转染人源 Omentin-1、Vaspin 妊娠期糖尿病脂肪细胞胰岛素受体底物和磷脂酰肌醇3激酶表达变化

目的：观察转染人源网膜素1（Omentin-1）、内脏脂肪组织源性丝氨酸蛋白酶抑制剂（Vaspin）的妊娠期糖尿病（GDM）脂肪细胞胰岛素受体底物1／2（IRS-1／2）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）表达变化。方法复苏、传代及诱导分化GDM前脂肪细胞。构建Omentin-1、Vaspin过表达载体，以3个不同过表达梯度（1．0、2．5、5．0μg）转染传代脂肪细胞，以无转染组为对照。采用实时荧光定量PCR法检测各组脂肪细胞Omentin-1、Vaspin、IRS-1／2、PI3K mRNA；采用Western blotting法检测各组脂肪细胞Omentin-1、Vaspin、IRS-1／2、PI3K蛋白及酪氨酸磷酸化IRS-1／2；采用[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取测定法测算各组脂肪细胞葡萄糖的摄取率。结果随Omentin-1表达增加，转染人源Omentin-1脂肪细胞中IRS-1、PI3K（P85a）mRNA及蛋白表达增加，IRS-2 mRNA及蛋白表达未发生明显变化， IRS-1酪氨酸磷酸化程度明显升高，IRS-2酪氨酸磷酸化程度未发生明显变化，葡萄糖摄取率上升。随Vaspin表达增加，转染人源Vaspin脂肪细胞IRS-1、IRS-2、PI3K（P85a）mRNA及蛋白表达均未出现明显变化，IRS-1、IRS-2酪氨酸磷酸化程度均未出现明显变化，葡萄糖摄取率变化不明显。结论转染人源Omentin-1的GDM脂肪细胞IRS-1和PI3K（P85a）表达升高，葡萄糖摄取率升高；转染人源Vaspin的GDM脂肪细胞无此变化。

胰岛素受体底物1基因Gly972Arg多态性与海南黎族2型糖尿病的关系

目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-1)基因Gly972Arg突变与海南黎族2型糖尿病(T2DM)的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,对78例海南黎族T2DM患者(T2DM组)和78例糖耐量正常人群(对照组)进行IRS-1基因Gly972Arg突变位点基因型检测.结果 对照组IRS-1基因Gly972Arg突变频率5%,T2DM组未发现该基因突变.结论 IRS-1基因Cly972Arg突变可能不是海南黎族T2DM的重要遗传因素.

胰岛素受体底物1基因沉默对3T3-L1细胞CCAAT增强子结合蛋白α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-I)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA及蛋白表达的影响,并观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞能力的改变,探讨胰岛素受体底物(IRSs)是否作为C/EBPα 、PPAR-γ的上游调节信号在前脂肪细胞分化中起到重要的调节作用.方法 合成4条IRS-I shRNA,Western blotting筛选出沉默效率高的1条.3T3-L1前脂肪细胞分为IRS-1沉默组和对照组.IRS-1沉默组细胞用沉默效率高的IRS-1 shRNA质粒转染3T3-LI前脂肪细胞,沉默细胞中的IRS-1分子；对照组采用无意义IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞.转染24h后诱导其分化成熟,分化72 h后检测促进前脂肪细胞分化的关键分子C/EBPα、PPARγ的表达.继续诱导分化至第7天,油红O染色观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的比例,检测其分化能力的改变.结果 与对照组相比,IRS-1沉默组在诱导分化72 h后,Real-time PCR结果显示3T3-L1前脂肪细胞中C/EBPα mRNA、PPARγ mRNA表达明显下降(Pa＜0.05),Western blotting结果显示C/EBPα、PPARγ蛋白水平也同样显著下降(Pa＜0.05)；细胞继续分化至第7天,油红O染色显示,IRS-1沉默组前脂肪细胞分化成熟的比例与对照组比较显著降低.结论 胰岛素可能通过IRS-1刺激C/EBPα、PPARγ的表达促进前脂肪组织的分化.

