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五种常见蔬菜和宁夏枸杞的抗氧化活性观察
为研究5种常见蔬菜和宁夏枸杞的抗氧化活性，以TBAS（硫代巴比妥酸反应物）的阻断率(TBASI)为指标，测定油菜、香菜、韭菜、芹菜、绿豆芽和宁夏枸杞和维生素C的抗氧化活性。结果显示：煮沸前香菜、韭菜、绿豆芽、宁夏枸杞和维生素C的抗氧化活性较高，分别为85.3%，71.7%，77.6%，94.6%和90.3%，油菜、芹菜次之，为65.1%和56.7%。阻断率随试样加入量的增加而增加。煮沸后芹菜、油菜、韭菜和维生素C的TBASI分别下降至22.3%、34.5%、35.5%和5.1%，宁夏枸杞、香菜和绿豆芽TBASI下降幅度相对较小，分别下降至74.9%、63.2%和58.3%。芹菜、韭菜、油菜煮沸前后TBASI下降差别有显著性，绿豆芽、香菜和宁夏枸杞的下降差别无显著性。结果提示5种蔬菜及宁夏枸杞中可能存在耐热的抗氧化物质。
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大豆异黄酮抗大鼠T细胞衰老及抗氧化作用研究
为研究大豆异黄酮抗大鼠T细胞衰老和抗氧化作用,选用老龄SD大鼠,观察大豆异黄酮对T细胞CD28表达水平及肝脏氧化应激水平的影响.实验设立青年对照组、老龄对照组和大豆异黄酮0.33、0.99 g/kg BW剂量组,其中剂量组按剂量灌胃给予大豆异黄酮,对照组灌胃给予等量纯净水.4周后,分别制备肝细胞匀浆和肝单细胞悬液,用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定肝匀浆中丙二醛(MDA)含量,分光光度法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,用流式细胞仪结合双氢罗丹明123(Rh123)和双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(H2DCFDA)染色法分别检测肝细胞线粒体膜电位(MMP)及活性氧(ROS)水平;另取外周血测定T淋巴细胞表面CD8/CD28表达情况. 结果显示:青年对照组及大豆异黄酮剂量组的肝组织MDA含量均较老年对照组低,而SOD活力及肝细胞MMP水平均较老年对照组高(P<0.05);大豆异黄酮剂量组肝细胞内的ROS水平较老年对照组低(P<0.01).老年对照组大鼠外周血CD28+和CD28+/CD8+T细胞比例低于青年对照组,而CD28-/CD8+T细胞比例高于青年对照组,给予大豆异黄酮样品组三者比例均介于两对照组之间.提示衰老大鼠外周血T细胞CD28表达降低,肝细胞线粒体膜稳定性下降,氧自由基清除能力下降,过氧化脂质分解的终产物增多;大豆异黄酮可提高老龄大鼠T细胞CD28表达水平,增加肝细胞抗氧化酶活性,稳定线粒体膜电位,减少活性氧产生.
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JWA基因的蛋白缺陷对苯并(a)芘所致HeLa细胞DNA损伤的影响
目的研究JWA基因表达缺陷对苯并(a)芘诱导细胞DNA损伤与修复的影响及可能机制.方法构建JWA基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-C1-asJWA),用该载体稳定转染人宫颈癌细胞(HeLa)获得JWA蛋白缺陷细胞株(asJWA-HeLa),在含有S9的培养条件下以50 μmol/L苯并(a)芘处理细胞3 h,再恢复不同时间,用碱性单细胞凝胶电泳方法鉴定DNA损伤程度.结果 asJWA-HeLa细胞JWA蛋白表达水平比对照下降了69%.在苯并(a)芘致DNA损伤模型中,asJWA-HeLa细胞的DNA损伤程度重于对照细胞,并且出现明显的DNA修复延迟现象.结论JWA作为一种新的环境应答基因,活跃地参与了苯并(a)芘诱导的HeLa细胞DNA损伤与修复过程,并在其中起着积极的保护作用.
