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外源性IL-10对变应性鼻炎大鼠Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响
目的：探讨外源性白细胞介素-10（ IL-10）对变应性鼻炎大鼠（ AR） Th细胞和Th17细胞相关因子表达的影响。方法 SD大鼠30只，采用随机数字表法将其分为AR模型组、IL-10组和阴性对照组，每组10只。 AR组和IL-10组采用常规卵白蛋白（ OVA）联合氢氧化铝致敏法建立AR大鼠模型，阴性对照组采用生理盐水代替，IL-10组于激发21 d后，给予OVA的同时，腹腔注射40 pg／kg的IL-101 ml，连续7 d；各组于给药后30 min内观察各组大鼠临床表现，记录大鼠的行为学得分，并于后一次激发后48 h，取血清检测IgE和OVA-sIgE含量，同时取大鼠双侧鼻腔呼吸区黏膜，用ELISA试剂盒检测IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量变化，同时用Western blot法检测各指标的表达水平。结果 AR组大鼠均表现出四处摩擦、涕流满面等重度AR的临床表现，与其相比，IL-10组表现明显减轻（P＜0．05）；各组血清中IgE和OVA-sIgE含量及鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β含量均明显升高（P＜0．05），经IL-10干预后，其含量明显降低，且与AR组相比，差异有统计学意义（P＜0．05）；Western blot结果显示，与对照组相比，AR组和IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平明显升高，IL-10组大鼠鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β表达水平低于AR组（ P＜0．05）。结论用外源性IL-10的方法治疗AR，并降低鼻黏膜中IFN-γ、IL-5、IL-17和TGF-β的表达，可在一定程度上达到治疗AR的目的。
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非肥胖性糖尿病（NOD）小鼠糖尿病发病过程中 B10细胞水平的研究
目的：观察非肥胖性糖尿病（ non-obese diabetic， NOD）小鼠自然病程不同阶段CD19＋CD5＋CD1dhigh B细胞及Th1、Th17细胞数量的变化，探讨B10细胞与NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生的关系。方法采用流式细胞术分别检测4周（A组，n＝10）、8周（B组，n＝10）及糖尿病（C组，n＝10）NOD小鼠及同龄C57BL／6小鼠（对照组，n＝20）脾脏、肠系膜淋巴结、外周淋巴结、胰腺淋巴结中CD19＋CD5＋CD1dhigh B、CD19＋IL-10＋B、CD4＋IFN-γ＋Th1、CD4＋IL-17＋Th17细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的比例；分离NOD小鼠胰腺组织作病理切片以评估胰岛炎的严重程度。结果（1）胰腺组织HE切片：A组无胰岛炎，4周；B组发生胰岛炎，8周；C组发生明显胰岛炎且无完整胰岛，糖尿病。（2）不同病程阶段NOD小鼠B10细胞比较：B及C组B10细胞较A组增高，而C组B10细胞则较B组显著下降，差异有统计学意义（P＜0．01）；A组B10细胞各组织间无明显差异（P＞0．05），B组B10细胞以胰腺淋巴结高，C组B10细胞以外周淋巴结高且胰腺淋巴结B10细胞较B组显著下降，差异有统计学意义（P＜0．01）。（3）不同病程阶段NOD小鼠效应性T细胞比较：C组Th1及Th17细胞较A、B组显著增加，差异有统计学意义（P＜0．01）。（4）不同病程阶段CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比较：C组Treg较A、B组无明显变化，且NOD小鼠Treg较同龄C57BL／6小鼠亦无明显变化（ P＞0．05）。结论随NOD小鼠年龄增长及胰岛炎进展，B10细胞存在数量变化及组织分布的差异；B10细胞数量减少可能参与NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发生。
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IL-2通过上调naive CD4+T细胞SOCS-3表达抑制CD4+T细胞的极化和增殖
目的 探讨IL-2预孵育naive CD4+T细胞后,对其极化(polarization)方向和增殖(proliferation)能力的影响.方法 用终浓度为50 U/ml的IL-2分别预孵育DOI 1.10 TCR转基因小鼠和C57BL/6N小鼠naYve CD+T细胞,在不同时间点用荧光实时定量PCR(real-time PCR)检测这两种细胞中SOCS-3(suppressor of cytokine signal-3)表达的变化.预孵育4 h后,洗去IL-2,分别加入卵清白蛋白(OVA)和灭活后的BALB/c脾细胞,在存在细胞因子IL-12或IL-4情况下共培养14 d后,用流式细胞仪检测TH1细胞活化和极化的标志IL-12R β1、IL-12Rβ2,对C57BL/6N小鼠nave CD4+2T细胞的极化中还榆测TH2极化的标志--细胞内IL-4的表达;同时将无IL-2预孵育的作为对照组.结果 IL-2预孵育后这两种鼠naive CD4+T细胞内的SOCS-3表达于6 h达高峰;在SOCS-3表达达高峰后分别给予特异性抗原和同种异基因抗原刺激,其向TH1方向的极化和增殖能力都受到明显的抑制(P<0.05).结论 IL-2预孵育naive CD+T细胞后,可以上调SOCS-3的表达;SOCS-3的上调表达可以抑制naive CD4+T细胞接受特异性抗原和同种异基因抗原刺激后向TH1方向的极化和增殖能力.