高脂饮食所致胰岛素抵抗小鼠心肌胰岛素受体底物1的改变

目的 探讨在高脂饮食导致的外周胰岛素抵抗存在的情况下,心肌胰岛素信号传导通路中的关键信号分子胰岛素受体底物1(IRS1)的改变及其机制.方法 将20只雄性昆明小鼠随机分为对照组(ND组)10只及胰岛素抵抗组(IR组)10只,ND组给予普通饲料,IR组给予高脂饲料.16周时称量体质量、检测空腹血糖和空腹胰岛素,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),用Western blot的方法检测心肌组织磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)及307位丝氨酸磷酸化的IRSl(p-IRS1)的表达,用免疫组织化学染色的方法检测心肌组织活化的核因子-κB (NF-κB)的表达.结果 ND组小鼠的体质量、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR分别为(53.45±3.97)g、(5.60±0.63) mmol/L、(8.36±1.66) mU/L、2.06±0.35,IR组小鼠分别为(61.70±4.47)g、(7.44±0.68) mmol/L、(9.61±1.33) mU/L、3.16±0.36,IR组小鼠的体质量、空腹血糖、空腹胰岛素和HOMA-IR均高于ND组(P＜0.05);ND组小鼠p-IRS1、p-JNK的表达水平和NF-κB的阳性细胞率分别为0.32 ±0.26、0.17 ±0.40、(11.17 ±6.75)％,IR组小鼠分别为0.77 ±0.23、0.68±0.12、(56.45±4.02)％,与ND组小鼠比较,IR组小鼠心肌p-IRS1蛋白水平明显上升(P＜0.05),IR组心肌活化的NF-κB和p-JNK表达比ND组显著增加(P＜0.01).结论 高脂饮食可成功诱导外周胰岛素抵抗小鼠模型,高脂饮食可能通过JNK和NF-κB通路引起IRS1丝氨酸磷酸化增加,进而导致心肌的胰岛素传导信号通路异常.

棕榈酸通过抑制IRS-1表达诱导大鼠骨骼肌细胞胰岛素抵抗

目的:建立L6细胞胰岛素抵抗模型,筛选出佳诱导条件,并探讨其作用机制.方法:用MTT法确定棕榈酸、胰岛素对L6细胞增殖的影响;用葡萄糖检测试剂盒检测葡萄糖含量,确定不同浓度的棕榈酸、胰岛素对L6细胞葡萄糖消耗的影响;通过Western Blot法检测IRS-1、PI3K、P-AKT、AKT、GLUT4的蛋白表达.结果:0.4 mmol·L-1棕榈酸诱导12 h、5×10-7mol· L-1胰岛素诱导24 h以上,对L6细胞生长无影响且出现明显胰岛素抵抗,移除刺激后24h内能够抑制胰岛素刺激状态下的糖转运;棕榈酸降低了IRS-1、PI3K、P-AKT、GLUT4在L6细胞上的表达.结论:高浓度棕榈酸能够通过抑制IRS-1等靶蛋白表达诱导L6细胞产生胰岛素抵抗.

桑精胶囊对2型糖尿病大鼠靶组织IRS-1表达及丝氨酸磷酸化水平的影响

目的:观察桑精胶囊对2型糖尿病大鼠脂肪和骨骼肌组织胰岛素受体底物1(insulin receptor substrat 1,IRS-1)蛋白表达及其丝氨酸磷酸化水平的影响,探讨其治疗2型糖尿病的分子机制.方法:采用尾静脉注射小荆量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)加高脂高热卡饲料喂养的方法建立2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,将造模动物随机分为模型组、二甲双胍组和桑精胶囊组,另设正常时照组.药物干预8周后,用免疫沉淀和Western印迹方法检测脂肪和骨骼肌组织胰岛素刺激前和胰岛素刺激后IRS-1表达水平和丝氨酸磷酸化水平.结果:与模型组比较,桑精胶囊组胰岛素刺激前和胰岛素刺激后脂肪和骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达均增高,IRS-1丝氨酸磷酸化水平均显著下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:桑精胶囊时2型糖尿病的治疗效应可能与提高脂肪和骨骼肌组织中IRS-1蛋白表达并抑制其丝氨酸磷酸化水平有关.

