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恩替卡韦治疗对HBeAg阳性乙肝患者血清和肝组织中HBV cccDNA的影响
目的 探讨口服恩替卡韦治疗HBeAg阳性乙肝患者1年对血清和肝组织中HBV cccDNA含量的影响.方法 选取90例HBeAg阳性乙肝患者,所有患者连续48周口服恩替卡韦0.5 mg/d,治疗前后分别静脉取血分离血清.采用化学发光法检测HBV血清标志物、采用荧光实时定量PCR法检测HBV-DNA及HBV cccDNA含量,并对各指标进行统计学分析.选取治疗48周后血清HBV cccDNA阴性且符合肝穿的患者进行肝穿检查,检测肝组织中HBV cccDNA含量.结果 (1)治疗后,血清HBV-DNA、HBV cccDNA及谷丙转氨酶(ALT)水平均显著下降(P＜0.01).(2)发生e抗原转换组的HBV DNA和HBV cccDNA水平下降均比未发生转换组更显著(P＜0.01).(3)90例患者在治疗1年后有68例患者血清中HBV cccDNA转阴,而在这其中选取8例患者进行肝穿,只有1例患者的肝组织中HBV cccDNA转阴.结论 尽管恩替卡韦可明显降低乙肝患者血清和肝组织的HBV cccDNA水平,然而恩替卡韦治疗1年尚不能彻底清除肝细胞中的HBV.
关键词： 恩替卡韦 HBeAg HBV-DNA HBV cccDNA -
乙型肝炎患者外周血单个核细胞HBV cccDNA含量的检测及其临床意义
[目的]采用实时荧光定量PCR的方法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量,并探讨其临床意义.[方法] 应用实时荧光PCR(RT-PCR)方法对随机选取的乙型肝炎患者100例和1例追踪治疗的乙肝患者的血清HBV DNA 含量和外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量进行检测;对已确诊的慢性乙肝患者40例,肝硬化患者30例外周血单个核细胞中HBV cccDNA 的含量进行检测.[结果] 100例乙型肝炎患者中,HBV DNA含量<5×102 copies/mL有57例,HBV cccDNA 的含量均<5×102 copies/mL;HBV DNA含量>5×102 copies/mL 有43例,HBV cccDNA 的含量>5×102 copies/mL 有22例;HBV DNA含量>1×103 copies/mL的患者有17例,在这些患者中HBV cccDNA 的含量>5×102 copies/mL者为13例,两者之间比例经χ2检验,差异无显著性意义,P>0.05;肝硬化患者HBV cccDNA 阳性率(>5×102 copies/mL)为67.7%,远远高于慢性乙肝患者的42.5%和随机乙肝人群的22.0%.各组间患者比例经χ2检验,差异有显著性意义,P<0.05.[结论] 乙型肝炎患者进行外周血单个核细胞中HBV cccDNA的检测,对于抗病毒治疗效果的监测和预后判断都重要的临床意义.
关键词： HBV cccDNA 单个核细胞 实时荧光PCR -
乙型肝炎患者血清 HBV cccDNA 与肝组织 HBV cccDNA、血清 HBV DNA 的关系及意义
目的：探讨乙型肝炎患者血清 HBV 共价闭合环状 DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）与肝组织HBV cccDNA、血清 HBV DNA 的关系及意义。方法从本院2011年9月～2013年9月收治的乙型肝炎患者中随机选择69例进行研究。结果15例肝组织及其血清标本中，HBV cccDNA 阳性检出率方面，血清标本显著低于肝组织，经比较差异有统计学意义，（χ2＝7.13，P ＜0.05）。肝组织 HBV cccDNA 和血清中 HBV cccDNA 水平以及血清 HBV DNA 水平之间均呈正相关关系，（r＝0.62，r＝0.72，均 P ＜0.05）。随着 HBV DNA 水平的升高，血清 HBV cccDNA 拷贝数呈现出不断增大的情况，二者水平之间呈正相关关系（r＝0.82，P ＜0.05）。69例血清标本中，HBV DNA≥105拷贝／mL 的高水平组的血清 HBV cccDNA 阳性检出率达到96.6％，显著高于 HBV DNA 水平较低组（103拷贝／mL≤HBV DNA＜1×105拷贝／mL）经比较差异有统计学意义，（χ2＝6.27，P ＜0.05）。69例乙型肝炎患者血清标本中，随着病程的不断进展，HBV cccDNA 检出率呈现出不断上升的情况，其中肝癌组的检出率高，不同病程之间的阳性检出率比较均有统计学意义，（均P ＜0.05）。结论乙型肝炎血清 HBV cccDNA 可间接反映出患者肝组织内的 HBV cccDNA 情况，与 HBV DNA 之间具有显著的相关性，且与病程有关。
关键词： 乙型肝炎 HBV cccDNA HBV DNA 血清 肝组织 -
儿童慢性乙肝肝组织病理与相关标志物的研究