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普通小麦对OVA诱导小鼠过敏反应的抑制作用及机制
目的 旨在探讨普通小麦(TA)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠过敏反应的作用及其机制.方法 将25只BALB/c雌鼠随机分为对照组、OVA组、TA 100 mg/kg组、TA 200 mg/kg组和地塞米松(dexamethasone,DEX)组,每组5只.将OVA 20μg与氢氧化铝1 mg溶解于100μl PBS溶液中,并向每只实验组小鼠腹腔内注射以致敏小鼠,而对照组小鼠腹腔内则注射100μl 0.9％生理盐水,饮用水饲养.首次致敏后2周,重复上述操作,并将不同浓度药物稀释于1％CMC溶液中继续饲养,饲养过程中记录每只小鼠的过敏症状与行为评分.首次致敏后12 d对照组、实验组小鼠外耳皮下分别注射20μl 0.9％生理盐水与OVA溶液,6 h、24 h测量每只小鼠外耳厚度,24 h后剪取各组小鼠外耳组织经苏木精-伊红(HE)染色后观察过敏症状.首次致敏后6周,颈椎脱臼法处死小鼠,经腹主动脉采集的血液经离心、取上清后,通过ELISA试剂盒检测IgE、IgG1、TNF-α、IL-4及抗OVA IgE、IgG1了解各炎性细胞因子的分泌情况;取出的脾脏组织提取其淋巴细胞后接种于培养皿,以不同的药物刺激后利用ELISA检测Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13),利用RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-12及IL-13的表达情况.结果 OVA组小鼠的过敏症状行为评分与外耳厚度均显著高于对照组及其他实验组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组中其与TA呈剂量依赖性降低,组织病理学结果也证实了上述结果.ELISA结果显示,实验组小鼠血浆中IgE、IgG1、IL-4及TNF-α水平与对照组比较显著升高,其水平与TA呈剂量依赖性降低,尤其是IgE、TNF-α在TA高浓度组显示出与DEX组相似的抑制效果.RT-PCR结果显示,实验组较对照组Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12)的含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),其水平与TA未显示出剂量依赖性效应,而DEX组显示出明显的抑制作用.实验组Th2细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)的表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),TA组的IL-4、IL-5、IL-13表达均较OVA组有不同程度的降低,尤其在TA 100μg/ml组中其表达较OVA组分别降低了约60％、18％与20％,显示出了明显的抑制作用.结论 TA可能通过选择性抑制Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)及IgE、IgG,而未抑制Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12),在保持体内免疫平衡的基础上有效降低过敏相关免疫应答,从而发挥抗过敏作用.本研究为新型抗过敏治疗药物(TA)的开发提供理论基础和实验依据.
