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JAK2/STAT3信号转导通路在岩大戟内酯B诱导的前列腺癌细胞PC-3凋亡中的作用
目的 探讨岩大戟内酯B诱导的人前列腺癌细胞系PC-3细胞凋亡以及JAK2/STAT3信号转导通路在此过程中的作用.方法 不同浓度的岩大戟内酯B处理人前列腺癌细胞系PC-3细胞0、24、48、72 h后,采用台盼蓝染色法检测PC-3细胞存活率;采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞仪检测PC-3细胞凋亡率;West-ern blot分析检测岩大戟内酯B作用不同时间后JAK2/STAT3信号转导通路的表达;预先用不同浓度的JSI-124(选择性STAT3途径抑制剂)处理PC-3细胞60 min,观察岩大戟内酯B作用不同时间后PC-3细胞的凋亡情况.结果 岩大戟内酯B能够诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡,降低磷酸化-JAK2/STAT3的表达,JSI-124可以提高岩大戟内酯B诱导的PC-3细胞凋亡率.结论 JAK2/STAT3信号转导通路参与了岩大戟内酯B诱导的PC-3细胞凋亡过程.JSI-124通过特异性地抑制STAT3活性提高了岩大戟内酯B诱导的PC-3细胞凋亡率.
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大豆苷元对前列腺癌细胞及PTEN基因的影响
目的:通过观察大豆苷元对前列腺癌细胞(PC-3)增殖和相关基因表达的影响,探讨通过膳食干预途径预防前列腺癌发病的可行性.方法:将PC-3在F12培养基(含10%小牛血清)中采用开放式单层贴壁培养.实验设溶剂对照组、受试物各六个剂量组,采用MTT法对PC-3的增殖情况进行分析,对大豆苷元作用后的雄激素非依赖型前列腺癌(PC-3)细胞的存活率、细胞毒作用进行了研究.结果:与溶剂对照组相比,大豆苷元对PC-3细胞抑制效应均具有剂量依赖性,具有诱导凋亡和引起坏死效应,同时能诱导PC-3细胞的(PTEN基因)表达.结论:大豆苷元具有明显抑制前列腺癌细胞PC-3增殖效应,并呈现剂量一效应关系.
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吴茱萸碱诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究
目的 探讨吴茱萸碱诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的不同机制.方法 应用MTT法检测吴茱萸碱对PC-3细胞生长的抑制作用,Western blot法检测吴茱萸碱诱导PC-3细胞凋亡的信号通路.结果 吴茱萸碱(≥1 μmol/L)明显抑制PC-3细胞生长,吴茱萸碱作用24 h后,caspase蛋白酶凋亡通路被激活,caspase-3和caspase-9的表达增加,同时bcl-2蛋白表达减少而bax蛋白表达增加.结论 吴茱萸碱对前列腺癌PC-3细胞主要是通过激活caspase通路及下调bcl-2表达和增加bax表达等信号通路诱导细胞凋亡.
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前列腺癌PC3细胞TGF-β1mRNA表达的变化
目的观察人前列腺癌细胞株(PC-3)TGF-β1mRNA表达变化特点.方法采用RT-PCR方法检测TGF-β1在mRNA水平的表达.结果体外培养的前列腺癌PC-3细胞TGF-β1在mRNA水平表达量明显增强(P＜0.001).结论提示前列腺癌PC-3细胞TGF-β1在mRNA水平表达增强可能在前列腺癌的病理过程中起促进作用.
关键词： 前列腺癌 PC-3细胞 TGF-β1mRNA -
血小板衍生生长因子在苯乙酸钠调控PC-3细胞增殖和凋亡中的作用
目的探讨凋亡相关基因血小板衍生生长因子(PDGF)在苯乙酸钠(NaPA)调控人前列腺癌细胞株(PC-3)细胞增殖和凋亡过程中的作用.方法在PC-3细胞培养液中加入不同浓度的NaPA,采用流式细胞术(FCM)检测PC-3细胞增殖和凋亡情况,同时用RT-PCR检测PDGFmRNA表达.结果在体外经不同剂量NaPA处理后的PC-3细胞,随着NaPA浓度的增加则增殖指数(PI)逐渐降低(P＜0.001);凋亡细胞数逐渐增多(P＜0.001);在前列腺癌PC-3细胞凋亡过程中,PDGFmRNA水平随NaPA剂量的增加,表达量降低(P＜0.001).结论提示PDGF基因可能在由NaPA调控的前列腺癌细胞系PC-3细胞增殖和凋亡过程中起着重要作用.
