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不孕妇女种植窗期血小板活化因子及其受体的表达和意义
目的:探讨血小板活化因子(PAF)及其受体(PAF -R)在不孕妇女种植窗期的表达及意义.方法:在10例不孕妇女(不孕组)和10例正常非孕妇女(正常组)种植窗期及10例妊娠早期妇女(孕40+天,孕早期组),①采用ELISA法检测3组对象血清PAF的含量及血小板活化因子-乙酰水解酶(PAF - AH)的活性；②流式细胞仪检测3组对象外周血单核细胞上PAF -R的表达；③免疫组织化学技术检测种植窗期子宫内膜及早孕蜕膜组织中的PAF -R表达.结果:不孕组妇女种植窗期血清中PAF含量(7.49±0.90 ng/ml)、PAF - AH活性(15.37±2.19ng/ml)、PAF-R在外周血单核细胞上(40.79±16.10％)和在子宫内膜组织中(0.27±0.05％)的表达与正常组和孕早期组比较差异有统计学意义(P均＜0.01).不孕组妇女种植窗期PAF -R在外周血单核细胞上和在子宫内膜组织中的表达呈正相关(r =0.972,P＜0.01).结论:①不孕妇女种植窗期血清PAF水平明显降低,PAF-AH活性明显增高,PAF-R在外周血单核细胞上和子宫内膜组织中的表达降低,可能是导致不孕的因素之一,提示PAF、PAF- AH、PAF-R表达水平的变化在女性不孕症发生机制中可能起一定作用.②外周血单核细胞上PAF -R的表达可间接反映子宫内膜组织中PAF-R的表达情况.
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血小板活化因子在缺血再灌注损伤中电生理作用的实验研究
目的研究正常灌注、模拟缺血/再灌注下血小板活化因子的电生理作用,初步探讨血小板活化因子的作用机制.方法通过标准微电极技术,分析豚鼠左心室乳头肌在正常灌注、缺血/再灌注时的血小板活化因子的电生理作用以及CV-6209和格列本脲对其作用的影响.结果血小板活化因子明显缩短了动作电位时相,灌注前后APD90(90%复极水平的动作电位时相)分别为(144.0±5.8)ms和(120.3±5.8)ms(n＝8,P＜0.001),CV-6209(血小板活化因子受体阻断剂)和格列本脲(ATP敏感性K+通道阻断剂)明显抑制了血小板活化因子诱发的动作电位持续时间缩短.CV-6209组(n＝5)、格列本脲组(n＝6)和对照组相比较,血小板活化因子诱发的APD90缩短率分别为(5.8±1.9)%,(1.1±1.9)%比(16.4±1.8)%(P＜0.05,P＜0.001).血小板活化因子引起了早期的动作电位持续时间的进一步缩短,相反,血小板活化因子引起再灌注早期的动作电位时相延长.结论血小板活化因子明显缩短了动作电位时相,CV-6209和格列本脲阻断血小板活化因子诱发的动作电位持续时间缩短,提示血小板活化因子受体和ATP敏感性K+通道,可能介入血小板活化因子电生理作用;血小板活化因子放大缺血/再灌注时缺血区和正常区的不均一性,这可能与缺血/再灌注心律失常密切相关.
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关键词：
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不孕患者血小板活化因子及其受体表达的变化
目的 探讨不孕患者血浆血小板活化因子(PAF)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性的变化,以及外周血中单个核细胞(PBMC)PAF 受体(PAF-R)的表达.方法 对10 例女性不孕患者采用生物法检测血浆中PAF 含量,酶水解底物显色法测定PAF-AH 活性,流式细胞仪检测PBMC 上PAF-R 的表达.并与10 例有正常生育功能的女性健康体检者对照.结果 不孕患者血浆中PAF 含量(5.21 ±1.81)μgPL,PAF-AH 活性(24.50 ±7.76)μmol/(min·L)、PBMC 上PAF-R 的表达与健康体检者比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 PAF、PAF-AH、PAF-R 三者在女性不孕的发生和发展中起重要作用.
