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特发性脊柱侧凸患者髂骨松质骨中Ⅰ型胶原、骨钙素和骨保护素等mRNA的表达
目的 探讨青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis, AIS)女性患者骨组织中Ⅰ型胶原、骨钙素和骨保护素mRNA含量的变化与骨量减低之间的关系.方法 43例AIS女性患者,年龄12～18岁.Cobb角范围40°～105°,平均50.3°±12.8°.将所有AIS患者分为两组:A组为骨量正常患者,B组为骨量减低患者.运用RT-PCR方法检测术中取髂骨松质骨块中Ⅰ型胶原、骨钙素和骨保护素mRNA的表达.结果 本组病例中骨量正常者(A组)29例,而骨量减低者(B组)14例(32.6%).两组患者的生长发育相关资料等无显著性差异.两组患者间骨钙素和骨保护素mRNA的相对含量无显著性差异,而A组患者Ⅰ型胶原mRNA的相对含量高于B组患者,但无统计学意义(F=1.761, P=0.196).相关分析显示全部患者的Ⅰ型胶原相对含量与BMD值之间呈较弱的正相关性,骨钙素和骨保护素与BMD值无显著相关性.结论 本组病例AIS女性患者的松质骨中Ⅰ型胶原、骨钙素和骨保护素等的mRNA表达量与骨量减低缺乏显著关联.不过,AIS女性患者的骨量减低与松质骨中Ⅰ型胶原含量之间的关系难以排除.
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卵巢切除大鼠在不同时期RANKL、 OPG蛋白表达的变化及与BTMs的相关性
目的 探讨卵巢切除大鼠在不同时期骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及与骨转换标志物(BTMs)的关系.方法 将SD雌性大鼠随机分成假手术组(Sham)和去卵巢骨质疏松模型组(OvX),模型组行双侧卵巢切除术,术后第2、6、10、14周分批取材,采用Western blot检测各时期大鼠骨组织OPG、RANKL蛋白表达,采用Elisa检测各时期大鼠血清骨转换标志物BGP、BALP、CTX-I、TRAP-5b的变化.结果 OVX组在术后第2周(P＜0.01)和第10、14周(P＜0.05)骨组织RANKL蛋白表达均较Sham组显著升高,OPG蛋白表达在第2周(P＜0.01)和第6周(P＜0.05)均显著降低.②与Sham组相比,OVX组术后第2周血清BGP、BALP、CTX-I(P ＜0.05)和TRAP-5b(P ＜0.01)水平均显著升高;OVX组术后第6周血清BGP、BALP水平显著升高(P＜0.01),CTX-I(P ＜0.05)和TRAP-5b(P ＜0.01)水平显著下降;OVX组术后第10、14周血清CTX-I(P ＜0.05)、BALP(P＜0.01)水平显著升高.③骨转换标志物血清CTX-I、TRAP-5b水平与骨OPG表达成负相关(P＜0.01),与骨RANKL表达成正相关(P＜0.05).结论 相关性分析显示骨转换标志物CTX-I、TRAP-5b与骨OPG成负相关,与骨RANKL成正相关.
