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通过呼气鉴定乳腺癌分子分型的可能性研究
目的 探讨通过人体呼出气体鉴定乳腺癌分子分型的可能性.方法 筛选出251例符合入组标准的研究对象,每人收集2份呼气样本,分别经热脱附-气相色谱-质谱(TD-GC-MS)技术及纳米传感器技术检测.结果 发现13种可挥发性有机化合物(VOCs)浓度在人类表皮生长因子受体-2 (HER-2)过表达型乳腺癌与非HER-2过表达患者间存在显著差异(P＜0.05),三阴型乳腺癌与非三阴型乳腺癌间5种,Luminal B型乳腺癌与非Luminal B型乳腺癌间1种,Luminal A型乳腺癌与非Luminal A型乳腺癌间0种.纳米传感器经留一法交叉验证判别各分子分型的乳腺癌时亦获得较高的精确度(73.64％ ～ 90.70％)、灵敏度(40.00％～93.75％)与特异度(73.77％ ～ 93.42％).结论 “呼气检测”可作为一种新型的鉴定乳腺癌分子分型的无创检查方法.
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肺癌的呼气诊断方法研究进展
在全球范围内,肺癌的死亡率居各种恶性肿瘤之首.目前诊断肺癌的常规方法难以诊断早期肺癌,不能有效提高5年存活率.呼气中挥发性有机物(VOCs)与人体新陈代谢过程密切相关,通过呼气检测肺癌以及其他疾病的研究已成为热点.由于呼气检测方法具有非侵入性、无痛苦、不昂贵等优点,有望成为检测早期肺癌的新方法.本文综述了呼气中的VOCs与人体新陈代谢的关系、影响人体呼气中VOCs浓度的因素、呼气采集方法以及呼气检测肺癌的分析技术研究进展.探讨了呼气诊断早期肺癌仍存在的问题和未来的应用前景.
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气相色谱质谱法测定食用油中邻苯二甲酸酯
目的 优化气相色谱和质谱条件,建立一种同时测定食用油中16种邻苯二甲酸酯的气相色谱质谱(GC-MS)方法.了解安阳市内销售的食用油中邻苯二甲酸酯含量现状.方法 以乙腈和二氯甲烷1∶2(V∶V)的混合溶液作为萃取剂,用Florisil和PSA填料净化待提取的样品,采用外标法进行定量.结果 16种邻苯二甲酸酯在24 min内流出并完全分离,在5～5 000 μg/L范围内相关系数r均在0.99以上,样品加标回收率在80％～105％之间,相对标准偏差均小于10％,定性检出限为0.12～0.55 μg/L.结论 该方法通过优化气相色谱条件,使16种邻苯二甲酸酯得到较好分离.该方法操作简单、准确度和精密度高,适用于食用油中邻苯二甲酸酯的检测和确证.
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吹扫捕集/气相色谱-质谱联用法同时测定水中苯甲醚和8种苯系物
目的 建立水中苯甲醚和8种苯系物的吹扫捕集/气相色谱-质谱测定方法.方法 采用吹扫捕集富集水中苯甲醚和8种苯系物,解吸后自动导入气相色谱质谱仪中,经过毛细色谱柱分离,热电离(EI)方式离子化,质谱检测器检测测定,通过苯甲醚和8种苯系物的保留时间及质谱图与谱库中的质谱图作对照进行定性;选择特征离子,内标法进行定量分析.结果 苯甲醚和8种苯系物的吹扫捕集/气相色谱质谱测定法在一定范围内有良好的线性关系;相关系数均≥0.999;相对标准偏差(RSD)在0.61％ ～4.44％之间,分别在水样中添加3个不同浓度的苯甲醚和8种苯系物标准溶液,样品加标回收率在95.0％～104.7％之间;结论 吹扫捕集/气相色谱-质谱法操作简单,毒性低,能够快速、灵敏、准确地测定水中苯甲醚和8种苯系物的含量.