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IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响
目的:探讨人白细胞介素24(IL-24)基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响,为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础.方法:检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组,检测IL-24目的基因的表达分为对照组(0.01 mol·L-1PBS)、空载体组[pcDNA3.1(+)载体]和IL-24基因组;检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组(6 Gy)、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组.碱裂解法提取纯化质粒DNA,用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中,目的基因表达的检测采用RT-PCR法.AnnexinV-FITC和PI双染后,采用流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡的变化.结果:与假照组比较,2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化,6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高(P<0.01),且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加,约是假照组的1.6～3.0倍.PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达,而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达;以上3组均有GAPDH基因的表达.IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较,早期凋亡细胞数均有上升趋势,除单纯照射组外,与其他组比较差异均有显著性(P<0.05);晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势,其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高(P<0.05或P<0.001);凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势,除IL-24基因组外,与其他组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01).结论:IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡.
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人前列腺癌PC-3细胞膜蛋白组学的分析
目的 分析人前列腺癌PC-3细胞中的所有膜蛋白,全面展示PC-3细胞中的蛋白质表达谱.方法 采用一维SDS-PAGE,结合高效液相色谱-串联质谱的方法,分离并鉴定PC-3细胞中的膜蛋白.结果 在严格的过滤参数条件下,PC-3细胞中鉴定出2 172种蛋白,其中1 499种经过基因本体评注(GOA)显示为已知细胞组分,其余为未知细胞组分.在已知细胞组分中,564种(37.6%)蛋白为质膜蛋白,其中138种为跨膜蛋白.跨膜蛋白中,21.17%被预测至少有1个跨膜区,57.66%有1～3个跨膜区,30.66%有4～9个跨膜区,11.66%有不少于10个跨膜区.许多新的蛋白也被鉴定,其中包括假设蛋白和一些cDNA序列.结论 这些被鉴定蛋白的生物学功能和理化性质将有助于进一步理解前列腺癌侵袭和转移的分子机制,为寻找与前列腺癌转移相关的分子提供新的实验证据.
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大豆多肽对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨大豆多肽对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响,为临床应用大豆多肽治疗前列腺癌提供实验依据.方法 用不同浓度的大豆多肽(5、10、15、20 μmol/L)处理前列腺癌PC-3细胞不同时间(24、48、72 h),采用MTT法检测细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期.结果 大豆多肽可抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,中晚期细胞凋亡趋势明显,且呈明显的剂量与时间依赖性;随着大豆多肽浓度的增加,前列腺癌PC-3细胞密度逐渐降低,边缘趋于圆滑,细胞间隙逐渐增大,局部可见部分已固缩的细胞及死亡的细胞碎片.结论 大豆多肽可抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡,在临床治疗前列腺癌方面具有广阔的应用前景.
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双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞生长及Survivin表达的影响
目的 观察双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞生长及Survivin表达的影响,并探讨其作用机制.方法 PC-3细胞经不同浓度的DHA处理后,MTT法检测细胞增殖抑制率;将PC-3细胞注入裸鼠右侧腋窝下,建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机分为空白对照组、DMSO对照组、DHA 高剂量组(200 μmol/kg 体重)和低剂量组(100 μmol/kg体重),经13 d干预后,计算抑瘤率;光镜及电镜观察肿瘤组织形态学改变,免疫组织化学法检测Survivin的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果 DHA可显著抑制PC-3细胞的增殖,并具有时间、浓度依赖性;DHA对裸鼠种植瘤生长具有明显的抑制作用,抑瘤率达60%以上;光镜及电镜观察到DHA两剂量组肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;DHA两剂量组细胞Survivin表达减弱,凋亡率明显升高.结论 DHA可明显抑制PC-3细胞生长,其机制与下调Survivin的表达并诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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老鹳草素诱导人前列腺癌细胞株PC-3凋亡及其分子机制的研究
目的 研究老鹳草素对人前列腺癌细胞株PC-3的诱导凋亡效应及其分子机制.方法 用MTT法研究老鹳草素对肿瘤细胞株生长的影响;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位及细胞凋亡;用Western blot法检测凋亡相关基因;用分光光度计检测Caspase-3和Caspase-9的吸光值.结果 老鹳草素对人前列腺癌细胞PC-3细胞的抑制作用强,差异具有统计学意义(P＜0.05).老鹳草素促使细胞色素C大量由线粒体向细胞质中释放,激活Caspase-3和Caspase-9功能,具有统计学意义(P＜0.05).结论 老鹳草素通过激活线粒体凋亡途径及调节一些凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞PC-3凋亡.