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冠心病患者中性粒细胞氧化代谢指标的检测及意义
目的探讨中性粒细胞活化在冠心病发生发展中的病理作用和意义. 方法利用化学发光法检测活性氧,膜片钳技术检测中性粒细胞脱颗粒,分光光度计比色法检测血浆和中性粒细胞内髓过氧化物酶(MPO)活性.结果不稳定性心绞痛组和稳定性心绞痛组中性粒细胞产生活性氧的峰值均显著高于对照组,分别为343.21±66.4,325.65±65.1和271.53±56.2(P<0.01).不稳定性心绞痛组高钙刺激膜电容大变化值显著低于稳定性心绞痛组和对照组,分别为(3.62±0.31) pF,(6.94±0.43) pF和(6.87±0.36) pF(P<0.01).不稳定性心绞痛组血浆和中性粒细胞内MPO活性均降低,稳定性心绞痛组血浆MPO降低,但细胞内MPO活性与对照组差别无显著意义.结论中性粒细胞氧化和抗氧化代谢失衡可能参与了冠心病的发生发展,尤其在不稳定性心绞痛发病过程中起到重要作用.
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氧自由基对转化生长因子-β1表达的影响及其在胰腺纤维化中的作用
目的研究氧自由基在慢性胰腺炎发病过程中对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响及其促胰腺纤维化作用.方法每周2次在大鼠腹腔内注射不同剂量二乙基二硫代氨基甲酸盐(DETC),分别于注射后1.5 h,24 h,48 h,72 h,2周,3周,4周,6周将大鼠处死,检测胰腺中超氧歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),结蛋白(Desmin),胶原Ⅰ,Ⅲ(CoⅠ,Ⅲ),转化生长因子β1(TGF-β1),纤维连接蛋白(FN)的表达. 结果注入DETC后,胰腺组织内SOD、GSH-PX活性下降,MDA含量升高,提示氧自由基增多,3周后出现较明显纤维化,6周达高峰,与对照组有显著差异(P＜ 0.001).2周起胰腺内α-SMA,Desmin,TGF-β1呈阳性表达,提示胰腺星状细胞(PSCs)的激活.CoⅠ,CoⅢ,FN的表达2周时弱,4周时强.RT-PCR半定量测定2周时TGF-β1 mRNA、FN mRNA水平高于对照组(P＜ 0.001),4周和6周时达高峰.结论氧自由基可能通过激活PSCs刺激TGF-β1的分泌,后者促使了胰腺纤维化的形成.
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线粒体ATP敏感钾通道介导缺氧预处理期细胞外信号调节蛋白激酶活化的机制
目的探讨线粒体ATP敏感钾通道(mKATP)与细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)在缺氧预处理延迟保护机制中的相互关系. 方法采用SD大鼠心肌细胞培养复制、缺氧/复氧损伤模型及缺氧预处理模型,建立对照组、缺氧/复氧组、缺氧预处理组、二氮嗪组、5-羟基癸酸+二氮嗪组、5-羟基癸酸+缺氧预处理组、二氮嗪+MGP组、缺氧预处理+2-巯基丙酰基甘氨酸(MGP)组、二氮嗪+PD98059组,以细胞存活率等作为反映心肌细胞损伤的指标,并于预处理后不同时间点分别测定细胞内活性氧含量及ERK1/2的活性. 结果缺氧预处理组及二氮嗪组细胞存活率和细胞内超氧化物歧化酶活性[(81.9±11.4)%、(13.6 ± 3.7)U/L,(79.2±12.4)%、(16.5±4.6)U/L]均显著高于缺氧/复氧组[(42.2±7.3)%、(8.8±2.8)U/L],缺氧预处理组及二氮嗪组乳酸脱氢酶释放[(101.9±18.9)U/L、(97.5±17.7)U/L]均显著低于缺氧/复氧组[(250.5±43.6)U/L,均为P＜0.01].缺氧预处理及二氮嗪均可快速诱导细胞内大量的活性氧生成并激活ERK1/2,但这些作用均可被mKATP阻滞剂5-羟基癸酸及氧自由基清除剂MGP所阻断.二氮嗪的细胞保护作用还可被ERK1/2阻滞剂PD98059所抵消. 结论 mKATP可通过诱导活性氧的生成而促进预处理期ERK1/2的激活,从而启动缺氧预处理延迟保护.
