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中药扶正解毒汤含药血清对染镍细胞DNA损伤的影响
目的 研究中药复方扶正解毒汤(FJD)含药血清对镍(NiSO4)致细胞DNA损伤的拮抗作用.方法 培养人支气管上皮细胞系(16HBE)经NiSO4处理后,加入不同剂量FJD含药血清,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及单细胞凝胶电泳(SCGE)观察细胞内自由基变化及DNA损伤.结果 NiSO4(1600μmol/L)染毒组彗星样细胞出现率(计数一定量细胞中彗星样细胞所占的比例)、尾长、Olive尾矩、尾DNA%、尾长/头长比及自由基含量均明显高于阴性对照组(P＜0.01);经FJD作用后,上述指标均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 FJD含药血清对镍致细胞DNA损伤有一定的拮抗作用,其机制与抑制镍诱导的氧化应激及清除自由基等有关.
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中药含药血清的研究进展及其在中医学中的应用
主要论述了药物血清制备方法、应用领域、存在问题和未来发展趋势.对当前药物血清的制备,从给药量、给药时间、采血时间及采血后的处理等主要问题进行了总结.同时指出含药血清在中医药研究中应用的范围之泛,能够较好地反映中药的药效,推动中药药代学的发展,建立国际认可的中药及复方质量标准,促进新药开发,阐明中药复方配伍机制.针对含药血清存在的不足,提出药物血清制备要运用现代科学技术,包括中药药代学、中药药效学、中药血清药物化学共同发展,做更深入的研究.
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半夏泻心汤对H2O2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制研究
目的 探讨半夏泻心汤对H2O2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制.方法 大鼠随机分组灌胃,取血收集含药血清,300 μM H2O2干预RIN-m5F细胞,测定半夏泻心汤佳浓度,后随机分组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率、Western blot检测各组蛋白表达.结果 半夏泻心汤含药血清佳浓度为10％(P＜0.05);与模型组比较,半夏泻心汤含药血清可显著降低RIN-m5F细胞凋亡率(P＜0.05),下调Caspase-3、Bax的表达(P＜0.05),上调Bcl-2、PAKT的表达(P＜0.05).结论 半夏泻心汤含药血清可抑制RIN-m5F细胞凋亡,其机制可能与PI3K/AKT通路的活化有关.
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半夏泻心汤对H2O2诱导的RIN-m5F细胞凋亡和胰岛素分泌的影响
目的 探讨半夏泻心汤对胰岛β细胞凋亡及胰岛素分泌的影响.方法 33只雄性SD大鼠随机分组灌胃,取血收集含药血清,H2O2处理RIN-m5F细胞建立氧化应激细胞凋亡模型,造模成功后探索半夏泻心汤佳浓度并随机分组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率、放免法检测胰岛素分泌浓度.结果 H2O2半数致死浓度为300 mmol/L,半夏泻心汤佳浓度为10％(P＜0.01);半夏泻心汤可显著增强胰岛细胞活力,降低胰岛细胞凋亡率,增加胰岛素分泌(P＜0.05).结论 半夏泻心汤可抑制胰岛细胞凋亡,促进胰岛素分泌,其机制有待进一步探讨.
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清肝化瘀方含药血清对人巨细胞病毒感染后人胚肺成纤维细胞细胞病变及增殖的影响
目的 探讨清肝化瘀方含药血清对人巨细胞病毒(HCMV)感染后人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞病变及增殖活性的影响.方法 以体外培养的HELF为靶细胞,将清肝化瘀方含药血清和更昔洛韦(GCV)含药血清分别作用于HCMVAD169株感染的HELF,采用倒置相差显微镜动态观察细胞病变,MTT检测细胞增殖活性.结果 清肝化瘀方含药血清、GCV含药血清大无毒浓度均为血清稀释度10-3.HCMV感染后24～72 h、168 h细胞病变(+);24～72 h、144 h增殖活性减低.清肝化瘀方含药血清、GCV含药血清干预后,细胞病变均消失;干预24～96 h增殖活性均逐渐升高,与病毒组比较,均以72 h时升高为主,差异有统计学意义(P＜0.05).2组间细胞病变及增殖活性比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 清肝化瘀方、GCV含药血清均可通过遏制HCMV感染后细胞病变,调节HELF增殖而发挥抗病毒作用.