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气相色谱-质谱法测定奶粉中的三聚氰胺
目的:建立气相色谱-质谱联用测定奶粉中三聚氰胺的方法.方法:奶粉用10%的三氯乙酸提取后经阳离子固相萃取柱富集净化、浓缩、定容后采用EI源在选择离子模式下进行检测.对提取溶剂、气相色谱以及质谱条件进行了考察.结果:确定了10%三氯乙酸作为提取剂,采用DB-1701作为气相色谱分离柱.空白加标的平均回收为82.1%,测定结果相对标准偏差为1.82%,在0.2～2.0 μg/ml的范围内具有良好的线形关系,相关系数为0.9996,低检出限达到0.1 mg/kg.结论:该方法简单,快速,灵敏度佳,克服了常规三聚氰胺检测中需要衍生化的缺点.能较好地满足奶粉中三聚氰胺的定性定量检验要求.
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吹扫捕集结合GC-MS测定水中甲基叔丁基醚
目的:建立适用于水中甲基叔丁基醚的吹扫捕集GC-MS测定方法.方法:水中甲基叔丁基醚吹扫富集到Tenax管中,解吸后经气相色谱柱分离,质谱检测器检测.结果:该方法甲基叔丁基醚的检出限为3.7 ug/L,线性范围为3.7～59.2 ug/L,其相关系数r=0,999,样品的加标回收率93,5%～108.9%,RSD为6.5%.结论:此方法能够用于分析水中甲基叔丁基醚.
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固相萃取-气相色谱质谱法同时测定水果蔬菜中13种三唑类杀菌剂
目的 建立固相萃取(SPE)-气相色谱质谱法同时测定水果蔬菜中戊菌唑、四氟醚唑、氟菌唑、己唑醇、乙环唑、腈菌唑和粉唑醇等13种三唑类杀菌剂残留量的检测方法.方法 采用乙腈、Carbori/NH2固相萃取柱净化提取样品中的待测组分,气相色谱串联质谱法分析,多反应监测模式(MRM)质谱检测,通过外标法定量.结果 在优化实验条件下,13种三唑类杀菌剂的回归方程均呈较好的线性关系,相关系数在0.995以上,检出限在0.2Jμg/L ～ 6.2 μg/L,定量限为0.5μg/L～7.9 μg/L.在0.5μg/L、1.0μg/L、2.0 μg/L 3种添加水平下,该方法的平均回收率在81.31％ ～ 104.43％,相对标准偏差(RSD)在2.33％～9.51％.结论 该方法背景干扰低,具有操作快捷简单、准确度和灵敏度高等特点,定量限低于有关文献报道及国家标准值.满足同时测定水果中13种三唑类杀菌剂农药残留的检测要求.
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小儿肝豆状核变性37例
目的 分析小儿肝豆状核变性(WD)的临床特点.方法 按照WD诊断标准,对37例(男24例,女13例;年龄2～13岁)以小同器官损害为首发症状的WD患儿的临床特点、实验室检查及影像学榆查、误诊情况和治疗及预后作回颐性分析.结果 首发症状以肝功能受损为主者33例,以神经系统受累为主者3例,同时以肝病和神经系统为主者1例.有明确家族史者2例.6例误诊患儿中误诊为肠梗阻1例,胆石症、肾炎各2例,腹泻病1例.检查角膜K-F环37例,阳性3例.实验室检查AIJT>40U/L者32例,24 h尿铜>100μg/24 h 37例,清蛋白<40 g/L 21例,铜监蛋白<0.2 g/L 37例.9例血氨>45μmoL/L,尿气相色谱质谱(GC-MS)分析在肝损害患儿中可见乳酸和半乳糖醇,在肾损害患者中可见多种氨基酸.肝损害严重时血浆串联质谱分析可见多种氨基酸水平升高.腹部超声检查提示肝脾大26例,肝脏CT检查密度异常3例,头颅CT或MRI检查信号异常4例.行肝脏穿刺活组织检查提示慢性肝炎并结节性肝硬化1例.37例患儿予低铜饮食,青霉胺驱铜及葡萄糖酸锌治疗,32例明显好转,4例死亡,1例放弃治疗.结论 WD临床表现复杂多样.易被误诊.血氨、GC-MS和血浆串联质谱分析可作为反映病情的指标之一.