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灵芝多糖通过上调STAT4促进人外周血淋巴细胞中Th1细胞的分化
目的 探讨灵芝多糖(GLP)对外周血淋巴细胞免疫分群的影响及其作用机制.方法 取肿瘤患者和正常人的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC)后,用不同剂量的GLP(10 ng/ml、50ng/ml和100 ng/ml)刺激后,用流式细胞仪检测DC细胞表面分子(HLA-DR、CD83和CD11c)、Th1细胞、Th2细胞和NK(CD3-CD56+)细胞数；并进一步用免疫磁珠分选出正常人外周血CD4+ Th细胞后用不同浓度GLP刺激24h后,荧光实时定量Q-PCR检测Th1和Th2细胞因子的表达水平,Westernblot分析Th1分化相关的转录因子水平.结果 灵芝多糖可以在体外呈浓度依赖性增加外周血中Th1细胞亚群和DC共刺激分子的表达(P＜0.01),并且增加STAT4的表达和IL-12、IFN-γ和TNF-α的mRNA的表达水平(P＜0.01).结论 灵芝多糖可能通过增加Th细胞STAT4的表达水平,促进其向Th1细胞分化,并增加Th1的分泌细胞因子.
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儿童特发性血小板减少性紫癜Th细胞IFN-γ、IL-4表达分析
目的:探讨Th1/Th2极化改变与儿童cITP之间关系.方法:采用流式细胞仪对21例cITP患儿治疗前后和28例健康者外周血CD3+CD8- 细胞内IFN-γ和IL-4进行分析.结果:cITP患儿治疗前Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较对照组显著降低(P＜0.01),治疗后Th0、Th1细胞和Th1/Th2比值较治疗前显著增高(P＜0.01),Th2细胞无明显差别 (P＞0.05),与对照组比较,治疗后cITP患儿Th0、Th1细胞增高(P＜0.05),Th2细胞和Th1/Th2比值无显著差异 (P＞0.05).结论:cITP患儿起病时表现为Th1 减低,Th2相对优势表达,治疗有效者表现为Th1显著增高,Th2无改变,cITP起病时Th1分泌的IFN-γ分泌减少可促进产生自身抗体,糖皮质激素治疗主要通过增加IFN-γ的分泌达到治疗目的.
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非小细胞肺癌手术治疗与Th1/Th2的漂移
目的:探讨肺癌患者手术前后是否存在Th1/Th2免疫失衡及根治性切除肿瘤负荷后是否能出现Th2型向Th1型的漂移.方法:用流式细胞仪检测30例根治切除的肺癌患者术前、术后不同时期外周血淋巴细胞亚群中各种细胞因子.结果:能代表Th1功能的IL-2和IL-12术后的表达水平较术前明显升高,而IFN-γ和TNF术后的表达水平则较术前降低;能代表Th2功能的IL-4和IL-10术前的表达水平远高于术后,差别均具有显著性意义(P≤0.01).结论:肺癌患者手术前即存在Th1/Th2免疫失衡,而根治性切除肿瘤负荷即解除肿瘤源性的免疫抑制后,可以改善患者细胞免疫功能而促使Th2型向Th1型的漂移.
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尿毒症患者淋巴细胞亚群改变的研究
目的了解尿毒症患者淋巴细胞亚群的改变.方法采用血液细胞计数仪对血液细胞进行分类与计数:使用单激光三色流式细胞仪,分析带荧光标记单克隆抗体染色的淋巴细胞及其亚群.结果①血常规计数表明:尿毒症患者存在淋巴细胞减少症(P＜0.005),中性粒细胞百分比高于正常对照组(P＜0.005);②淋巴细胞亚群分析提示:尿毒症患者CD3+、CD4+、CD8+细胞百分数以及CD4/CD8比值,与正常对照组相比差异无显著性(P＞0.05);NK细胞百分数明显增高(P＜0.005),透析组CD8+细胞数较未透析组增加[(27.45±7.26)%Vs(20.33±7.01)%,P=0.042],单核细胞数高于正常对照组[(75.6±9.68)%Vs(63.98±12.82)%P=0.039]; B淋巴细胞数低于正常对照组[(4.33±1.69)%Vs(9.49±3.30)%P=0.001];③尿毒症患者表现为Th2细胞优势(P＜0.05),Th1/Th2比值显著降低(P＜0.05),长期透析后上述表现无改善.结论尿毒症患者T细胞亚群表现为Th2优势,透析患者存在B淋巴细胞减少,淋巴细胞亚群的这些改变可能参与了血液透析患者免疫功能下降的发病机理.