关键词： 绝经后骨质疏松 骨转换标志物 骨保护素 核因子κB受体活化因子配体 -
香豆雌酚对大鼠骨髓基质干细胞增殖和成骨分化的调控研究
目的 观察香豆雌酚(coumestrol) 对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells BMSCs)增殖和成骨分化的影响,探讨香豆雌酚对骨髓基质干细胞的调节及其对骨骼系统的影响.方法 用不同浓度(0,10-10～10-5 mol·L1-)香豆雌酚干预6～8周雌性sD大鼠的骨髓基质干细胞,并设17-βE2(17β雌二醇,10-8 mol·L-1) 为阳性对照,在干预不同时间分别用MTT法测细胞增殖率、Von kossa 染色鉴定钙化结节形成、全自动生化仪测碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性、酶消化法测羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)含量、放免法测骨钙素(Osteocalcin,OC)含量.并用 Western-Blot 法测干预7天时骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)蛋白的表达,用Reahime-PCR法测干预7天、14天时OPG、RANKL(receptor activator of nuclear factor-kB ligand,核因子KB受体活化因子配基)基因的表达.结果 ①细胞增殖:干预24、48、72 h,10-8、10-7 mol·L-1香豆雌酚均能显著促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖,而10-5mol·L-1 香豆雌酚在干预24、72 h抑制细胞增殖.②成骨分化:10-8 mol·L-1香豆雌酚干预25天后开始出现钙化结节;10-1、10-7 mool·L-1 香豆雌酚干预组ALP在14、21天时显著增加、Hyp在28天时显著增加,10-8 mol·L-1香豆雌酚干预组OC表达在28天时显著增加,高浓度(10-5 mol·L-1)则呈现抑制作用.③OPG/RANKL表达:干预7、14天,10-7mol·L-1 香豆雌酚能增加骨髓基质干细胞OPG mRNA及其蛋白的表达,提高OPG/RANKL基因的相对表达.结论 香豆雌酚能促进大鼠骨髓基质干细胞的增殖和成骨分化,并能通过影响OPG/RANKL 的表达来发挥骨骼系统的保护作用.
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蛇床子素对大鼠成骨细胞中OPG和RANKL基因mRNA表达的影响
目的观察蛇床子素(OST)对体外培养的大鼠成骨细胞中OPG中RANKL基因表达的影响.方法新生SD大鼠颅骨成骨细胞培养,设空白对照组和用不同浓度蛇床子素培养液(10-7,10-6,10-5 mol/L)培养处理的大鼠成骨细胞为实验组,未经处理的细胞为空白对照组,分别提取48 h和7 d的细胞总mRNA,用RT-PCR技术分析OPG/RANKL的mRNA表达情况进行半定量比较.结果48h两基因都已有表达,相对空白对照组,OST上调OPG mRNA的表达(P＜0.05),但对RANKL的表达无显著影响,OPG/RANKL比值变大;7 d时OPG和RANKL表达都有增加,OST上调OPG的表达(P＜0.01),OST在10-5mol/L下调RANKL的表达(P＜0.05),OPG/RANKL比值增大.结论OST可以增加大鼠成骨细胞OPG的表达,同时轻微抑制RANKL的表达,早期对RANKL的表达影响不大.
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纤维蛋白胶复合BMP对去卵巢山羊骨密度和松质骨中OPG表达的影响
目的 了解纤维蛋白胶(Fibrin sealant,FS)复合BMP2局部成骨机制,为其临床应用提供实验依据.方法 将9只2岁雌性山羊施行卵巢切除术,以每个山羊桡骨远端为一个实验单位,共18个单位,随机分为:生理盐水组(NS)、纤维蛋白胶组(FS)、实验组(FS+BMP2),每组6个单位.术后6个月,分别在各组桡骨远端一次性注射生理盐水、纤维蛋白胶和纤维蛋白胶复合BMP2.注射5周后,应用双能X线吸收仪(DEXA)测量各组山羊桡骨远端的骨密度(BMD);在桡骨远端取活组织,利用免疫组织化学染色及图像分析方法对组织切片进行图像分析,观察纤维蛋白胶复合BMP2对去势山羊松质骨骨保护素(OPG)表达的影响.结果 ①与NS组比较FS+BMP2组桡骨远端BMD明显升高(P＜0.01),FS组BMD变化不明显(P＞0.05);FS+BMP2组BMD明显高于FS组和NS组(P＜0.01).②FS+BMP2组灰度值明显低于NS组和FS组(P＜0.01);NS组和FS组灰度值差别不明显(P＞0.05).结论 局部注射纤维蛋白胶复合BMP2具有高效的骨诱导活性,对局部骨质疏松骨折具有预防作用.
