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尼古丁对小鼠胚胎干细胞特异基因Oct-4转录的影响
目的 通过尼古丁对小鼠胚胎干细胞(Embryonic Stem,ES)特异基乙丁是否影响早期胚胎发育.方法 ES细胞选用饲养层培养法,尼古丁(1～1000 nmol/L)和/或10μmol/L筒箭毒(尼古丁乙酰胆碱受体阻断剂)作用24h后,纯化ES细胞,提取总RNA.首先扩增Fgf-5以观察纯化后ES细胞的纯度;同时用半定量RT-PCR法观察尼古丁对Oct-4和β-actin表达的影响,及筒箭毒对尼古丁作用的影响.结果 尼古丁对β-actin转录没有明显的影响,而可明显的增强Oct-4的转录;筒箭毒单独作用ES细胞可提高Oct-4的转录,而在尼古丁同时存在的情况下,筒箭毒对Oct-4的作用将随着尼古丁浓度的增加而减弱,当尼古丁的浓度为100～1000 nmol/L时,筒箭毒可明显抑制尼古丁诱导的Oct-4的表达.结论 研究表明,Oct-4的转录水平和胚胎干细胞的命运密切相关,维持胚胎干细胞的未分化状态需要Oct-4保持相对恒定的转录水平.因而,尼古丁对Oct-4转录的影响可能会影响胚胎干细胞的发育和分化,从而影响胚胎的早期发育.
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环磷酰胺下调大鼠睾丸OCT-4和GDNF表达
目的 探讨抗肿瘤药物环磷酰胺对大鼠睾丸和精原干细胞相关因子OCT-4和GDNF表达的影响.方法 12只8周龄大鼠随机分为对照组和实验组,每组6只；实验组每天腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg,连续3d,用药4周后PAS染色法观察大鼠睾丸组织学变化,精原细胞,生精小管直径和附睾尾部精子数量.免疫组织化学法检测精原干细胞相关分子OCT-4和GDNF表达水平.结果 与对照组比较,实验组大鼠体重、睾丸和附睾重量均显著减轻,睾丸组织学无明显改变,附睾精子活动度降低,附睾精子和精原细胞数量减少.实验组GDNF表达明显减少,而OCT-4表达水平无明显变化.结论 环磷酰胺短期用药可造成精子发生的损害,其中精原细胞的减少可能与损害后GDNF表达下调有关.
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长期低剂量NaAsO2诱导人骨髓间充质干细胞的分化
目的 研究在建立抗砷细胞模型CAsE-人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)过程中,低剂量砷长期暴露对hBMSCs分化的作用. 方法 常规条件培养hBMSCs,实验组用1μmol/L的亚砷酸钠连续诱导hBMSCs≥12周,采用48h急性砷中毒实验检测细胞抗砷性的产生;细胞集落形成实验分析CAsE-hBMSCs的增殖能力;应用RT-PCR、免疫细胞化学技术检测砷对Oct-4表达的影响;RT-PCR检测砷对ABCG2表达的影响. 结果 用1μmol/L的亚砷酸钠连续诱导12周后,hBMSCs获得抗砷性,砷诱导hBMSCs的LC 50为35.59μmol/L,平行培养的hBMSCs的LC 50为18.04μmol/L;与对照组比较,CAsE-hBMSCs不具有恶性增殖能力;Oct-4基因在第4代、第18代及砷诱导4周的hBMSCs中均有表达,但在亚砷酸钠诱导12周、15周后未检测到Oct-4的表达;Oct-4蛋白在第4代hBMSCs表达阳性,砷诱导15周的CAsE-hBMSCs中呈弱阳性表达,阳性颗粒分布在胞质内;实时定量结果 显示ABCG2在砷诱导15周的hBMSCs中的表达明显低于对照组(P<0.001). 结论 长期低剂量NaAsO2可诱导人骨髓间充质干细胞分化.
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Oct-4和人端粒酶逆转录酶在不同胎龄人胚原始生殖细胞的表达变化
目的 检测不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4、人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达变化.方法 取人胚胎生殖嵴,通过RT-PCR检测5～13周龄人胚生殖嵴中Oct-4、hTERT的表达变化;同时,取人胚胎生殖嵴,经石蜡切片,HE染色、免疫组织化学染色等技术,观察不同胎龄人胚原始生殖细胞的形态,检测Oct-4、hTERT的表达情况.结果 胎龄6～7周时,生殖嵴中可见少量原始生殖细胞,且表达Oct-4及hTERT;胎龄8～12周时,生殖嵴中原始生殖细胞数量增多,Oct-4及hTERT表达增强(P<0.05);胎龄13周以后,生殖嵴中Oct-4阳性的原始生殖细胞数量逐渐减少,Oct-4表达减弱,但hTERT仍然高表达.结论 不同胎龄人胚原始生殖细胞中Oct-4的表达呈动态变化,胎龄8～12周时表达较强,但hTERT的表达量始终维持在较高水平,没有明显变化.