关键词： 女性不孕 血小板活化因子 血小板活化因子乙酰水解酶 血小板活化因子受体 -
大鼠脑损伤后COX-2、GluR2、PAFR表达变化及其与脑损伤的关系
[目的]复制大鼠落体打击模型,同时从mRNA水平和蛋白水平研究环氧化酶-2(CyClooxygenase-2,COX-2)、谷氨酸受体2(glutamate receptor 2,GluR2)、血小板活化因子受体(platelet activating factor receptor,PAFR)损伤后的时序性变化,探讨它们之间的相互关系以及与脑损伤时序性变化的相关性.[方法]选用体质量350～400 g的雄性SD大鼠,随机分为手术对照组及损伤组,后者于损伤后4、8、12、24、48 h不同时间点取材观察,复制Marmarou's大鼠闭合性颅脑损伤模型,应用RT-PCR技术对海马的COX-2、GluR2和PAFR的表达情况进行研究,同时应用免疫组化SP法检测它们在海马中的表达情况.[结果](1 )RT-PCR结果显示PAFR和GluR2在对照组呈高表达,损伤后表达逐渐减弱,12 h达低值,损伤后各组与对照组相比差别有显著性(P＜ 0.01).COX-2在对照组呈低表达,损伤后表达逐渐增高,8 h达高值,损伤后各组与对照组相比差别有显著性(P＜0.01).(2)免疫组化提示COX-2在对照组有少量免疫反应阳性细胞表达,损伤后阳性细胞表达增多,于损伤后8 h达大值.GluR2在对照组有大量免疫反应阳性细胞表达,损伤后阳性细胞表达减少,于损伤后24 h达低值.PAFR在对照组海马部位可见极少量阳性神经元表达.胞浆呈强阳性表达,细胞核不表达,部分细胞有阳性突起,损伤后几乎没见到阳性神经元表达.[结论] COX-2、GluR2和PAFR三者在损伤前后表达的时序性变化特点可以作为判断脑损伤的客观指标.
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原代培养大鼠海马神经元液压冲击后PAFR、COX-2和GluR2基因表达比较研究
[目的]研究海马神经元在中度液压冲击损伤后PAFR、COX-2和2GluR2基因表达时序性变化的相关性.[方法]原代培养大鼠海马神经元,复制改良Scott's中度液压冲击神经元损伤模型,采用免疫荧光双标技术鉴定神经元纯度,应用RT-PCR技术对PAFR mRNA、COX-2 mRNA和GluR2 mRNA的表达进行定量研究.[结果]对照组COX-2 mRNA呈低表达,损伤后表达逐渐增高,12 h达高值,损伤后12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05);对照组GluR 2mRNA呈高表达,损伤后表达逐渐减弱,8 h达低值,损伤后8 h、12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05);对照组PAFR mRNA呈高表达,损伤后表达逐渐减弱,8 h达低值,损伤后8 h、12 h组与对照组相比差别有显著性(P＜0.05).[结论]正常时COX-2 mRNA在体外培养神经元中仅有少量表达,损伤后4 h表达增加,12 h达高值,48 h时仍高于正常.正常时GluR2 mRNA在体外培养神经元有较多表达,损伤后4 h表达下降,8 h达低值,48 h时仍低于正常.正常时PAFR mRNA在体外培养神经元中有较多表达,损伤后4 h表达下降,8 h达低,48 h时仍低于正常.PAFR mRNA、COX-2 mRNA和GluR2 mRNA在体外海马神经元中度液压冲击损伤中表达的时序性变化特点基本一致,三者关系密切,共同参与脑损伤病理生理过程.