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慢病毒介导的绿色荧光蛋白报告基因对人前列腺癌PC-3细胞的标记
目的 探讨慢病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)标记人前列腺癌PC-3细胞是否影响其细胞生物学特性,以及GFP基因能否持久稳定表达,为下一步实验奠定基础.方法 常规肿瘤细胞培养、传代,在细胞状态佳时以不同病毒感染复数(MOI)实行GFP慢病毒对PC-3的感染,7天后在荧光显微镜下观察GFP在PC-3的表达情况.选取感染GFP阳性表达率高的孔继续培养传代至第三代后,分别用镜下形态观、MTT测生长曲线、划痕实验来对比两种细胞的形态、活性、生长速度和生长状态,以评价GFP基因在PC-3细胞表达的稳定性.结果 置荧光显微镜下,转染72h后,部分PC-3细胞可见绿色荧光,转染一周,绿色荧光表达强.其中以MOI=20感染率高,GFP阳性表达率为(92.3±1.2)%,GFP/ PC-3在体外持续培养2、4、8周GFP阳性率没有明显变化.镜下形态观、MTT测生长曲线、划痕实验等结果显示,与转染前相比,慢病毒感染PC-3后,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响(P>0.05).结论 GFP慢病毒能够高效标记PC-3,并且不影响其生物学特性,GFP基因在PC-3能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究.
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镉诱导PC-3细胞金属硫蛋白和锌转运体的基因表达
[目的]研究镉对前列腺癌PC-3细胞中金属硫蛋白(Metalllothionein,MT)和锌转运体(Zinc transporter,ZnT)基因表达的影响.[方法]0、10、20、40、80和100μmol/L氯化镉处理PC-3细胞,细胞存活率用噻唑蓝(MTT)方法检测;MT-1F、MT-JX、MT-2A和ZnT-J基因的mRNA表达用RT-PCR进行检测.[结果]氯化镉(≥40μmol/L)对PC-3细胞具有明显的抑制生长作用(P<0.05).MT-1F和MT-2A的mRNA水平在5μmol/L氯化镉诱导时表达水平达高,随着氯化镉浓度的增高mRNA的表达呈下降趋势.MT-1X的mRNA表达水平随氯化镉浓度增加呈不断上升趋势,在40μmol/L表达水平为高.ZnT-J的mRNA在10 μmol/L氯化镉诱导表达水平为高,随着氯化镉浓度的增高mRNA表达呈下降趋势.[结论]镉可诱导PC-3细胞MT-1F、MT-JX、MT-2A和ZnT-J基因mRNA表达增高.
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异黄酮对前列腺癌细胞的激素受体基因表达的影响
[目的]通过大豆异黄酮的活性物质染料木黄酮和大豆苷元抑制前列腺癌PC-3和LNCaP细胞增殖和对激素基因表达的影响,探讨大豆异黄酮治疗和预防前列腺癌的可能机制.[方法]0、10、20、40、60、80和160μmol/L剂量组的染料木黄酮和大豆苷元处理前列腺癌细胞,细胞存活率用MIT方法检测,α雌激素受体(ERα)、β雌激素受体(ERβ)、雄激素受体(AR)和血管上皮生长因子(VEGF)等基因的mRNA表达用RT-PCR进行检测.[结果]染料木黄酮和大豆苷元对PC-3、LNCaP细胞具有明显的抑制生长作用,在160μmol/L的浓度时,染料木黄酮、大豆苷元作用72 h后,PC-3细胞的存活率分别为12.28%和44.88%,LNCaP细胞的存活率分别为25.48%和43.14%,其抑制效应具有时间和剂量依赖性,同时发现对PC-3细胞的VEGF、ERα和ERβ基因表达下调,AR基因处理前后没有检测到;对LNCaP细胞的VEGF和AR基因表达下调,ERα和ERβ的表达并无影响.[结论]大豆异黄酮能抑制前列腺癌细胞的增殖效应,存在时间和剂量效应关系,雌激素受体基因可能直接在大豆苷元抑制PC-3细胞的增殖中参与作用,而染料木黄酮抑制PC-3细胞和染料木黄酮及大豆苷元抑制LNCaP细胞可能主要是通过Akt通路影响VEGF和AR等基因而实现.