目的 分析乙肝病毒核内共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)、肝纤维化血清标志物、乙肝病毒基因型与肝脏纤维化和炎症活动度的相关性,以了解其在乙肝诊断中的价值,指导治疗和预后.方法 2008年4月至2011年8月于甘肃省人民医院儿科和兰州大学第一医院感染科门诊就诊和住院的乙肝及HBV携带患儿为慢性乙肝组和HBV携带组,选择同期健康查体儿童为对照组.检测慢性乙肝组、HBV携带组和对照组血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ.依据病情严重程度,慢性乙肝组进一步分为轻度、中度和重度亚组;慢性乙肝组和HBV携带组检测血清HBV cccDNA和HBV基因型;分析HBV cccDNA、肝纤维化血清标志物、HBV基因型与肝脏纤维化和炎症活动度的相关性.结果 46例患儿进入分析,男34例,女12例,年龄1～16岁,平均年龄(11.8±3.7)岁.HBV携带组20例,慢性乙肝组26例(轻度13例、中度8例、重度5例),对照组20例.①随乙肝临床分度加重,血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ呈升高趋势,以重度乙肝亚组上升为明显;②随肝组织纤维化程度与炎症活动度的增加,血清HA、LN、PCⅢ和CⅣ呈升高趋势;③血清HBV cccDNA阳性组与阴性组在肝组织炎症活动度
关键词： HBV cccDNA 肝纤维化指标 乙肝病毒基因型 肝组织病理 -
乙型肝炎患者抗病毒治疗过程中肝组织HBV cccDNA与血清学标志物变化的动态变化研究
目的 探讨慢性乙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗过程中肝组织乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccD-NA)与相关血清学标志物变化.方法 88例乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性的慢性乙型病毒性肝炎患者给予恩替卡韦抗病毒治疗96周.分别于0、24周、48周、96周检测肝组织中和血清HBV cccDNA、血清HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、HBeAg定量,并分析肝组织HBV cccDNA与血清学标志物变化的关系.结果 与基线比较,治疗后24周时患者肝组织HBV cccDNA,血清HBV cccDNA,血清HBV DNA和HBsAg均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);治疗后24周和48周比较:肝组织HBV cc-cDNA,血清HBV cccDNA,血清HBV DNA差异有统计学意义(P＜0.01);48周与96周检测指标相比:肝组织HBV cccDNA定量差异无统计学意义(P＞0.05);血清HBV DNA定量和血清HBV cccDNA定量差异有统计学意义(P＜0.01).血清HB-sAg和HBeAg差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血清HBV DNA定量和血清HBV cccDNA定量同步下降幅度大于肝组织cccDNA定量和HBsAg、HBeAg定量,肝组织HBV cccDNA定量、HBsAg、HBeAg定量在48周后逐步趋于稳定.血清HBsAg、HBeAg定量与肝组织HBV cccDNA具有较高的一致性,血清HBsAg、HBeAg定量检测能更准确、方便、快捷指导临床诊断.
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PCR-微流芯片法检测HBV感染者外周血HBV cccDNA和HBV DNA
目的:探讨HBV感染的肝病患者血中HBV cccDNA、HBV DNA的临床意义.方法:采用PCR-微流芯片法检测105例HBV感染者血清HBV DNA、HBVccc DNA、白细胞中HBV cccDNA(3例进行肝组织HBV cc-cDNA检测),以6例非乙型肝炎患者作为对照.结果:6例非乙型肝炎患者HBVM、HBV DNA、HBV cccDNA均阴性:HBV感染者中41.9%(44/105)白细胞HBVccc DNA阳性,其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证;HBVDNA≥105copy/ml中HBV cccDNA阳性率57.4%(35/61)显著高于HBV DNA<105copy/ml者20.5%(9/44,P<0.01);18.9%HB VDNA<103copy/mlHBV感染者HBV cccDNA阳性;抗病毒治疗的慢性肝病患者HBV cccDNA阳性率显著低于未抗病毒治疗者(5/25 VS 34/65,P<0.01).结论:HBV感染的患者外周血中存在HBV cccDNA;HBV DNA高浓度者HBV cccDNA检出率高;外周血白细胞HBV cccDNA、血清HBVDNA联合检测更能准确判断抗病毒治疗效果及提高HBV复制检出率.
关键词： PCR-微流芯片 HBV cccDNA HBV DNA 乙型肝炎 抗病毒 -
乙肝E抗原阳性产妇卵巢组织中HBV cccDNA阳性的相关因素分析
目的 检测人卵巢组织中HBV cccDNA,寻找人卵细胞为HBV靶细胞的证据.方法 使用RT-PCR法测定33例慢性乙肝剖宫产手术产妇的卵巢组织HBV DNA、HBV cccDNA含量；同时检测孕妇的肝功能、HBV标志物与HBV DNA定量.结果 产妇卵巢组织的HBV cccDNA与血清HBV DNA定量存在明显正相关性.其正相关因素为外周血HBsAg和HBV DNA定量(r=0.335),负相关因素为孕妇谷丙转氨酶水平(ALT,r=-0.360)及谷草转氨酶水平(AST,r=-0.347).结论 卵巢组织是HBV的靶器官,并可在其中复制.卵巢组织HBV cccDNA的存在与外周血HBV DNA载量、卵巢组织的HBV DNA载量和ALT、AST水平密切相关.