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乌司他丁和泰索帝对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及细胞因子IGF-1R、PDGFA和PAFR表达的影响
目的 探讨乌司他丁( Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人原代乳腺癌细胞增殖、侵袭及胰岛素样生长因子受体1(Insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、血小板衍生因子A(Platelet-derived growth factor A,PDGFA)和血小板活化因子受体(Platelet-activating factor receptor.PAFR)表达的影响.方法 将原代培养的乳腺癌细胞分为4组:UTI组(800 IU/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+ TXT组和培养液对照组,MTT法检测细胞的增殖活力；Transwell小室法检测细胞的侵袭能力；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；RT-PCR和Western blot检测细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 UTI和TXT均可显著抑制人原代乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,下调细胞中IGF-1R、PDGFA及PAFR基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平,且UTI与TXT联合使用时效果更为明显.结论 UTI能够增强TXT对人原代乳腺癌细胞的抑制作用,二者具有协同效应,这种机制可能与UTI影响IGF-1R、PDGFA和PAFR的表达有关.
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血小板活化因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达及其调控
目的:观察血小板活化因子受体(PAF-R)在正常人皮肤角质形成细胞中的表达调控特征.方法:应用免疫组织化学法检测PAF-R在正常皮肤组织及HaCaT细胞中的表达,采用RT-PCR法检测PAF-R在HaCaT细胞基因水平的表达特征,并用流式细胞术定量检测刺激因素作用下HaCaT细胞中PAF-R的表达调控情况.结果:PAF-R在正常人角质形成细胞中有强烈的表达,阳性部位位于细胞膜及细胞质.PAF-R在HaCaT细胞转录水平有表达,且组织型mRNA产物高于白细胞型mRNA产物.PAF-R在HaCaT细胞膜内外均有阳性表达,细胞内表达量约是膜表达量的4.82倍.IFN-γ、维甲酸可以上调PAF-R在HaCaT细胞的膜表达量.结论:皮肤角质形成细胞在细胞、蛋白及基因水平均有PAF-R强烈表达,而且这种表达可被炎症因子调控,提示PAF系统可能在皮肤炎症中起重要作用.
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血小板活化因子及其受体与皮肤炎症
血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF) 是一种高生理活性的磷脂介质,具有广泛的生物学作用,参与体内多种疾病的发病过程.近年来发现,PAF系统参与表皮角质形成细胞功能和皮肤炎性反应,与许多皮肤炎症有密切联系.同时人体角质形成细胞能够表达功能性的PAF受体,并参与诱导表皮细胞因子网络,与其他炎性介质相互作用,对皮肤炎症的发生起协同放大的效应.
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树鼩脑缺血半暗区PAF受体介导的微环境改变及GB保护机制的探讨
目的研究树鼩血栓性脑缺血时,血小板活化因子(PAF)受体活化介导的缺血半暗区微环境改变,并探讨PAF受体拮抗剂-银杏内酯B(ginkgolide,GB)的神经保护机制.方法采用光化学诱导树鼩血栓性局部性脑缺血模型,用3H-PAF放射免疫标记法检测缺血区微环境脑细胞PAF受体亲合性(Kd值)和结合特性(Bmax值)的变化;用密度梯度法及原子吸收分光法分别测定缺血微环境水含量及Na+、Ca2+含量,并于光化学反应后6 h静注GB(5 mg/Kg),观察其对脑血栓形成后24 h时缺血微环境的改善效应.结果树鼩脑血栓形成后缺血半暗区微环境的改变以24 h为著,脑细胞膜高亲和性、低亲和性PAF受体的Kd值及Bmax值明显降低,其中Kd1及Bmax1分别为(0.611±0.9)nM和(419.4±72.6)fmol·mg-1蛋白,Kd2及Bmax2分别为(4.08±0.5)nM和(676.8±98.66)fmol·mg-1蛋白(与对照组相比P＜0.01);GB可促使缺血微环境脑细胞PAF受体Kd及Bmax的恢复,并具有改善局部脑水肿和缓解Ca2+超载(P均＜0.01).结论PAF受体活化在介导缺血半暗区微环境改变中具有重要作用,GB可改善缺血半暗区微环境和逆转PAF受体活化介导的神经元泵功能障碍.