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生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达
目的 体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P19细胞诱导分化前后的表达.方法 用全反式维甲酸(ATRA)诱导P19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P19细胞诱导分化前后的表达.结果 Oct-4在P19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2d后表达下降；而GCNF在P19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2d后呈阳性表达.结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化.GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化.
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多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌 Eca109细胞球细胞中的表达
目的：观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。方法采用无血清成球培养法，富集培养细胞球细胞，观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球，收集第14天的细胞球，一部分用于实验，一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上，贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达，但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱；Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达，贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达；Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。
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人类羊水源类ES细胞多能性干细胞的分离培养
Stem cells are classified into embryonic stem (ES) cells and adult stem cells, which are the progenitors of any cell types of the body or tissues, and have the ability to self-renew and produce one or more differentiated cell types.
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SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达
目的体外培养人胚胎生殖细胞(EG细胞),通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.
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OCT-4在上颌窦鳞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨Oct -4基因与上颌窦鳞癌恶性生物学行为的关系.方法 应用免疫组化方法检测43例上颌窦癌和20例癌旁正常鼻黏膜组织中Oct -4的表达.结果 Oct -4在癌旁正常鼻黏膜组织中表达率为15％ (3/20),而在上颌窦鳞癌组织中阳性表达率为51.2％ (22/43),两者有显著统计学差异(P＜0.01).Oct -4表达与上颌窦鳞癌的组织分化程度及淋巴结有无转移有关(P＜0.05),与性别、年龄、临床分期无明显相关(P＞0.05).结论 b(1)与癌旁正常组织相比,癌组织中Oct -4阳性细胞表达率明显增高,提示表达Oct-4的肿瘤细胞可能是肿瘤干细胞,其与上颌窦鳞癌的形成有关系；(2) Oct -4阳性细胞表达率与上颌窦癌恶性程度及淋巴结转移密切相关,提示Oct -4的表达在上颌窦鳞癌发生、发展中可能具有一定的意义.
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干细胞标志物Nanog、Oct-4、SOX-2表达与结肠癌术后复发转移关系
目的:探讨结肠癌患者肿瘤组织中Nano g、Oct-4、SOX-2表达情况及其对远处转移的预测作用,方法:采用免疫组织化学方法检测经手术切除的80例结肠癌术后标本中Nanog、Oct-4、SOX-2表达情况,并且对三种指标的表达同肿瘤分化程度、分期和术后复发转移关系进行分析.结果:8 0例患者有3 5例出现复发转移,SOX-2、Oct-4、Nanog在转移组患者中表达率分别为48.57%(17/35)、51.43%(18/35)、60%(21/35),在非转移组中表达率分别为17.78%(8/45)、13.33%(6/45)、26.67%(12/45).差异有统计学意义.原发灶分化程度仅同Nanog表达差异有统计学意义(P=0.00l).但是三指标表达同T分期和N分期没有明显联系.三者均为表达阳性其转移率明显高于均为阴性转移率,生存分析显示不同表达状态其远处转移出现时间差异有统计学意义(P=0.0001).结论:组织中Nanog、Oct-4、SOX-2表达同结肠癌术后复发转移发生相关,联合检测有助于评估肿瘤转移情况.
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胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达
目的 分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况.方法 应用RT-PCR检测Oct-4 mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Western blot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素 (FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率.结果 4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白.88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关.Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%.结论 Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞.
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干细胞相关基因Oct-4在人肿瘤细胞系中的表达及其意义
目的 探讨干细胞相关基因Oct-4在多种人肿瘤细胞系中的表达.方法 体外培养人胰腺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞系,应用RT-PCR和Western blot法分别检测Oct-4 mRNA和蛋白在各种人肿瘤细胞系中的表达.结果 Oct-4 mRNA和蛋白在胰腺癌细胞系SW1990、PANC1、BxPC3、PC3,宫颈癌细胞系HELA,肝癌细胞系HepG2,乳腺癌细胞系MCF-7和结肠癌细胞系CaCo2中均有表达.结论 干细胞相关基因Oct-4在肿瘤细胞中的表达,一方面说明恶性肿瘤与干细胞具有密切的关系,另一方面也说明Oct-4基因在这些肿瘤的发生中起到重要作用.