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rhIGF-1对成骨细胞增殖、分化及骨保护素、骨保护素配体基因mRNA表达的影响
目的观察不同剂量rhIGF-1对成骨细胞增殖、分化及骨保护素、骨保护素配体mRNA基因表达的影响,为明确骨保护素、骨保护素配体在骨质疏松症发病的作用机理及rhIGF-1在临床中的应用提供实验依据.方法取2代培养的大鼠成骨细胞,在rhIGF-1为 0 ng/ml,10 ng/ml,20 ng/ml,50 ng/ml的浓度中培养.观察细胞的生长及钙结节的形成,MTT法、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)测定细胞增殖和分化,RT-PCR测定rhIGF-1对成骨细胞骨保护素、骨保护素配体基因mRNA表达的影响.结果成骨细胞在7 d可铺满瓶壁,30 d可形成钙结节,rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖、ALP和OGN的分泌,促进骨保护素、骨保护素配体基因的表达,以促进骨保护素表达明显,在rhIGF-1为10 ng/ml时作用明显.结论rhIGF-1可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化,及骨保护素、骨保护素配体基因mRNA的表达,骨保护素mRNA表达显著.rhIGF-1可能通过影响骨保护素、骨保护素配体而调节成骨细胞、破骨细胞的平衡,使骨重建,从而防治骨质疏松症.
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不同频率脉冲电磁场对骨保护素基因敲除小鼠骨代谢指标影响
目的 采用不同频率的脉冲电磁场干预骨保护素基因敲除小鼠骨质疏松模型,探讨脉冲电磁场治疗骨质疏松的适治疗频率.方法 8周龄雌雄各半骨保护素基因敲除小鼠30只,随机分为A、B、C 3组,每组10只,A组为空白对照组,不进行干预;B组小鼠每天在强度为4 mT,频率为8 HZ的磁场中照射治疗20 min,共30 d;C组小鼠每天在强度为4 mT,频率为32 HZ的磁场中照射治疗20 min,共30 d.各组小鼠在治疗前及治疗30 d后用酶联免疫法(ELISA)法检测抗酒石酸酸性磷酸酶5b及血清骨钙素值.结果 8 HZ、32 HZ两治疗组在治疗后抗酒石酸酸性磷酸酶5b,血清骨钙素含量与A对照组之间比较差异有统计学意义(P＜0.05),8 HZ、32 HZ两治疗组之间治疗前与治疗后所测三种指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 脉冲电磁场对骨保护素基因敲除小鼠骨质疏松有肯定治疗效果,应用频率为8～32 HZ的磁场治疗能产生相同的治疗效果.
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OPG-RANKL-RANK系统对绝经后女性类风湿关节炎患者骨代谢的影响
目的 探讨绝经女性类风湿关节炎(RA)患者外周血核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)与炎症因子及骨代谢指标之间的相关性.方法 收集绝经女性RA患者45例和健康对照组25例.采用双能X射线骨密度测量仪(DEXA)测骨密度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定人外周血清RANKL、OPG、IL-6水平,并详细记录临床、实验室资料.两组间计量资料比较采用t检验,相关分析采用Pearson积差相关法.结果 ①与健康对照组相比,绝经女性RA组的骨密度、OPG/RANKL低于对照组,RANKL、IL-6水平高于对照组(P＜0.05),OPG在两组间并无统计学差异(P＞0.05).②绝经女性RA患者OP组较非OP组有更高的抗CCP抗体水平(P＜0.05),RANKL、OPG、DAS28评分等并无差异(P＞0.05).③绝经女性RA患者外周血中RANKL与DAS28评分、PINP、β-CTX、IL-6正相关(r=0.357,0.381,0.370,0.330,P＜0.05),OPG与PINP、β-CTX、IL-6正相关(r=0.561,0.511,0.328,P＜0.05).结论 绝经女性RA患者RANKL水平与炎症因子IL-6的诱导密切相关,但作为动态变化指标,仅反映近期骨代谢状况,并不能反映长期骨密度的变化.