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基于UPLC-Q TOF/MSE方法的凉血活血胶囊口服给药后入血成分初探
利用血清药物化学方法以及先进的UPLC-Q TOF/MSE技术对凉血活血方含药血清进行研究,初步鉴定了大黄素、芍药苷、羟基茜草素及紫草萘醌类化合物四个成分,分别来自方中的大黄、赤芍、茜草及紫草.揭示了凉血活血方的体内部分化学成分,为凉血活血胶囊的制剂工艺再优化及作用机理阐释奠定基础.
关键词： 凉血活血方 UPLC-Q TOF/MSE方法 口服 含药血清 -
芪莲茅根汤含药血清对大鼠肾小球系膜细胞凋亡相关基因表达谱的影响
目的 利用cDNA基因表达谱芯片观察芪茅莲根汤含药血清干预后的大鼠肾小球系膜细胞基因表达水平的变化,通过诱导肾小球系膜细胞凋亡相关基因的表达谱变化,探讨其在凋亡信号转导途径中的机制.方法 建立大鼠肾小球系膜细胞培养体系,用Trizol一步法、抽提法分别从正常对照组、含药血清组的大鼠肾小球系膜细胞中抽提mRNA,经逆转录后合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,与含有11 260个cDNA基因的大鼠12K基因表达谱芯片杂交,将图像导入分析软件Imagene进行图像分析,数据导入分析软件Genespring进行标准化处理,计算ratio值(两种荧光Cy3、Cy5的比值).分析正常对照组、含药血清组之间差异表达的基因,对所获得的基因进行生物信息学分析.结果 含药血清组与正常对照组中差异表达上调的基因147条、下调的168条;涉及参与细胞凋亡发生以及能量代谢、蛋白合成、信号转导和激活因子.与细胞凋亡相关的差异表达基因37条,占芯片基因总数的0.3286%,其中表达上调的21条(平均Ratio值为3.975),下调的16条(平均Ratio值为0.402);生物信息学分析表明,Bcl-2、Bak1、Caspase9、Timp1、Cdk5、Pdgfra、Igfbp5、Ifi1等在芪莲茅根汤含药血清诱导大鼠肾脏系膜细胞凋亡的调控中发挥了重要作用.结论 芪茅莲根汤含药血清诱导肾小球系膜细胞调亡涉及多个基因,通过细胞内、外信号传导途径共同调节完成,从而调控肾小球系膜细胞的增殖.
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芦丁含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化成熟的影响
目的 研究芦丁含药血清(Serum of rats administered Rutin,SR)对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 ①取出生24 h 内的Wistar 大鼠颅骨,采用酶解法分离获得成骨细胞,培养于含10%类标准胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的α-MEM 培养基中,37℃、5% CO2 和饱和湿度条件下培养,每3 d 换液1 次,至80%融合时传代.②按100 g 体重25 mg 芦丁的剂量灌服12 只成年大鼠,对照组用等体积生理盐水灌胃.采用心脏穿刺取血,血液静置2 h 后3000 rpm 离心10 min,上清即为芦丁含药血清(Serum rats administered Rutin,SR)或对照血清.以2.5%、5% 和10% 3 种浓度加入ROB 培养基,分别检测对细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙化结节的影响.结果 2.5%、5%的SR 均促进细胞增殖[分别为(0.678±0.242)%、(0.796± 0.155)%],以5%浓度明显;10%浓度导致部分细胞悬浮死亡,表明浓度过高.成骨性诱导培养发现,5% 芦丁含药血清显著提高ROB 细胞ALP 活性,增加骨钙素分泌量(63.35±5.20)μg/μl.结论 芦丁经口服后的代谢产物能刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟.由于多数含芦丁的中药制剂均为口服,所以其代谢产物很可能是芦丁抗骨质疏松的有效成分,但其具体形式和作用方式尚待进一步研究.