关键词： 缺血预处理 心肌 腺苷三磷酸 有丝分裂素激活蛋白激酶类 活性氧组分 -
α-synuclein片段对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能和活性氧水平的影响
目的研究α-synuclein的纤维源性片段NAC对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能及活性氧水平的影响.方法采用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成多巴胺能细胞,后经不同浓度的NAC(0、0.1、1.0、10.0、25.0、50.0 μmol/L)处理48 h,MTT法测定线粒体氧化还原酶的活力.用硫磺素S染色观察细胞内蛋白聚集情况,JC-1检测线粒体膜电位,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平.结果经NAC处理48 h后,与对照组比较,PC12细胞线粒体活力在高浓度(≥25 μmol/L)NAC作用时明显下降64.1%(P＜0.05).NAC(25 μmol/L)可诱导出现蛋白聚集,JC-1荧光染色可检测到线粒体膜电位明显去极化,DCFH-DA荧光染色及流式细胞仪检测显示PC12细胞内活性氧增加.60.6% 结论 NAC可引起PC12细胞内蛋白聚集,进而线粒体功能障碍及氧化应激增强,终导致细胞死亡.
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卡那霉素对三种小鼠耳毒性比较及对血管纹Na-K-2Cl联合转运子1表达的影响
目的建立小鼠氨基糖甙类抗生素(aminoglycoside antibiotics,AmAn)耳毒性模型,探讨在不同种小鼠中的AmAn耳毒易感性及其对耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子-1(Na-K-2Cl co-transporter-1,NKCC1)表达的影响.方法将72只C57BL/6J、CBA/CaJ、NKCC1+/-小鼠各自随机分为A、B、C、D 4组.A组:卡那霉素组;B组:卡那霉素+2,3-二羟基苯甲酸组;C组: 2,3-二羟基苯甲酸组;D组:生理盐水组.各组连续用药14 d.各组动物在用药前、用药后第14天及用药后第35天行脑干诱发电位(auditory brainstem response,ABR)检测听功能;耳蜗琥珀酸脱氢酶组织化学染色观察耳蜗形态学变化;免疫组化法观察血管纹NKCC1表达的变化.结果① A组小鼠ABR阈值明显提高(P<0.01)并伴随外毛细胞的减少;② B组小鼠ABR阈值变化明显小于A组(P<0.01),外毛细胞的损害也明显减轻;③ A组小鼠耳蜗血管纹NKCC1表达减弱,与D组比较有明显差异(P<0.01),而B组小鼠血管纹NKCC1表达较A组增强(P<0.01);④ 3种小鼠中CBA/CaJ小鼠对AmAn敏感,C57BL/6J和NKCC1+/-小鼠对AmAn的易感性无明显差异.结论应用卡那霉素可建立小鼠AmAn耳毒性模型;卡那霉素可抑制血管纹NKCC1的表达;2,3-二羟基苯甲酸拮抗AmAn耳毒性的途径之一可能是通过减轻AmAn对血管纹NKCC1的抑制作用;具有年龄相关性听力损失特性的小鼠对AmAn耳毒作用并不易感.