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银杏石榴煎对寻常性银屑病患者血小板活化因子及其受体表达水平的影响
目的 探讨中药银杏石榴煎治疗进行期寻常性银屑病的疗效及其对患者血清中血小板活化因子(PAF)及皮损组织中血小板活化因子受体(PAFR)表达水平的影响.方法 治疗前后对银屑病患者皮损进行PASI评分,采用ELISA法检测患者治疗前后和正常人对照血清中PAF的表达水平,并采用免疫组化方法检测患者治疗前后皮损和正常人皮肤中PAFR的表达变化.结果 ①银杏石榴煎可显著改善患者的临床症状,治疗后(2.86±1.81)PASI评分较治疗前(32.81±14.77)明显下降(P＜0.01);②治疗前患者血清中PAF表达水平(15.41±4.28 pg/mL)明显高于正常人对照(5.77±1.47 pg/mL)(P＜0.01),治疗后(8.25±2.43 pg/mL)其表达水平较治疗前明显下降(P＜0.05),且患者血清中PAF表达水平与PASI评分呈正相关(r=0.46,P＜0.05);③治疗前患者皮损表皮及真皮中内皮细胞、炎症细胞可见明显PAFR阳性表达,治疗后阳性细胞表达减少(P＜0.05).结论 进行期银屑病患者血清中PAF及皮损中PAFR呈高表达,且与患者病情严重程度密切相关,银杏石榴煎可明显降低它们的表达水平.
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血小板活化因子与新生儿疾病
血小板活化因子(PAF)是一种磷脂信号分子,主要通过细胞膜表面的PAF受体(PAF-R) ——G蛋白耦联受体,将细胞内信号传导至多种类型的细胞效应器.PAF在多种有害刺激下与PAF-R结合并发生磷酸化,激活信号传导通路及细胞内第二信使,如环磷酸鸟苷、磷脂酰肌醇、磷脂酶C、磷酸肌酸激酶及钙离子等生物效应,并可介导转录因子如核因子(NF) -κB的活化,激发并扩大急性炎症和凝血反应等,从而介导参与多种疾病的病理过程.在脓毒症、休克、创伤中,PAF信号系统失调,中断效应器反应会引起好的结果.随着研究深入,发现PAF与新生儿疾病的发生、发展有密切关系.现就PAF的结构、代谢、功能及其与新生儿疾病的相关性进行综述.
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树鼩脑局部血栓性缺血的扩布性抑制机制探讨
目的:观察树鼩血栓性脑缺血时,对侧神经元血小板活化因子(PAF)受体活化和神经元线粒体呼吸功能改变,探讨皮层扩布性抑制的可能机制.方法:采用光化学法诱导脑血栓形成,分别观察脑缺血对侧神经元超微结构、脑细胞膜PAF受体、单胺氧化酶(MAO)活性、单胺类递质含量以及神经元线粒体呼吸功能.结果:树鼩脑缺血时对侧皮层淤血,神经元线粒体肿胀;脑缺血4 h对侧神经元PAF受体亲和量降低,其变化以24 h为显著(P＜0.01);缺血区线粒体Ⅲ态呼吸速率、呼吸控制率(RCR)及氧化磷酸化效率(P/O)均明显降低;缺血对侧皮层的P/O降低(P＜0 05),Ⅲ态呼吸速率明显抑制(P＜0.01);伴随着对侧脑组织MAO活性的升高(P＜0.01),对侧皮层的去甲肾上腺素(NA)和5-羟色胺(5-HT)含量降低而5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量明显升高(P＜0.01).结论:树鼩脑缺血时对侧皮层神经元PAF受体的活化以及MAO活性的增强可能在扩布性抑制的发生中具有重要作用.