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肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5的影响及机制研究
目的 基于Smad通路研究肺痹汤含药血清对白细胞介素17(IL-17)诱导的人胚肺成纤维细胞二倍体(MRC-5)的影响,探讨肺痹汤防治肺间质纤维化的机制.方法 建立IL-17诱导的MRC-5模型,通过CCK-8法检测细胞增殖水平,ELISA法检测TGF-β1、Smad 3、Smad 7表达水平,qPCR法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白RNA表达水平,研究肺痹汤含药血清对MRC-5模型是否具有干预效果.结果 以IL-17诱导MRC-5细胞能够成功建立肺纤维化模型,肺痹汤含药血清对IL-17诱导的MRC-5细胞中Smad 3、Smad 7、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白RNA、Ⅲ型胶原蛋RNA表达水平有明显下调作用.结论 肺痹汤含药血清可抑制成纤维细胞的增殖,减少TGF-β1的分泌,阻断TGF-β1/Smad信号通路,从而减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,从而改善肺间质纤维化.
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通阳活血方含药血清对兔缺血再灌注窦房结细胞凋亡和细胞骨架蛋白 Vinculin 的影响
目的：探讨治疗病态窦房结综合征的通阳活血方含药血清对模拟缺血再灌注损伤兔窦房结细胞凋亡和细胞骨架蛋白Vinculin的影响。方法取新生乳兔窦房结细胞，以缺氧缺糖模拟缺血，以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型。设正常对照组、模型组、空白血清组、含药血清高、中、低剂量组，运用酶标仪、流式细胞分析仪、激光共聚焦显微镜观察各组窦房结细胞活性、凋亡及细胞骨架蛋白Vinculin形态的变化。结果模型组活细胞量较正常组明显减少(P<0.01)；凋亡明显增多(P<0.01)；空白血清组与模型组无明显差异。细胞骨架蛋白Vinculin裂解明显。含药血清高、中、低剂量组活细胞量明显高于模型组(P<0.05)，凋亡明显减少(P<0.01)， Vinculin结构较模型组完整，荧光强度明显高于模型组。结论通阳活血方含药血清能抑制模拟缺血再灌注引起的窦房结细胞损伤；通阳活血方治疗病态窦房结综合征的机制可能与保护窦房结细胞活性、对抗细胞凋亡、保护细胞骨架蛋白Vinculin形态结构有关。
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扶正透邪方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究
目的 探讨扶正透邪方提取物及其组分和含药血清对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用.方法 运用二倍稀释法检测扶正透邪方提取物、提取物纯化组分(粗多糖、精多糖、皂苷、酚酸+香豆素、黄酮+蒽醌)及给予大鼠1/2等效剂量、等效剂量、2倍等效剂量、8倍等效剂量提取物灌胃后所得含药血清的体外抑菌情况.结果 扶正透邪方提取物、提取物纯化组分中的皂苷具有较好的体外杀菌作用,其余组分在此次实验所用浓度下没有抑菌作用;给予大鼠2倍等效剂量和8倍等效剂量扶正透邪方提取物灌胃后所得的含药血清具有较好的体外抑菌作用.结论 扶正透邪方提取物及其部分组分和含药血清具有体外抑菌作用,并能影响多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性,为其干预多重耐药铜绿假单胞菌的进一步研究提供了实验依据.
关键词： 扶正透邪方 含药血清 多重耐药铜绿假单胞菌 体外抑菌 -
镇肝熄风汤含药血清激活Nrf2/ARE信号通路对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激的保护作用
目的:研究镇肝熄风汤含药血清对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)致PC12细胞氧化应激的保护作用及其相关机制.方法:应用镇肝熄风汤低剂量(8 g·kg-1)、中剂量(16 g·kg-1)和高剂量组(32 g·kg-1)大鼠的含药血清或空白血清预处理PC12细胞1h后,加100 μM 6-OHDA共孵育24 h后收集细胞.二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光探针染色法结合荧光酶标仪检测活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平,采用实时定量PCR检测核转录因子E2相关因子2(Nuclear Factor-erythroid 2 Related Factor2,Nfe2l2))基因Nfe2l2、血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Glutamate-CysteineLigase Catalyticsubunit,GCLc)和调节亚基(GCLm)mRNA表达.采用荧光素酶报告基因系统检测抗氧化反应元件(Antioxidant Response Element,ARE)活性.结果:镇肝熄风汤含药血清抑制了6-OHDA诱导的氧化应激,上调了6-OHDA处理细胞中Nfe2l2、HO-1和GCLc mRNA表达,但是对GCLm mRNA表达没有显著影响.结论:镇肝熄风汤含药血清对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与上调Nfe2l2 mRNA表达,使ARE激活进一步诱导其下游II相解毒酶基因和抗氧化酶基因HO-1和GCLc mRNA表达有关.