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变形链球菌活性氧代谢规律的初步探讨
目的研究变形链球菌代谢产生活性氧的规律及其酶学基础，探讨变形链球菌活性氧代谢产物对菌斑微生态的作用。方法采用电子自旋捕捉法检测不同培养条件下变形链球菌产生活性氧的情况及还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide reduced，NADH）对次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系和Fe2+-H2O2体系产生活性氧的影响。结果在变形链球菌培养液中可检测到特征性的二甲基吡咯氮氧化物（dimethyl pyridine N-oxide，DMPO）-O2和DMPO-OH·的电子自旋共振（electron spin resonance，ESR）信号及超氧化物歧化酶的活性；美蓝使变形链球菌培养过程中产生的特征性ESR信号消失；NADH对变形链球菌培养过程中产生的特征性ESR信号没有明显影响，但是NADH可使次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系和Fe2+-H2O2体系的ESR信号明显减弱甚至消失。结论变形链球菌在代谢过程中产生了O2和OH·，NADH氧化酶催化的反应可能是变形链球菌产生活性氧的主要来源。
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晚期氧化蛋白产物导致血管内皮细胞氧化应激损伤
目的研究慢性肾功能衰竭病人循环晚期氧化蛋白产物(AOPP)对人血管内皮细胞活性的影响及机制.方法用次氯酸(HOCl)氧化牛血清白蛋白(BSA)体外制备AOPP-BSA,将人血管内皮细胞株ECV304与不同浓度、不同氧化修饰程度的AOPP-BSA共同培养,用MTT法测定细胞活性,用VICTOR Wallac 1420多标记分析系统动态检测细胞内活性氧的产生量.结果 AOPP-BSA使血管内皮细胞活性降低,其对内皮细胞活性的影响与BSA氧化程度及AOPP-BSA的浓度有关;AOPP-BSA刺激内皮细胞生成活性氧,细胞内活性氧的生成量随BSA氧化程度和AOPP-BSA浓度增加而升高.用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen预处理细胞,可使AOPP-BSA诱导产生的活性氧减少53%,并可保护细胞免受AOPP-BSA造成的细胞损伤.结论晚期氧化蛋白产物能通过氧化应激引起血管内皮细胞损伤.
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晚期糖基化终产物诱导单核细胞产生细胞因子的细胞内信号传导机制
目的探讨晚期糖基化终产物(AGE)诱导单核细胞产生白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)的细胞内信号传导机制.方法采用密度梯度离心法分离健康成人外周血单核细胞,经AGE修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)刺激后,用 ELISA法检测培养上清中IL-1β、TNF-ɑ水平,用化学发光法测定活性氧的生成;免疫细胞化学染色及凝胶迁移电泳(EMSA)法观察核因子-κB(NF-κB/p65)的激活.分别用抗AGE受体(RAGE)抗体、NADPH氧化酶特异性抑制剂apocynin和p38通路抑制剂SB 203580预处理单核细胞,观察对AGE-HSA诱导细胞因子和活性氧产生的影响.结果 AGE-HSA与单核细胞在体外共同培养后,细胞内NF-κB激活,培养上清中IL-1β、TNF-ɑ水平明显增高,活性氧生成增加;用抗RAGE抗血清或apocynin预处理细胞可阻断AGE-HSA诱导的活性氧生成(P<0.01),抑制NF-κB的活化并使培养上清IL-1β、TNF-ɑ显著降低(P<0.01).用SB 203580预处理细胞也可抑制AGE-HSA诱导的NF-κB激活及IL-1β、TNF-ɑ的产生,但对活性氧的产生无明显影响 (P>0.05).结论 AGE通过RAGE介导的途径刺激单核细胞生成IL-1β、TNF-ɑ和活性氧,NADPH氧化酶途径可能是RAGE细胞内信号途径的上游,而AGE诱导的细胞因子生成依赖于p38磷酸化.
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长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用
目的:分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用.方法:用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况, 荧光分光光度计检测活性氧,电子自旋共振波谱仪检测自由基.结果:110～120 kJ*m-2的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡,甘露醇能够拮抗这种作用, 照射样品中发现活性氧生成增加,并检测到了羟自由基信号.结论:低辐照度UVA(0.6 mW*cm-2)照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用.
