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γδT细胞、NK细胞及LAK的部分抗肿瘤生物特性比较
目的:通过体外分离、增殖培养获取γδT细胞、NK细胞和LAK细胞,并比较了3种细胞的抗肿瘤的生物学特性.方法:收集用不同单抗分别包装被粘附的细胞,然后通过MACS细胞分选仪的分选,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以单抗阻断效应的分析.结果:经MACS分离得到的γδT细胞,培养2 w后细胞数扩散600～800倍,CD3、CD8和γδ细胞表达阳性率分别是72.29%、58.02%和65.98%.γδT细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji和XG-7这3种不同靶细胞均有较高的杀伤率,分别为35.98%、42.27%和69.08%;NK细胞对此3种细胞的杀伤率分别是45.12%、12.34%和29.27%;LAK细胞的杀伤率分别为44.01%、29.27%和25.68%.γδT细胞对经MHC-Ⅰ类单抗阻断前后的K562、Raji和XG-7 3种靶细胞的杀伤率无明显改变.结论:γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用;γδT细胞对MHC-Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化,提示γδT细胞较NK细胞和LAK细胞有更广泛的抗瘤谱.
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淫羊藿甙逆转转化生长因子β2对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用
目的:探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子β2(Transform ing Growth Factor β2,TGFβ2)对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用及其机制.方法:采用 MTT法,RT-PCR和流式细胞术.结果:淫羊藿甙能逆转受TGFβ2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性,并能部分恢复受TGFβ2抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平,以及CD3AK细胞的增殖活性.结论:淫羊藿甙通过恢复LAK细胞IL-2Rα表达,提高CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平及促进CD3AK增殖,逆转TGFβ2对LAK 、CD3AK的免疫抑制作用.
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抗人膀胱癌/抗CD3双功能基因抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用的体外研究
目的探讨抗人膀胱癌/抗CD3双功能基因抗体对LAK细胞增殖和增强细胞毒的作用.方法采用125I-UdR释放试验等检测方法.结果双功能抗体显著提高LAK细胞与肿瘤细胞结合率,促进淋巴细胞增殖,加入双功能抗体后,LAK细胞对肿瘤细胞细胞毒性明显增加.结论抗人膀胱癌/抗CD3双功能基因抗体可以大大促进LAK细胞增殖和增加细胞毒性作用,为膀胱癌的治疗提供新的方法.
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激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究
目的:证实激活骨髓(Activated bode marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞不同的生物学效应.方法:应用重组白细胞介素-2(rIL-2)、抗CD3单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞,以MTT比色分析法测定ABM、LAK细胞的杀伤活性,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒-巨噬细胞系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E)培养.结果:rIL-2+抗CD3单抗激活的ABM组杀伤活性强(65.8±9.2)%,rIL-2激活的ABM组次之为(56.3±7.9)%,活性强于相同条件下的LAK组,两组差异具有显著性(P＜0.01).增殖倍数与相同条件下的LAK细胞相比差异亦具有显著性.体外激活3～5 d的ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比BFU-E、CFU-GM形成率差异无显著性(P＞0.05),LAK细胞则不具有造血祖细胞活性.结论:ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于LAK细胞,且能保持造血祖细胞活性,抗CD3单抗能够促进rIL-2诱导的ABM抗肿瘤活性和增殖效应,不损伤造血祖细胞活性,是优于LAK细胞的过继免疫疗法.
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红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响
目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响.方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性.结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg·mL-1和0.625mg·mL-1剂量组促增殖作用明显(P＜0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P＜0.05).结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能.
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健康人外周血单个核细胞诱导的NK细胞对脑胶质瘤杀伤作用的探讨
目的 对体外培养的NK细胞杀伤脑胶质瘤细胞进行探讨,为脑胶质瘤的免疫细胞疗法提供理论基础.方法 从4个健康人外周血提取单个核细胞,在KRATM培养环境下,诱导产生NK细胞和LAK细胞.分别用细胞计数法和流式细胞仪检测NK细胞增殖和细胞表面特异性标志CD3/CDl6/CD56,并用MTr法检测NK细胞及LAK细胞对脑胶质瘤细胞的杀伤.结果 经过体外培养,平均可得到7.93×109个以上细胞.和LAK细胞相比,NK细胞对脑胶质瘤细胞LNI8、LN229、T98G和U87MG的敏感性更高.结论 NK细胞能够对脑胶质瘤细胞产生有效免疫应答,为过继性免疫细胞治疗脑胶质瘤提供可能.
