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癌基因GOLPH3研究进展
高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3),又称Gpp34、GMx33、MIDAs,是近年发现一类参与小泡运输的癌基因,由人染色体5p13基因编码.参与生命中一系列的生理过程,GOLPH3还可充当癌基因促进细胞转化和肿瘤的生长,增强活动的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶调节细胞生长,增殖和存活,与肿瘤的发生有密切关系.本文从GOLPH3的生物学功能及其与肿瘤发生的相关性做一综述.
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GOLPH3促进前列腺癌细胞增殖和转移的机制研究
目的 研究前列腺癌中新型高尔基相关蛋白GOLPH3的表达特性,并探索其在前列腺癌细胞中的功能作用和分子机制.方法 采用定量PCR和Western blot方法检测前列腺癌细胞中GOLPH3表达情况.运用免疫组化法检测前列腺组织中GOLPH3的表达情况.采用CCK-8方法检测敲减GOL-PH3后PC-3细胞增殖生长情况;使用Transwell方法检测敲减GOLPH3后PC-3细胞侵袭和迁移能力.Western blot方法检测敲减GOLPH3后PC-3细胞周期蛋白表达的变化;Western blot方法检测EGFR-Src和EGFR-Akt-mTOR信号通路中关键蛋白及其磷酸化在GOLPH3 RNAi及其阴性对照组细胞中的表达变化.结果 GOLPH3在前列腺癌细胞和组织不同程度表达.GOLPH3敲减后,PC-3细胞增殖和生长受到明显抑制作用(P<0.05),PC-3细胞穿过滤膜的细胞数明显减少(P<0.05).GOLPH3基因沉默后PC-3细胞增殖和转移能力明显下降.GOLPH3敲减后,PC-3细胞在G2/M期出现了非常显著的阻滞,提示GOLPH3基因在G2/M期参与了PC-3细胞增殖周期过程;PC-3细胞中p21的表达明显上调,CDK1/2、cyclinB1表达明显下调,Akt和mTOR表达上调,p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K则下调;p-EGFR、p-Src蛋白表达量显著降低,而EGFR、Akt、mTOR、Src、FAK、p-FAK、p70S6K蛋白表达量无明显变化.揭示阻断GOLPH3能抑制EGFR-Src信号通路的活化.结论 GOLPH3在前列腺癌细胞和组织中过量表达.GOLPH3在前列腺癌细胞增殖和转移过程中发挥重要作用.GOLPH3通过抑制p21,激活CDK1/2、cyclinB1等细胞周期蛋白和Akt-mTOR-p70S6K磷酸化来促进前列腺癌细胞增殖.GOLPH3能调控EGFR蛋白磷酸化及其下游Src蛋白磷酸化的表达.GOLPH3可能通过调控EGFR-Src信号通路及其底物MMP9影响前列腺癌的侵袭和转移.
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肾透明细胞癌组织GOLPH3表达临床意义
目的 高尔基蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)与多种肿瘤的发生相关,在肿瘤组织中高表达,本研究拟探讨GOLPH3在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测72例RCCC组织和40例癌旁正常组织中GOLPH3的表达,采用蛋白质印迹法检测10例RCCC组织和癌旁正常组织中GOLPH3的蛋白表达.结果 RCCC组织GOLPH3阳性表达率(53％)高于癌旁正常组织(20％),χ2=38.798,P<0.05;GOLPH3蛋白高表达患者的平均生存期(52.34个月,95％CI:42.803～61.881)低于低表达者(68.79个月,95％CI:52.984～74.587),χ2=23.42,P<0.05;多因素Cox回归显示TNM分期(T1～T2/T3～T4)HR=3.76(95％CI:2.87～4.65)、Fuhaman分级(G1～G2/G3～G4)HR=2.63(95％CI:1.98～3.56)、GOLPH3表达水平(HR=2.94,95％CI:2.35～3.58)均是RCCC预后的独立危险因素.结论 GOLPH3 在 RCCC 的发生发展中发挥重要作用,有可能成为新的 RCCC 检测和监控的指标.