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生物样品组成对氯氮平浓度检测的影响
目的:研究生物样品中盐、酯、蛋白质等成分的变化对固相微萃取-气相色谱质谱法检测氯氮平浓度的影响.方法:用固相微萃取-气相色谱质谱法测定样品中氯氮平(CLP)、洛沙平(内标),通过改变样品基质中氯化钠、醋酸乙酯、血浆的含量,观察盐、酯、蛋白质对CLP检测的影响.结果:随着样品中盐含量升高,CLP、洛沙平峰面积增大,方法灵敏度提高;随着样品中酯类、蛋白质含量升高,CLP、洛沙平峰面积减小,方法灵敏度降低.各组CLP、洛沙平峰面积保持相同的变化趋势,CLP与洛沙平峰面积的比值相对固定.结论:样品中盐、酯、蛋白质等含量的变化对固相微萃取-气相色谱质谱法检测氯氮平的灵敏度有不同程度的影响,但在选取合适内标的情况下并不影响定量分析的准确性.
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羧化全酶合成酶缺陷病的临床诊治及基因突变分析
目的 报道羧化全酶合成酶(holocarboxylase synthetas,HCS)缺陷病的诊治及随访情况,了解该疾病的基因突变谱.方法 ①采用质谱分析及生物素酶活性测定进行HCS缺陷病的诊断.②采用聚合酶链反应-直接测序法进行HCS基因突变分析.③11例HCS缺陷病患儿中10例接受了生物素的治疗(10~40 mg/d),对其疗效进行随访观察.结果 ①11例患儿均有不同程度精神萎靡、嗜睡及代谢性酸中毒,10例患儿有皮肤损害.质谱分析血3-羟基异戊酰肉碱,尿3-甲基巴豆酰甘氨酸、甲基枸橼酸等增高.生物素酶活性与正常对照者生物素酶活性的比值>30%.②发现4种突变:c.1522C>T(R508W),c.1088T>A(V363D),c.126G>T(FA2D),c.1994G>C(R665P)(新变异).实变频率分别为50%,29%,7%,14%.③10例接受生物素治疗的患儿,1～2周后临床症状消失,2～6月后异常代谢产物多下降至正常.结论 HCS缺陷病以神经系统及皮肤损害、代谢性酸中毒为特征.质谱分析、生物素酶活性测定、基因突变分析有助于明确诊断,口服生物素疗效显著.突变RS08W和V363D可能是中国患儿的常见突变.
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复杂腹腔感染对白蛋白合成速率的影响
目的 探讨复杂腹腔感染对白蛋白合成速率的影响.方法 前瞻性收集2009年12月至2010年10月间南京军区南京总医院普通外科研究所收治的肠瘘合并复杂腹腔感染病例(感染组,8例);另选取同期8名年龄、性别、BMI相匹配的健康志愿者作为对照组.受试者在空腹状态下经外周静脉给予首剂量无菌L-[ring-2H5]-苯丙氨酸溶液(4 μmol/kg),继之以6 μmol·kg-1·h-1的速度持续输注6 h.输注前和输注后的每小时取3 ml动脉血;通过GC-MS测定血浆游离氨基酸和掺入到白蛋白中L-[ring-2H5]-苯丙氨酸的同位素丰度.结果 感染组患者血清总蛋白和白蛋白浓度分别为(62.2±1.0)g/L和(32.5±4.0)g/L,显著低于对照组[(74.2±1.7)g/L和(46.1±2.6)g/L;均P<0.05].感染组患者C反应蛋白、白细胞计数和体温3项全身炎性反应指标均高于对照组(均P<0.05).感染组患者白蛋白合成速率为(5.3±1.6)%/d,显著低于正常对照组的(7.8±1.2)%/d,差异有统计学意义(P<0.05).血浆游离氨基酸谱显示,感染组患者血浆谷氨酸高于对照组,苯丙氨酸和脯氨酸低于对照组(均P<0.05).结论 复杂腹腔感染可明显抑制白蛋白合成,是腹腔感染患者低白蛋白血症的原因之一.