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T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3与鼻息肉的相关性研究
鼻息肉是耳鼻咽喉科常见的以鼻腔-鼻窦黏膜为主的慢性炎症疾病,目前其病因和发病机制尚未完全明确.既往研究证实T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)可促进Tregs的增殖,抑制Th1、Th17细胞的分化及其分泌细胞因子,在疾病中参与重要的免疫应答.Th1/Th2细胞、Th17/Treg细胞的失衡是近年来研究鼻息肉发生的重要因素,本文通过鼻息肉中TIM-3与Th1、Th17、Treg细胞的研究进行综述.
关键词： 鼻息肉 Th1细胞 Th17细胞 Treg细胞 T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3 -
肾癌患者外周血Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞因子的表达
目的 检测不同临床分期肾癌患者外周血CD4+ T细胞、CD8+ T细胞中细胞因子的表达水平,分析Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移对肾癌发生和转移的临床意义.方法 用流式细胞仪检测60例不同分期肾癌患者和40例正常对照者外周血CD4+ T细胞、CD8+ T细胞分泌的IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6和IL-10的表达水平.结果 与正常对照组相比,无症状型肾癌患者各细胞因子的表达无明显差异,而局限型患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平降低(P<0.01),局部进展型和转移型肾癌患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γIL-2和TNF-α分泌水平明显下降(P<0.01);而Th2、Tc2类细胞因子IL4、IL-6(P<0.05,P<0.01)分泌水平升高.结论 Th1/Th2偏移和Tc1/Tc2偏移促进了晚期肾肿瘤的进展和转移.T淋巴细胞亚群改变导致免疫功能失调,使肿瘤细胞发生免疫逃逸.
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冠心病合并糖尿病患者外周血Th1/Th2细胞水平的研究
目的 通过对冠心病合并糖尿病患者外周血中Th1/Th2细胞水平变化的研究,推测Th1/Th2细胞失衡在糖尿病患者动脉硬化过程中的作用.方法 选取研究对象94例(冠心病患者32例,冠心病合并糖尿病患者36例,健康对照者26例),提取外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测Th1/Th2细胞水平,分析研究对象外周血中Th1/Th2的变化.结果 冠心病组Th1细胞水平较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);冠心病组Th2细胞水平较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).冠心病合并糖尿病组患者Th1细胞水平较冠心病组和对照组明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.01);冠心病合并糖尿病组患者Th2细胞水平较冠心病组和对照组明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 冠心病合并糖尿病患者比冠心病患者体内存在更严重的Th1/Th2失衡,合并更严重的免疫炎症反应.
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早发型与晚发型重度子痫前期实验室检查结果及一般情况分析
目的 分析早发型与晚发型重度子痫前期(S-PE)实验室检查结果的差异,探讨其临床应用价值.方法 收集山东大学附属省立医院2016年3至11月收治的S-PE患者108例,参照人民卫生出版社《妇产科学》(第7版)诊断标准,以妊娠34周为界分为早发型S-PE 64例(早发组)和晚发型S-PE 44例(晚发组);选取正常妊娠妇女42名作为对照组,收集一般信息资料,并对Hb、PLT、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、AST、ALT、尿素、肌酐、尿酸、CRP、尿蛋白等指标进行分组统计学分析,同时采用流式细胞术检测各组样本中辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)的比例并分析Th1 /Th2的比值,采用SPSS19.0 统计软件对各指标进行F检验及统计学分析.结果 早发组、晚发组和对照组之间孕前体重指数(29.55±4.49、30.66±5.13、26.62±3.17,F=9.829,P<0.05)、舒张压[(105.17±14.46)mmHg(1 mmHg=0.133kPa)、(99.80±12.56)mmHg、(74.36±8.42)mmHg,F=82.088,P<0.05]、Hb[(123.22±14.38)g/L、(117.03±16.48)g/L、(112.62±11.24)g/L,F=7.133,P<0.05]、尿素[(6.56±2.36)mmol/L、(4.51±1.35)mmol/L、(3.04±0.87)mmol/L,F=51.733,P<0.05]、肌酐[(68.47±18.05)μmol/L、(61.37±14.37)μmol/L、(48.54±8.73)μmol/L,F=23.737,P<0.05] 、CRP[(7.68±8.76)mg/L、(5.88±6.03)mg/L、(3.56±2.41)mg/L,F=4.735,P<0.05]、尿蛋白[(3.66±0.76)g/L、(2.20±1.05)g/L、(0.19±0.40)g/L,F=249.714,P<0.05]差异有统计学意义.流式结果显示,早发组患者Th1比例(19.83±3.04)显著高于晚发组(14.49±2.79)和对照组(11.78±1.17),而Th2比例(1.02±0.12)明显低于晚发组(1.11±0.12)和对照组(1.56±0.11),差异有统计学意义(Th1:F=135.110,P<0.05;Th2:F=293.687,P<0.05).结论实时监测S-PE患者肝肾功能、尤其是免疫功能等实验室检查指标,对评估早发型和晚发型S-PE病情及个性化治疗有指导意义,对保证母婴健康、改善母婴预后有很重要的临床价值.