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HPLC法对白香丹胶囊中芍药苷在大鼠体内药时曲线的测定
目的:本研究通过HPLC法对白香丹胶囊大鼠含药血清的检测,确定其主要药效成分芍药苷在体内代谢的药时曲线,并找出佳采血时间,为后续机制研究奠定基础.方法:通过方法学考察确定所采用HPLC的准确度和精密度;给予白香丹胶囊溶液1 mL/100 g,连续给药3天,每天2次;给药后在不同时间点对大鼠进行眼眶静脉丛取血,白香丹胶囊组取血时间点分别为:10、20、40、60、90、120、180、240、300、360 min,离心15 min,3 000 r·min-1,取血清;将大鼠血清与甲醇按1:4混合,4℃离心,取上清液,氮气吹干,流动相定容至100 μL,过滤后进行测定.结果:方法学考察结果显示,日内精密度和日间精密度RSD＜3％,回收率均在98.0％-102.0％;制备药时曲线显示末次给药2h左右含药血清中芍药苷含量达到峰值.结论:通过方法学考察说明所采用HPLC方法日内精密度和日间精密度良好,回收率在标准范围内,符合定量检测要求;采用该方法所得药时曲线说明该复方中主要药效成分芍药苷在2h后血药浓度大,可作为复方含药血清提取的佳采血时间,这将为后续该复方治疗机制研究提供科学依据.
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蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞HepG -2增殖的抑制作用
目的：探讨蛇黄肝炎汤含药血清对人肝癌细胞 HepG -2增殖的影响。方法25只大鼠随机分为1倍、2倍、4倍浓度含药血清组，复方环磷酰胺含药血清组（阳性药物血清组），空白血清组5个实验药物组，分别将不同浓度的蛇黄肝炎汤含药血清、阳性药物含药血清、空白血清与 HepG -2细胞共同培养，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及细胞集落形成实验观察蛇黄肝炎汤含药血清体外对 HepG -2细胞增殖、克隆形成能力的影响。结果与空白血清组相比较，2、4倍的蛇黄肝炎汤含药血清组吸光度值（OD 值）均降低，差异均有统计学意义（P <0.05）。4倍含药血清随作用时间的延长，对 HepG -2细胞的抑制率逐渐增加（P <0.05），当4倍浓度含药血清抑制时间为72 h 时，抑制率达76.82%，与阳性药物血清组作用相当（抑制率达77.71%）。不同浓度的含药血清均能有效降低肿瘤细胞集落形成，与空白血清组相比差异均有统计学意义（P <0.05），且随着含药血清浓度增大细胞集落形成数逐渐降低，集落形成抑制率随含药血清浓度的增加呈逐渐升高的趋势。结论蛇黄肝炎汤含药血清具有抑制人肝癌细胞 HepG -2体外增殖、降低其克隆形成能力作用。
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透骨消痛胶囊含药血清对退变关节软骨细胞表达TNF-α、IL-1β的影响
目的 观察透骨消痛胶囊含药血清对体外培养的大鼠退变软骨细胞表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的影响,探讨透骨消痛胶囊防治骨性关节炎的作用机制.方法 4周龄SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原原位杂交法对第3代软骨细胞进行鉴定.用10 ng·mL-1 IL-1β干预第3代软骨细胞复制退变软骨细胞模型.模型复制成功后,随机分为模型组和透骨消痛胶囊含药血清组,分别在培养24、48、72 h后用TaqMan real-time PCR法检测各组mRNA表达.结果 透骨消痛胶囊含药血清组TNF-α mRNA、IL-1β mRNA相对表达量随着干预时间的延长逐渐下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞TNF-α、IL-1β的表达.