关键词： 类风湿关节炎 核因子-κB受体活化因子配体 骨保护素 白介素-6 骨密度 -
骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的表达
目的 研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,探讨其在骨重建过程中的调节作用.方法 实验中采用梯度离心法和酶消化法分别获得人骨髓基质细胞和成骨细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化.通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法,确定骨髓基质细胞的功能状态和分化程度.采用RT-PCR和Western blot方法,检测骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中骨保护素和骨保护素配体的表达情况.结果 获得的骨髓基质细胞和成骨细胞生长状态良好,生化指标稳定.骨髓基质细胞分化后,碱性磷酸酶分泌明显增加,可以产生大量的矿化结节,具有成熟成骨细胞的表型特征.RT-PCR和Westernblot检测,在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素在mRNA和蛋白质水平的表达明显升高,而骨保护素配体的表达则逐渐下降.细胞中OPGmRNA表达在第21天时达到大,约为未分化时水平的2.5倍.而OPGLmRNA表达减少为未分化时1/2;细胞中OPG的蛋白质表达水平提高约为未分化细胞的6倍.统计学分析,P＜0.01,差异有显著性.结论 在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素表达逐渐升高而骨保护素配体表达显著降低,两者比值的逐渐增大,从而发挥促进骨形成,抑制骨吸收的作用,这可能是协调骨重建周期有序进行的重要机制之一.
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联合甲状旁腺激素和普萘洛尔对人成骨细胞增殖及OPG 和 RANKL mRNA 表达的影响
目的：联合甲状旁腺激素（ rhPTH1-34）和普萘洛尔（ PRO）处理体外培养的人松质骨源性成骨细胞（ HOB），观察其对人成骨细胞增殖及骨保护素（OPG）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）基因表达的影响，探讨其对骨代谢影响的可能机制。方法（1）以成人髂骨和股骨颈部松质骨为原料，分离培养原代人成骨细胞并对其鉴定。（2）以人成骨细胞为体外实验模型，固定浓度rhPTH1-34（50 ng/ml）和不同浓度PRO（0.1μM、1μM、10μM）分别及联合刺激体外培养的人成骨细胞72 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖能力，用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞OPG和RANKL基因的表达。结果 rhPTH1-34和PRO单独给药均可促进成骨细胞增殖（ P＜0.05），在PRO 10 uM时成骨细胞OPG基因的表达量增加（ P＜0.05），且大于RANKL基因的表达量；相反，联合rhPTH1-34和PRO给药抑制成骨细胞增殖（ P＜0.05），并抑制成骨细胞OPG和RANKL基因的表达（P＜0.05），且随着PRO浓度的增加，OPG和RANKL基因表达均呈下降趋势。结论 rhPTH1-34和PRO单独给药均可促进成骨细胞增殖，而两者联合给药后却抑制了成骨细胞的增殖，可能是通过调控OPG和RANKL基因的表达来实现的。
关键词： 甲状旁腺素 普萘洛尔 人成骨细胞 骨保护素 核因子kB受体活化因子配体 -
重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对胶原诱导性关节炎大鼠骨质及骨保护素的影响
目的 研究重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc,益赛普)及其他慢作用药对胶原诱导性关节炎大鼠骨密度及骨保护素的影响,探讨各种方案对骨代谢生化指标、骨质的改变.方法 建立Ⅱ型胶原诱导的雄性Wistar大鼠CIA模型,随机分为正常对照组、CIA模型对照组、MTX联合强的松龙组、MTX联合羟氯喹和柳氮磺吡啶组、MTX联合益赛普组.分别于第10、21周予行大鼠四肢关节钼靶拍片及测骨保护素(OPG).结果 CIA组大鼠第10周出现骨质疏松、关节软骨、骨破坏、关节间隙狭窄,MTX+pred组大鼠出现骨质疏松,关节腔结构尚完整,MTX+HCQ+SSZ组大鼠出现骨质疏松、关节软骨、骨轻度破坏、关节间隙轻度狭窄,MTX+ rhTNFR:Fc组大鼠则仅出现骨质轻度破坏;第21周时CIA组、MTX+pred组和MTX+HCQ+SSZ组大鼠骨质破坏加重,而MTX+ rhTNFR:Fc组大鼠则未见骨质破坏加重.4组血清OPG水平在治疗前均出现降低,第10周时4组OPG水平均出现降低,但MTX+ rhTNFR:Fc组降低较其他3组有统计学意义(P＜0.05).21周时CIA组、MTX+pred组和MTX+HCQ+SSZ组OPG水平均出现进一步降低(P＜0.05),但MTX+ rhTNFR:Fc组未见明显降低(P>0.05).结论 rhTNFR:Fc能有效抑制胶原诱导性关节炎大鼠骨质破坏,其作用机制可能与OPG相关.
