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莪术散对子宫内膜异位症模型大鼠异位内膜组织Cyclin A及P21表达的影响
目的：探讨子宫内膜异位症（内异症）大鼠在位和异位组织中细胞周期蛋白A（Cyclin A）及P21表达的差异，从细胞周期调控的角度探讨莪术散治疗子宫内膜异位症的相关机制，以及对其调节作用。方法：用自体移植法建立内异症大鼠模型，将造模成功的大鼠随机分成复方莪术散高、低剂量组，孕三烯酮对照组，模型对照组和空白对照组，共5组，以1 mL/100 g灌胃给药。采用免疫组化法测定给药后大鼠在位以及异位内膜组织中Cyclin A及P21的表达。结果： Cyclin A在子宫内膜异位症组中其阳性表达率较其在正常子宫内膜组织中增高，P21蛋白在子宫内膜异位症组中其阳性表达率较其在正常子宫内膜组织中明显降低，Cyclin A与P21蛋白在子宫内膜异位症组中的表达呈负相关；复方莪术散在一定剂量关系上能显著抑制异位组织的生长，缩小异位病灶体积，抑制Cyclin A的表达，提高P21蛋白的表达，与模型对照组比较有统计学差异（P＜0.05）。结论：莪术散可抑制Cyclin A的表达，提高P21蛋白的表达，从细胞周期调控的角度证实复方莪术散对子宫内膜异位症具有调节作用，这可能是其治疗子宫内膜异位症的机制之一。
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Sirt3对人脐静脉内皮细胞衰老的影响
目的：探讨沉默信息调节因子相关酶3（Sirt3）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响。方法体外培养 HUVECs，合成 Sirt3-siRNA 序列，Western blotting 法筛选出抑制效率高的序列。将实验分为对照组、Sirt3-siRNA 组，Western blotting 法检测 Sirt3和细胞衰老相关蛋白 P16和 P21的表达水平，β-半乳糖苷酶染色法检测内皮细胞衰老状态，2′，7′-二氯二氢荧光素二乙酯（DCFH-DA）法测定血管内皮细胞活性氧（ROS）的释放。结果与对照组比较，Sirt3-siRNA 组β-gal 阳性染色率明显增多，Sirt3的蛋白表达量减少，P16和 P21的蛋白表达量升高（P ＜0．05），ROS 释放明显增多。结论Sirt3抑制 HUVECs 衰老，其作用机制可能是通过调节 ROS 的释放而实现的。
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网脊衣酸上调p21CIP1蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析
目的 探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制.方法 细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用.结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达.同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平.阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性.而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加.结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖.
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急性肾损伤组织中细胞周期调控蛋白的表达变化及其意义
目的 观察细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)、p21在不同原因所致急性肾损伤(AKI)组织中的表达变化,并探讨其意义.方法 选择行肾穿刺活检术的患者纳入研究,包括AKI患者108例和无器质性肾脏病变的肾功能异常的患者(对照组)39例.AKI患者中,肾毒性AKI 63例(肾毒性AKI组)、缺血性AKI 45例(缺血性AKI组).取各组肾穿刺活检标本,采用免疫组织法检测Cyclin B1、CDK4、p21蛋白.结果 肾毒性AKI组、缺血性AKI组的肾小管细胞和肾间质中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达积分均高于对照组(P均<0.05).肾毒性AKI组及缺血性AKI组肾组织中Cyclin B1、CDK4、p21蛋白表达积分相比,P均>0.05.结论 AKI组织中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达上调,在肾毒性AKI和缺血性AKI中三种细胞周期调控蛋白表达变化的趋势一致;细胞周期调控蛋白的表达与AKI病因无关.
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沉默ADAM17蛋白对人结肠癌HT29细胞增殖能力的影响及机制探讨
目的 观察沉默解整合素样金属蛋白酶17(ADAM17)表达对结肠癌HT29细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 将HT29细胞分为3组,沉默组和阴性对照组分别转染ADAM17小干扰RNA(ADAM17-shRNA)及对照序列(nonsense shRNA),空白对照组加入等量PBS;转染后48 h,采用real-time PCR法检测细胞ADAM17mRNA,CCK-8法观察细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21.结果 转染48 h,与阴性对照组和空白对照组比较,沉默组细胞ADAM17 mRNA及蛋白表达减少,细胞增殖率下降,G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例降低,cyclin D1蛋白表达降低,p21蛋白表达升高(P均＜0.01).结论 沉默ADAM17蛋白可抑制结肠癌HT29细胞增殖,可能与其影响细胞周期蛋白cyclin D1、p21表达从而调控细胞周期有关.