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比较两种不同预处理法的尿液有机酸分析在遗传代谢性疾病筛查和诊断
目的:比较两种不同预处理法的尿液有机酸分析在遗传代谢性疾病筛查和诊断中的应用.方法:留取本院内分泌代谢科80例遗传代谢病高危患儿和80例同年龄段正常儿童尿液,分别经尿素酶预处理法和有机酸萃取预处理法处理后用GC-MS检测尿代谢产物,进行疾病诊断、代谢产物的定性、半定量及抗干扰性分析.结果:尿素酶预处理法共诊断15例代谢性疾病及1例肾小管重吸收障碍,有机酸萃取预处理法诊断出13例代谢性疾病;尿素酶预处理法能检测有机酸、氨基酸、糖、醇及嘧啶类等多种代谢产物,有机酸萃取预处理法仅能检测到有机酸;有机酸萃取预处理法对有机酸的检测值及抗干扰性都要高于尿素酶预处理法.结论:尿素酶预处理法适用于临床不能确诊的遗传代谢病的筛查;有机酸萃取预处理法则适用于临床高度怀疑为有机酸病的诊断.
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气相色谱-质谱联用技术在遗传代谢病诊断和治疗监测中的应用
目的 探讨利用气相色谱-质谱(GC-MS)联合分析技术在遗传代谢病的筛查和诊断中的意义,为疾病的诊断和治疗提供依据.方法 收集住院和门诊2856例疑似遗传代谢病患者的尿液,通过去蛋白、尿素酶处理、肟化酮酸、萃取、除水、硅烷衍生化等处理,应用GC-MS进行样本有机酸检测,所得检测数据通过遗传代谢病软件分析,同时结合串联质谱氨基酸和酰基肉碱检测结果 及基因分析进一步疾病诊断.结果对2856例疑似患者的尿液标本有机酸分析,确诊先天性遗传代谢疾病342例(11.9%),其中苯丙酮尿症154例(5.39%),甲基丙二酸尿症为57例(2.00%),丙酸尿症34例(1.19%),希特林蛋白缺乏症34例(1.19%),戊二酸尿症Ⅰ型27例(0.95%),异戊酸尿症5例(0.18%),鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症2例(0.07%),全羧化酶合成酶缺乏症2例(0.07%),短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症5例(0.18%),中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症12例(0.42%),多种酰基辅酶A缺乏症3例(0.11%),3-甲基巴豆酰甘氨酸2例(0.07%),5-氧合脯酸胺尿症、甲基丙二酸半醛脱氢酸缺乏症、黑酸尿症、泽尔韦格氏综合症、卡纳万氏综合症、枫糖尿症各1例(0.04%).继发性代谢障碍或感染269例(9.42%),确诊患者中1例枫糖尿症、2例MMA患者死亡,2例失访,随访率98.2%,对患者采取跟踪、随访治疗,临床上取得较好的治疗效果.结论 GC-MS是遗传代谢病诊断的可靠方法,监测尿中特异性标志物浓度水平变化为治疗提供有效的手段.
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革兰阴性菌挥发性有机物的检测与分析
目的 通过分析测定常见革兰阴性菌培养产生的上层气体中的挥发性有机物(VOCs),达到鉴别细菌种类的目的,为呼出气检测在肺部感染诊断中的应用提供实验依据.方法 将30例革兰阴性菌(肺炎克雷伯菌6株、大肠埃希菌6株、铜绿假单胞6株、鲍曼不动杆菌6株、嗜麦芽假单胞6株)分别制成混悬液后注入血培养皿中,并于恒温箱中培养24 h.培养瓶上层气体通过固相微萃取-气相色谱/质谱联用技术(SPME+GC/MS)收集并检测分析.结果 肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌共能检测出13种挥发性有机物,包括乙醇、1-葵醇、1-十二醇、顺式-9-十六碳单烯酸、1-十六醇等物质,而铜绿假单胞、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽假单胞此类非发酵菌则检测不到挥发性有机物.结论 通过SPME+GC/MS检测革兰阴性菌培养产生的上层气体中的挥发性有机物,可鉴别发酵菌与非发酵菌.
