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C/EBPα基因与PARs在肝星状细胞激活中的作用及关系
蛋白酶活化受体家族(protease activated receptors,PARs)可通过MAPK/ERK,信号通路激活细胞内部分转录因子,从而参与肝纤维化的形成,是肝纤维化自动放大循环过程中主要炎症和纤维化受体.肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的活化是肝纤维化的关键,HSC活化的显著变化是细胞内维生素A和脂滴的减少和消失,而转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在维持脂肪细胞分化中起着重要作用,因此其对肝纤维化形成过程中肝星状细胞的活化具有负性调控作用,上调其表达可以抑制肝星状细胞增殖和活化,并诱导肝星状细胞的凋亡.深入研究PARs与C/EBPα的关系,将有助于对肝纤维化发生机制的理解,从而为抗肝纤维化治疗提供新的理论依据.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白α 蛋白酶活化受体家族 肝纤维化 肝星状细胞 -
人CCAAT增强子结合蛋白α基因影响骨肉瘤细胞生长活性研究
目的：构建带Myc(pXJ-40)标签的CCAAT增强子结合蛋白α(CCAATenhancerbindingproteinα，C/EBPα)的真核表达载体，并检测其对骨肉瘤细胞生长的影响。方法应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR )技术从人乳腺文库中扩增出C/EBPα全长编码区基因；将扩增基因克隆到Myc载体中，并将重组质粒转染人胚胎肾293T细胞；Western blotting检测表达情况；另将重组Myc-C/EBPα质粒转染人骨肉瘤细胞系U2OS (实验组)、Myc空载体质粒转染U2OS细胞(对照组)，生长实验检测C/EBPα对肿瘤细胞生长的影响。结果成功构建Myc-C/EBPα真核表达质粒，重组质粒转染人胚胎肾293T细胞后成功表达。生长实验显示Myc-C/EBPα转染的U2OS细胞的生长明显受限，随着培养时间延长，受抑制的程度逐渐增大，培养至第5天，Myc-C/EBPα转染的实验组细胞生长抑制率为58%，且细胞的生长速率OD＝0.495明显低于空白对照组1.179，差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 C/EBPα对骨肉瘤细胞的生长具有抑制作用。
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CCAAT增强子结合蛋白α在甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化中的作用
目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在甾醇类新药NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化中的作用.方法 采用NSC67657诱导HL60细胞分化,流式细胞仪检测细胞表面分化抗原CD14的表达.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法连续检测C/EBPα基因和蛋白在细胞分化前后的表达情况.构建pDsRed-C/EBPα真核表达载体,基因测序后采用电转染技术,将真核表达载体转入HL60细胞中,并进行表达验证.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、瑞氏染色和流式细胞技术,观察转染细胞在NSC67657作用前后的增殖和分化情况.结果 10 μmol/L NSC67657可以诱导HL60细胞向单核系分化,连续诱导5 d后,有93.9%的细胞有CD14阳性表达.分化后的HL60细胞中,C/EBPα基因和蛋白表达均先升高后下降,分别在第2天和第3天达到峰值.真核表达载体构建成功,通过电转染和G418筛选,可获得90%以上阳性克隆.C/EBPα高表达可使HL60细胞增殖明显减缓,表面抗原CD11b的表达可达到(50.44±4.92)%.在NSC67657处理的重组质粒转染HL60细胞中,细胞单核系分化受到抑制,保留部分粒系分化.结论 NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化不一定通过C/EBPα蛋白的协调作用,但C/EBPα蛋白高表达可以阻止NSC67657诱导HL60细胞向单核系分化的进程.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白α NSC67657 HL60细胞 单核系分化 -
益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞C/EBPα、GM-CSF、 GM-CSFRα、MAFB mRNA表达的影响
目的 观察益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠骨髓细胞CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、粒-单系祖细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒-单系祖细胞集落刺激因子受体α(GM-CSFRα)、转录因子MAFB mRNA表达的影响,探讨该药调控骨髓造血的作用机制.方法 采用随机数字表法将78只雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、粒系祖细胞集落刺激因子(G-CSF)组及益髓生血颗粒高、中、低剂量组.益髓生血颗粒高、中、低剂量组先预防给药2d,分别按12、6、3g/(kg·d)灌胃.采用60Co-γ射线全身一次性照射造模.造模第2天,G-CSF组按30 μg/(kg·d)皮下注射G-CSF注射液,益髓生血颗粒高、中、低剂量组给药方法同预防给药,其余组均给予等量蒸馏水,连续14 d.进行小鼠骨髓细胞计数;采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测骨髓细胞C/EBPα、GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达.结果 益髓生血颗粒能明显提高辐射损伤小鼠骨髓细胞计数(均P＜0.05),上调骨髓细胞GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达(均P＜0.05),以低剂量组效果佳.结论 益髓生血颗粒可促进骨髓造血,其机制与上调骨髓细胞GM-CSF、GM-CSFRα、MAFB mRNA表达有关.
