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大鼠脂肪间充质干细胞体外转染为胰岛素分泌细胞的实验研究
目的 探讨脂肪间充质干细胞(ADMSCs)体外转染成为胰岛素分泌细胞的可能性及其在不同浓度葡萄糖环境下的胰岛素分泌情况.方法 以未转染的ADMSCs作为对照组,含有PcDNA3.1的ADMSCs作为空载体组,含有PcDNA3.1-hINS的ADMSCs作为重组载体组,转染后再将重组载体组根据培养时间不同分为1、6、12、18 d组,并将重组载体18 d组根据葡萄糖浓度的不同分为高糖组和低糖组.RT-PCR扩增人胰岛素基因,并构建含有人胰岛素基因的真核表达重组载体PcDNA3.1-hINS.经离心消化法获得ADMSCs,并通过流式细胞仪检测.瞬时转染,RT-PCR测各组胰岛素DNA的转录,ELISA法检测各组胰岛素分泌量,并对重组载体18 d组行葡萄糖刺激实验,计量资料以x±s表示,多组间的比较采用方差分析,两组比较采用t检验.结果 流式细胞仪检测ADMSCs表面抗原:CD44、CD90、CD106表达阳性,CD34、CD45、CD11b表达阴性.RT-PCR法检测重组载体组有胰岛素DNA转录,对照组和空载体组均无转录.ELISA法检测重组载体1、6、12、18 d组胰岛素分泌量分别为(4.7±0.8)mIU/L、(8.8±0.5)mIU/L、(8.9±0.8) mIU/L、(8.6±0.6) mIU/L,与对照组的(1.3±0.6) mIU/L和空载体组的(1.7±0.8)mIU/L分别比较,差异均有统计学意义(t=10.09,32.64,22.20,55.53；9.23,27.56,19.43,51.25,P＜0.05)；重组载体1d组与6、12、18 d组的胰岛素分泌量分别比较,差异有统计学意义(t=12.77,12.26,13.93,P＜0.05)；而6、12、18 d组间的胰岛素分泌量比较,差异无统计学意义(F=45.67,P＞0.05).高糖组和低糖组胰岛素分泌量比较,差异有统计学意义(t=2.03,P＜0.05).葡萄糖刺激实验阴性.结论 ADMSCs成功转染为胰岛素分泌细胞,并可以稳定分泌胰岛素,虽然胰岛素分泌量不能根据葡萄糖的浓度改变而改变,但仍为干细胞治疗糖尿病提供了一种新的种子细胞.
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脂肪间充质干细胞的研究进展及临床展望
1 引言目前干细胞的来源主要有两种,即胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)和成体干细胞(adultste cells,ASC).ESC由于涉及伦理道德及对其分化能力控制等各方面问题,目前各国对ESC研究普遍持谨慎态度;而ASC存在取材困难,获得率低(约1×105骨髓间质细胞方能获取一个间充质干细胞)[1]等不利因素其临床应用前景也明显受到限制.在此情况下,人们从人脂肪组织抽吸物中获得了一种成纤维细胞形态的细胞群[2],具有取材容易,获得率高,自我更新能力与多向分化潜能类似ASC等优势,因而有望成为组织工程和基因工程中新的干细胞来源,并且具有较好的临床应用前景.
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混合共培养条件下骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞成骨性能分析
目的 探讨混合共培养条件下骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)和脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC)成骨分化潜能变化.方法 无菌条件下获取BMSC和ADSC,纯化后倒置显微镜下观察细胞形态,对两种细胞分别进行成脂肪诱导、成软骨、成骨诱导,分别利用油红O染色、甲苯胺蓝染色、茜素红染色进行鉴定.实验分四组:A组:BMSC+ ADSC未诱导(BMSC∶ADSC=1∶1);B组:BMSC诱导组;C组:ADSC诱导组;D组:BMSC+ ADSC诱导组(BMSC∶ADSC=1∶1).诱导组采用成骨诱导液进行成骨诱导,体外培养14d后Real-time PCR检测骨钙素(osteocalcin,OCN)及Runt相关转录因子2(Runx-2)基因表达情况,以及通过Western-blot法检测OCN及Runx-2蛋白表达情况.结果 两种细胞在体外诱导后油红O染色、甲苯胺蓝染色、茜素红染色均为阳性,q-PCR结果显示D组OCN及Runx-2表达量明显高于A、B、C组(P＜0.05),Western-blot结果显示OCN及Runx-2蛋白表达量D组明显高于其他三组P＜0.05).结论 BMSC与ADSC在体外混合共培养条件下可促进干细胞的成骨性能.