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分散固相萃取法用于测定茶叶中10种拟除虫菊酯及有机氯农药残留
目的 建立分散固相萃取法(QuEchERS)净化处理茶叶样品,气相色谱-质谱法测定拟除虫菊酯及有机氯农药残留量,为茶叶中快速检测拟除虫菊酯及有机氯农残提供参考.方法 样品经乙腈提取所得上清液依次加入无水硫酸钠,PSA粉末和石墨化炭黑粉末作为分散固相萃取试剂去除杂质,浓缩后经正己烷定容气相色谱-质谱仪测定.通过优化气相色谱质谱仪参数,确定适用于拟除虫菊酯农残佳检测条件,绘制标准曲线,在选择性离子监测(SIM)模式下采用外标法定量.结果 7种拟除虫菊酯及3种有机氯农药在1～5 μg/ml范围内线性关系良好(r值为0.994 0 ～0.999 9),加标回收率为53.2％～82.5％,相对标准偏差(RSD)为0.8％～5.3％.结论 分散固相萃取法操作快捷,方便,试剂消耗量少,回收率和精密度良好,适合快速检测茶叶中拟除虫菊酯及有机氯农药残留.
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四例戊二酸血症Ⅰ型患儿临床资料分析与基因突变研究
目的 回顾分析4例戊二酸血症Ⅰ型患儿.临床资料特点,并探讨其基因突变类型.方法 对戊二酸血症Ⅰ型患儿进行头颅计算机断层扫描(computer tomography,CT)、磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)影像学检查.应用串联质谱和气相色谱质谱分析患儿血氨基酸、肉碱和尿有机酸含量的改变.提取外周血基因组DNA,针对戊二酰辅酶A脱氢酶(glutaryl-CoA dehydrogenase,GCDH)基因设计特异性PCR引物,PCR扩增产物直接测序,确定GCDH基因突变类型.结果 4例男性患儿表现为大头畸形,头围分别为50 cm(14个月),47 cm(9个月),46 cm(5个月),51 cm(14个月),均高于同龄儿的正常值.头颅影像学检查发现这4例患儿表现为大脑外侧裂及侧脑室扩大,额颞萎缩,蛛网膜下腔增宽,小脑蚓部异常等.4例患儿血戊二酰肉碱含量分别为:5.8μmol/L,7.5μmol/L,8.3μmol/L,7.9μmol/L(正常参考值为0~0.2μmol/L),同时发现尿中戊二酸含量大量增高.通过GCDH基因突变分析,证实4例患儿存在基因突变,其中C.146_149del4、IVS6-4_Ex7+4del8、c.508A>G(P.K170E)、c.797T>C(p.M266T)和c.420del100为新发现的GCDH基因突变类型.结论 戊二酸血症工型患儿以头围异常增大,神经系统损伤为主要临床表现,血串联质谱和尿气相色谱质谱分析对疾病的诊断起重要的提示作用,但确诊还需行基因突变分析.
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固相微萃取-气相色谱-质谱联用分析九香虫气味成分
目的 分析活体及炮制九香虫的气味成分.方法 采用固相微萃取法(SPME)萃取活体及炮制九香虫的气味成分,结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析其组成,以面积归一化法计算各组分的相对百分含量.结果 从活体九香虫的气味成分中共鉴定出16种化合物,主要是烷烃类、烯烃和醛类化合物,其中含量较高的成分有3,4-二甲基-2-己烯(30.65％)、十三烷(16.71％)、反-2-癸烯基乙酸(15.32％)和反-2-己烯醛(12.22％).从炮制九香虫的气味成分中共鉴定出43种化合物,主要是脂肪酸、酯类和烷烃类化合物,其中含量较高的成分为十三烷(30.85％)、2-辛烯酸(20.91％)和棕榈酸(4.68％).结论 活体九香虫与炮制九香虫的气味成分有显著差异.根据两者成分的差异,可针对性地合理开发九香虫的药食两用价值.