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雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇对PC-3/MDR细胞耐药的体外逆转作用
目的 研究雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇对人前列腺癌PC-3/多药耐药(MDR)细胞耐药的体外逆转作用.方法 将对数生长期的PC-3、PC-3/MDR细胞随机分为阴性对照组、多西紫杉醇组、雷公藤内酯醇组、多西紫杉醇-雷公藤内酯醇组(1∶1、1∶2、1∶3),MTT法测定各组细胞生长抑制率,HPLC法检测各组细胞对多西紫杉醇的摄取,试剂盒法测定给药组细胞P-gp表达和P-gp ATP酶活性,RT-PCR法考察雷公藤内酯醇干预对PC-3/MDR细胞MDR1 mRNA表达影响.结果 不同浓度雷公藤内酯醇联合多西紫杉醇与PC-3、PC-3/MDR细胞孵育后,IC50值均显著降低,其中3倍量前者对后者的耐药逆转指数为9.75.联合用药组细胞所摄取的多西紫杉醇量显著高于多西紫杉醇组,并呈雷公藤内酯醇剂量依赖性.此外,高浓度雷公藤内酯醇对MDR1 mRNA表达有明显抑制作用.结论 雷公藤内酯醇可通过抑制P-gp表达、激活P-gp ATP酶活性、抑制MDR1 mRNA表达等多重机制,促使多西紫杉醇在体外逆转前列腺肿瘤PC-3/MDR细胞耐药.
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p75真核表达载体的构建及其在PC-3细胞中的表达
目的:构建人神经生长因子低亲和力受体p75真核表达质粒,并在前列腺癌细胞PC-3中表达.方法:运用RT-PCR技术从人脑胶质细胞瘤组织中分离扩增编码人p75完整基因,与pcDNA载体重组,并通过酶切和测序鉴定;用脂质体介导法将重组质粒转染到PC-3细胞中,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光化学和细胞免疫组织化学法在转录和翻译两个水平上检测表达产物.结果:酶切和测序证实所获得的重组质粒包含p75完整基因;在转染pcDNA3.1(+)-p75的 PC-3细胞中检测到转录和翻译产物.结论:成功地构建了p75真核表达质粒并在PC-3细胞中表达,为深入研究p75在前列腺癌中的生物学功能奠定了基础.
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巨噬细胞极化影响前列腺癌细胞的促血管形成能力
研究巨噬细胞极化对人前列腺癌PC-3细胞促血管形成的作用,并探讨其机制.本实验成功诱导正常男性外周血单核细胞为M0、M1、M2和TAM,发现它们在形态学上差异明显.ELISA检测各亚型巨噬细胞条件培养液(condition medium,CM)表明:TGF-β在TAM中显著高于其他亚型,IL-10高表达于M2及TAM,而IL-12在M1中高表达(P＜0.05).RT-PCR结果表明:IL-6、IL-23与CXCL9在M1中表达显著增高(P＜0.05),以及miRNA let-7b、let-7c比TAM表达显著增高(P＜0.01).体外血管形成实验结果显示M2、TAM能增强PC-3细胞的促血管形成(P＜0.01).因此,TAM亚型巨噬细胞促进PC-3细胞的血管形成机制可能与miRNA let-7b、let-7c高表达以及上述细胞因子的差异性表达有关.
