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微孔反应板培养法在阴道毛滴虫实验诊断中的应用
近年,笔者对培养法进行了一些改进,以微孔反应板代替培养皿,并对培养液成分进行改进,效果比较理想.1 对象、材料及方法1.1 对象全部为妇科毛滴虫感染疑似病例,患者有白带增多,呈白色泡沫状,稀薄有臭味,外阴瘙痒与腰痛,部分患者有尿痛、尿急、尿频等尿路感染症状.
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提高龙心素活性测定的重复性
龙心素是采用地龙为原料,用生物技术加工而成抗心脑血管疾病的药物.其质量标准(滇Q/WS1112-1995)采用龙心素溶液点样于纤维蛋白板上产生溶斑的大小测定其活性,此法重复性较差.#1标准中方法的局限性1.1标准法中所用试剂质量标准规定,取已消毒的培养皿2只,分别加入2 mg@ml-1的纤维蛋白质溶液10ml,快速加入凝血酶溶液(每1 ml含牛凝血酶40单位)0.5ml,混匀、室温静置10 min,即成纤维蛋白板.方法中不同批号的纤维蛋白原试剂所含可凝蛋白的量不等,可凝蛋白量高的纤维蛋白原试剂制备成纤维蛋白板测试的溶斑明显小于可凝固蛋白量低的纤维蛋白原试剂制备成纤维蛋白板测试的溶斑.但不同批号纤维白原试剂含可凝蛋白不一致,以纤维蛋白原为定量依据会使制成的纤维蛋白浓度不一致而导致活性测定的重复性差.另外标准未对培养皿的尺寸作出规定,采用不同规格的培养皿也会导致测定结果的差异.
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淋巴细胞培养条件及常见失败原因探讨
淋巴细胞培养是实验研究常用的一项技术,对于培养器皿,可以选用培养板,培养瓶,培养皿,三角烧瓶,试管,青、链霉素小瓶等[1,2].目前,关于淋巴细胞分离方法的文献资料较多,论述较详细,而对淋巴细胞培养则论述较少,较简单.细胞培养工作十分繁琐,环节较多,探讨细胞培养的条件,对于成功培养细胞具有十分重要的意义.本文选用1.5ml离心管培养淋巴细胞,观察了淋巴细胞培养前后的变化,探讨了淋巴细胞培养的条件及失败的常见原因.现报道如下.
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骨髓间充质干细胞在软骨组织工程化组织构建中的应用
人骨髓中所含的细胞可以分为造血类细胞和非造血类细胞.前者中含有的干细胞主要为造血干细胞,而后者中含有间充质类干细胞(mesenchymal sten cell)能够分化为骨、软骨、肌腱、脂肪、皮肤和其他类型的细胞[1-2].骨髓中含有多向分化潜能的细胞,这类细胞的共同特征是具有成纤维细胞的形态,能黏附塑料培养皿,并能形成细胞克隆,但无吞噬功能.
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SMMC-7721肝癌细胞裸鼠种植瘤的血管内皮细胞生长因子表达
实体瘤生长至肿瘤直径大于1~2*!mm时自身能分泌多种促血管生长因子[1],其中主要的是血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),人肿瘤细胞和某些病理情况下的人组织细胞产生和分泌4种VEGF蛋白多糖分子单体,分别是VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206,它们的同源二聚体分子能特异地与肿瘤周围血管内皮细胞上的VEGFR结合[2,3],刺激内皮细胞的有丝分裂,并通过细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的相应变化,从而建立肿瘤的血管网络。本实验的目的是验证SMMC-7721细胞系是否具有分泌VEGF的生物学特性,为下一步用抗VEGF抗体抑制人肝癌裸鼠皮下种植瘤生长的实验研究,提供可供应用的肝癌细胞系。1 材料和方法1.1 动物和材料雄性的BALB/C nu/nu裸小鼠3只(购自上海市肿瘤研究所),体重(25±2)g。冻存的SMMC-7721肝癌细胞株,RPMI-1640细胞培养液(GibcoBRL),0.25%胰蛋白酶消化液(GibcoBRL),单克隆抗VEGF165抗体(mouse anti-human,IgG2b,clone 26503.11,Sigma),HIGH-SABC试剂盒及DAB显色试剂盒(佰士德公司,武汉)。1.2 细胞培养、肿瘤接种、细胞铺片的制备1.2.1 复苏冻存的SMMC-7721细胞株,用RPMI-1640细胞培养液,25*!mL细胞培养瓶传代培养3~4代以后,再用250*!mL细胞培养瓶扩传培养,待细胞生长至对数生长期,胰酶消化,用细胞培养液制成细胞悬液,调整细胞密度至1×107/mL,每个裸鼠背部取一点皮下种植细胞悬液0.5*!mL。种植1月后杀死动物取瘤,用10%福尔马林固定,石蜡包埋。1.2.2 将清洁的、高压消毒过的盖玻片放在培养皿中,然后向培养皿中滴加RPMI-1640培养液制成的SMMC-7721细胞悬液,置5%的CO2孵箱中,37℃培养,培养至在显微镜下确认盖玻片上的培养细胞已处于对数生长期,吸除细胞培养液,用PBS洗涤玻片2遍,再用95%的酒精固定玻片上的细胞15*!min,室温放置晾干后,置-30*!℃冰箱中保存备用。
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经环氧乙烷灭菌的培养皿对Ames试验的影响
目的:研究经环氧乙烷灭菌的培养皿对Ames试验的影响。方法:采用Ames试验平板掺入法,分别使用不同储存时间及是否通风等情况下的环氧乙烷灭菌培养皿,计数TA97、TA98、TA100、TA102及TA1535菌株的回变菌落数。结果:灭菌后存放1个月左右(25 d)的培养皿中环氧乙烷的残留在活化和非活化两种条件下均能引起TA100和TA1535菌株的回变菌落数增多(TA100,约自发回变数的1.5倍;TA1535,约自发回变数的10倍),而经通风或延长培养皿储存时间可减少环氧乙烷残留并消除这种致突变作用。结论:在一定条件下,经环氧乙烷灭菌的培养皿对Ames试验中TA100、TA1535菌株有致突变性。
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浅谈金黄色葡萄球菌的肺部感染
金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌,隶属于葡萄球菌属,是革兰阳性菌的代表,可引起许多严重感染.金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到.金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源.当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了,于是发现了青霉素,而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰阳性菌作用明显.
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手术间3种不同采样高度细菌计数结果分析
手术间空气中细菌的采样培养,是经常进行的一项消毒效果的监测方法.根据国家规定其采样高度要求在80~150cm范围内,如严格的按测试标准去做,事先要准备培养皿放置的高度,操作较为繁琐.为此,我们进行了3种不同高度的采样测试.