肉桂醛对糖尿病大鼠腓肠肌IRS-1和P85α表达的影响

目的:研究肉桂醛(Cin)降糖调脂作用及其对胰岛素受体底物1(IRS-1)和磷脂酰肌醇3激酶调节亚基P85α的影响.方法:Wistar大鼠,雄性,随机分为3组:正常对照组、糖尿病组(T2DM,高脂饮食诱导8周后,腹腔注射35 mg/kg链脲佐菌素建立的糖尿病大鼠模型)和Cin+糖尿病组[T2DM+Cin,肉桂醛40 mg/(kg·d),灌胃].药物干预4周后,观察一般情况,检测体重、血糖血脂、胰岛素,采用免疫组化检测大鼠腓肠肌IRS-1和P85α蛋白水平.结果:实验末,T2DM+Cin组体重、血糖、胰岛素、甘油三酯、低密度脂蛋白均显著低于T2DM组(P＜0.01),高密度脂蛋白高于T2DM组(P＜0.05);T2DM+Cin组腓肠肌的IRS-1高于T2DM组,P85α低于T2DM组,差别有统计学意义(P＜0.05).结果:肉桂醛的降糖调脂作用可能与升高糖尿病大鼠腓肠肌中IRS-1和降低P85α水平有关.

肝组织胰岛素受体底物1表达及其酪氨酸磷酸化与慢性乙型肝炎病毒感染者胰岛素抵抗的关系

目的 研究慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者肝脏组织中胰岛素受体底物1(insulin receptor substste-1,IRS-1)表达及其酪氨酸磷酸化与胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的关系.方法 共收集36例肝组织,其中来源于健康对照受试者12例,轻度慢性乙型肝炎(mild chronic hepatitis B,MCHB)未合并IR受试者12例,MCHB合并IR受试者12例.测量受试者的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹血胰岛素(fasting blood insulin,FINS)水平、HBV DNA及乙肝病毒标记物.根据稳态模型计算的胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment,HOMA-IR)界定IR.当HOMA-IR值＞2.7定义为IR.采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组IRS-1蛋白表达及酪氨酸磷酸化水平.结果 ①MCHB伴IR组FINS、FBG、HOMA-IR、HBV DNA及HBeAg阳性率分别为(19.48±7.97)μU/mL、(5.20±0.62)mmol/L、(4.37±1.34)％、(5.01±1.33)％和75.00％；MCHB未伴IR组FINS、FBG、HOMA-IR、HBV DNA及HBeAg阳性率分别为(8.49±2.78)μU/mL、(5.05±0.54)mmol/L、(1.86±0.58)％、(4.89±1.52)％和58.33％;正常对照组FINS、FBG及HOMA-IR分别为(7.21±2.71)μU/mL、(4.98±0.36)mmol/L和(1.60±0.63)％.MCHB伴IR组的FINS水平和HOMA-IR值显著高于MCHB未伴IR组和正常对照组,差异有统计学意义(P ＜0.01); HBeAg阳性率及HBV DNA载量差异无统计学意义(P＞0.05).②MCHB伴IR组肝组织IRS-1蛋白表达水平为(0.33±0.03),明显低于正常对照组(0.68±0.03)和MCHB未伴IR组(0.64±0.01),差异具有统计学意义(P＜0.01).③MCHB伴IR组肝组织IRS-1蛋白酪氨酸磷酸化程度为(0.17±0.02),明显低于正常对照组(0.56±0.03)和MCHB未伴IR组(0.53±0.01),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 HBV在胰岛素抵抗中的作用尚未明确.肝脏组织中IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度降低,可能是HBV感染者发生胰岛素抵抗的分子机制之一.