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C/EBPα在慢性髓性白血病患者中的表达及其作用机制研究
目的 研究转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在慢性髓性白血病(CML)患者中的表达情况及其作用机制.方法 收集50例CML患者(慢性期33例,加速期7例,急变期10例)骨髓标本和20名正常对照者外周血标本,用RT-PCR方法检测C/EBPα基因mRNA的表达情况及其与bcr-abl融合基因的相关性;观察伊马替尼对K562细胞C/EBPα基因mRNA表达的影响;采用慢病毒转染的方法将重组pLVX-C/EBPα-3FLAG-Puro及空载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro慢病毒质粒转入K562细胞,构建稳定表达C/EBPα的K562细胞株;用CCK-8试剂盒检测细胞增殖;RT-PCR方法检测Foxo3a、Bim基因的表达情况.结果 与正常对照者相比,CML患者C/EBPα mRNA表达显著下降(P＜0.01),并与bcr-abl融合基因表达呈负相关(r=-0.505,P＜0.01);RT-PCR和Western blot检测结果显示成功构建稳定表达C/EBPα的K562细胞株;K562-C/EBPα细胞增殖水平明显低于未处理K562细胞及K562-空载体细胞;K562-C/EBPα细胞Foxo3a、Bim基因mRNA相对表达量分别为1.06±0.06、0.53±0.07,均高于K562-空载体和K562细胞(P＜0.01,P＜0.05).结论 CML患者转录因子C/EBPα表达水平下调,过表达C/EBPα对K562细胞增殖有抑制作用.
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1,25-二羟基维生素D3抑制脂肪细胞分化作用的研究
目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对脂肪细胞分化的影响及其机制。方法以间充质干细胞系C3H10T1/2为研究对象，将其分为6组，分别为对照组、诱导分化组和4个不同剂量的1,25(OH)2D3处理组。其中对照组加入溶媒，诱导分化组加入脂肪细胞诱导分化试剂，1,25(OH)2D3处理组除了加入脂肪细胞诱导分化试剂外，予以10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L 1,25(OH)2D3处理。处理后5 d进行油红O染色，RT-PCR检测脂肪细胞特异性转录因子和Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达水平，Western blot检测β-catenin蛋白水平。结果1,25(OH)2D3能够强烈抑制脂肪细胞生成，阻断脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ、CCAAT增强子结合蛋白（C/EBP）α及脂肪细胞表征因子aP2 mRNA表达，下调Wnt/β-catenin信号通路抑制因子分泌性卷曲相关蛋白1（sFRP1）mRNA，上调β连环素（β-catenin）蛋白水平。结论1,25(OH)2D3强烈抑制脂肪细胞分化，该作用可能与其激活Wnt/β-catenin信号通路有关。
关键词： 脂细胞 细胞分化 骨化三醇 PPARγ CCAAT增强子结合蛋白α β连环素 脂肪细胞表征因子aP2 -
转化生长因子β受体Ⅰ影响脂肪细胞分化的研究
目的探讨siRNA下调转化生长因子β受体Ⅰ（TGFBRⅠ）基因表达后对ST2细胞向脂肪细胞分化的作用。方法设计并合成针对TGFBRⅠ的靶向siRNA作为实验组，以转染Control siRNA作为对照组。应用qRT-PCR检测并比较转染ST2细胞后各组TGFBRⅠmRNA的表达和脂肪细胞特异性转录因子CCAAT增强子结合蛋白（C/EBP）α、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ、脂肪细胞表征因子FABP4 mRNA的表达水平。诱导5 d后对2组细胞进行油红O染色，检测TGFBRⅠsiRNA对ST2细胞分化的影响。利用激光共聚焦显微镜观察脂肪细胞的染色情况并对细胞进行拍照。另外，用异丙醇萃取出油红O，测定油红O在波长520 nm处的光密度（OD）值，并进行组间比较。结果转染TGFBRⅠsiRNA后，ST2细胞TGFBRⅠ基因的表达水平明显下调，TGFBRⅠsiRNA能够促进脂肪细胞生成，增强C/EBPα、PPARγ及FABP4 mRNA表达；经成脂诱导5 d后，转染TGFBRⅠsiRNA的细胞产生的脂滴明显较Control siRNA组多，且OD值高于Control siRNA组。结论 TGFBRⅠsiRNA能有效促进脂肪细胞的分化，提示TGFBRⅠ可能是前体细胞向脂肪细胞分化的重要调控因子。
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Notch1/Hes1信号调控CCAAT/增强子结合蛋白α表达对高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与分化的影响