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小鼠体内灌注五色灵芝提取液与LAK细胞协同抑瘤作用的观察
目的 探讨五色灵芝提取液与LAK细胞合用对小鼠移植性动物肿瘤的抑制作用.方法 按药物体内抑瘤作用常规筛选方法进行,试验动物用NIH小鼠.瘤株为小鼠肉瘤细胞(sarcoma-180).小鼠随机分成五组,每组10只.阴性对照组以生理盐水20 ml/kg/天灌胃.阳性对照组以环磷酰胺(CTX)20 mg/kg/天灌胃.第一实验组:灵芝液组20 g/kg/天灌胃.第二实验组:LAK细胞1×107/只/隔天+IL-2 5000U/天腹腔注射.第三实验组:灵芝液20 g/kg/天灌胃+LAK细胞1×107/只/隔天+IL-2 5 000 U/天腹腔注射.各组均于接种后24小时开始灌胃给药,连续10天.均于末次给药后24小时处死,计算抑瘤率.结果 各组抑瘤率分别是:第一实验组为46.41-60.42 %,第二实验组为44.85-51.29 %,第三实验组为对71.41-75.42 %.各实验组的抑瘤作用与阴性对照组相比较,差异均有显著性意义(P＜0.001).灵芝液与LAK细胞联合组与单用灵芝液组或单用LAK细胞组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论 五色灵芝提取液与LAK细胞联合使用具有协同抑瘤作用.
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人脐带血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响
目的研究人脐带血树突状细胞(DC)对LAK细胞杀伤活性的影响.方法从人脐带血中分离出DC,以不同浓度与LAK细胞共育,检测其杀伤活性变化.结果加入低于1×105/mlDC的LAK杀伤活性显著增强,高于此浓度则对LAK活性呈不显著或负面影响.结论该结果提示脐血DC对LAK细胞杀伤活性可能具双向调节作用.
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CIK对Lewis肺癌小鼠细胞因子水平影响的实验研究
目的观察CIK(cytokine-induced killer)细胞的体外增殖和杀瘤活性及对Lewis肺癌小鼠脾细胞分泌细胞因子浓度变化的影响.方法常规方法培养CIK和LAK细胞,建立Lewis肺癌小鼠模型,给予CIK 和LAK 细胞治疗3周后,杀鼠取脾,用ELISA方法分别测定C57小鼠脾细胞上清液的IL-2、 IL-4 、IFN-γ浓度,用MTT方法测定C57小鼠脾细胞上清液TNF-α浓度.结果 CIK治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液细胞因子水平明显高于LAK组.结论 CIK细胞对Lewis肺癌小鼠治疗有效,杀瘤活性强于LAK, CIK治疗组荷瘤鼠的细胞因子水平也高于LAK组.
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CD3AK细胞在肿瘤治疗中的研究进展
随着免疫学、分子生物学与基因工程技术的发展,以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗和放疗后的新模式.CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)是指抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞,以其存活时间长、外源性IL-2用量小,以及体内外抗瘤作用优于LAK细胞等优势,成为继LAK(Lymphokineactivated killer,LAK)和TIL(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)之后,肿瘤AIT研究中受关注的肿瘤效应细胞[1].
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MTT法检测CIK细胞的体外杀瘤活性
目的现察CIK(cytokine induced killer)细胞的体外杀瘤活性.方法以LAK(lympho-kine activated killer)细胞作对比,用MTT法测定并比较CIK细胞与LAK细胞的体外杀瘤活性.结果CIK细胞的体外杀瘸活性明显优于LAK细胞,杀伤率分别为29%和15%.结论CIK细胞是一种具有较强杀伤活性的免疫效应细胞,有可能用于抗肿瘤的生物治疗.
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胃安康对小鼠免疫功能的影响
目的:研究中药复方胃安康(WAK)对小鼠免疫功能的影响,以探讨其抗肿瘤作用机理.方法:通过给小鼠灌胃WAK,观察其对免疫低下小鼠迟发性超敏反应、溶血素生成及对小鼠NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响.结果:WAK可明显增强免疫低下小鼠的DTH,提高血浆溶血素水平,增强NK及LAK细胞杀伤活性.结论:WAK可通过提高机体的免疫功能来发挥抗肿瘤作用.