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Th1/Th2细胞与移植免疫耐受
随着器官移植手术的开展,如何诱导宿主对移植器官的特异性免疫耐受引起人们越来越多的关注.近年来随着研究的深入,特别是对一些"免疫特惠器官”的研究,逐渐提出了如免疫偏离、克隆清除、克隆不应答、免疫抑制等诱导免疫耐受的途径[1,2].但人们发现诸如克隆不应答、克隆清除并不能完全解释自身免疫耐受及移植免疫耐受的机制.然而免疫抑制的理论得到了大多数学者的承认,并进行了广泛、深入的研究[3].现在免疫学的研究进展不仅证实了外周免疫抑制性T淋巴亚群的存在,而且研究的重点集中在CD4+的Th1/Th2亚群的转换与免疫耐受之间的关系.
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结核病患者体内抗原特异性多功能辅助性T细胞1的检测及分析
目的 了解结核分枝杆菌特异性多功能辅助性T细胞1(Th1)在外周血和胸腔积液中表达的变化及其临床意义.方法 纳入对象包括结核病(TB)患者93例,其中普通肺结核患者66例,结核性胸膜炎患者27例;结核分枝杆菌潜伏感染者(LTBI)30例;健康对照(HD) 66例.首先分离外周血和胸腔积液中的单个核细胞,特异性结核分枝杆菌抗原刺激后,进行胞内细胞因子染色,根据CD4+T淋巴细胞细胞因子产生的不同,将其分为7个不同亚群,分别为白细胞介素(IL)-2+干扰素(IFN)-γ+肿瘤坏死因子(TNF)-α+、I12+ IFN-γ+、ID2+ TNF-α+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、TNF-α+、IFN-γ+细胞亚群.结果 以“(x)±s”表示,所有数据均使用GraphPad Prism 4.0统计软件进行分析,两组间比较采用配对t检验,多组间比较采用ANOVA方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 TB患者外周血特异性多功能Th1细胞(II2+ IFN-γ+INF-α+)表达水平为(0.107±0.278)％,明显高于LTBI(0.019±0.032)％和HD(0.008±0.016)％(F=5.675,P-0.004);IL-2+TNF-α+细胞在TB和LTBI分别为(0.049±0.123)％和(0.046±0.050)％,均高于HD(0.003±0.014)％(F=5.435,P=0.005);TB患者IFN-γ+TNF-α+、IL-2+IFN-γ+细胞表达水平分别为(0.136±0.256)％和(0.146±0.347)％,明显高于HD(0.052±0.082)％和(0.029±0.042)％(F=3.774,P=0.024;F=4.912,P=0.008).结核性胸膜炎患者胸腔积液中特异性多功能Th1、IL-2+ TNFα+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、IFNγ++应答水平分别为(0.719±0.996)％、(0.628±1.284)％、(0.704±0.829)％、(0.955±1.538)％、(1.188±1.924)％,均高于外周血单个核细胞(0.033±0.065)％、(0.095±0.174)％、(0.137±0.317)％、(0.285±0.434)％、(0.318±0.598)％(t=3.700,P=0.001;t=2.125,P=0.043;t=3.216,P=0.003;t=2.144,P=0.041;t=2.412,P=0.023).结论 结核分枝杆菌特异性多功能Th1细胞应答激活与结核分枝杆菌感染的发病密切相关,多功能Th1细胞在TB的保护性免疫反应中起一定作用.