关键词： 卵巢 HBV cccDNA HBV DNA -
HBV在原代胎盘滋养细胞内复制的初步探讨
目的：从体外实验研究HBV在胎盘滋养细胞的感染和复制,初步探讨HBV经胎盘传播的机制。方法：收集HBV携带孕妇足月胎盘12例,采用密度梯度离心法联合反复贴壁法分离、纯化滋养细胞,提取滋养细胞进行培养。流式细胞术检测滋养细胞中CK-7表达,进行细胞纯度鉴定；免疫双标法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测滋养细胞CK-7及间质Vimentin的表达,进行细胞形态学鉴定。 PCR-荧光探针法检测体外培养24、48、72 h滋养细胞上清HBV DNA的表达；微粒子酶免疫分析技术检测体外培养24、48、72 h滋养细胞上清HBsAg和HBeAg的表达。流式细胞分选技术分选出纯度98%以上的滋养细胞,荧光定量PCR检测滋养细胞中HBV cccDNA的表达。结果：12例HBV携带孕妇胎盘滋养细胞体外培养24、48、72h,上清均可检测到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的阳性表达。 HBV-M滴度在24h表达量高,随着时间的推移,HBV DNA滴度逐渐下降,而HBsAg和 HBeAg 滴度呈先下降后上升的趋势,但3个时间点均无统计学差异( P>0.05)；3个时间点上清 HBsAg 和 HBeAg 的表达量有良好的相关性( P<0.05)。12例HBV胎盘滋养细胞标本中,4例检测出HBV cccDNA阳性,阳性率为33.3%,表达量( cop-ies/ml)分别为5.67×103、2.12×104、1.72×104、4.90×104。 Pearson相关分析结果显示,母血HBV DNA滴度和滋养细胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相关(r=0.977,P=0.023)。结论：HBV可感染胎盘滋养细胞并在滋养细胞内繁殖复制。
关键词： 乙型肝炎病毒 滋养细胞 复制 HBV cccDNA -
乙肝患者肝组织cccDNA与血清HBsAg及肝损伤的关系
目的 探讨慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA水平与血清HBsAg及肝脏组织损伤的关系.方法 采用化学发光法定量检测66例慢性乙肝患者血清HBsAg;实时荧光定量聚合酶链反应法检测肝组织HBVcccDNA,同时对肝组织进行病理染色判断肝组织炎症及纤维化程度.结果 血清HBsAg水平与肝组织HBVcccDNA水平显著相关(r=0.808,P＜0.05);肝组织HBV cccDNA水平与血清ALT、PT及其组织炎症程度、纤维化程度比较无明显相关性(P＞0.05).结论 肝组织HBV cccDNA不能反映肝脏组织受损情况,血清HBsAg可以反映肝组织HBV cccDNA的水平.
关键词： 乙型肝炎 HBV cccDNA HBsAg -
慢性乙型肝炎肝组织中HBV cccDNA、HBV DNA和血清中HBV DNA的关系
目的 探讨慢性乙型肝炎肝组织中HBV cccDNA、HBV DNA和血清中HBV DNA的关系.方法 采用实时定量PCR技术检测慢性乙型肝炎肝组织中HBV cccDNA、HBV DNA和血清中HBV DNA含量,同时采用MEIA法检测HBVM指标.结果 60例慢性乙肝患者肝组织中53%检测到HBV cccDNA,平均值为5.98×10~3拷贝/mg,肝组织HBV DNA定量平均值为3.66×10~4拷贝/mg;血清HBV DNA定量为7.12×10~4拷贝/mL.肝组织HBV cccDNA定量与肝组织HBV DNA定量呈高度相关性(P<0.01);肝组织HBV cccDNA定量与血清HBV DNA定量也正相关(P<0.05).结论由于肝组织HBV cccDNA定量与肝组织HBV DNA定量呈高度相关性,因此在一定程度上可代替检测肝组织中HBV cccDNA来判断病毒复制情况.
关键词： 乙型肝炎 HBV cccDNA HBV DNA 荧光定量PCR -
PBMC中HBV cccDNA与HBV宫内感染关系的研究
目的:对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)进行扩增,并对其产物直接测序鉴定,以证实PBMC为HBV肝外复制的场所,从而进一步证实PBMC感染为乙型肝炎宫内感染的途径之一.方法:选择性PCR扩增PBMc中HBV cccDNA,并对1例阳性产物直接测序鉴定,测序结果与GeneBank中已知序列进行同源性比较.结果:HBsAg阳性孕妇PBMC HBV cccDNA的检出率为9.93%,新生儿PBMC HBV ccc DNA的检出率为4.58%,PBMC HBV cccDNA与公布的已知序列的同源性为100%.结论:PBMC为HBV肝外复制的场所,PBMC感染很可能是乙肝宫内感染的传播机制之一.
关键词： PBMC HBV cccDNA 宫内感染 测序