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固相萃取净化-气相色谱质谱联用法快速测定金银花软胶囊浸膏中的农药残留
目的 为了对金银花软胶囊农药残留进行质量控制.方法 该研究建立了浸膏中有机磷和菊酯类农药残留的固相萃取净化-气相色谱质谱联用分析方法.样品先经丙酮和水混合液提取,石油醚和丙酮萃取,无水硫酸钠脱水浓缩后;再经Florisil固相萃取柱净化,进入气质联用仪(GC-MS)进行多残留量的测定.结果 含量测定方法学研究结果表明,外标法定量,样品在0.3 mg/kg ～3 mg/kg范围内加标,平均回收率在70％～ 120％之间,检出限(LOD)在0.01 mg/kg ～ 0.05 mg/kg之间,相对标准偏差(RSD)为1.96％～10.66％.结论 该方法快速、可操作性强、相对简单,样品基质干扰小,净化效果较好,可满足软胶囊浸膏中多种农药残留的检测需要.
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质谱技术检测羊水代谢物对丙酸血症进行产前诊断
目的 探讨串联质谱及气相色谱质谱技术检测羊水中的酰基肉碱及有机酸用于丙酸血症(propionic acidemia,PA)产前诊断的诊断价值.方法 收集2010年-2016年40例于上海交通大学医学院附属新华医院进行产前诊断且生育过PA患儿的孕妇作为PA母亲组.从同期进行常规产前诊断孕妇中随机选取40例作为对照组.2组孕妇均于妊娠16～20周进行羊膜腔穿刺术抽取羊水.采用串联质谱检测羊水丙酰肉碱(propionylcarnitine,C3)、乙酰肉碱(acetylcarnitine,C2)水平,采用气相色谱质谱检测羊水甲基枸橼酸、3-羟基丙酸水平,部分羊水细胞进行基因检测.结果 PA母亲组4例孕妇羊水C3[9.53(6.06～11.45) μmol/L]、C3/C2[1.03(0.62～1.43)]、甲基枸橼酸[3.15(2.05～4.58) mmol/mol肌酐]水平均高于对照组[1.14(0.52～3.40)μmol/L,0.11 (0.05～0.22),0.00(0.00～0.34) mmol/mol肌酐],提示胎儿为PA阳性患儿,检出率为10％;其中3例进行了基因突变检测均检测到突变位点.3-羟基丙酸在对照组与阳性组之间差异无统计学意义.结论 PA孕妇再生PA患儿的几率为10％左右,可利用串联质谱及气相色谱质谱技术检测羊水中的C3、甲基枸橼酸水平,对先证者为PA的孕妇进行产前诊断.
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SPE-GC/MS法检测大鼠尿中尼美西泮及其代谢物
目的 检测尼美西泮阳性大鼠尿液中的代谢物.方法 2只Wistar大鼠分别喂食半粒尼美西泮药丸,收集24h内尿液,用β葡萄糖醛酸酶水解,Oasis(R)HLB柱固相提取,以DB-35 MS柱为分离柱,气相色谱质谱联用法检测.结果 从大鼠尿液中检出尼美西泮的4种代谢物:7-乙酰氨基尼美西泮、7-乙酰氨基硝基安定、7-氨基尼美西泮和2一氨基-5-硝基苯基苯甲酮及少量尼美西泮原体.结论 尼美西泮在大鼠体内易代谢,在尿液中的主要代谢物为7-乙酰氨基尼美西泮和7-乙酰氨基硝基安定.