吡格列酮对KKAy小鼠胰岛素敏感性的影响及机制

目的 观察吡格列酮(Pio)对胰岛素抵抗状态KKAy小鼠胰岛素敏感性的影响,并探讨其可能的机制.方法 将16只8周龄的雄性KKAy小鼠随机分成2组:胰岛素抵抗模型组和Pio干预组,每组8只,另以8只同周龄的雄性C57BL/6J小鼠为模型对照组,3组小鼠均饲喂AIN93G饲料,Pio组在饲料中添加Pio,干预12周,测定Pio对小鼠血糖、血清胰岛素水平、葡萄糖耐量、胰岛素耐量等方面的影响,通过ELISA实验测定Pio对小鼠血清脂联素和瘦素水平的影响,通过Real time PCR实验测定Pio对小鼠附睾脂肪组织的脂联素和瘦素mRNA水平的影响,通过Western blot实验测定Pio对小鼠肝脏和附睾脂肪组织中过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPAR-γ)蛋白、胰岛素受体底物1(IRS1)及蛋白激酶B(PKB/AKT)的磷酸化水平的影响.结果 Pio干预可降低KKAy小鼠血糖、血清胰岛素水平,改善胰岛素耐量和葡萄糖耐量,升高血清脂联素水平,降低瘦素水平,同时增加附睾脂肪组织脂联素的mRNA表达水平.Pio干预可使KKAy小鼠肝脏和附睾脂肪组织中PPARγ蛋白、IRS1和AKT磷酸化水平均升高.结论 Pio可改善KKAy小鼠胰岛素抵抗,增加小鼠胰岛素敏感性,这些作用可能与Pio增加肝脏及附睾脂肪组织的PPARγ蛋白表达,从而激活胰岛素信号转导通路的蛋白有关.

番石榴叶总三萜改善3 T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

目的：观察番石榴叶总三萜（TTPGL）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用，并探讨其可能的作用机制。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化，给予TTPGL（0.3、1、3、10μg／L），并设溶媒（0.1％DMSO）组、阳性药正钒酸钠（ Van，10μmol／L）组、正常对照（ control）组和模型（ model）组，药物作用48 h。 MTT法检测药物对前脂肪细胞活力的影响，油红O染色法观察其对细胞分化的影响。建立IR模型后，药物处理48 h，葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（GOD-POD）检测IR脂肪细胞上清液中葡萄糖消耗量；比色法检测游离脂肪酸（FFA）水平；ELISA法检测脂肪因子分泌水平；real-time PCR检测IR脂肪细胞蛋白酪氨酸激酶1B（PTP1B）的mRNA表达量；Western blot检测磷酸化胰岛素受体底物1／胰岛素受体底物1（ p-IRS-1／IRS-1）和磷酸化蛋白激酶B／蛋白激酶B （ p-Akt／Akt）的蛋白水平。结果：与溶媒组比较，TTPGL显著提高了前脂肪细胞的活力并抑制其分化（ P＜0.01）。与IR溶媒组比较，无论在基础状态下还是胰岛素刺激状态下，TTPGL（1-10μg／L）均显著地促进了IR脂肪细胞葡萄糖消耗（P＜0.01）；TTPGL（0.3～3μg／L）显著抑制FFA的产生（P＜0.01）。与模型组比较，TTPGL（0.3和3μg／L）显著增加IR脂肪细胞脂联素的分泌（P＜0.05）并抑制TNF-α的分泌（P＜0.01），TTPGL（3μg／L）对抵抗素的分泌有显著抑制作用（P＜0.05），对瘦素分泌无显著作用；TTPGL（3μg／L）显著下调IR脂肪细胞PTP1B的mRNA表达（P＜0.01）；TTPGL（3μg／L）极显著上调p-IRS-1／IRS-1的水平；TTPGL（0.3和3μg／L）显著上调p-Akt／Akt的蛋白水平（ P＜0.05）。结论：TTPGL具有显著改善3T3-L1脂肪细胞IR的作用，其作用机制可能与TTPGL下调了IR脂肪细胞PTP1 B mRNA的表达、同时上调p-IRS-1／IRS-1和p-Akt／Akt的蛋白水平有关。