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结直肠癌组织中Golph3的表达与细胞凋亡的相关性*
目的：探讨Golph3在结直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法：免疫组织化学方法检测62例结直肠癌组织中的Golph3、Caspase-3的表达，TUNEL法检测结直肠癌组织的凋亡指数，分析结直肠癌组织中的Golph3表达与临床病理因素、细胞凋亡的相关性。结果：Golph3在结直肠癌组织中的表达率明显高于正常结直肠黏膜（P<0.05）；低分化、浸润深度侵及浆膜外、淋巴结转移、Ⅲ期的结直肠癌组织中Golph3的表达率分别明显高于高中分化、浆膜内、无淋巴结转移者、Ⅰ～Ⅱ期结直肠癌组织的表达率（P均<0.05），而Golph3的表达与年龄、性别、肿瘤位置、大体类型、肿瘤长度无关（P>0.05）。Golph3高表达的结直肠癌组织中Cas-pase-3阳性表达率及凋亡指数明显低于Golph3低表达的结直肠癌组织（P<0.05），相关分析显示结直肠癌组织中Golph3的表达与AI呈负相关（r=-0.320，P<0.05）。结论：结直肠癌组织中Golph3存在过表达，与细胞凋亡呈负相关。
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胃癌组织中高尔基体磷酸化蛋白的表达及临床意义
目的：探讨高尔基体磷酸化蛋白（GOLPH3）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法收集该院2009年5月至2012年7月经手术切除病理证实为胃癌的组织标本40例，用Real-time PCR 方法检测其肿瘤组织和癌旁组织中GOLPH3的表达，并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 GOLPH3在肿瘤组织的表达明显高于癌旁组织（P＜0.001），GOLPH3的表达与肿瘤大小（P＝0.029）、分化程度（P＝0.036）、浸润深度（P＝0.002）、淋巴结转移（P＝0.030）和TNM分期（P＝0.006）相关。结论 GOLPH3在胃癌中过表达，可能参与了胃癌的发生发展，有望成为胃癌新的独立预测指标。
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Snail 介导 GOLPH3对人脑胶质瘤细胞迁移和侵袭作用的研究
目的：研究GOLPH3影响脑胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力及机制。方法观察GFP荧光和Western blot鉴定过表达或下调GOLPH3的U251细胞；分别应用RT-PCR、Western blot 实验检测GOLPH3对Y-box binding protein 1（YB1）蛋白及核酸水平、对MMP-2及Snail的调节；采用Snail siRNA下调Snail的表达后，Western blot检测Snail及YB1的水平，细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测Snail对细胞的侵袭迁移能力的影响；Western blot检测在过表达GOLPH3的U251细胞中下调Snail后，GOLPH3、Snail及YB1的水平；同时应用细胞划痕实验和Transwell 侵袭实验检测此共转实验对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果下调GOLPH3抑制YB1的蛋白与核酸水平以及MMP2核酸水平。下调GOLPH3抑制Snail 的蛋白表达，过表达GOLPH3，Snail表达量增加。下调Snail后，YB1的表达量降低，并抑U251细胞的侵袭与迁移能力。过表达GOLPH3引起的细胞的迁移和侵袭能力增加被下调Snail所逆转。结论 GOLPH3通过Snail调节YB1的表达，调节U251细胞的迁移和侵袭能力。
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GOLPH3对人脑胶质瘤细胞周期及凋亡调节作用的研究
目的：探讨GOLPH3（ Golgi phosphoprotein 3）对人脑胶质瘤细胞周期及凋亡的影响及调控机制。方法在U251胶质瘤细胞中利用siRNA下调GOLPH3的表达后，流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化，RT-PCR和Western blot技术检测细胞周期相关蛋白cyclin D1， p21waf1／cip（p21）和p53在核酸和蛋白水平的变化，同时检测下调GOLPH3对Akt、pAkt蛋白水平的影响。结果3条GOLPH3 siRNA均能下调GOLPH3的蛋白表达（均P＜0．05）；下调GOLPH3使细胞周期阻滞在G0／G1期（P＜0．05），细胞凋亡率明显增加（P＜0．05）。同时发现下调GOLPH3使cyclin D1的核酸和蛋白水平降低，p21的核酸和蛋白水平升高而p53的核酸和蛋白水平无明显变化。下调GOLPH3的表达降低pAkt的蛋白水平（P＜0．05），但对Akt无影响。结论在U251细胞中下调GOLPH3使细胞阻滞在G0／G1期，促进细胞凋亡。下调GOLPH3对细胞周期的调节作用可能是通过抑制PI3K-Akt信号通路，进而下调cyclin D1和上调p21的表达来实现的。
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下调GOLPH3通过P-YB1途径抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移的研究
目的 探讨癌基因GOLPH3影响胶质瘤细胞侵袭和迁移的机制.方法 将真核表达质粒GOLPH3shRNA with GFP tagged和对照质粒GOLPH3 shNC转入人胶质瘤U25l细胞中,Western blot技术检测GOLPH3、GOLPH3 L、YB1、P-YB1蛋白表达,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 与对照组比较,转染GOLPH3 shRNA with GFP tagged质粒24h后U25l细胞侵袭能力下降49％、迁移能力下降58％,差异均有统计学意义(P＜0.01);转染GOLPH3 shRNA可以明显降低YB1、P-YB1蛋白的表达(P＜0.01).结论 下调GOLPH3可以通过降低YB1、P-YB1的表达,进而抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移能力.