背景:Notch1/Hes1信号和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein alpha,C/EBPα)在肺发育及肺损伤中均发挥重要作用.前期研究发现,高氧可引起肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cel,AECII)增殖分化异常,并与C/EBPα异常表达有关,而这种异常是否与Notch1/Hes1信号调控有关,目前尚不清楚.目的:探讨Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对高氧损伤AECII增殖与分化的影响.方法:体外培养人AECII,将细胞随机分为空气组、空气激活剂组(Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)、高氧组(按3 L/min通入体积分数95％O2和5％CO2高纯混合气体且持续10 min)、高氧激活剂组(在通氧前30 min加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L).于干预后24 h收获各组细胞,采用RT-PCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPαmRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测AECII细胞增殖;流式细胞术标记肺泡Ⅰ型上皮细胞特异性表面标志蛋白AQP5检测AECII分化.结果与结论:与空气组比,空气激活剂组Notch1、Hes1、C/EBPαmRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05),AECII增殖增加而分化减少(P<0.05);高氧组和高氧激活剂组Notch1、Hes1、C/EBPαmRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),AECII增殖减少而分化增加(P<0.05);与高氧组比,高氧激活剂组Notch1、Hes1、C/EBPαmRNA和蛋白表达增加(P<0.05),AECII增殖增加而分化减少(P<0.05);结果提示,Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响高氧损伤AECII增殖与分化功能.
关键词： 肺泡Ⅱ型上皮细胞 Notch1/Hes1信号 CCAAT增强子结合蛋白α 高氧 增殖 分化 -
C/EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究
目的 构建GST-C/EBPa融合蛋白表达载体,并在大肠埃希茵(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-C/EBPa为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化E-coliDH5α筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPa全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了C/EBPa原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPa蛋白和研究C/EBPa的生物学功能奠定了基础.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白α 截短突变体 质粒 原核表达 -
大黄素对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的作用
目的:观察大黄素(emodin)对3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化作用,并探讨其可能机制.方法:采用油红O染色、三酰甘油(TG)含量测定及3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)活性测定等方法检测脂肪细胞的分化程度;用实时定量PCR法检测大黄素对脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体.y2(PPARγ2)mRNA、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA和脂肪酸结合蛋白ap2 mRNA表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖;运用表面等离子体共振技术(SPR)测定大黄素与PPARγ2的亲和力.结果:大黄素呈剂量依赖性促进3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化,50 μmol/L大黄素可使脂肪细胞内TG含量和GPDH活性分别增加约22%及60%.大黄素可显著升高脂肪细胞的PPARγ2 mRNA、C/EBPα mRNA及脂肪酸结合蛋白ap2 mRNA表达水平.同时.50 μmol/L大黄素可使前脂肪细胞的细胞增殖率下降约17%.SPR检测结果显示.大黄素具与PPARγ2结合活性,提示其可能是PPARγ2的配体.结论:大黄素作为PPARγ2的配体,能促进脂肪细胞分化、抑制前脂肪细胞增殖,而该过程可能是通过上调PPARγ2、C/EBPα的表达来实现的.
