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血脂与动脉粥样硬化
1 引言动脉粥样硬化(AS)是指发生在弹力型动脉(如主动脉)以及肌肉型动脉(如冠状动脉)壁内膜及内膜下,因脂质(主要是胆固醇和胆固醇酯)沉着并伴有中层平滑肌细胞向内膜移行、增殖,形成纤维脂质斑块或粥样病灶.动脉壁增厚,血管变硬,管腔狭窄,严重时局部斑块内膜坏死脱落,血栓形成,血管腔阻塞.AS是中老、年人心、脑血管病变的重要病理过程.
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脂肪肝的饮食调理
因为疾病或药物等因素导致肝细胞内脂质积聚超过肝湿重的5％,我们称之为脂肪肝.肝内积聚的脂质由于病因不同可以是三酰甘油、脂肪酸、磷脂或胆固醇酯等,其中以三酰甘油为多.根据脂肪含量,可将脂肪肝分为轻型(含脂肪5％～10％)、中型(含脂肪10％～25％)、重型(含脂肪25％ ～ 50％或＞30％)3种类型.
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HPLC法测定RAW264.7源性泡沫细胞中胆固醇酯的含量
目的:建立测定细胞内胆固醇及胆固醇酯含量的高效液相色谱法(HPLC),以精确鉴定泡沫细胞含量,为研究细胞内胆固醇的变化提供技术平台.方法:应用HPLC法测定氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)和不同浓度的普伐他汀处理RAW264.7鼠源单核细胞源性巨噬细胞中胆固醇酯的含量.结果:OX-LDL可显著增加细胞对酯质的摄取量(P<0.01),而普伐他汀能通过降低细胞内胆固醇水平而减轻细胞泡沫化程度,且呈浓度、时间依赖性(P<0.05,P<0.01).结论:本研究建立的测定细胞内胆固醇及胆固醇酯含量的HPLC法可用来鉴定泡沫细胞的泡沫化程度.
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β-葡聚糖对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响及机制
目的：探讨β-葡聚糖对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响及相关机制。方法采用氧化低密度脂蛋白（oxLDL）诱导的RAW264.7巨噬细胞为泡沫细胞模型，给予β-葡聚糖进行干预。通过油红O染色及酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯水平的变化；采用Western blotting及实时定量PCR检测β-葡聚糖对巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）及其mRNA表达的影响并进行统计分析。同时采用蛋白合成抑制剂放线菌酮（CHX）处理细胞4、8、12 h测定ABCA1稳定性。结果与oxLDL处理组比较，β-葡聚糖对巨噬细胞摄取脂质的抑制率为（90.0±1.8）%， oxLDL处理组巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇酯及总胆固醇与β-葡聚糖处理组（2.5、5.0、10.0μg/mLβ-葡聚糖+oxLDL共同孵育）比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；5.0、10.0μg/mLβ-葡聚糖处理组巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及其mRNA表达与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01或0.05）。β-葡聚糖（10.0μg/mL）与CHX共同处理组在细胞孵育4、8、12 h时，ABCA1降低水平均小于CHX处理组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论β-葡聚糖通过增加ABCA1的表达水平及增强其稳定性，促进细胞内胆固醇的排出，终抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成。
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枸杞多糖对泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激作用机制的研究
目的 研究枸杞多糖(LBP)对单核细胞源性泡沫细胞泡沫化与胆固醇酯流出的影响及内质网应激的作用机制.方法 原代培养单核细胞源性泡沫细胞后,用50、100、200 μg· mL - LBP孵育72 h,油红O染色法检测泡沫细胞的数量；用荧光分光光度法分析细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量；用酶联免疫吸附法检测细胞中氧化低密度脂蛋白( ox - LDL)及内质网应激蛋白(Grp78,CHOP,Xbp-1)的含量.结果 LBP可减少泡沫细胞的形成和细胞内TC、FC、CE的含量,固时可降低细胞内ox - LDL与内质网应激蛋白的含量(P ＜0.05,P＜0.01).结论 LBP通过降低ox - LDL及内质网应激蛋白的含量引起泡沫细胞内胆固醇的含量下降从而发挥抗动脉粥样硬化的作用.
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脂蛋白 (a)与巨噬细胞内脂质聚积关系的研究
目的: 泡沫细胞形成是早期动脉粥样斑块的典型特征 . 本文通过对脂蛋白 (a)[lipoprotein(a), Lp(a)]与巨噬细胞的相互作用进行研究 , 探讨 Lp(a)与泡沫细胞形成的关系 . 方法: 经生物素 - 亲和素 - 酶联法测定不同浓度生物素标记的天然及氧化型 Lp(a)与小鼠腹腔巨噬细胞表面的结合量 . 天然及氧化型 Lp(a)与小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育后 , 酶法测定细胞内胆固醇及胆固醇酯含量的变化 . 结果:天然的 Lp(a)能以一定的亲合力、可饱和的与巨噬细胞表面结合 , 氧化修饰后 Lp(a)与巨噬细胞的结合量显著增加 . 天然及氧化型 Lp(a)均能引起巨噬细胞的过量摄取 , 导致细胞内胆固醇含量增加 , 其中以氧化型 Lp(a)的作用更为显著 . 与氧化型 Lp(a)孵育后 , 巨噬细胞内胆固醇含量的增加是与天然 Lp(a)孵育后的 2. 5倍 , 而胆固醇酯的含量增加是与天然 Lp(a)孵育后的 6. 1倍 . 结论:Lp(a)能与巨噬细胞表面特异性结合 , 并促使细胞对其吞噬、降解 ; 且巨噬细胞对氧化型 Lp(a)的结合、摄取量显著增加 .
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分枝菌酸诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定
目的 探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性.方法 将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100) μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24、48、72 h、5d和8d后,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定各组泡沫细胞内胆固醇酯的含量,采用MTT法检测细胞增殖水平.结果 当包被MA浓度为75 μg/mL、吞噬时间为24 h时,RAW264.7能形成典型的泡沫细胞,其细胞内胆固醇酯相对含量为60.98％±1.32％;随着吞噬时间延长,形成泡沫细胞所需的MA的浓度逐渐递减;且随着细胞泡沫化程度增加,细胞增殖活力逐渐减弱.结论 MA包被聚苯乙烯微球可快速诱导巨噬细胞形成泡沫细胞,MA浓度与细胞泡沫化程度呈正相关,且有时间依赖性.