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Mcl-1与高尔基体磷酸化蛋白在结肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系
目的 探究髓细胞白血病-1(Mcl-1)与高尔基体磷酸化蛋白(Golph3)在结肠癌组织中的表达水平及与其临床病理特征的关系.方法 应用免疫组化方法 ,检测60例结肠癌组织中Mcl-1、Golph3表达水平,并与其癌旁正常组织中的表达水平进行比较.结果 Golph3、Mcl-1在正常组织及结肠癌组织中均有表达,然而在结肠癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05);Mcl-1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),与肿瘤浸润深度、临床分期密切相关,浸润程度大,临床分期Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织中Mcl-1阳性表达率显著较高(P<0.05);Golph3水平与浸润深度、淋巴结转移密切相关,浸润程度大,发生淋巴结转移患者组织中Golph3阳性表达率明显较高(P<0.05).结论 Mcl-1、Golph3参与结肠癌的发生、发展过程中,与正常组织相比其表达量显著升高,且与肿瘤远端转移、淋巴结转移,临床分期等病理参数密切相关.
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子宫内膜癌组织中GOLPH3的表达及其临床意义
目的 探讨子宫内膜癌组织中GOLPH3表达的临床病理学意义及其与细胞增殖、预后的关系.方法 免疫组织化学方法(SP法)检测60例子宫内膜癌组织和20例正常子宫内膜组织中GOLPH3、ER、PR和Ki-67的表达,分析GOLPH3表达与临床病理因素、ER、PR、Ki-67增殖指数及预后的关系.结果 GOLPH3在子宫内膜癌组织的表达率明显高于正常子宫内膜的表达率(P＜0.05),子宫内膜癌组织中GOLPH3的表达率随着临床分期的提高而明显升高,差别有统计学意义(P＜0.05).此外,GOLPH3的表达与年龄、组织分级、浸润深度和ER、PR的表达水平无明显相关(P＞0.05),子宫内膜癌组织中GOLPH3的表达计分值与Ki67增殖指数呈正相关(r=0.325,P=0.010).GOLPH3阳性的患者5年生存率明显低于GOLPH3阴性表达者(P＜0.05).结论 GOLPH3在子宫内膜癌组织中存在过度表达,促进了子宫内膜癌细胞的增殖,并与子宫内膜癌的预后差相关.
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卵丘颗粒细胞GOLPH3表达对单精子卵胞浆内注射助孕结局的影响
目的 探讨卵丘颗粒细胞高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3)表达对单精子卵胞浆内注射(ICSI)助孕结局的影响.方法 收集2012年4月~2014年6月,因男性不育症行ICSI助孕的119例女性患者的卵丘颗粒细胞,采用细胞免疫化学,Western bloting方法检测颗粒细胞GOLPH3蛋白的表达,采用real-time荧光定量PCR方法检测GOLPH3基因表达.比较分析ICSI妊娠组与非妊娠组病例卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率差异,并分析它们与ICSI实验室结局各项指标:穿卵泡数、获卵数、获卵率;受精数、受精率;卵裂数、卵裂率;优质胚胎数、囊胚形成数及囊胚冷冻数之间的相关关系.结果 对119份卵丘颗粒细胞涂片进行免疫细胞化学分析GOLPH3的表达,结果发现GOLPH3主要表达在细胞质中,妊娠组与未妊娠组卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与表达强度组间差异均有统计学意义(P均<0.05).卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与ICSI实验室结局指标:穿卵泡数,Ⅲ级OCCs数,ICSI卵子数,受精数,卵裂数,平均优质胚胎数,平均囊胚数,优质囊胚数,平均冷冻胚胎数等呈显著正相关关系(P均<0.01).Real-Time PCR,Western blot检测妊娠组与未妊娠组颗粒细胞GOLPH3蛋白与基因表达组间差异也均有统计学意义(P均<0.05).结论 GOLPH3在卵丘颗粒细胞的表达,可能影响卵母细胞的成熟,卵子的发育能力,进而与ICSI助孕结局有关.
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GOLPH3基因对宫颈癌细胞Hela迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨GOLPH3基因对宫颈癌细胞Hela迁移和侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将GOLPH3的表达质粒和靶向GOLPH3的siRNA转入Hela细胞内;通过荧光实时定量PCR检测GOLPH3基因的相对表达量,Transwell实验检测Hela细胞迁移和侵袭能力.结果 荧光实时定量PCR结果显示,与NC组(0.990±0.005)相比,siRNA组GOLPH3表达量(0.383±0.020)显著降低(P＜0.01),与pcDNA组(0.997±0.029)相比,GOLPH3组GOLPH3表达量(3.333±0.219)显著升高(P＜0.01).Transwell细胞迁移实验结果显示,NC、siRNA、pcDNA和GOLPH3组具有迁移能力的细胞数分别为(172.30±4.33)、(75.00±3.79)、(163.70±3.93)和(258.00±4.93).Transwell细胞侵袭实验结果显示,NC、siRNA、pcDNA和GOLPH3组具有侵袭能力的细胞数分别为(53.67±2.96)、(26.67±2.73)、(51.67±2.19)和(81.67±3.38).结论 上调GOLPH3基因表达可促进宫颈癌细胞迁移和侵袭能力;反之,抑制其表达可抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭能力.
