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Racl在心房颤动中的作用研究进展
心房颤动(房颤)是常见的持续性心律失常,房颤总的发病率为0.4%,随着年龄增长房颤的发生率不断增加,75岁以上人群可达10%.房颤时心房激动的频率达300～600次/分,心跳频率往往快而且不规则,有时候可以达到100～160次/分,不仅比正常人心跳快得多,而且绝对不整齐,心房失去有效的收缩功能.
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IL-8对肺癌NCI-H157细胞增殖和迁移的影响
目的 研究IL-8对肺癌细胞增殖和迁移的影响,初步探讨IL-8调控肺癌细胞的分子机制.方法 体外培养肺癌NCI-H157细胞,用不同浓度的IL-8刺激肺癌细胞,分别用MTT法检测IL-8对肺癌细胞的增殖作用;划痕损伤实验和Transwdl小室两种方法检测肺癌细胞的迁移能力;Western blot检测Rac1和Cdc 42蛋白的表达变化.结果 IL-8促进NCI-H157细胞增殖,但随浓度增加,细胞增殖活性差异无统计学意义;细胞划痕损伤和Transwell实验均表明IL-8可诱导NCI-H157细胞迁移,且具有浓度依赖性;Western blot结果显示,随着IL-8浓度增加,Rac1和Cdc 42的表达水平逐渐升高,以Cdc42变化为显著.结论 IL-8可促进肺癌细胞增殖和迁移,可能与Rac1和Cdc42表达有关.
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艰难梭菌毒素A对K562细胞Rho GTPases及细胞骨架的影响
目的:研究艰难梭菌毒素A(TcdA)对白血病K562细胞株Rho GTPase及细胞骨架的影响.方法:体外培养K562细胞经不同浓度的TcdA处理,采用四唑蓝比色试验(MTT)检测TcdA对K562细胞增殖的影响;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞骨架调节蛋白相关基因cdc42、RhoA、Rac1 mRNA表达的变化;激光共聚焦显微镜观察TcdA作用48h后细胞微丝的变化.结果:TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率(IR)为47.67％,TcdA可下调细胞骨架调节蛋白相关基因cdc42、RhoA、Rac1 mRNA表达,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05).激光共聚焦显微镜显示,TcdA处理后细胞内微丝含量下降.结论:艰难梭菌毒素A可抑制白血病细胞株K562增殖,其作用机制可能与Rho GTPase通路蛋白相关基因的表达下降,微丝形成受抑相关.
关键词： 艰难梭菌毒素A K562细胞 RhoGTPases Rac1 细胞骨架 -
Rac1在HL-60细胞中的表达及其对细胞周期和凋亡的影响
本研究旨在观察Rac1在急性白血病细胞系HL-60中mRNA的表达水平及其对细胞周期和凋亡的影响.采用半定量RT-PCR方法检测HL-60细胞及正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中Rac1 mRNA表达水平;用脂质体FuGENE6法将Rac1特异性反义寡核苷酸(ASODN)转入HL-60细胞,应用MTT试验检测细胞存活率;采用流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化、Wright-Giemsa、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)及Annexin V-FITC/PI染色检测凋亡细胞.结果表明:Rac1在HL-60细胞系中相对含量(Rac1/GAPDH)为0.84±0.13,在正常PBMNC中相对含量为0.26±0.1(P＜0.01),Rac1在HL-60细胞中的表达明显高于PBMNC.与正义链(SODN)组相比,经2.0g/L Rac1特异性ASODN作用48小时后,HL-60细胞存活率降低[(73.7±5.0)%vs(93.2±3.0)%,P＜0.01],G1期细胞百分数升高[(52.1±6.8)%vs(31.6±4.7)%,(P＜0.05)],Annexin V阳性率升高[(19.2±2.1)%vs(4.1±1.7)%,(P＜0.01)],凋亡小体明显增加.结论:白血病细胞系HL-60中高表达的Rac1可能促进白血病细胞HL-60的过度增殖并抑制其凋亡.
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Rac1抑制剂对盐敏感性高血压肾损害大鼠转化生长因子β1及Ⅲ型胶原表达的影响
目的 通过观察Rac1抑制剂对盐敏感性高血压肾损害大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅲ型胶原表达的影响,探讨Rac1在盐敏感性高血压肾脏损害中可能的作用.方法 4～5周龄雄性SD大鼠30只,行左肾摘除术后存活的22只,随机选取6只作为对照组,予以皮下注射等量的植物油,饮用自来水.剩余16只制作高血压模型,每周皮下注射醋酸脱氧皮质酮(DOCA)油剂30 mg/kg,饮用1％NaCl盐水,持续到第8周,取造模成功的大鼠12只,随机分为模型组和干预组,每组6只.第9周开始干预组以NSC23766(Rac1抑制剂)0.1mg/(kg·d)皮下注射,模型组和对照组以等量的生理盐水皮下注射,持续4周.各组大鼠每周监测血压.于0、4、8、12周代谢笼收集24 h尿液检测24 h尿蛋白定量.实验结束处死大鼠,取右肾行HE染色观察肾小管组织学变化.Western blot检测肾组织中TGF-β1、Ⅲ型胶原蛋白及Rac1蛋白的表达.结果 模型组24 h尿蛋白定量较对照组增加[12周:(14.96±2.80)比(4.26±0.70)mg/24 h,P＜0.05];干预组较模型组下降[(6.74±0.96)比(14.96±2.80)mg/24 h,P＜0.05].HE染色结果显示,模型组肾小管及间质病理损伤明显,干预组则明显轻于模型组.Western blot结果显示,模型组肾组织中TGF-β1蛋白、Ⅲ型胶原及Rac1蛋白的表达较对照组明显升高(分别为0.79±0.08比0.47±0.04,0.68±0.05比0.39±0.03,0.45±0.03比0.21±0.02,均P＜0.05).与模型组比较,干预组上述3种蛋白表达则降低(分别为0.56±0.04比0.79±0.08,0.49±0.02比0.68±0.05,0.29±0.02比0.45±0.03,均P＜0.05).结论 Rac1参与了盐敏感性高血压大鼠的肾脏损害过程,其作用机制可能是通过TGF-β1通路的介导.