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慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者Th细胞分化的影响
目的：探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者Th细胞分化的影响。方法重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体pGC-FU分别转染29例CHB患者外周血CD4+ T细胞，分离培养5 d的细胞培养液上清，应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平；收集培养5 d的CD4+ T细胞，应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3 mRNA的表达水平。结果①与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平明显升高（P =0.003）。②与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平明显降低（P =0.007）。③与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值明显增大（P =0.001）。④与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3 mRNA的表达水平无显著性差异（P均＞0.05），但pGC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较pGC-FU转染组明显增大（P =0.005）。结论 Runx3过表达可促进CHB患者Th1型细胞因子的分泌，抑制Th2型细胞因子分泌，促使CHB患者外周血Th细胞向Th1细胞分化，使其Th1/Th2失平衡得到改善。
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结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗转染人气道上皮细胞对哮喘患者Th1/Th2平衡的调节作用
目的研究结核分支杆菌抗原85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用.方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG-Ag85B,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE,并收集转化细胞培养上清液,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85B mRNA水平的表达,螨过敏哮喘组(18例)和正常组(13例)PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其培养上清液中白介素5(IL-5)、γ干扰素(IFN-γ)的水平.结果 RT-PCR法扩增转染的16HBE细胞中有992 bp长度的预期片断.无刺激状态下,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL-5、IFN-γ无差异,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL-5,刺激和未刺激处理分别为(17.1±1. 9) pg/ml 和(11.9±0.9) pg/ml(P＝0.02);螨+Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较,前者IFN-γ水平显著高于后者,分别为(111.5±15.9) pg/ml和(58.8±7.8) pg/ml(P＝0.04), IFN-γ/IL-5的比值分别为7.2±4.8和4.9±2.5(P＝0.08).正常人不同刺激方法间比较,所有指标差异均无显著性(P＞0.05).结论螨过敏的变应性哮喘患者的PBMC在螨刺激下向Th2免疫反应偏移,在螨变应原存在时转化Ag85B基因的人气道上皮细胞培养上清液,能够诱导PBMC释放 IFN-γ,调节免疫反应向Th1方向偏移.
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耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠细胞因子产生及Th1/Th2应答的影响
目的研究以耻垢分枝杆菌(M.S)制备的M.S疫苗对小鼠免疫应答的影响,验证M.S的免疫原性、探讨M.S疫苗的免疫调节作用.方法将BALB/c小鼠随机分成生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组,每组6只,分别注射生理盐水和不同剂量的M.S疫苗.取小鼠脾细胞或腹腔巨噬细胞体外培养,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-12和γ干扰素(IFN-γ)的含量,分析M.S疫苗对小鼠Th1/Th2类应答的影响.结果 (1) 生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组小鼠产生的IL-12分别为(32.6±22.7)、(58.9±18.6)、(77.3±38.0)、(114.7±9.9)pg/ml,M.S疫苗中、高剂量组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).(2)生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组小鼠产生的IL-2分别为(5.0±2.6)、(13.4±9.3)、(15.3±9.7)、(22.6±7.5)pg/ml,M.S疫苗高剂量组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(3)体外以ConA刺激时,生理盐水对照组和M.S疫苗中剂量组小鼠产生的IFN-γ分别为(662±279)和(807±163)pg/ml,IL-4分别为(407±127)和(101±26)pg/ml,但M.S疫苗组与生理盐水对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);体外以M.S-纯化蛋白衍生物(PPD)刺激时,生理盐水对照组和M.S疫苗中剂量组小鼠产生的IFN-γ分别为(14.0±6.31)和(55.3±32.4)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),各组产生的IL-4均在检测限以下.结论 M.S具有良好的免疫原性,以此制备的M.S疫苗具有促进Th1类应答、抑制Th2类应答的免疫调节作用.