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明矾对 HepG2、SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响及机制探讨
目的：观察明矾对HepG2、SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。方法选取HepG2、SMMC-7721肝癌细胞株，分别设置实验组及对照组（ HepG2细胞设为实验1组及对照1组，SMMC-7721细胞设为实验2组及对照2组），实验组加入不同剂量明矾，对照组加入等体积的DMEM培养基，台盼蓝实验做细胞生长曲线；流式细胞分析技术检测各组细胞周期、凋亡变化；RT-PCR、ELISA法分别检测细胞内转化生长因子β1（ TGF-β1）、p21、Cyclin E mRNA及蛋白表达。结果100μg／mL的明矾对HepG2细胞株在第3、4、5、6天的抑制率分别为23．2％、53．7％、68．6％、97．3％，100μg／mL的明矾对SMMC-7721细胞株在第3、4、5、6天的抑制率分别为14．1％、28．3％、47．2％、81．9％。 HepG2细胞：实验1组及对照1组G0／G1期细胞比例分别为73．15％、59．75％，两组比较， P＜0．05；SMMC-7721细胞：实验2组及对照2组G0／G1期细胞比例分别为76．66％、44．11％，两组比较，P＜0．05。HepG2细胞：实验1组及对照1组细胞凋亡率分别为22．53％、5．20％，两组比较，P＜0．05；SMMC-7721细胞：实验2组及对照2组细胞凋亡率分别为17．63％、4．80％，两组比较，P＜0．05。与其相对应的对照组比较，实验组TGF-β1 mRNA及蛋白表达升高，p21 mRNA及蛋白表达升高，Cyclin E mRNA及蛋白表达降低（P＜0．05或0．01）。结论明矾能够抑制肝癌细胞增殖，使肝癌细胞阻滞于G1期，并促进其凋亡，其机制可能与促进TGF-β1、p21表达及下调Cyclin E表达有关。
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原发性肝细胞癌组织Smad4、p21蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨原发性肝细胞癌组织Smad4和p21蛋白表达及其相关性.方法 采用免疫组化法检测60例原发性肝细胞癌组织及20例癌旁组织中Smad4、p21蛋白的表达,同时结合临床资料进行分析.结果 癌及癌旁组织中Smad4蛋白阳性表达率分别为36.7%、80.0%,p21蛋白阳性表达率分别为41.7%、70.0%,两种组织Smad4和p21蛋白表达差异均有统计学意义(P＜0.01,＜0.05).癌组织中Smad4蛋白表达与组织分级、肿瘤转移有关(P＜0.05).Smad4与p21蛋白的表达呈正相关(r=0.69,P＜0,01).结论 Smad4及p21蛋白在原发性肝细胞癌组织中表达均显著下降,并与肝癌生物学行为关系密切.
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KLF16对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制
目的 探讨Krüppel样转录因子16(KLF16)对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制.方法 取处于对数生长期的BGC-823和SGC-7901细胞,每种细胞分为3组,sh-KLF161#、2#、3#组采用脂质体Lipofectamine 3000,分别将sh-KLF161#、sh-KLF162#、sh-KLF163#转染至细胞中,sh-NC组将shRNA无关序列转染至细胞中,以不转染shRNA的细胞为空白对照组.Real-time PCR法检测KLF16 mRNA相对表达量.CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性,细胞克隆形成试验检测胃癌细胞克隆能力.Western blotting法检测细胞中细胞周期相关蛋白p21和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 BGC-823细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF161#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.13±0.10、1.06±0.15、0.57±0.11、0.72±0.14、0.39±0.13;SGC-7901细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF161#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.09±0.12、1.02±0.14、0.59±0.15、0.53±0.11、0.31±0.15;两种细胞中,sh-KLF16#3组的KLF16 mRNA相对表达量低于sh-KLF16#1组和sh-KLF16#2组(P均<0.05).在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,细胞增殖受抑制.BGC-823细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF163#组细胞克隆数目分别为(180.45±19.32)、(189.83±22.43)、(109.32±24.31)个,SGC-7901细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF163#组细胞克隆数目分别为(148.41±21.43)、(152.95±24.75)、(87.82±18.43)个,sh-KLF163#组细胞克隆数目低于空白对照组、sh-NC组(P均<0.05).在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,p21蛋白表达增加(P均<0.05),而CDK4蛋白表达下降(P均<0.05).结论 干扰KLF16基因表达,可抑制细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与上调p21蛋白和降低CDK4蛋白表达有关.