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人红细胞对LAK细胞DNA合成和IL-2受体表达影响的研究
本文用3H-TdR掺入法、APAAP免疫染色法和MTT法研究人红细胞(RBC)对LAK细胞DNA合成、IL-2受体(IL-2R)表达及杀伤活性的影响.人RBC对LAK细胞DNA合成有抑制作用,对LAK细胞IL-2R表达和杀伤活性有促进作用.随RBC浓度增加,抑制作用和促进作用均明显加强.
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Wilms瘤的免疫治疗:附8例报告
为探讨提高Wilms瘤治愈率的方法,采用自体外周血应用体外IL-2诱导培养LAK细胞,分别通过全身输注或区域动脉灌注的方法配合化疗,放疗及栓塞、手术切除治疗Ⅰ至Ⅳ期:包括UH型2例在内的Wilms瘤8例,迄今完全存活,其中4例2年无病生存.应用LAK细胞具有不增加治疗药物引起的毒副反应的效果,对全身状况有明显帮助.
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组胺联合LAK/IL-2疗法治疗转移性黑色素瘤
目的： 研究组胺对C57BL/6小鼠脾源性LAK细胞体内杀伤活性的调控作用及可能的机理。方法： 以B16恶性黑色素瘤肺转移的C57BL/6小鼠作为治疗对象，比较LAK/IL-2/组胺疗法与LAK/IL-2疗法导致的近期疗效和远期疗效之间的差异。结果: 组胺可明显增强LAK/IL-2疗法的体内抗肿瘤转移活性，产生明显的肿瘤消退，近期疗效优于LAK/IL-2疗法；组胺与单纯LAK/IL-2治疗相比，LAK/IL-2/组胺疗法显著提高了荷B16恶性黑色素瘤小鼠的生存时间和生存率，具有较好的远期疗效； 组胺的这一协同效应可被H2受体拮抗剂雷尼替丁完全阻断，H2受体激动剂dimaprit则可模拟这一效应。结论: 用组胺和LAK/IL-2联合应用在C57BL/6小鼠体内具有较强的协同效应，对B16恶性黑色素瘤细胞的杀伤效果明显优于传统的LAK/IL-2疗法；组胺的这一效应是通过体内单核巨噬细胞上的组胺H2受体介导的。
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高压氧对荷瘤鼠淋巴细胞功能的影响
目的探讨高压氧(HBO)暴露对淋巴细胞功能的影响.方法将Balb/c小鼠随机分成正常对照组、HBO组、肿瘤组、肿瘤HBO组.用接种S-180腹水癌细胞的方法制成免疫功能低下动物模型.经HBO暴露,取血标本观察淋巴细胞-肿瘤细胞花环率、淋巴细胞数、淋巴细胞百分比;用ELISA双抗夹心法测定小鼠血清IgG浓度;用3H-TdR掺入法测定脾淋巴细胞增殖;用同位素靶细胞释放法观察NK细胞杀伤活性和LAK细胞活性;取脾脏观察小鼠脾指数的变化.结果(1)淋巴细胞-肿瘤细胞花环率肿瘤HBO组明显高于对照组(P＜0.01).(2)淋巴细胞计数各组之间均无明显变化.(3)淋巴细胞百分比对照组分别比肿瘤HBO组和肿瘤组高(P＜0.01,P＜0.05),HBO组比肿瘤HBO组高(P＜0.01).(4)IgG测定各组间无统计学差异.(5)淋巴细胞增殖HBO组比对照组低(P＜0.01),肿瘤HBO组比HBO组低(P＜0.01),肿瘤组比HBO组低(P＜0.01).(6)NK细胞活性肿瘤组比对照组低(P＜0.05),肿瘤HBO组比肿瘤组高(P＜0.05),HBO组比对照组有降低的趋势(P=0.07).(7)LAK细胞活性肿瘤组比对照组高(P＜0.05).(8)脾指数各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论压力为0.2 MPa,氧体积分数为87%的HBO暴露和/或肿瘤接种对免疫系统的作用是多方面的,有的部分增强,有的部分减弱,值得进一步研究.