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初治肺结核患者外周血Th1/Th2细胞的测定及临床意义
目的探讨外周血CD+4 T淋巴细胞及其亚型(Th1/Th2)细胞在初治肺结核患者中的改变及临床意义,并了解其在结核病治疗过程中的变化.方法利用流式细胞术对105例初治肺结核患者、25名正常人外周血CD+4 T淋巴细胞进行直接计数,同时用25 ng/ml佛波酯(PMA)、250 ng/ml离子霉素(ionomycin)对外周血细胞进行刺激,用2 μmol/ml 莫能霉素(monensin)作蛋白转运抑制剂,5% CO2培养4.0～4.5 h,而后分别配对加入CD3 -PC5+CD8 -FITC+INF-γ-PE/CD3 -PC5+CD8 -FITC+IgG1 -PE、CD3 -PC5+CD8 -FITC+IL-4 -PE/CD3 -PC5+CD8 -FITC+IgG1 -PE(PC5:藻红蛋白-花青苷5;FITC:异硫氰酸胍荧光素;PE:藻红蛋白)单克隆抗体进行胞膜和胞内标记,进行流式细胞术检测Th1/Th2的百分含量.按病变程度分为重度32例,中度44例,轻度29例.并对其中67例肺结核患者在化疗强化期末、第6个月化疗结束时进行同样指标的追踪检测,以了解在抗结核治疗过程中肺结核患者外周血CD+4 T细胞、Th1/Th2细胞的变化状况.结果 (1)初治肺结核患者外周血CD+4 T细胞、Th1细胞水平显著低于健康对照组,其检测值分别为(663±160)个/μl、(9.56±3.60)%和(735±156)个/μl、(18.70±5.03)%(P值均<0.05);(2)重度肺结核患者CD+4 T细胞和Th1细胞的检测值为(579±120)个/μl和(5.43±2.33)%,显著低于轻、中度肺结核患者的(726±166)个/μl和(12.2±1.81)%、(684±192)个/μl和(10.9±2.30)%(P值均<0.01);Th2细胞的水平则显著高于轻、中度肺结核患者,其检测值分别为(5.63±1.26)% 、(2.93±0.87)%和(3.22±1.01)%(P值均<0.01);(3)67例随访患者中,61例抗结核治疗后明显好转,外周血CD+4 T细胞、Th1细胞的水平增加,Th2细胞的水平减少;(4)痰菌阳性患者与痰菌阴性患者比较,前者Th2细胞的水平显著高于后者,检测值分别为(5.20±0.97)%、(2.77±1.96)%(P<0.05). 结论对肺结核患者外周血CD+4 T细胞、Th1/Th2细胞的检测有助于病情判断和疗效观察.
关键词： 结核 肺 CD4阳性T淋巴细胞 Th1细胞 Th2细胞 -
糖皮质激素对Th1/Th2平衡的影响
近10年积累的证据显示,糖皮质激素可抑制抗原提呈细胞和Th1细胞表达白细胞介素(IL)-12、干扰素(IFN)-γ、IFN-α和肿瘤坏死因子(TNF)-α,而上调Th2细胞表达Ib-4、IL-10和IL-13.通过以上机制,使用糖皮质激素会选择性抑制Th1介导的细胞免疫,并向Th2介导的体液免疫偏移,而不是对Th1和Th2均产生抑制.在免疫反应和炎症反应过程中,应激系统激活,糖皮质激素水平升高,诱导向Th2偏移,从而使机体免于Th1/促炎细胞因子和激活的巨噬细胞产生的其他产物的损伤.尽管如此,引起糖皮质激素水平较大变化的情况,如急性或慢性应激、剧烈运动、妊娠、产褥期等,均可通过调节Th1/Th2细胞平衡而引起感染和自身免疫、变态反应性疾病或改变其敏感性.
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辅助性T细胞与变态反应性疾病的关系
变态反应性疾病,如鼻炎和哮喘是一种与辅助性T细胞(Th细胞)分化异常相关的免疫性疾病."经典模式"的Th细胞分为,Th1和Th2细胞两个亚群,他们在变态反应性疾病的发生发展过程中发挥着重要作用.Th17细胞是近发现的一个新的Th细胞哑群,介导机体对各种感染的防御机制,并且是许多自身免疫性疾病免疫病理的效应细胞.本文就Th细胞不同亚群的发育和活化进行介绍,着重探讨Th1、Th2和Th17细胞在变态反应性疾病发病中的作用.