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GANT61对人胃癌细胞生长的影响及机制
目的 探讨锌指蛋白(G1i)特异性抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS生长的影响及机制.方法 用不同终浓度的GANT61处理AZ521和AGS细胞72 h后,采用MTS法检测GANT61对肿瘤细胞活力的影响;Western blotting法检测GANT61作用于AZ521和AGS细胞24h后Gli-1、Gli-2、CyclinD1和p21蛋白表达.流式细胞术检测GANT61作用于AZ521和AGS细胞24h后细胞周期.结果 GANT61作用于AZ521和AGS的IC50分别是7.94、12.70 μmol/L,GANT61作用后,AZ521和AGS细胞中Gli-1、Gli-2、CyclinD1蛋白表达显著下调(P均＜0.05),p21蛋白表达增加(P均＜0.05).GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后Go/G期细胞所占比例增高(P均＜0.05).结论 GANT61可显著抑制人胃癌细胞AZ521和AGS生长;其机制可能与下调Gli-1、Gli-2、CyclinD1蛋白表达,增加p21蛋白表达有关.
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PCNA和P21蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义
目的 探讨P21蛋白和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)在子宫内膜癌中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测正常子宫内膜组织20例(对照组)、子宫内膜非典型增生组织9例(非典型增生组)和子宫内膜腺癌组织57例(子宫内膜癌组)中P21蛋白和PCNA的表达情况.结果 对照组P21蛋白阳性表达率明显高于非典型增生组与子宫内膜癌组(P＜0.05),子宫内膜癌组PCNA高增殖率明显高于对照组与非典型增生组(P＜0.05);P21蛋白阳性表达率及PCNA高增殖率在子宫内膜组织的手术-病理分期、分化程度及淋巴结转移方面差异有统计学意义(P＜0.05)；子宫内膜癌组PCNA高增殖率P21表达阳性者为37％,P21表达阴性者为80％,差异有统计学意义(P＜0.05);子宫内膜癌组织P21蛋白阳性表达率与PCNA高增殖率呈负相关(r=-0.414,P=0.002).结论 P21蛋白和PCNA异常表达可能在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用.
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p21蛋白与K-ras蛋白在先天性胆管扩张症中的表达及其意义
目的 研究p21蛋白和K-ras蛋白在先天性胆管扩张症(CBD)中的表达及其相互关系,并探讨其在CBD癌变发生发展过程中的临床意义.方法 收集本科2000年1月-2007年9月确诊为CBD的36例患儿行胆总管囊肿切除术的组织标本,9例正常对照组胆管组织来自本院病理学系流产胎儿及死于非胆管系统疾病儿童尸检标本.标本组织经40 g·L-1甲醛固定,石蜡包埋,切片固定处理,应用免疫组织化学技术对标本中p21蛋白和K-ras蛋白表达进行检测.应用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果 36例CBD标本中,5例K-ras蛋白表达阳性,阳性率为13.8%,正常对照组胆管末检出阳性;CBD中p21蛋白的阳性率为55.6%,显著低于正常对照组(100%)(P<0.05).结论 p21蛋白和K-ras蛋白表达异常可能是CBD癌变发生过程中的一个早期信号.K-ras蛋白在正常胆管组织中不表达,而在CBD中高表达,表明CBD癌变的发生在蛋白表达水平上已具有恶性增殖信号.故早期手术切除囊肿组织是防止CBD发生癌变的主要手段,术后根据p21蛋白和K-ras蛋白的表达情况早期干预可能有助于阻止或减少癌变.