关键词： 紫外线 凋亡 成纤维细胞/放射效应 活性氧组分 -
抗氧化剂改善冻融人精子氧化应激性DNA损伤的研究
目的 探讨抗坏血酸盐、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)对冻融人精子氧化应激性DNA损伤的可能保护作用.方法 30份健康可生育男性精液分别添加改良人精子冷冻保护液,依所添加的抗氧化剂及终浓度分6组;检测各组冻融前后常规精子参数,精子核DNA完整性以及冻融后活性氧(ROS)水平.结果 (1)冻融后抗坏血酸盐300 μmol/L组与CAT 200 U、400 U组a+b级精子下降少于对照组(均P＜0.05),精子活率复苏率、ROS水平则分别高于和低于对照组(67%±14%、68%±14%、69%±15%vs 59%±10%,均P＜0.05;30±13、30±11、30±11 vs 37±17,均P＜0.05).(2)添加抗坏血酸盐300 μmol/L组,CAT 200 U、400 U组的彗星细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩与冷冻前相比,差异无统计学意义(P＞0.05);但分别低于对照组(41%±4%、40%±7%、40%±6%vs 46%±6%,均P＜0.01;7.7±1.2、7.5±1.6、7.8±1.9 vs 10.1±3.1,均P＜0.01).其余试验组上述指标则明显高于冷冻前(均P＜0.01),而与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).(3)冻融后各实验组a+b级精子与ROS水平有负相关性(P＜0.05或P＜0.01).除抗坏血酸盐600 μmol/L组外,其余试验组尾部DNA%、Olive尾矩则分别与其对应组ROS有显著正相关性(P＜0.05、P＜0.01).结论 在精液冷冻保护剂中添加一定浓度的抗坏血酸盐、CAT可减少冷冻产生的过量ROS,进而减轻后者对精子核DNA的氧化应激性损伤,从而提高冻融人精子质量.
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α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α诱导的人内皮细胞血红素氧化酶1基因表达及胞质游离钙水平的影响
目的 探讨α-玉米赤霉醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血红素氧化酶I(HO-1)表达及胞质游离钙水平的影响及其作用机制.方法 用小分子RNA干扰(siRNA)技术消除HUVEC的NADPH氧化酶p47~(phox)亚基;用分子探针2,7-DCF测定细胞内活性氧(ROS)的产生量;用RT-PCR测定HO-1 mRNA的表达以及用细胞免疫组化方法测定HO-1蛋白的表达;以Fluo-3/AM为探针,用激光共聚焦显微镜测定胞质游离钙整体水平的变化.结果 TNF-α刺激使细胞内ROS的产生量较对照组增加了,155%(228.3±50.6比89.4±23.7,P<0.05);α-玉米赤霉醇预处理旱剂依赖地抑制TNF-α对ROS的诱导效应;p47~(phox)的siRNA完全阻断TNF-α诱导ROS的产生.TNF-α刺激使细胞内HO-1的mRNA表达水平较对照组增加了145%(0.88±0.10比0.36±0.11,P<0.01),蛋白的表达也明显增加;α-玉米赤霉醇预处理呈剂量依赖地抑制TNF-α对HO-1 mRNA表达的诱导效应;α-玉米赤霉醇预处理及转染p47~(phox)的siRNA均明显降低TNF-α诱导的HO-1蛋白的表达.TNF-α刺激使内皮细胞胞质游离钙整体水平比对照组增加179%(107.3±4.9比38.5±0.6,P<0.01);α-玉米赤霉醇预处理及转染p47~(phox)的siRNA分别使TNF-α诱导的胞质游离钙水平降低46%(58.5±0.3比107.3±4.9,P<0.01)及57%(46.3±2.1比107.3±4.9.P<0.01).结论 ROS仅部分介导TNF-α对HUVEC中HO-1表达的诱导作用,α-玉米赤霉醇主要通过抑制NADPH氧化酶途径产生的ROS而降低TNF-α诱导的HO-1表达及胞质游离钙水平增加.
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中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制
目的 研究中性粒细胞弹力蛋白酶(NE)通过表皮生长因子受体(EGFR)引起黏蛋白(MUC)5AC高表达的上游信号通路.方法 培养人气道BEAS-2B上皮细胞,给予NE刺激,以肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1(TAPI-1)及活性氧(ROS)清除剂DMTU为干预因素.RT-PCR检测干预前后细胞中MUC5AC mRNA含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测培养上清中MUC5AC、可溶性转化生长因子(TGF)-α蛋白含量;Western印迹分析磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白水平.结果 NE刺激后引起MUC5AC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组(P＜0.01),同时伴随可溶性TGF-α及p-EGFR蛋白水平的增高,与对照组相比,差异有统计学意义(均P＜0.01);加入浓度为20 μmol/L的肿瘤坏死因子转换酶抑制剂TAPI-1后可明显下调上述指标的表达水平(均P＜0.01),DMTU也同样降低了MUC5AC的基因转录、产物水平以及可溶性TGF-α蛋白相对含量,与单纯NE刺激组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但对单纯外源性TGF-α刺激组引起的MUC5AC基因转录和蛋白合成增加无明显作用(均P＞0.05).结论 NE能刺激细胞产生ROS,再活化肿瘤坏死因子转换酶(TACE)引起黏蛋白产生的增多,组成EGFR通路上游的主要信号分子,故ROS/TACE/TGF-α前体/EGFR转导途经是NE引起气道黏液高分泌的重要机制.