复方贞术调脂方对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的 观察复方贞术调脂方(FTZ)对胰岛素抵抗(IR) HepG2细胞的作用,为开拓FTZ的治疗范围,阐明FTZ调节糖脂代谢的机制提供实验依据.方法 用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,用高、中、低3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA的表达,Western blot检测HepG2细胞胰岛素信号转导蛋白IRS1表达.结果 模型细胞培养基上清液中葡萄糖含量高于正常细胞(P＜0.05).给予FTZ(1、25、100μg/mL)后,HepG2细胞培养基上清液中葡萄糖含量均低于模型细胞葡萄糖含量(P＜0.05).胰岛素抵抗细胞与正常细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著降低(P＜0.05).给予FTZ干预后,与胰岛素抵抗细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 FTZ可改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的摄取.其改善胰岛素抵抗的作用机制之一可能是通过上调胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA和IRSl蛋白质在胰岛素抵抗HepG2细胞的表达.

丹栀逍遥散调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用机制

目的:研究丹栀逍遥散(DanZhi XiaoYao power,DZXYP)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠模型胰岛素抵抗的作用及其调控机制.方法:应用皮下埋植左旋18-甲基炔诺酮硅胶棒联合皮下注射人绒毛膜促性腺激素的方法建立PCOS模型,光镜观察卵巢形态及颗粒细胞分布,生化分析仪和电化学发光仪检测血脂、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)和空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)等,Western blot检测胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)307丝氨酸及AKT 473丝氨酸的磷酸化.结果:DZXYP显著改善PCOS大鼠卵泡的囊性扩张性变化及颗粒细胞排列,与PCOS组相比,DZXYP显著降低TG(P ＜ 0.01)、TC(P ＜ 0.05)和LDL(P ＜ 0.01)水平,显著增高HDL水平(P ＜ 0.05),降低FINS和稳态模型胰岛素抵抗(homeostasis model assessment insulin resistance,HOMA-IR)水平(均P ＜ 0.05),抑制了体重增长(P ＜ 0.05)并减低卵巢重量(P ＜ 0.01),降低了IRS-1的307丝氨酸磷酸化水平(P ＜ 0.01),显著增加AKT 473丝氨酸的磷酸化水平(P ＜ 0.01).结论:DZXYP改善PCOS大鼠胰岛素抵抗的作用可能与降低IRS-1的307丝氨酸磷酸化和增加AKT 473丝氨酸的磷酸化有关.

Giα介导的胰岛素信号转导在烫伤大鼠胰岛素抵抗中的作用

目的探讨Giα介导的胰岛素信号转导在烫伤大鼠胰岛素抵抗中的作用,初步阐明烫伤后发生胰岛素抵抗的信号转导分子机理.方法①Western杂交检测严重烫伤大鼠肝脏细胞Giα含量的变化规律,并检测烫伤3 d大鼠肝脏细胞IRS-1的酪氨酸磷酸化.②血糖仪和放射免疫法检测烫伤大鼠血糖及胰岛素水平,并统计分析与Giα表达水平的关系.结果①烫伤后1～6 d肝细胞Giα明显降低,以伤后第3天为明显.同步检测IRS-1的酪氨酸磷酸化,发现在胰岛素刺激下IRS-1不能发生酪氨酸磷酸化.②烫伤大鼠血糖和胰岛素水平均明显升高.对烫伤3 d的血糖和Giα进行相关分析,发现Giα的表达水平和血糖呈明显的负相关.结论 Giα表达减少可能是烫伤大鼠IRS酪氨酸磷酸化障碍及产生胰岛素抵抗的一个重要机制.