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心力衰竭患者血小板活化因子及其受体表达的变化
目的:探讨心力衰竭患者血浆血小板活化因子(PAF)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性的变化,以及外周血中单个核细胞(PBMC)PAF受体(PAF-R)的表达.方法:对30例心力衰竭患者采用生物法检测血浆中PAF含量,酶水解底物显色法测定PAF-AH活性,流式细胞仪检测PBMC上PAF-R的表达.并与30例健康体检者对照.结果:心力衰竭患者血浆中PAF含量(11.12±1.80)μg/L,PAF-AH活性(24.50±7.86)umol/(min.L)、PBMC上PAF-R的表达与健康体检者比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:PAF、PAF-AH、PAF-R三者在心力衰竭发生和发展中起重要作用.
关键词： 心力衰竭 充血性 血小板激活因子 血小板活化因子乙酰水解酶 血小板活化因子受体 -
大鼠脑缺血再灌注PAF、PAF受体基因表达的变化
目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后血浆血小板活化因子(PAF)、PAF受体基因表达的变化.方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)及再通模型,应用RT-PCR技术检测MCAO及再通后缺血半暗带皮质PAF受体基因表达,同时用ELISA法检测对应血浆PAF值.结果单纯脑缺血24 h时缺血区皮质PAF受体mRNA含量并无显著变化,密度比值为0.98±0.13,再灌注6 h明显降低(0.63±0.08),24 h低(0.44±0.06),随后逐渐回升.对应时相血浆PAF值单纯脑缺血组为(848±80)(pg/ml),再灌注12 h为高,48 h降至对照组水平(568±45)(pg/ml).结论脑缺血再灌注可致PAF受体基因表达异常,推测与内源性PAF水平升高有关.
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氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活
目的 探讨氧化型低密度脂蛋白刺激能否诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活.方法 体外常规培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,加入氧化型低密度脂蛋白或溶媒孵育24 h,用高效液相色谱分析技术检测巨噬细胞内源性大麻素Anandamide和2-arachidonoylglycerol水平,以实时定量PCR技术和免疫印迹法对大麻素CB1、CB2受体和血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达进行分析.结果 内源性大麻素2-arachidonoylglycerol水平在6mg/L和12 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时分别升高了2.4倍和4.8倍,而Anandamide水平无明显变化.3～12mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时,RAW264.7巨噬细胞大麻素CB1和CB2受体及血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达均明显上调(P＜0.01).结论 首次证实氧化型低密度脂蛋白通过激活血小板活化因子受体诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活,提示氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化过程中可能涉及该系统的激活.
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血小板活化因子受体在伴放线放线杆菌致病过程中的作用
目的 研究血小板活化因子受体(PAFR)在磷脂酰胆碱(PC)阳性伴放线放线杆菌(Aa)黏附侵袭人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)过程中的作用.方法 利用PAFR拮抗剂(CV3988)和抗PAFR抗体作用于HUVEC 30 min后,观察PC阳性Aa对HUVEC黏附和侵袭的影响;并采用MTT法分析PC阳性和阴性Aa诱导细胞损伤的情况.结果 采用100、200、500 nmol/L的PAFR拮抗剂预处理HUVEC,显著减少了PC阳性Aa对HUVEC的黏附和侵袭(P＜0.001),黏附率分别为对照组的(36.29±3.52)％,(19.04±3.35)％和(7.69±3.19)％;侵袭率分别为对照组的(12.12±1.58)％,(7.08±0.29)％和(2.60±2.26)％.用抗PAFR抗体预处理HUVEC后Aa对HUVEC的黏附率和侵袭率分别为(50.05±5.28)％和(39.09±6.50)％,显著降低了Aa对宿主细胞的黏附和侵入(P＜0.001).采用200 nmol/L和500 nmol/L的PAFR拮抗剂和25 μg/mL抗PAFR抗体预处理HUVEC后,PC阳性的Aa与细胞作用以后,细胞的存活率显著升高(P＜0.001),从(25.39±9.33)％分别升高到(91.12±3.14)％,(94.12±2.15)％和(65.5±1.87)％.而PC阴性的Aa菌株中,预处理组与未预处理的组相比,细胞活力并没有显著增加(P＞0.05).结论 我们发现PAFR在PC阳性的Aa对宿主细胞的粘附、侵袭及诱导胞死亡的过程中发挥了重要作用.