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中医不同治法对骨质疏松症小鼠骨密度、碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶影响的实验研究
目的：观察中医不同治法对骨质疏松症小鼠骨密度（ BMD）、碱性磷酸酶（ ALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ TRAP）变化的影响，探讨中医防治骨质疏松症的机制。方法除正常组外，将骨保护素（ OPG）基因敲除小鼠随机分为模型组、补肾组、健脾组、活血组和福善美组。检测各组小鼠BMD及血清ALP、TRAP含量。结果1．与正常组比较，模型组小鼠BMD显著降低（ P＜0．05）；与模型组比较，补肾组与健脾组BMD显著升高（ P＜0．05）。2．与正常组比较，模型组小鼠血清ALP含量显著升高（P＜0．05）；与模型组比较，补肾组、健脾组和福善美组小鼠血清ALP含量显著降低（P＜0．05）。3．与正常组比较，模型组小鼠血清TRAP含量显著升高（P＜0．05）；与模型组比较，补肾组与健脾组小鼠血清TRAP含量显著降低（P＜0．05）。结论补肾和健脾方法能显著提高骨质疏松小鼠的骨量，明显抑制成破骨活性，使小鼠脱离高骨转换状态，起到治疗骨质疏松症的作用。
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甲状旁腺激素联合辛伐他汀对成骨细胞分化及 OPG和 RANKL mRNA 表达的影响
目的：联合甲状旁腺激素（ rhPTH1－34）和辛伐他汀（ SIM）在体外对乳鼠颅盖骨成骨细胞分化及骨保护素（ OPG）和核因子κB受体活化因子配体（ RANKL）基因表达的影响。方法以乳鼠成骨细胞为体外试验模型，rhPTH1－34（10－9 mol／L）联合不同浓度SIM（10－8、10－7、10－6mol／L）作用于体外培养的乳鼠成骨细胞，采用对硝基苯磷酸盐（PNPP）法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；RT－PCR法测定OPG和RANKL基因的表达。结果 rhPTH1－34和SIM单独给药均可促进成骨细胞ALP活性及OPG基因、降低RANKL基因表达（ P＜0．05）；两者联合后与SIM单独作用组比较， ALP活性明显增加，并能协同促进 OPG、降低RANKL基因表达（P＜0．05）。结论 rhPTH1－34和SIM联合应用对成骨细胞分化和代谢有协同作用。
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铁调素对MC3T3-E1小鼠成骨细胞骨保护素和骨钙素基因表达的影响
目的 研究铁调素对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞骨保护素(OPG)和骨钙素(BGP)基因表达的影响.方法 小鼠MC3T3-E1细胞体外培养后,以不同浓度(100 nmol/ml,200 nmol/ml,300 nmol/ml)的铁调素作用72h,用RT-PCR方法检测OPG、BGP mRNA的表达水平.结果 RT-PCR检测显示 在不同浓度铁调素干预后,各组均有OPG mRNA和BGP mRNA表达;不同浓度组的OPG mRNA和BGP mRNA表达光密度比值不同,组间密度比值比较存在显著性差异(P<0.05).结论 铁调素可上调MC3T3-E1细胞OPG及BGP mRNA表达,铁调素浓度增加转录水平逐渐增加,结果显示有浓度依赖性.