组织特异性胰岛素抵抗及其代谢综合征的机制探讨

观察炎症状态和高脂状态对mTOR/S6K/IRS1-Ser和IRS1-Tyr信号通路表达的影响

目的 观察在体内外炎症状态下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-70S核糖体蛋白s6激酶(S6K)-胰岛素受体底物1(IRS1)信号传导通路异常磷酸化表达对胰岛素抵抗的影响.方法 体外实验,将HepG2分为4组:对照组、高脂组[给予100 mg/L低密度脂蛋白(LDL)b理]淡症介入组[给予20 μg/L肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理]、联合干预组(给予20μg/L TNF-α+100 mg/L LDL处理).采用实时定量PCR和Western blotting方法检测mTOR、S6K和IRS1 mRNA及蛋白表达水平；体内实验,8周龄c57BL/6J小鼠随机分为4组(正常饮食组、正常饮食加炎症组、高脂饮食组和高脂饮食加炎症组),分别给予隔日皮下注射生理盐水和酪蛋白建立炎症模型,8周后将实验小鼠于深度麻醉下处死并检测其肝脏组织中mTOR、S6K和IRS1 mRNA及蛋白表达水平.结果 体内外实验均显示与对照组相比,炎症组与高脂组mTOR、S6K和IRS 1-Ser mRNA及蛋白表达增加,而联合干预组表达明显增高,IRSITyr mRNA及蛋白表达下降,联合干预组表达明显降低.结论 炎症及高脂状态激活mTOR/s6k/IRS 1-Ser信号通路,而抑制IRs1-Tyr信号通路,从而加重胰岛素抵抗.

子宫内膜腺癌组织中AdipoR1、AdipoR2及IRS-1的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜腺癌组织中脂联素受体(AdipoR1、AdipoR2)和胰岛素受体底物1(IRS-1)的表达及临床意义.方法:采用免疫组化(MaxVision)方法检测广西医科大学肿瘤医院2014年1月到2016年3月间首次接受治疗的80例子宫内膜腺癌、26例不典型增生以及23例正常子宫内膜组织中AdipoR1、AdipoR2、IRS-1蛋白的表达,分析其与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系.结果:①子宫内膜腺癌组织中AdipoR1、AdipoR2阳性表达率明显低于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(P均＜0.05);而子宫内膜腺癌组织与不典型增生组织中AdipoR1、AdipoR2的阳性表达率相比,差异均无统计学意义(P＞0.05);IRS-1在3组的阳性表达率,两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).②AdipoR1的阳性表达率与子宫内膜癌腺癌患者的临床病理分期、病理分级、肌层浸润深度、淋巴结转移情况、淋巴脉管受累有关(P均＜0.05);而AdipoR2的阳性表达与患者病理分级有关(P＜0.05);IRS-1的阳性表达率与患者FIGO分期、病理分级以及淋巴结转移有关(P均＜0.05).③在子宫内膜腺癌组织中,AdipoR1与IRS-1的表达呈负相关(r=-0.361,P＜0.05);AdipoR2与IRS-1的表达亦呈负相关(r=-0.368,P＜0.05).结论:AdipoR尤其是AdipoR1及IRS-1的表达与子宫内膜腺癌的发生、发展及病理特征有一定关系.

胰岛素与硒对糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素信号转导的联合作用

目的 观察胰岛素与硒对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号分子表达的影响.方法 雄性SD大鼠35只,随机分为正常组、糖尿病组、糖尿病胰岛素治疗组(D-In组)、糖尿病亚硒酸钠治疗组(D-Se组)、糖尿病联合胰岛素和亚硒酸钠治疗组(D-In-Se组),每组7只.采取One TouchⅡ血糖仪测定胰岛素和硒联合应用后糖尿病大鼠血糖变化；微柱法测定糖化血红蛋白(HbA1c)；Western blot法和免疫组织化学法检测骨骼肌细胞中胰岛素受体底物1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和葡萄糖转运子4(GLUT4)表达的变化；采用简单相关分析观察IRS-1、PI3K、GLUT4和血糖之间的相关性.结果 D-In-Se组血糖较D-In组和D-Se组明显下降(P＜0.01)；Western blot法和免疫组化结果均显示:胰岛素和硒联合应用能明显增加糖尿病大鼠骨骼肌细胞上IRS-1、PI3K和GLUT4的表达(P＜0.01)；相关分析结果显示:骨骼肌细胞膜上GLUT4蛋白的表达量与胞质中IRS-1及PI3K蛋白的表达均呈正相关,血糖水平与骨骼肌细胞膜上GLUT4蛋白的表达量呈负相关.结论 胰岛素和硒联合应用可通过IRS-1/PI3K途径、增加骨骼肌胞膜上GLUT4蛋白的表达,发挥协同降血糖作用.