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多聚胞嘧啶结合蛋白E2的RNA干扰对白血病32DP210细胞分化影响的分子机制探讨
目的:Bcr/abl诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2 [poly(rC)-binding protein-E2,hnRNP-E2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中起着重要作用.本研究旨在探讨hnRNP-E2特异性小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对小鼠白血病32DP210细胞分化的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法:构建能表达特异性抑制小鼠hnRNP-E2基因表达的shRNA(即sh-hnRNP-E2)反转录病毒载体,经Phoenix-Ampho细胞包装后, 取上清液感染小鼠白血病32DP210细胞, 然后采用RT-PCR和Western 印迹法验证sh-hnRNP-E2对hnRNP-E2 mRNA的干扰以及蛋白表达抑制效果,瑞氏染色法观察靶细胞分化情况,FCM法检测粒系分化抗原Gr-1表达情况,Western印迹法检测下游野生型CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α,C/EBPα)的表达情况.结果:sh-hnRNP-E2反转录病毒感染32DP210细胞后,显著抑制靶细胞内hnRNP-E2 mRNA和蛋白的表达;靶细胞形态学出现粒系分化特征,细胞表面粒系分化抗原Gr-1表达被诱导;同时,靶细胞内野生型C/EBPα蛋白的表达恢复.结论:sh-hnRNP-E2特异性沉默靶细胞内hnRNP-E2基因表达后,可促进32DP210细胞向粒系分化;其机制可能与hnRNP-E2表达受抑制后,不能再对C/EBPα的翻译模式进行异常调控,从而恢复野生型C/EBPα的表达有关.
关键词： 白血病 粒-单核细胞 慢性 RNA干扰 细胞分化 多聚胞嘧啶结合蛋白E2 CCAAT增强子结合蛋白α -
探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响
目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达.本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响及其可能的分子机制.方法:用电转染方法将hnRNP E2诱骗RNA野生序列和突变序列的表达载体(pGD和pGM)转入32D-BCR/ABL细胞,用G418筛选出稳定表达诱骗RNA的细胞.锥虫蓝染色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力.FCM分析细胞周期,RT-PCR和Western印迹法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein α,C/EBPα)和c-Myc的表达.结果:筛选出稳定表达野生型和突变型诱骗RNA 的32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞.野生型32DP210-pGD细胞与未转染32D-BCR/ABL细胞相比,其细胞增殖抑制率为(69.48±5.21)%,克隆形成能力明显减弱,细胞周期由G0/G1期向S期进展受阻;C/EBPα mRNA水平无改变,但在蛋白水平上42 ku-C/EBPα的表达增加(43.83±4.91)%;c-Myc mRNA水平下降(35.67±6.64)%,蛋白水平降低(30.91±3.84)%.突变型32DP210-pGM细胞与未转染32D-BCR/ABL的细胞相比,其上述各指标无明显差异.结论:hnRNP E2诱骗RNA能够抑制32D-BCR/ABL细胞的增殖,其机制可能是诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPα mRNA的结合,引起42 ku-C/EBPα表达增加,进而引起其下游靶基因c-Myc下调.