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VP3基因联合多西紫杉醇诱导人前列腺癌细胞株凋亡的实验研究
目的 观察VP3基因、多西紫杉醇各浓度及VP3基因联合多西紫杉醇各浓度对PC-3细胞株的凋亡作用.方法 构建重组真核表达载体PcDNA3-VP3,采用基因转染法转染人前列腺癌细胞株PC-3.利用RT-PCR技术检测VP3基因在PC-3细胞株中的表达状况.将多两紫杉醇浓度分为3组,分别为10-8 mol/L、10-7mol/L、 10-6mol/L.应用光镜、HE染色、透射电镜形态学、MTT法、流式细胞仪TUNEL法观察转染重组质粒PcDNA3-VP3单独或联合多西紫杉醇各浓度对前列腺癌细胞株PC-3的影响.结果 VP3基因转染PC-3细胞后在细胞中得到了表达.HE染色和透射电镜下观察到PC-3细胞的典型凋亡形态学特征.MTT法检测结果显示转染质粒PcDNA3-VP3,单独应用10-7mol/L以上浓度的多西紫杉醇及转染质粒PcDNA3-VP3联合应用10-8mol/L以上浓度的多西紫杉醇均可使PC-3细胞株的增殖活性明显下降(P＜0.01).流式细胞仪TUNAL法检测单独转染质粒PcDNA3-VP3、质粒PcDNA3-VP3联合10-8mol/L浓度组及质粒PcDNA3-VP3联合10-77mol/L浓度组后24h、48h、72h各个时间点上的PC-3细胞株凋亡率分别为(20.31±1.96)%、(41.50±1.03)%、(50.03±3.00)%,(P＜0.01):(31.10±0.59)%、(53.10±0.77)%、(68.90±2.66)%(P＜0.01);(40.01±0.53)%、(62.23±0.74)%、(75.20±0.53)%(P＜0.01).结论 联合10-8mol/L以上浓度的多西紫杉醇能明显增加VP3基因诱导人前列腺癌PC-3细胞株凋亡.
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人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用
目的 探讨人参胡核汤对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制作用.方法 通过血清药理学的方法,制备人参胡核汤高、中、低剂量及空白组的血清.各组与PC-3细胞作用48h、72h后,光镜观察细胞形态学改变;MTT法观察细胞增殖的抑制率;RT-PCR技术检测前列腺特异性抗原(PSA)表达.结果 人参胡核汤含药血清各组作用48h、72h后,表现出不同程度的细胞皱缩,边缘毛糙,细胞核固缩或碎裂,细胞体积缩小;各组均可抑制PC-3细胞增殖;降低PSA表达水平.上述指标中,以人参胡核汤含药血清高剂量组作用48h的效果为明显.结论 人参胡核汤含药血清可使PC-3细胞的形态发生改变、抑制PC-3细胞增殖、降低PSA的表达.
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多西紫杉醇对激素非依赖性前列腺癌的体内外作用研究
目的观察多西紫杉醇对激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3的体内外作用,并探讨其可能的作用机制.方法应用光镜形态学、MTT法、流式细胞仪和免疫细胞化学法观察了10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L浓度多西紫杉醇在体外对前列腺癌细胞系PC-3的作用和对细胞DNA含量及Cyclin D1表达的影响.观察PC-3细胞荷瘤裸鼠使用20mg/kg多西紫杉醇治疗前后的体重、肿瘤重量、血清PSA和肿瘤PSA免疫组化的变化.结果10-7mol/L以上浓度多西紫杉醇对前列腺癌细胞系PC-3有明显的生长抑制作用(抑制率≥47.5%,P＜0.05),增强诱导凋亡作用(凋亡率≥16.8%,P＜0.01),下调Cyclin D1的表达(表达率≤10.8%),与阳性对照组Cyclin D1表达率25.5%相比有显著差异(P＜0.05).治疗前后裸鼠体重无明显变化,但肿瘤重量(3.7±0.4)g、血清PSA(95±13)ng/ml和肿瘤PSA免疫组化的表达率(66.啦3.8)%在治疗组显著低于对照组(P＜0.05或0.01).结论多西紫杉醇对激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3及荷瘤鼠肿瘤均有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,显示了多西紫杉醇用于治疗激素非依赖性前列腺癌的可能性和价值.
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dsP21-625通过激活P21基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖
目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-strandedRNA-625,dsP21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响.方法:将人工合成的dsP21-625(dsP21-625组)和dsCtrl质粒(dsCtrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和DU-145.用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E(CyclinE)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2) mRNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力.结果:与dsCtrl组比较,dsP21-625组PC-3和DU-145细胞中P21 mRNA水平升高(均P＜0.01),CyclinE和CDK2 mRNA表达水平下调(均P＜0.01);dsP21-625组PC-3和DU-145细胞中P21蛋白表达上调(均P＜0.01),CyclinE和CDK2蛋白表达下调(均P＜0.01);dsP21-625组细胞S期和G2/M期的细胞比例减少(均P＜0.05),G0/G1期的细胞比例增加(均氏0.01);dsP21-625组细胞增殖活力降低(均P＜0.05)、克隆形成数减少(均P＜0.05).结论:dsP21-625上调前列腺癌细胞中P21mRNA及蛋白的表达,下调CyclinE和CDK2 mRNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力.