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宫颈癌HeLa细胞株GCNF和Oct-4诱导分化表达
目的:检测生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)及Oct-4在宫颈癌HeLa细胞诱导分化前后的表达.方法:用全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)诱导HeLa细胞分化,HE染色观察诱导前后细胞的形态变化;通过免疫组化和半定量的RT-PCR方法,检测GCNF及Oct-4在HeLa细胞诱导分化前后的表达.应用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果:随着诱导时间的延长HeLa细胞体积变小,圆形细胞逐渐增多,细胞核开始固缩;GCNF在诱导前后的HeLa细胞中均有表达,随着诱导时间延长其表达逐渐增强但3d后表达强度开始下降,F=14.67,P＜0.001.3d组和1d组、2d组和5d组比较差异无统计学意义;但与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05;Oct-4在诱导前后的细胞中均不表达.结论:GCNF参与了肿瘤细胞的体外分化;在体外培养的宫颈癌细胞株中,GCNF基因可能关闭了Oct-4的激素反应元件.
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Oct－4在结直肠癌组织中表达及其与预后的关系
目的：探讨Oct－4蛋白在结直肠癌组织中的表达与患者临床病理学参数及预后的关系。方法应用免疫组化法检测本院101例结直肠癌组织中 Oct－4蛋白的表达情况。分析 Oct－4蛋白表达与结直肠癌临床病理参数的关系及其对患者预后的影响。结果 Oct－4蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率为59．41％（60／101），其阳性表达与患者性别（P＝0．020）、肿瘤 T 分期（P＝0．030）、N分期（P＝0．001）、TNM 分期（P＜0．001）和 Duke 分期（P＜0．001）显著相关。 Oct－4蛋白阳性表达患者总体5年生存率为10％，显著低于阴性表达患者的总体 5年生存率56．1％（P＜0．001）。 Oct－4蛋白阴性表达患者5年无疾病进展生存率为51．22％，显著高于阳性表达患者5年无疾病进展生存率27．72％（P＝0．001）。 COX 多因素回归分析结果表明肿瘤直径（HR＝0．433，95％ CI：0．243～0．772，P＝0．005）、TNM分期（HR＝3．49，95％ CI：2．352～5．181，P＜0．001）和 Oct－4阳性表达（HR＝0．432，95％ CI：0．248～0．754，P＝0．005）是影响患者预后的独立危险因子。结论 Oct－4蛋白阳性表达可作为结直肠癌患者预后不佳的预测指标。
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喉鳞状细胞癌组织中OCT-4、CD44的表达及OCT-4 CD44双阳性的临床病理学意义
目的 检测核转录因子OCT-4在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与CD44表达的关系,进而探讨OCT-4与肿瘤干细胞的关系及其在肿瘤组织中表达的意义.方法 筛选兰州军区兰州总医院病理科2008年1月至2012年12月鳞状细胞癌患者手术切除存档的喉癌标本69例.另取18例正常喉黏膜组织标本作为正常对照.利用组织芯片技术、免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色技术,定位标记OCT-4、CD44和OCT-4 CD44双阳性细胞,观察分析其在喉鳞状细胞癌组织中的表达数量、分布方式、细胞形态特征以及与患者临床病理参数的关系.结果 喉鳞状细胞癌组织中CD44阳性细胞百分数为(63.62±8.76)％,高于正常喉黏膜的(13.61±5.81)％(P<0.001);喉鳞状细胞癌组织中OCT-4阳性细胞百分数为(50.44±10.84)％,而在正常喉黏膜组织中不表达(P<0.001);喉鳞状细胞癌组织中OCT-4阳性细胞百分数低于CD44(P<0.001).喉鳞状细胞癌组织OCT-4 CD44双阳性细胞百分数为(5.07±2.90)％.中、 低分化喉鳞状细胞癌组CD44、OCT-4阳性细胞百分数分别为62.78％(8.22％)、49.89％(13.12％),高于高分化组[28.62％(30.45％)、33.00％(20.00％),P<0.05];在肿瘤干细胞中,中、 低分化喉癌组的OCT-4 CD44双阳性细胞百分数高于高分化组[6.54％(4.24％)比1.18％(4.66％),P<0.01],且分化程度越低,OCT-4的表达水平越高;中、低分化组OCT-4和CD44的表达在不同T分期之间差异均无统计学意义(均P>0.05),但OCT-4 CD44双阳性细胞百分数随着T分期的增加而不断升高(P<0.05);伴有淋巴结转移组OCT-4阳性细胞百分数高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论 OCT-4、CD44的表达与喉鳞状细胞癌的恶性生物学行为密切相关.OCT-4可能是喉鳞状细胞癌肿瘤干细胞有价值的标志物.
