首页 > 文献资料
-
多重、非对称PCR-FP技术同步检测沙眼衣原体和解脲支原体
目的:应用多重PCR-荧光偏振(FP)技术建立一种可靠、简单经济、快速的同步检测沙眼衣原体、解脲支原体的新方法,并推向临床应用.方法:以与沙眼衣原体dnaB样蛋白、解脲支原体UreC各血清型保守区序列互补的2对特异而无交叉反应的引物在同一反应体系中行多重、非对称聚合酶链反应扩增246例临床样本,应用沙眼衣原体、解脲支原体特异探针混合物与上述非对称扩增PCR产物孵育杂交,荧光偏振检测技术检测,并与常规检测方法测定结果比较.结果:应用多重、非对称PCR-FP技术同步检测泌尿生殖系感染临床标本246例,其中沙眼衣原体感染阳性56例,占22.7%;解脲支原体感染阳性62例,占25.2%;沙眼衣原体、解脲支原体混合感染阳性28例,占11.2%.与常规方法检测结果比较,两者对感染阳性的检测符合率为100%.结论:初步建立了具有良好的特异性、仅需一次扩增即可方便简单地检测沙眼衣原体、解脲支原体的同步检测新方法,对于相关感染的筛查及预防、预后判断具有重要价值.
-
TDI-FP法检测宫颈癌组织中HPV16E7基因647位点突变
目的:人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7基因的变异可能和HPV的致癌能力直接相关,E7 647位点的突变可能增强了致癌能力. 本课题通过应用TDI-FP法检测宫颈癌HPV16阳性标本中E7 647位点突变情况,可以对确定高危人群、恶性病变的预警筛查、辅助诊断、疗效判定及预后提供临床价值,并可以为宫颈癌及其癌前病变的基因治疗、疫苗治疗和预防提供分子水平方面的重要依据. 方法:TDI-FP技术是一种在聚合酶链反应的基础上具备液相探针杂交和碱基掺入三重特异反应的检测新方法,具有极高的特异性和敏感性. 本课题实验在TDI-FP方法的基础上检测宫颈癌患者HPV16 E7基因647位点突变情况,以进一步明确这些位点突变与宫颈癌变的相关性. 结果:应用TDI-FP法检测宫颈癌组织中HPV16型E7 647位突变率为32.35%,HPV16型E7 647位突变与对照组相比具有统计学差异(χ2=12.437,P＜0.001). 结论:本实验初步提示宫颈癌患者中HPV16型E7 647位突变可能是HPV致癌的一个高危因素.
-
PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性与2型糖尿病的关联性
目的: 确定中国西北人群中2型糖尿病(T2DM)与PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性的关联性. 方法: 应用模板指导荧光标记终止子结合的荧光偏振(TDI-FP)技术确定PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性的基因型. 比较基因型及基因频率在两组中的差异. 结果: PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性基因型及基因频率在T2DM组和对照组中分别为5.9%和5.8%,无显著性差异. 结论: TDI-FP技术是一种较可靠的新型单核苷酸多态性(SNP)技术. 在本实验中的中国西北人群中PPAR-γ2基因Pro12Ala多态性可能与T2DM发病无关联.
关键词： 荧光偏振 糖尿病 多态现象(遗传学) 过氧化物酶体增殖物激动受体-γ -
BRCA2基因突变荧光偏振检测方法的建立及优化
目的:建立一种适合于大量标本的基因突变筛查方法.方法:PCR扩增包含BRCA2基因突变位点的片段,经模板指导的荧光素标记碱基掺入反应(Template Directed Dye-terminator Incorporation,TDI),荧光素标记终止碱基(R110-acyGTp或TAMRA-acyTTP)特异性掺入到检测探针的3'末端,通过检测荧光偏振值(Flourscence Polarization,FP)确定BRCA2基因突变.结果:建立了基于TDI-FP原理的突变检测方法,并对引物、dNTPs浓度、PCR反应循环数等进行了优化,对健康人及乳腺癌患者外周血标本的检测结果与PCR产物直接测序法结果完全吻合.结论:此方法可快速、高通量检测BRCA2基因突变,适用于临床诊断和大量人群筛查.
关键词： 实验诊断学 BRCA2 荧光偏振 乳腺癌 模板指导的荧光素标记碱基掺入反应 -
TDI-FP法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16、18型别感染
目的 通过模板介导的染料终止子掺入-荧光偏振技术(TDI-FP)检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16、18感染情况,以初步探讨本地区HPV流行特点.方法 基于TDI-FP的基本原理,以HPV16、18 L1克隆重组质粒为模板,用HPV通用引物GP5+/6+ PCR扩增,再通过检测探针杂交后掺入的特异荧光素标记碱基的不同来判断病毒的类型.结果 在宫颈癌组织中HPV16和18型阳性率分别为61.8%及32.7%,高危型HPV占宫颈癌HPV的98.1%,宫颈癌组高危型HPV阳性率显著高于癌前病变组和慢性宫颈炎组.结论 初步提示宫颈癌患者HPV感染以高危型为主,其中有超过一半的患者以HPV16型感染为主.TDI-FP是一新兴的高通量基因检测技术,快速、可靠、敏感、特异并且操作简便,更适合于大规模临床筛查及在临床上广泛推广应用.
-
人类乳头瘤病毒16型早期基因178位(T→G)突变分析
目的 检测宫颈癌患者高危型人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV) 16型阳性标本中早期基因(E6基因)178位(T→G)点突变情况.方法 应用模板指导的染料终止子掺入-荧光偏振检测技术(TDI-FP)方法检测宫颈癌患者高危HPV16型E6基因178位点突变情况,以进一步明确此基因位点突变与宫颈癌变的相关性.结果 应用TDI-FP法检测宫颈癌组织中高危HPV16型E6基因178位突变率为32.5％0,与癌前病变及慢性宫颈炎患者相比,差异具有统计学意义(x2=20.623,P＜0.01).结论 宫颈癌患者HPV16型E6基因178位(T→G)突变率较高,可能是HPV致癌的一个高危因素.
-
TNFα基因-863位点单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系
目的 探讨TNFα基因 863位点的单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系.方法 采用模板介导的染料终止物掺入荧光偏振检测(TDI-FP)的方法对59例宫颈癌以及22例对照进行TNFα基因 863位点的单核苷酸多态性检测.结果 宫颈癌组的TNFα基因 863位点A等位基因频率(39.0%)较对照组(14.6%)明显升高(P<0.01,OR=2.673,95% CI:1.300～5.497);AA基因型在宫颈癌组和对照组中分别为15.3%和0,差异显著(P<0.05);CA基因型在两组中分别为47.5%和29.2%,差异显著(P<0.05);A等位基因频率在HPV阳性者与HPV阴性者之间没有显著性差异(P>0.05,OR=1.950,95% CI:0.840～4.527),但是在HPV阳性者中具有增高趋势(37.5%),高于HPV阴性者(19.2%).结论 TNFα基因 863位点A等位基因以及CA、AA基因型与宫颈癌的危险性升高有关,与HPV感染危险性无关.
-
免疫发光仪节约成本对策分析
AXSYM全自动免疫化学发光分析仪是美国雅培公司的产品.其通过微粒子酶免疫分析法(MEIA)、荧光偏振免疫分析法(FPIA)、离子捕捉免疫分析法(ICIA)及辐射能衰减分析法(REA)等4种方法对多种人体指标进行检测.如肿瘤标记物、性激素、甲状腺激素、病毒及药物浓度等,其特点是检测快速、准确、简便、重复性好,主要是其特异性强、抗体(原)纯度高.