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绿原酸诱导肺癌细胞凋亡及其机制研究
目的 研究绿原酸对人肺癌A549细胞凋亡的作用及其机制,为临床应用提供依据.方法 四氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的绿原酸对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧水平的变化;分光光度法检测绿原酸对表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase,EGFR-TPK)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和氨肽酶N(aminopeptidase,APN)活性的变化.结果 MTT法检测显示,绿原酸在24h、48 h和72 h时均可抑制A549细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性关系趋势;绿原酸作用48 h后,细胞凋亡率呈现明显增高的趋势,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01);在100.μg/ml质量浓度的绿原酸作用下使细胞内活性氧(ROS)百分率达到了(42.32±3.3)％,与对照组相比比较差异有显著性(P＜0.01);绿原酸对APN、EGFR-TPK和MMP-2半数抑制浓度(IC50)分别为(8.12±0.78)、(29.43±2.76)和(1.54±0.13)μg/ml,显示出了较好的抑制效果.结论 绿原酸可以抑制A549的增殖和转移,促进细胞凋亡,其凋亡机制可能与细胞内活性氧组分的增多及APN、EGFR-TPK和MMP-2活性降低有关.
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活性氧在4-HPR诱导膀胱癌细胞T24凋亡中的作用
目的研究4-HPR诱导的膀胱癌细胞凋亡,探讨DNA氧化损伤与修复在其中的作用.方法以4-HPR处理T24细胞后,检测其生长抑制情况,用荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)含量,用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况,用Western blot法检测DNA修复蛋白XRCC1的表达.结果4-HPR能诱导细胞发生凋亡,2.5、5.0、10.0μmol/L4-HPR引起的凋亡率分别达到1.8%、4.0%和10.5%,在此过程中伴随着细胞内ROS水平升高(高达到3倍),并使DNA修复蛋白XRCC1的表达下降,使caspase-3激活.抗氧化物质维生素C能有效地抑制4-HPR引起的ROS升高,并能部分抑制其引起的细胞生长抑制、凋亡及XRCC1蛋白表达的下降.结论ROS的生成并造成DNA损伤可能是4-HPR诱导膀胱癌细胞凋亡的主要机制.
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噪声对豚鼠耳蜗抗氧化酶防御体系的影响
目的了解噪声对耳蜗抗氧化酶防御体系的影响.方法雄性花色豚鼠16只,体重250～300g,随机分为2组,正常对照组和噪声暴露组,每组8只.噪声暴露组接触中心频率为4 kHz的倍频程连续噪声,强度为100dB(SPL),每天8 h,连续3 d.于接触噪声前、噪声暴露结束后即刻测定听觉诱发脑干反应(ABR),并测定活性氧(ROS)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力.结果噪声暴露组的ROS水平为(281.2±3.5)U/mg pro,正常对照组为(273.0±3.2)U/mg pro,差异有显著性(P＜0.05),SOD、CAT及GSH-Px活力分别为(206.5±5.1)NU/mg pro、(47.0±9.0)U/g pro、(14.1±2.5)U/mg pro,比正常对照组[分别为(221.8±4.8)NU/mg pro、(60.8±9.9)U/g pro、(21.1±3.1)U/mg pro]明显降低,且差异有显著性(P＜0.05).结论噪声可以损伤耳蜗的抗氧化酶防御体系.