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结肠癌β-catenin、 Oct-4表达及其与术后复发转移的关系
目的 探讨结肠癌患者肿瘤组织中β-catenin、Oct-4表达及其对远处转移的预测作用.方法 采用免疫组化方法检测80例结肠癌患者术后肿瘤组织中β-catenin、Oct-4蛋白表达情况,并分析其与肿瘤分化程度、分期和术后复发转移的相关性.采用RT-PCR检测20例冷冻标本肿瘤组织及癌旁组织中Oct-4 mRNA表达情况.结果 80例患者有35例出现复发转移,β-catenin、Oct-4在转移组患者中表达率分别为65.71％(23例)、51.43％(18例),在非转移组分别为31.11％(14例)、13.33％(6例),两组间阳性表达率差异均有统计学意义(X 2=9.843,P=0.002;X 2=13.605,P=0.001).不同肿瘤分化程度、T分期和N分期者β-catenin、Oct-4表达差异均无统计学意义(P＞0.05).肿瘤组织中Oct-4 mRNA表达明显高于癌旁组织.β-catenin、Oct-4均为阳性表达者和均为阴性表达者术后远处转移率分别为78.57％(11/14)和12.50％(4/32),生存分析显示不同表达状态其远处转移出现时间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肿瘤组织中β-catenin、Oct-4表达同结肠癌术后转移的发生相关.
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肿瘤干细胞标志物CD133、CD44、OCT-4在小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的：探讨肿瘤干细胞标志物CD133、CD44、OCT-4与小细胞肺癌临床病理特征之间的相关性及临床意义。方法应用免疫荧光技术检测小细胞肺癌细胞株NCI-H82中肿瘤干细胞标志物CD133、CD44、OCT-4的表达；同时应用免疫组织化学法检测79例小细胞肺癌组织中CD133、CD44、OCT-4的表达。结果在小细胞肺癌细胞株NCI-H82中，CD133和CD 44的荧光信号为阳性表达，OCT-4的荧光信号为阴性表达。小细胞肺癌组织中CD133和CD44表达与肿瘤直径、淋巴结转移和临床分期相关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。小细胞肺癌组织中OCT-4为阴性表达。结论 CD133和CD44可能是小细胞肺癌肿瘤干细胞的标志物，对小细胞肺癌的诊断和治疗有一定的临床意义。
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Oct-4在肿瘤干细胞中的研究进展
干细胞(SC)是一类具有潜在自我更新和分化能力的初始细胞,在一定条件下,它可以增殖并分化为多种功能细胞.核蛋白Oct-4、Nanog和Sox2是3个主要转录调节因子,在维持SC多能特性、抑制SC分化的过程中发挥着核心作用.肿瘤干细胞(CSC)假说认为,在肿瘤组织内很可能也存在着具有不断增殖和分化能力的SC,即CSC,正是CSC导致了肿瘤侵袭生长、转移和对治疗的抗性.确定SC的标志物成为当前肿瘤领域研究的重要方向,而将维持SC的核心调控分子Oct-4、Nanog、Sox2引入CSC领域无疑是目前研究的前沿.现对Oct-4在CSC中的研究进展进行综述.
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Oct-4和Nestin在肺癌中共表达的临床意义
目的 研究Oct-4和Nestin共表达在肺癌中的临床意义.方法 收集320例确诊肺癌患者的肿瘤组织标本,采用PCR和免疫组织化学法检测肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中干细胞相关基因的表达差异.结果 体外实验显示,与非肿瘤干细胞相比,肿瘤干细胞,尤其是高表达Oct-4和Nestin的肿瘤干细胞致瘤性明显增强.更重要的是,320例中的42例(13.13％)肿瘤组织呈Oct-4和Nestin表达阳性.单因素分析和多因素分析提示,Oct-4和Nestin的表达与起病年龄、淋巴结转移情况密切相关(P＜0.05).结论 Oct-4和Nestin在肺癌的发展中起到重要的调节作用,Oct-4和Nestin或许可作为判断肺癌预后的重要指标.
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肺癌干细胞基因Oct-4表达的临床意义
目的 研究肺癌干细胞的基因表达与临床特征、病理特征、预后间的关系.方法 应用流式细胞仪分选出肺癌干细胞,并应用RT2 ProfilerTM PCR仪检测肺癌干细胞与非肺癌干细胞间的差异性基因表达.应用免疫组化分析干细胞基因Octamer-4(Oct-4)的表达与临床病理特征之间的关系.应用Western-blot检测肺癌干细胞中Oct-4蛋白的表达情况.结果 肺癌干细胞与非肺癌干细胞间显著差异性表达的基因共7种,包括干细胞分化相关因子(CD44、Oct-4和nestin)、细胞周期调节因子(APC和CDC2)以及生长因子(HGF和TGF).其中,Oct-4蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P = 0.001).经过生存分析,Oct-4蛋白高表达病例的术后无病生存期明显短于Oct-4低表达或无表达的病例(P = 0.001).在Cox回归模型中,肿瘤大小、淋巴结转移和Oct-4的表达为独立预后因子(分别为P = 0.031、0.002和0.003).结论 Oct-4在肺癌干细胞中高表达,并可作为肺癌发生、进展及分化的潜在生物标志.