关键词： 铁调素 骨钙素 骨保护素 MC3T3-E1细胞 RT-PCR -
Bcl2促进UMR-106细胞BMP-2、OPG表达及补肾健脾活血方对其影响
目的 基于构建Bcl2沉默和过表达腺病毒观察Bcl2对成骨细胞骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的调节作用及补肾健脾活血方对其影响.方法 将培养的UMR-106细胞分为空载腺病毒组(沉默Bcl2空载腺病毒NC-bcl2,过表达Bcl2空载腺病毒WT-bcl2)、Bcl2腺病毒组(沉默Bcl2腺病毒sh-bcl2,过表达Bcl2腺病毒Ad-bcl2),空载腺病毒+空白血清组(NC-bcl2,WT-bcl2)、空载腺病毒+补肾健脾活血方含药血清组(NC-bcl2+ME,WT-bcl2+ ME)、腺病毒+空白血清组(sh-bcl2,Ad-bcl2)、腺病毒+补肾健脾活血方血清组(sh-bcl2+ ME,Ad-bcl2+ ME),用RT-qPCR检测Bcl2、OPG mRNA的变化、应用免疫印迹(Western Blot)检测Bcl2、OPG、BMP-2的变化.结果 ①荧光倒置显微镜观察包装腺病毒转染UMR-106细胞;②在正常培养基中,与NC-bcl2比较,sh-bcl2可以降低Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05),与WT-bcl2比较,Ad-bcl2可以提高Bcl2、OPG、BMP-2蛋白的表达(P均＜0.05);③与NC-bcl2比较,RT-qPCR显示sh-bcl2可以降低Bcl2 mRNA的表达,但OPG mRNA无统计学意义;④在大鼠血清干预中,与空载腺病毒比较,补肾健脾活血方含药血清均可以增加BMP-2、OPG蛋白表达(P均＜0.05);在sh-bcl2干预的细胞中,补肾健脾活血方含药血清提高BMP-2、OPG蛋白的表达(P均＜0.05);在Ad-bcl2干预的细胞中,中药干预后,BMP-2、OPG未见明显变化.结论 Bcl2可以影响BMP-2、OPG蛋白的表达,补肾健脾活血方可能通过作用于Bcl2影响成骨细胞成骨相关蛋白的表达.
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人骨保护素在 CHO 细胞内初步稳定表达
目的：构建人OPG的稳定表达载体，并在DHFR-型CHO细胞内稳定表达。方法用RT-PCR的方法获得人全长OPG的编码基因，并将其克隆入载体pcDNA3.1-DHFR/CT-GFP，鉴定无误后，转染DHFR-型CHO细胞，经MTX筛选获得阳性表达OPG的细胞株。结果成功构建人OPG的稳定表达载体，并获得阳性表达OPG的细胞株。结论全长人OPG基因可以在CHO细胞内成功稳定表达，这为OPG的功能研究及临床应用奠定物质基础。
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老年人血清骨保护素与骨密度的关系
目的：明确血清骨保护素（osteoprotegerin，OPG）在维吾尔族、汉族老年人是否存在差异性，探讨其与腰椎、左股骨近端骨密度T值（ BMD－T）的关系。方法选择2011年10月至2013年12月在新疆医科大学第一附属医院住院患者312例（年龄≥60岁），采用双能X线吸收法（DXA）测量腰椎（L）、左股骨近端BMD－T值，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血OPG的浓度，进行统计学分析。结果（1）血OPG浓度在低骨量组1．588（1．559）较骨量正常组2．062（1．606）降低（Z＝1．531，P＝0．018）。（2）血OPG浓度在维吾尔族组1．503（1．033）较汉族组1．971（1．805）偏低（Z＝1．834，P＝0．002）；按性别分层：维吾尔族男性血OPG浓度1．474（0．729）较汉族男性2．062（1．712）明显偏低（Z＝2．215，P＝0．000），而在女性间两民族血OPG浓度则无统计学差异；按病例－对照分层：维吾尔族骨量正常者血 OPG 浓度1．772（1．044）明显较汉族骨量正常者2．303（2．031）低（Z＝1．404，P＝0．039），而在低骨量者两民族血OPG浓度则无统计学差异。（3）Spearman相关性分析结果显示：汉族女性L2、L3、L4、L总（LZ）、股骨颈（Neck）、大粗隆（G．T）、粗隆间（InterTro）、髋关节（Hip）部位血OPG浓度与BMD－T值呈负相关（r＝－0．333～－0．235，P＝0．02～0．032），汉族男性G．T－T与血OPG浓度呈正相关（r＝0．174，P＝0．026），维吾尔族无论男性、女性血OPG浓度与各骨骼部位BMD－T值无明显相关性（ P＞0．05），经控制BMI、年龄后汉族女性血OPG浓度与L2、L3、L总、InterTro、Hip部位BMD－T值的相关性仍有统计学意义；（4）二元线性回归分析结果提示：汉族女性血OPG浓度对L1、L2、L3、L总、InterTro部位T值是负性决定因素，可以解释T值变异的0．8％～10％。（5）拟合曲线提示：汉族女性血OPG浓度与L1、L2、L3、L总、InterTro部位T值以线性拟合优，与G．T、Hip部位T值以二次多项式拟合优，与L4、Neck部位T值无优拟合曲线。结论维吾尔族老年人血OPG浓度较汉族老年人偏低，尤其维吾尔族男性低于汉族男性；血OPG浓度变化可能是汉族老年女性骨密度T值变化的影响因素。
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人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力.方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)进行感染.采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度.结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功,病毒滴度可达2.5×109pfu/ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含hOPG重组腺病毒载体.