关键词： 白血病 髓样 慢性 多聚嘧啶区结合蛋白质 CCAAT增强子结合蛋白α 细胞增殖 诱骗RNA -
小檗碱激活AMPK抑制3T3-L1脂肪细胞分化
目的 探讨小檗碱对3T3-L1脂肪分化的作用是否与激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)有关.方法 在3T3-L脂肪细胞分化全程加入小檗碱,以油红O染色检测3T3-L1脂肪细胞胞浆中脂肪的堆积,实时定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)、CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和AMPK的mRNA表达,以Western印迹法检测AMPK和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的磷酸化水平.结果 小檗碱剂量依赖性地抑制3T3-L1脂肪细胞分化,10 μmol/L小檗碱几乎完全抑制胞浆中脂肪的堆积.5 μmol/L小檗碱在脂肪细胞诱导分化1、3、5、7d后均显著降低CEBPα mRNA表达(P<0.05或P<0.01),诱导分化3、5、7d时显著降低PPARγ2的mRNA表达(P<0.05或P<0.01).AMPK的mRNA水平在分化过程中未受小檗碱的明显影响,而小檗碱明显增加其蛋白磷酸化水平,其下游靶基因ACC磷酸化水平也明显增加.结论 小檗碱抑制3T3-L1脂肪细胞的分化可能与其激活AMPK有关.
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转化生长因子β1对肾小管上皮细胞C/EBPα及相关核转录因子表达的影响
目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)核转录因子表达的影响,探讨C/EBPα在TGF-β1致肾间质纤维化过程中的表达及其机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),利用TGF-β1分别在不同质量浓度(5和10 ng/mL)和不同时间点(0、4、12、24 h)刺激HK-2细胞,收集细胞总RNA和蛋白(核蛋白和总蛋白)以及细胞上清液.应用real-time PCR法和Western blotting检测C/EBPα和核转录因子PPARγ以及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白α-SMA、E-cadherin的表达变化;ELISA方法检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平.结果 TGF-β1(5 ng/mL)刺激HK-2细胞24 h后C/EBPα蛋白与PPARγ变化一致,差异均无统计学意义(P＞0.05);E-cadherin表达减少.TGF-β1(10 ng/mL)分别刺激0、4、12、24 h后,核蛋白中C/EBPα在12h时表达明显降低,PPARγ在4h表达升高.以TGF-β1 10 ng/mL刺激HK-2细胞12 h后,C/EBPα、PPARγ、E-cadherin mRNA分别降低70％、50％和90％ (P ＜0.05).以10 ng/mL TGF-β1刺激HK-2细胞后,MCP-1在12、24 h时分别升高6倍和10.67倍.结论 C/EBPα参与TGFβ1诱导的肾间质纤维化过程,并且与间质纤维化过程中的炎症反应和EMT过程相关;且在此过程中,与PPARγ相互作用,促进或抑制肾间质纤维化.
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转录因子CCAAT增强子结合蛋白α的研究进展
CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员.该家族属于碱性区亮氨酸拉链(bZIP)蛋白家族,在细胞增殖分化、细胞周期调控、免疫应答、炎症反应、能量代谢、肿瘤发生及凋亡等过程中发挥作用.文章就C/EBPα的结构、表达调控、生物学功能作一综述.
关键词： CCAAT增强子结合蛋白α 结构 表达调控 生物学功能 -
转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α在银屑病皮损中的表达及意义
目的 探讨转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBP-α)在寻常性银屑病皮损中的表达及与角质形成细胞异常增殖及皮损严重程度间的相关性.方法 用免疫组化二步法及Western印迹检测30例寻常性银屑病患者皮损和30例健康对照皮肤的表皮中C/EBP-α.免疫组化法检测Ki-67的表达,并根据Ki-67阳性表达数量计算增殖指数,Pearson相关分析法分析寻常性银屑病皮损中C/EBP-α的表达水平与角质形成细胞Ki-67增殖指数及银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI评分)间的相关性.结果 C/EBP-α主要在角质形成细胞胞质中表达,寻常性银屑病皮损中C/EBP-α的表达较健康对照皮肤明显下调(f=7.82,P＜ 0.05).Ki-67主要在角质形成细胞胞核中表达,寻常性银屑病皮损中角质形成细胞的增殖指数明显高于健康对照皮肤(t=4.54,P＜0.05).经Pearson相关分析,寻常性银屑病皮损中C/EBP-α表达水平与增殖指数呈负相关,与PASI评分呈负相关.Western印迹结果亦显示,C/EBP-α在银屑病皮损处的表达量显著下调.结论 C/EBP-α在寻常性银屑病皮损中表达下调,可能参与了寻常性银屑病的发病过程.