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子宫内膜癌ras基因p21蛋白的表达及临床病理意义
目的研究ras基因p21蛋白在子宫内膜增殖症及子宫内膜癌的表达及临床病理意义.方法应用免疫组化s-P法检测了66例子宫内膜癌及20例子宫内膜增殖症组织中p21蛋白的表达.结果子宫内膜癌p21蛋白阳性过表达率均为53.03%(35/66),与子宫内膜增殖组有明显差异,其过表达与组织分级呈正相关,而与肿瘤浸润、转移无关.结论p21蛋白过表达是子宫内膜癌分化差的重要指标,并有助于子宫内膜癌的早期诊断.
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p53、p21在食管癌和鼻咽癌中的表达及意义
目的对比研究食管鳞癌和鼻咽鳞癌的p53、p21基因表达情况,探讨改进食管癌临床放射治疗的方法.方法采用许氏ABC免疫组化法对43例食管鳞癌和39例鼻咽鳞癌标本进行p53、p21表达率和表达强度的对比分析研究.结果p53、p21两种细胞增殖指标在食管鳞癌和鼻咽鳞癌中的表达率和表达强度基本相近,经统计学检验无明显差异(P≥0.05).结论p53、p21蛋白表达异常在食管癌和鼻咽癌存在某些共性,食管癌可以借鉴鼻咽癌成功的非常规放射治疗方式.
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成人急性白血病患者骨髓细胞中NF-κB与P21蛋白的表达
目的:探讨成人急性白血病(acute 1eukemia,AL)患者骨髓细胞中原代细胞核因子-κB(NF-κB)与P21蛋白的表达及临床意义.方法:应用免疫细胞化学法检测45例初治AL患者,30例AL缓解期患者及30例正常人骨髓细胞中NF-κB与P2l蛋白的表达.结果:初治AL患者骨髓细胞中NF-κB与P21蛋白的表达率及表达积分明显高于缓解期患者和正常人(P＜0.05),而缓解组和正常组之间比较,P＞0.05.初治组中2者表达呈正相关(r=0.767,P＜0.05).结论:白血病细胞中NF-κB及P21蛋白异常高表达,2者偶联活化,共同参与了细胞的恶性转化和增殖.
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全反式维甲酸对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞
目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及P21蛋白表达水平的影响.方法血管平滑肌细胞(VSMC)采用组织贴块法培养.ATRA(2.5×10-6mol*L-1)作用于经20%胎牛血清刺激后的血管平滑肌细胞,24h后分别行3H-TdR掺入实验测定和P21蛋白印迹检测P21蛋白表达.结果 ATRA明显抑制血管平滑肌细胞DNA合成和促进P21蛋白表达.结论 ATRA促进P21蛋白表达是抑制VSMC增生的原因之一.
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肝细胞生长因子与糖尿病大鼠早期肾小球肥大
目的检测肝细胞生长因子(HGF)和P21WAFI/CIP1在早期糖尿病大鼠肾小球中的表达,探讨HGF在肾小球肥大中的作用.方法免疫组化法检测糖尿病大鼠早期(第3、7、14 d)HGF蛋白和P21蛋白的表达,同时用酶联免疫吸附法(ELISA)法和反转录PCR(RT-PCR)检测了肾小球内HGF蛋白和mRNA水平.结果HGF在早期糖尿病大鼠的表达主要位于肾小球内,HGF蛋白和mRNA均在第3 d开始升高,并于第7 d达到高峰;肾小球内P21蛋白的表达亦于第7 d达到高峰;糖尿病组肾小球内HGF蛋白水平和P21蛋白积分呈正相关(r=0.9346,P＜0.01).结论糖尿病早期肾小球内有HGF的表达,其表达可能与糖尿病早期肾小球肥大有关.