血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素作用机制的研究

目的 研究血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)对L6大鼠成肌细胞的胰岛素信号传导的影响,探讨AngⅡ影响胰岛素信号传导通路的可能机制.方法 培养及诱导分化L6细胞,根据AngⅡ或JAK2-PKA抑制剂H89干预的不同,将其分为4组:对照组、胰岛素组、胰岛素+AngⅡ组及胰岛素+AngⅡ+H89组.采用RT-PCR方法检测IRS1、GLUT4 mRNA的表达水平,Western blot方法检测IRS1、Ptyr-IRS1、总蛋白和膜蛋白中GLUT4的蛋白表达.结果 RT-PCR检测4组间GLUT4 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),后3组间IRS1 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),但均较对照组增加(P＜0.05).Westernblot检测后3组IRS1、ptyr-IRS1、膜蛋白中GLUT4表达均较对照组升高(P＜0.05),而3组间IRS1表达差异无统计学意义(P＞0.05),4组间GLUT4表达差异无统计学意义(P＞0.05),胰岛素+AngⅡ+H89组Ptyr-IRS1、GLUT4较胰岛素+AngⅡ组表达增加(P＜0.05),较胰岛素组表达减少(P＜0.05).结论 AngⅡ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路抑制IRS1的酪氨酸磷酸化,抑制GLUT4由胞浆转移至胞膜,进而导致胰岛素抵抗.

胰岛素受体底物1和2在2型糖尿病大鼠脂肪组织中的蛋白表达及其意义

目的探讨2型糖尿病胰岛素抵抗的分子机制.方法用Western杂交检测自发发病的2型糖尿病模型(OLETF大鼠)脂肪组织内IRS-1和2(胰岛素受体底物1与2)的蛋白表达水平;并与同种属的Wistar大鼠比较.结果OLETF大鼠脂肪组织内IRS-1的蛋白表达较对照组减少(P＜0.05),而IRS-2的蛋白表达与对照组差异无显著性(P＞0.05).结论OLETF大鼠脂肪组织IRS-1蛋白表达是减少的;IRS-2可能在OLETF大鼠脂肪细胞内含SH2区域的信号传导分子中起主要的docking蛋白作用,并可能是引起2型糖尿病高胰岛素血症及胰岛素抵抗的因素之一.

Ⅱ型糖尿病患者血脂胰岛素受体底物及血清中血管细胞粘附分子1的检测及意义

目的探讨2型糖尿病患者血脂胰岛素受体底物(IRS)及血清中血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)的表达及二者在临床中的意义.方法采用免疫组化ELASA法及Western印迹技术分别检测了39例2型糖尿病患者(男23例,女16例;年龄49岁-76岁,平均年龄623岁)上述两种物质的表达,并以20例非糖尿病者作对照,检测结果利用SPSS统计软件进行统计学分析.结果①2型糖尿病患者血脂中IRS-1蛋白表达减少,与正常对照差异具显著性(P＜0.05),IRS-2蛋白表达无明显变化.②2型糖尿病患者血清中sVCAM-1水平明显高于非糖尿病组,差异具显著性(P＜005),而且伴微血管并发症的糖尿病亚组血清中sVCAM-1高于不伴微血管并发症组.结论检测2型糖尿病血液中IRS及sVCAM-1,有助于了解糖尿病的发病机制,监测疾病的发生发展.