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GLP-1对2型糖尿病大鼠血清OPG、RANKL及骨密度的影响研究
目的 探讨GLP-1类似物利拉鲁肽对糖尿病大鼠血清OPG、RANKL及骨密度的影响.方法 健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM)、利拉鲁肽低剂量组(LR-L)、利拉鲁肽高剂量组(LR-H).高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,低剂量组予利拉鲁肽400 μg/(kg.d)皮下注射,高剂量组予利拉鲁肽800 μg/(kg.d)皮下注射,给药4w后处死大鼠,测血糖、血钙、血磷、碱性磷酸酶、胆固醇、甘油三酯,ELISA法检测0PG、RANK,DXA法检测大鼠骨密度.结果 与NC组比较,①DM组、LR-L组、LR-H组体重均减轻,LR-L组、LR-H组较DM组更轻,但LR-L组与LR-H组间比较无差异;②DM组、LR-L组、LR-H组血糖均升高,LR-L组、LR-H组血糖较DM组低,但LR-L组与LR-H组间比较无差异;③DM、LR-H、LR-L组血清OPG、RANKL明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),LR-L组OPG较DM组更高差异有统计学意义(P＜0.05),LR-H组OPG高于DM组但差异无统计学意义;LR-H与LR-L组RANKL明显低于DM组;④DM组血清OPG/RANKL比值低于NC组,LR-L、LR-H组血清OPG/RANKL较DM升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);⑤DM组、LR-L、LR-H组大鼠全身及各部位骨密度均降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),但DM组、LR-L组、LR-H组3组间差异无统计学意义.结论 利拉鲁肽具有降低2型糖尿病大鼠体重、减低血清RANKL、升高血清OPG的作用,但利拉鲁肽治疗后未见骨密度的提高.
关键词： 2型糖尿病 骨密度 骨保护素 细胞核因子κB受体活化因子配基 -
不同浓度锌对成骨细胞MC3T3-E1骨保护素基因表达和细胞增殖的影响
目的 研究不同浓度锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响.方法 取小鼠的成骨细胞系MC3T3-E1培养并随机分为4组,A组加入10μ mol/L硫酸锌；B组加入50μmol/L硫酸锌；C组加入200μmol/L硫酸锌；D组作为空白对照.培养48h后提取细胞RNA,RT-PCR分析成骨细胞骨保护素(OPG)mRNA表达,Elisa检测细胞培养上清中骨保护素表达水平.MTT法测定成骨细胞增殖率.结果 A组、B组、C组与D组细胞骨保护素基因表达比值分别为0.461 +0.051、1.068±0.123、0.244±0.044、0.548±0.089,A组与D组差异不明显,B组高于D组(P＜0.01),C组低于D组(P＜0.01).Elisa结果与RT-PCR相同.细胞增殖率之间差异有显著性意义,B组高于D组(P＜0.01),C组低于D组(P＜0.0l).结论 50μmol/L的锌促进成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖,200μmol/L的锌则抑制成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖.而10μmol/L的锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响不大.