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C反应蛋白和白细胞介素6在自然衰老大鼠血管中的表达研究
目的:研究炎性因子C反应蛋白(CRP)和白细胞介素(IL)-6在不同年龄组大鼠主动脉组织中的表达差异,及其可能在血管衰老机制中的作用.方法:清洁级雄性SD大鼠24只,其中12只青年大鼠(青年组,2月龄)和12只老年大鼠(老年组,20月龄),经适应性喂养1周后麻醉采静脉血待测,处死后取胸主动脉组织,石蜡包埋切片HE染色后光镜下观察血管组织形态改变,Western blot检测主动脉p16和p21蛋白水平,化学发光酶免疫分析法和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定大鼠血清CRP和IL-6的含量.结果:老年组大鼠主动脉组织HE染色血管中膜层增厚、血管平滑肌细胞排列紊乱,Western blot检测p16和p21蛋白表达阳性;青年组大鼠主动脉组织HE染色血管中膜层正常、血管平滑肌细胞排列整齐,p16和p21蛋白表达阴性.与青年组大鼠相比,老年组血清CRP和IL-6含量均明显升高(均P＜0.05).结论:炎症可能是导致血管衰老的原因之一.
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P21蛋白对阴茎癌淋巴结肿大的诊断价值
目的:探讨阴茎癌淋巴结肿大与ras癌基因P21蛋白的相关性.方法:采用免疫组化ABC法检测110枚腹股沟淋巴结中ras癌基因产物P21蛋白的表达状况,其中病理检查证实癌性和炎性肿大淋巴结各40枚,正常淋巴结80枚.结果:P21蛋白在癌性、炎性和正常淋巴结中的阳性率分别为92.5%、22.5%和0;在炎性淋巴结中,P21蛋白阳性者平均6个月和17个月出现局部复发和骨盆转移.结论:检测P21蛋白表达状况,可提高癌前状态或癌前病变的诊断水平.
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孕激素对孕激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞JEC的影响
目的 探讨不同浓度的孕激素(progesterone,P)对孕激素受体(progesterone receptor,PR)阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞增殖和细胞周期的影响及其机制.方法 取JEC细胞体外培养,加入含不同浓度P的培养液,采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝( MTT)比色法和流式细胞术(FCM)的方法,观察JEC细胞的增殖活性和细胞周期时相变化；同时用FCM检测加入P前后JEC细胞中p21蛋白的表达；用免疫组织化学法及图像分析,检测加入P前后JEC细胞内Cyclin A的表达.结果 (1)细胞计数法和MTT法显示,P可使JEC细胞数明显减少；(2)1× 10-5 mol/L的P作用72 h,可使JEC细胞G0/G1期比例增加,S期及G2/M比例减少；(3)P对JEC细胞内p21蛋白的表达无影响.(4)P可明显抑制JEC细胞内Cyclin A蛋白的表达.结论 PR阴性的JEC细胞生长可受到孕激素的调控,其作用具有剂量和时间效应.这种调控可能与CyclinA有关,但与P21蛋白无关.
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鼻腔NK/T细胞淋巴瘤中p53和p21表达及其与细胞增殖和凋亡的关系
目的:探讨p53、p21蛋白在鼻腔NK/T细胞淋巴瘤(nasal NK/T-cell tymphoma,NKTL)中的表达,及其与细胞增殖和凋亡的关系.方法:取62例NKTL组织构建组织芯片,应用免疫组织化学方法检测p53、p21、Ki67蛋白的表达情况,TUNEL法原位凋亡检测,计算增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:①p53,p21蛋白在NKTL中表达的阳性率分别为79.03%、58.06%;②p53在Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ,Ⅲ、Ⅳ期患者中表达的阳性率分别为69.57%、75.00%、86.67%、100.00%,p21在Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者中表达的阳性率分别为47.83%、56.25%、60.00%、87.50%,随着肿瘤进展,二者表达阳性率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);③p53在大、中、小型瘤细胞患者中表达的阳性率分别为92.86%、78.95%、53.33%,p21在大、中、小型瘤细胞患者中表达的阳性率分别为67.86%、57.89%、40.00%,随着肿瘤细胞增大,二者表达阳性率逐渐升高.差异有统计学意义(P<0.05);④p53和p21二者表达之间统计学上具有明显的相关性(P<0.05);随着p53、p21蛋白表达强度的增加,肿瘤临床分期增高,肿瘤细胞增大,PI亦逐渐升高,它们均与PI呈正相关(P<0.05),而与AI无关联性(P>0.05).结论:p53、p21蛋白表达与NKTL的发生、发展密切相关,联合榆测Ki67表达,可作为评估该病患者肿瘤细胞增殖、侵袭性等生物学行为的良好指标.