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芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞分泌血管新生因子的影响
目的 探讨芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管新生因子影响的机制.方法 采用血清药理学和体外干预培养HUVEC的方法,通过MTT法和酶联免疫吸附分析法观察芎芍胶囊低、中、高剂量对HUVEC的体外增殖和分泌Ang、Ang-2、VEGF、bFGF、EGF和TGF-β1的影响. 结果 芎芍胶囊各剂量组均有促HUVEC增殖的作用.低剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和VEGF的作用,而对bFGF、TGF-β1分泌的影响无明显差异;中剂量组有促进HUVEC分泌Ang、Ang-2、EGF和bFGF的作用,抑制TGF-β1的分泌,对VEGF的分泌无明显影响;高剂量组有促进HUVEC分泌Ang、EGF和bFGF的作用,并抑制VEGF与TGF-β1的分泌,而对Ang-2的影响无明显差异.结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,增加HUVEC分泌促血管新生因子和降低抑血管生成因子表达,且与剂量有一定的关系.
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柴胡疏肝散含药血清蛋白质组学的初步研究
目的 利用蛋白质组学的思维,通过实验来证明中药复方多靶点、多环节、多层次的整体性调节方式的作用机理与西药安理申单一靶点的作用机制存在差别,为进一步研究中药复方的作用机制奠定基础.方法 通过利用蛋白芯片质谱仪(SELDI)对柴胡疏肝散含药血清和安理申含药血清进行检测,使柴胡疏肝散含药血清、安理申含药血清和空白组含药血清之间飞行时间质谱柱状图之间对比,以其检测到差异蛋白,来验证中药复方和西药的作用机理存在的差异.结果 柴胡疏肝散含药血清有7个特有蛋白表达峰;安理申含药血清有14个特有蛋白表达峰.结论 柴胡疏肝散含药血清和安理申含药血清飞行质谱图存在着显著差异,因此说明两者之间对机体的药理作用机理存在差异.
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黄芩三种方法提取液的血清图谱比较
目的：比较黄芩采用半仿生提取法（Semi - bionic extraction，SBE）、水提法（Water ex-traction，WE）和乙醇提取法（Alcohol extraction，AE）三种提取液的血清图谱。方法取新西兰大白兔，灌胃乙醇提取液（Alcohol extraction，AE 液），采集不同时刻的血样，分离含药血清，将 HPLC 色谱峰数目、峰总面积平均值标准化处理，加权求和后得综合评判 Y 值，以 Y 值大者为较佳采血时刻；然后对三种方法提取液此时刻的含药血清作图谱比较。结果 HPLC 图谱表明，给药后2.5 h 的含药血清综合评判 Y 值大；三种提取液2.5 h 含药血清以半仿生提取液（Semi - bionic extraction，SBE 液）综合评判 Y 值大。结论 SBE 液含药血清较其他提取液含药血清中成分含量高。
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降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞磷酸肌醇-3激酶/AKT/FOXO1通路的影响
目的:通过研究降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞PI3K/AKT/FOXO1通路中相关蛋白与基因表达的影响,探讨降糖消渴颗粒含药血清保护胰岛B细胞的分子机制.方法:选取FOXO1高表达INS-1稳定细胞株,分别以1％ 、5％ 、10％ 、15％ 、20％ 不同浓度降糖消渴颗粒含药血清干预,用MTT法计算细胞成活率以观察药物毒性,分别检测各组细胞中总FOXO1蛋白水平以确定佳药物浓度开展后续实验.细胞用或不用PI3K抑制剂LY294002干预后,以Western blotting检测细胞中总FOXO1、p-FOXO1、Akt、p-Akt和细胞核内外的FOXO1、p-FOXO1的蛋白表达,qRT-PCR检测FOXO1mRNA和AktmRNA含量.结果:不同浓度含药血清对细胞均无毒性,其中10％ 为佳药物干预浓度.10％ 含药血清使磷酸化FOXO1和Akt的表达升高;在胞质和胞核中,10％ 含药血清使FOXO1的表达降低,磷酸化表达升高,抑制剂LY294002使FOXO1和p-FOXO1表达均降低.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,Akt mRNA表达升高,FOXO1mRNA表达降低,抑制剂使FOXO1mRNA表达降低,结果与Western blotting结果一致.结论:降糖消渴颗粒含药血清可通过PI3K/AKT/FOXO1通路促进FOXO1磷酸化出核以抑制FOXO核转录实现保护胰岛B细胞的作用.
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滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响
目的:从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制.方法:体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-[4,5-dimethylthylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况.结果:与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖.结论:高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展.