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mTOR抑制剂治疗非小细胞肺癌疗效预测初步分析
目的:讨RAD001治疗的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的疗效及其与mTOR通路相关分子表达水平的关系.方法:收集2009年5月至2009年12月广东省人民医院Ⅰ期临床试验中8例经RAD001治疗NSCLC患者的肿瘤组织和血浆标本,采用免疫组化方法、实时荧光定量方法结合临床资料分析mTOR通路相关分子与疗效之间的可能预测关系.结果:8例NSCLC患者中达到部分缓解(PR)1例、病情稳定(SD)3例、病情进展(PD)3例、不能评价1例(未及评价期死亡患者),中位无进展生存时间(PFS) 15周.GOLPH2、mTOR、ALK、KRAS等可考虑为mTOR抑制剂的潜在预测指标；治疗前血浆中部分通路分子mRNA表达水平低的患者对mTOR抑制剂疗效较好.结论:RAD001治疗NSCLC有一定疗效,治疗前血浆部分mTOR通路相关分子mRNA低表达可能提示患者对mTOR抑制剂敏感.
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高尔基体磷蛋白3在前列腺癌中的表达及意义
目的：探讨高尔基体磷蛋白3（GOLPH3）在前列腺癌中的表达及临床意义。方法：采用qRT－PCR定量检测GOLPH3在60例前列腺癌患者、40例前列腺增生患者及20例正常健康人群血液标本中的表达，并分析其在前列腺癌中的表达与临床病理特征的关系。同时，采用 qRT-PCR 及 Western Blot 定量检测了GOLPH3在4例前列腺癌及配对的癌旁正常组织中的表达。结果：qRT-PCR定量检测结果显示GOLPH3在前列腺癌患者血液中的表达明显高于前列腺增生及正常健康人群，差异具有统计学意义（P ＜0．01）。同时， GOLPH3在前列腺增生患者血液中的表达也明显高于正常健康人群（P ＜0．05）。此外，qRT-PCR及Western Blot结果均显示GOLPH3在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P ＜0．05）。 GOLPH3在前列腺癌中的表达与Gleason评分、淋巴结转移以及临床TNM分期相关（P ＜0．05）。结论：GOLPH3高表达与前列腺癌的发生及发展密切相关。
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Golph3与上皮性卵巢癌预后的关系
目的:探讨Golph3与卵巢癌患者预后的关系.方法:收集40例在本院接受手术治疗的上皮性卵巢癌患者癌旁组织和卵巢癌组织,通过RT-PCR检测Golph3的差异表达,结合患者的临床资料分析其意义,采用κaplan-Meier法分析生存时间,Chi-Square检验检测差异表达Golph3与患者预后的关系.结果:40例患者的Golph3在卵巢癌组织中的总体表达水平明显高于癌旁组织,比较在卵巢癌组织中高表达及低表达Golph3患者的生存情况,发现低表达Golph3的患者的生存期较高表达者明显延长,差异具有统计学意义(P＜0.05).Chi-Square检验发现Golph3的表达与患者的手术病理分期(P=0.009)、组织学分化(P=0.000)及治疗反应(P=0.003)相关,与患者的年龄和病理类型无关(P＞0.05).结论:我们的研究结果提示Golph3可能作为一个癌基因参与了卵巢癌的发生发展,与患者的手术病理分期、组织学分化、治疗反应及生存期相关.
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GOLPH3通过EMT促进食管癌转移的研究
目的 探讨GOLPH3在食管癌转移中的作用.方法 通过划痕实验、Transwell侵袭实验和3D培养等方法,研究GOLPH3对KYSE-140细胞迁移和侵袭能力的影响.用qRT-PCR法检测CYR61,CD44与Snail这三个上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子与GOLPH3的关系,初步探索GOLPH3对食管鳞癌细胞转移能力的影响.结果 GOLPH3对食管鳞癌细胞的迁移和侵袭有促进作用,且CYR61,CD44与Snail在食管鳞癌细胞中的表达水平与GOLPH3的表达呈正相关.结论 GOLPH3高表达可促进食管鳞癌细胞的上皮-间质转化,从而促进食管癌的转移和进展,发挥癌基因作用.