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电磁脉冲对BV-2细胞形态和分泌功能的影响及其机制探讨
目的 研究电磁脉冲( electromagnetic pulse,EMP)对小鼠BV-2小胶质细胞形态及分泌功能的影响,并初步探讨其作用机制.方法 离体培养的BV-2细胞经200 kV/m EMP辐照200次,分别在辐照后1、6、12、24h收集细胞培养上清及细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10等细胞因子水平的变化,硝酸还原酶法检测培养上清中一氧化氮(NO)水平,DCFH-DA探针检测活性氧,免疫印迹(Western-blot)法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、c -Jun氨基末端激酶(JNK)、p38磷酸化水平和蛋白表达量的变化.应用p38抑制剂( SB203580)预处理细胞后再进行EMP辐照,然后检测培养上清中NO水平和活性氧的生成.结果 EMP辐照后1、6和12h,部分小胶质细胞出现胞体变大、突触变粗变短,且活化细胞比例与假辐照组相比明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；EMP辐照后细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-10等细胞因子水平未发生明显改变,但活性氧检测结果显示,与假辐照组(小胶质细胞平均荧光强度10.34)相比,EMP辐照后1h小胶质细胞荧光强度(平均荧光强度21.56)明显增加,6h达峰值(平均值为32.46),12h开始恢复(平均荧光强度24.36),差异均有统计学意义(P＜0.05),24h恢复至假辐照水平；EMP辐照后NO水平的变化与活性氧一致,辐照后1h开始增加,6h达峰值,12h开始恢复,24h恢复至假辐照组水平；蛋白杂交结果显示,EMP辐照后1、6h,p38的磷酸化水平和蛋白水平较假辐照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),ERK和JNK无明显变化.应用p38抑制剂SB203580预处理细胞,明显抑制了EMP诱导的小胶质细胞对活性氧和NO的产生,活性氧水平除6h组未恢复至假辐照水平外,其他各组均恢复至假辐照水平,NO水平各组均恢复至假辐照组水平.结论 EMP辐照可活化小胶质细胞并且促进其对NO和活性氧的生成,p38信号通路参与了此过程.
关键词： 电磁场 神经胶质细胞 活性氧组分 一氧化氮 有丝分裂素激活蛋白激酶类 -
活性氧在MEHP致大鼠离体心脏损伤中的作用
目的 观察邻苯二甲酸二乙基已酯(MEHP)对大鼠离体心脏的损伤作用及其机制探讨.方法 将35只SD大鼠随机分为对照组,3.125、6.250、12.500和25.000 μmol/L MEHP组,5 mmol/LNAC+12.500 μmol/L MEHP组,5 mmol/L NAC+ 25.00 μmol/L MEHP组,每组5只.应用Langendorff大鼠离体心脏灌流技术,采用PL3508数据采集分析系统连续记录给予灌流液后0、5、10、15、20、25 min这6个时间点处心率、左心室发展压(LVDP)、左室内压大上升速率(dp/dtmax)、左室内压大下降速率(dp/dtmin)及初始左心室舒张末压(LVEDP)并进行分析.生化法测定心脏流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;部分左心室组织用于组织病理学检查;DCFH-DA标记法检测不同组心肌细胞活性氧(ROS)水平.结果 病理结果显示,与对照组比较,MEHP组心脏组织出现明显的水肿、炎性细胞浸润及心肌细胞坏死.与各自0 min时心率值比较,随着MEHP浓度的增加,心率下降,且不同浓度间两两比较,心率呈现浓度依赖性下降,差异有统计学意义(P＜0.05);6.250、12.500及25.000 μmol/L MEHP灌流使大鼠离体心脏LVDP、dp/dtmax和dp/dtmin均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),并且这种降低随灌流时间的延长而更加明显;而LVEDP在6.250、12.500及25.000 μmol/L MEHP灌流时明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);3.125 μmol/L MEHP灌流时dp/dtmin在第10 min和15 min时明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).心脏流出液中LDH随MEHP浓度的增加而升高.心脏组织ROS水平随着MEHP浓度的增加而明显升高.而给予抗氧化剂NAC,除心率外,NAC可部分拮抗MEHP所致的心肌收缩舒张功能、心脏流出液中LDH含量及病理改变.结论 MEHP可引起大鼠离体心肌损伤,其机制可能与活性氧有关.
关键词： 邻苯二甲酸二乙基已酯 活性氧组分 心率