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无血清诱导脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的实验研究
目的 探索无血清诱导脂肪间充质干细胞分化为雪旺细胞的方法.方法 取大鼠双侧睾丸周围脂肪组织,分离培养原代脂肪间充质干细胞,CD90、CD44和CD45流式鉴定.将脂肪间充质干细胞分成两组,实验组无血清诱导培养,对照组有血清诱导培养.采用雪旺细胞化学诱导因子逐步诱导2周,比较形态学变化以及细胞免疫荧光S-100和GFAP阳性率.结果 分离的脂肪间充质干细胞相关的CD90和CD44表达阳性,CD45表达阴性.诱导后两组形态学相似,实验组S-100、GFAP阳性率与对照组比较无明显差异(P＞0.05).结论 无血清诱导培养可作为诱导脂肪间充质干细胞向雪旺细胞分化的方法.
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人自体脂肪间充质干细胞治疗骨关节炎的临床研究
目的 探讨人自体脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)复合玻璃酸钠、富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)注射治疗膝关节骨关节炎的安全性和有效性.方法 取人腹部脂肪组织,分离获取AD-SCs,经体外培养获得足量的ADSCS,并以流式细胞仪检测其表面标志物,分析成软骨细胞分化能力.选择咸阳市第一人民医院骨科中心门诊30例膝关节轻中度骨关节炎患者,关节腔内注射人ADSCs复合玻璃酸钠、富血小板血浆,评价观察干预前、后的患者是否有不良反应以及膝关节活动度的评分、疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、核磁共振下膝关节面.结果 人腹部脂肪组织分离出来的ADSCs均阳性表达CD105、CD29,阴性表达CD45、CD34,体外具有良好的成骨、成脂、成软骨能力;临床治疗干预后患者无不良反应,膝疼痛减轻,关节活动度较前增大,核磁共振可见关节面斑片状影较治疗前显著减少,低信号区显著减少,未见明显关节腔积液,关节面厚度增加.结论 关节腔注射ADSCs复合玻璃酸钠、富血小板血浆治疗骨关节炎能有效改善患者膝关节活动度,减少疼痛,提高生活质量,通过核磁共振发现关节面厚度增加,延缓关节退化.
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脂肪间充质干细胞向成骨细胞分化的研究进展
脂肪间充质干细胞因其具有良好的成骨分化潜能，且较骨髓间充质干细胞有提取技术简单、来源广泛等优点。然而随着应用增多，其存在的问题日益突出，如佳成骨分化浓度、分离纯化、致瘤性及安全性等问题还有待进一步解决。脂肪间充质干细胞的应用与研究逐渐受到重视，但同时存在诸多问题。本文就脂肪间充质干细胞的分离培养、生物学特性和临床应用进行综述。
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大鼠脂肪间充质干细胞移植治疗急性放射病的安全性
目的：探讨急性放射性大鼠经静脉输注异体脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs)后的安全性。方法：SPF级雄性SD大鼠45只，随机分为空白对照组，照射对照组和照射移植组，每组15只。体外分离培养大鼠脂肪间充60质干细胞，照射对照组与照射移植组大鼠经 Co治疗机一次性7 Gy剂量全身照射后，照射移植组大鼠按10 mL/kg尾静脉注射脂肪间6充质干细胞，细胞浓度为1×10/mL；空白对照组和照射对照组注射等体积的无菌生理盐水。分别于照射后16和34 d进行血液学、血液生化学和组织病理学检查。结果：移植组大鼠体质量、血常规、血液生化与照射对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；移植组大鼠脏器病理学观察与照射组、空白对照组相比无明显差别；未见移植组大鼠出现急慢性移植物抗宿主病反应。结论：急性放射性大鼠异体静脉输注脂肪间充质干细胞是安全可行的，对受者无不良影响。
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PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景
1型糖尿病主要是由于胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏引起，胰岛β细胞无法再生，也不能进行异种移植，干细胞移植是治疗糖尿病的新型方法。已有研究证实了脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells, ADSC）能够被诱导分化成胰岛素分泌细胞，也有研究显示了胰十二指肠同源盒基因-1（PDX-1）可诱导非胰岛分泌细胞如骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞等向胰岛素分泌细胞分化，提示PDX-1在改善胰岛β细胞再生和促进胰岛细胞恢复中有着巨大潜能。本文就当前 PDX-1基因提高脂肪间充质干细胞分化为胰岛分泌细胞能力的研究前景作一综述。
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脂肪间充质干细胞移植治疗1型糖尿病
1型糖尿病严重威胁人类健康，胰岛细胞移植可为机体提供正常的胰岛组织细胞，替代体内已被疾病破坏的胰岛细胞，从而维持正常的血糖水平，达到阻止或延缓并发症的发生，为胰岛素依赖的糖尿病带来新的治疗方案。随着干细胞研究的深入，间充质干细胞诱导后移植治疗1型糖尿病取得了进一步的发展，当然随着研究的深入发现了许多亟待解决的问题，即便如此，脂肪间充质干细胞诱导后移植为临床治疗1型糖尿病带来了新的希望，并指明了方向。