关键词： 银屑病 CCAAT增强子结合蛋白α 增殖指数 -
CCAAT增强子结合蛋白α与急性髓细胞白血病的发生
CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在髓系造血过程中起着重要的调控作用,其基因表达失调是急性髓细胞白血病(AML)发生的重要机制.C/EBPα基因表达失控的结局是p30过表达和p42不完全丧失,两者均促使AML的发生.因此,恢复C/EBPα表达比例,过表达p42或阻断p30致癌通路是治疗此类原因所致AML的重要途径.本文回顾了近年来关于C/EBPα表达失调及其两种蛋白体在AML发病机制中的研究进展.
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川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响
目的 研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponin Ⅵ,ASA Ⅵ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用.方法 以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50 μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平.结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10 μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBP αmRNA表达.结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBP α基因抑制3T3-L1细胞成脂分化.
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胰岛素受体底物1基因沉默对3T3-L1细胞CCAAT增强子结合蛋白α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响
目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-I)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA及蛋白表达的影响,并观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞能力的改变,探讨胰岛素受体底物(IRSs)是否作为C/EBPα 、PPAR-γ的上游调节信号在前脂肪细胞分化中起到重要的调节作用.方法 合成4条IRS-I shRNA,Western blotting筛选出沉默效率高的1条.3T3-L1前脂肪细胞分为IRS-1沉默组和对照组.IRS-1沉默组细胞用沉默效率高的IRS-1 shRNA质粒转染3T3-LI前脂肪细胞,沉默细胞中的IRS-1分子；对照组采用无意义IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞.转染24h后诱导其分化成熟,分化72 h后检测促进前脂肪细胞分化的关键分子C/EBPα、PPARγ的表达.继续诱导分化至第7天,油红O染色观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的比例,检测其分化能力的改变.结果 与对照组相比,IRS-1沉默组在诱导分化72 h后,Real-time PCR结果显示3T3-L1前脂肪细胞中C/EBPα mRNA、PPARγ mRNA表达明显下降(Pa＜0.05),Western blotting结果显示C/EBPα、PPARγ蛋白水平也同样显著下降(Pa＜0.05)；细胞继续分化至第7天,油红O染色显示,IRS-1沉默组前脂肪细胞分化成熟的比例与对照组比较显著降低.结论 胰岛素可能通过IRS-1刺激C/EBPα、PPARγ的表达促进前脂肪组织的分化.
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披针新月蕨总黄烷对3T3-L1细胞增殖与分化的影响
目的 探索披针新月蕨总黄烷对3T3-L1细胞增殖与分化的影响.方法 通过检测细胞存活率来评价总黄烷的细胞毒性,通过检测油红O染色程度来评价总黄烷对3T3-L1细胞增殖分化的影响,通过实时定量逆转录多聚链反应(RT-PCR)检测细胞分化相关基因CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα),脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)和葡萄糖转运因子4(GLUT-4)mRNA的表达情况.结果 披针新月蕨给药组的细胞MTT值未有明显改变,而油红O染色程度显著性下降了,同时披针新月蕨给药明显的抑制了细胞C/EBPα,FABP4和GLUT-4基因的表达.结论 披针新月蕨具有抑制3T3-L1细胞增殖与分化的活性.