关键词： 伴放线放线杆菌 血小板活化因子受体 人脐静脉血管内皮细胞 黏附率 侵袭率 -
早期自然流产患者PAF-R及VEGF表达水平的研究
目的:探讨早期自然流产患者蜕膜绒毛组织中血小板活化因子受体(PAF-R)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平.方法:将2008年1月至2009年12月期间在广东省深圳市龙岗区第二人民医院妇产科收治的60例患者分为3组:稽留流产组(Ⅰ组)、先兆流产(Ⅱ组)、正常早孕组(Ⅲ组),每组各20例.采用积分光度法及免疫组织化学法对3组患者蜕膜绒毛组织中PAF-R、VEGF的表达情况进行分析.结果:(1) PAF-R、VEGF在3组患者蜕膜绒毛组织中的表达均呈阳性.(2)PAF-R、VEGF表达水平:Ⅰ组＜Ⅱ组＜Ⅲ组(均P＜0.05).结论:PAF-R、VEGF表达降低普遍存在于早期自然流产患者中,PAFR、VEGF表达的降低可能是导致早期自然流产的重要因素.
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细胞相互作用和阿托伐他汀对内皮细胞与系膜细胞 PAF 及其受体基因表达的影响
目的：探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对血小板活化因子（PAF）产生、系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R）基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养，分为对照组、甘露醇组、高糖＋高溶血卵磷脂组、阿托伐他汀干预组，采用实时荧光定量检测系膜细胞 PAF-R mRNA 表达、酶联免疫吸附法检测 PAF 含量。结果共培养组和单培养组在高糖高溶血卵磷脂条件下，PAF 和系膜细胞 PAF-R mRNA 表达均升高（P ＜0．05），单培养 PAF 均较共培养下降（P＜0．05）；阿托伐他汀可抑制高糖高溶血卵磷脂引起的 PAF 和系膜细胞 PAF-R mRNA 表达上调（P ＜0．05）。结论系膜细胞和内皮细胞在高糖高溶血卵磷脂培养下，存在相互作用，并促进 PAF 产生和系膜细胞 PAF-R基因表达。阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用，减少 PAF 的产生及下调系膜细胞 PAF-R 基因表达。
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不育患者精液中PAF的变化及外周血PBMC上PAF-R的表达
目的:探讨男性不育患者精液血小板活化因子(PAF)、血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)活性的变化,以及外周血中单个核细胞(PBMC)PAF受体(PAF-R)的表达.方法:对10例男性不育患者(其中5例为精液异常组,5例为不明原因不育组)采用生物法检测精液中PAF含量,酶水解底物显色法测定PAF-AH活性,流式细胞仪检测PBMC上PAF-R的表达.并与5例有正常生育功能的男性健康体检者对照.结果:精液异常组PAF含量(1.87±0.76)μg/L,PAF-AH活性(23.56±6.86)μmol/(min·L)、PBMC上PAF-R的表达与健康体检者比较差异有非常显著性意义(P＜0.01);不明原因不育组PAF含量(2.12±0.81)μg/L,PAF-AH活性(21.65±5.13)μmol/(min·L)、PBMC上PAF-R的表达与健康体检者比较差异也有非常显著性意义(P＜0.01);精液异常组与不明原因不育组相比差异无显著性.结论:男性不育患者精浆PAF降低、PAF-AH升高,PAF、PAF-AH、PAF-R三者在男性不育的发生中可能起重要作用.