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LAK细胞和白介素Ⅱ配合化疗药物支气管动脉灌注治疗晚期肺癌
目的:探讨LAK细胞和白介素Ⅱ配合化疗药物支气管动脉灌注治疗晚期肺癌的价值.方法:将40例晚期肺癌随机分为两组:LAK细胞和白介素Ⅱ配合化疗药物支气管动脉灌注20例为观察组;单纯化疗药物支气管动脉灌注20例为对照组.对两组病例的疗效、生存率和生活质量分别作χ2检验,进行对照分析.结果:观察组首次治疗的近期疗效50%(10/20),与对照组30%(6/20)比较, 差异无显著性(χ2=1.67,P>0.05);但观察组1年生存率95%(19/20),与对照组45%( 9/20)比较,有高度显著性差异(χ2=11.90,P<0.01),且观察组较对照组生活质量明显提高(P<0.01).结论:LAK细胞和白介素Ⅱ配合化疗药物支气管动脉灌注,可能是晚期肺癌较为有效的治疗方法.
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穴位注射LAK细胞对Balb/c小鼠免疫功能的影响
目的:观察小鼠连续多次穴位注射不同数目LAK细胞对其免疫功能的影响,为临床应用提供理论依据.方法:40只小鼠随机分组,每组10只,设为对照组(生理盐水组),阴性对照组(腹腔注射LAK细胞5×107/ml),低剂量组(LAK细胞5×106/ml)和高剂量组(LAK细胞5×107/ml).另用10只小鼠制备LAK细胞,采用LAK细胞分别对2组小鼠足三里、肝俞穴位注射,每个穴位0.02ml,1次/日,连续7天,对照组注射生理盐水,注射穴位、实验相同.阴性对照组腹腔注射高剂量LAK细胞,每日一次,每次0.1ml,连续7天.结果:阴性对照组与LAK细胞低剂量组的小鼠免疫功能明显高于对照的生理盐水组,NK细胞杀伤活性、NKCF水平以及IL-2活性均有提高,经统计学处理有显著性差异.LAK高剂量组小鼠免疫功能明显高于阴性对照组与低剂量组,NK细胞杀伤活性、NKCF水平以及IL-2活性均有增高,经统计学处理具有显著的差异.结论:LAK细胞对小鼠足三里、肝俞进行穴位注射能明显提高小鼠的免疫功能,高剂量明显优于阴性对照组与低剂量组.同时表明:同剂量的穴位注射较非穴位注射更为优越.
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海洋真菌多糖(YCP)对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响
目的 研究海洋真菌多糖(YCP)促进小鼠淋巴细胞的免疫调节作用,探讨其抗肿瘤作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测YCP对淋巴细胞增殖的作用,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,MTT法检测淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)的诱生及其细胞杀伤活性.结果 YCP体外能显著提高淋巴细胞增殖反应;显著增加细胞上清液中IL-2和IFN-γ的浓度;与IL-2单独刺激相比,YCP体外能显著提高与IL-2协同诱导产生的LAK细胞对于NK不敏感的Hela细胞和NK敏感的K562细胞的杀伤作用.结论 YCP能够增强小鼠脾淋巴细胞的免疫作用.
关键词： 海洋真菌多糖(YCP) 淋巴细胞 白介素-2 干扰素-γ LAK细胞 -
细胞因子诱导的杀伤细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的影响
目的 研究脐血单个核细胞体外多向诱导分化为LAK,CD3AK,CIK细胞及体外对胆囊癌细胞株GBC-SD杀瘤活性的变化.方法 采用IL-2刺激诱生LAK细胞;用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞;加入IFN-γ,24 h后加入IL-1,CD3单抗,IL-2刺激诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况,并分析其相互关系;取培养的CIK细胞用流式细胞仪分析表型;用MTT法以胆囊癌细胞株GBC-SD为靶细胞,分组测定LAK,CD3AK,CIK细胞的杀伤活性.结果 CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第20天左右时CIK细胞的扩增倍数显著高于CD3AK(P＜0.05).流式细胞仪分析结果显示CIK细胞培养后,其主要效应细胞CD3+ CD56+细胞较培养前显著增加(P＜0.05),CD8+细胞也较培养前显著增加(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05),而CIK细胞杀伤活性又强于CD3AK细胞(P＜0.05).结论 CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀伤效应细胞.