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Rac1对胰腺癌增殖的影响及其机制
目的:探讨RacGTP酶激活蛋白1(Rac GTPase activating proteinl,Racl)对胰腺癌细胞增殖的影响及其机制.方法:分别采用EDU和CCK-8(cell counting kit-8)方法检测Rac1对胰腺癌细胞增殖的影响；采用Western blot、免疫荧光等试验探讨Rac1 影响胰腺癌增殖的具体机制.结果:Rac1可以促进胰腺癌细胞的增殖,沉默Rac1或者Rac1特异性阻滞剂NSC23766可以抑制胰腺癌的增殖,且进一步的机制研究发现Rac1通过促进β-Catenin进入细胞核,上调wnt-β-Catenin信号通路靶基因c-m yc、c-jun和Cyclin D1的表达,进而促进胰腺癌细胞的增殖.结论:Rac1通过wnt-β-Catenin信号通路促进胰腺癌细胞的增殖.
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硫氧还蛋白对血管内皮细胞 Nox2通路调控的研究
目的：探讨动脉粥样硬化发生发展中硫氧还蛋白（Trx）对 NADPH 氧化酶 Nox2亚型的调控作用及机制。方法应用腺病毒感染的方法，在原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立高表达硫氧还蛋白（Ad-Trx）及其对照（Ad-GFP）的细胞模型，将致动脉粥样硬化重要危险因子氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作为刺激剂，应用免疫印迹法检测 Nox2、Rac1的表达及 Akt 的磷酸化；用免疫印记及免疫荧光的方法检验 Trx 在内皮细胞中的蛋白表达水平；DCFH-DA 法检测细胞内活性氧（ROS）水平；提取细胞膜组织，用酶学方法测定内皮细胞 NADPH 氧化酶的活性。结果免疫印记结果显示腺病毒感染在内皮细胞中成功上调了 Trx 的表达，与对照组相比上调了3.3倍（P＜0.01）。与对照组相比，过表达 Trx 明显下调了 ox-LDL 刺激下内皮细胞 Nox2、Rac1及 p-Akt 的表达（分别下调了31.5％、23.8％和20.8％，均为 P ＜0.05），抑制了 ox-LDL 诱导的 ROS 增加（25.3％，P ＝0.0247）及 NADPH 氧化酶活性增加（32.6％，P＝0.004）。结论过表达 Trx 通过减少 ox-LDL 刺激下内皮细胞 Nox2、Nox2结合蛋白 Rac1的表达及 Nox2下游信号分子 Akt 的磷酸化，抑制了内皮细胞 Nox2通路的过度活化及氧化应激，减轻炎症损伤，保护内皮细胞功能。
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Rab23基因在肿瘤中的研究进展
近年来,肿瘤发病率和死亡率呈上升趋势[¨.肿瘤的发生、发展是一个多因素、多步骤的变化过程.目前,其分子机制仍未研究透彻.Rab23属于小GTP酶,是Ras致癌基因家族的一名成员,位于染色体6p12.1,早是由Olkkonen等[2] 1994年从小鼠脑部分离得到.Rab23能够调节真核细胞的囊泡运输以及蛋白转运,其基因突变引起的功能缺失会导致一些先天性疾病的发生,如Carpenter综合征和史蒂文森-约翰逊综合征[3-4].近几年研究证实,Rab23在肿瘤的形成和发展中起到极其重要的作用[5].本综述探讨Rab23在肿瘤发生、发展中的作用及其在肿瘤的诊断、治疗以及预后中的应用前景.
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缺氧状况下Rho GTPases的表达和活性变化及其与肿瘤血管生成关系的研究
目的探讨Rho GTPases在缺氧状态下的表达和活性变化以及与缺氧诱导的肿瘤血管生成的关系.方法提取胃癌细胞AGS、SGC7901和肝癌细胞HepG2的总RNA,采用半定量RT-PCR检测缺氧状况下Rho GTPases家族分子的mRNA表达水平;应用Rho蛋白活性检测试验进一步检测其活性;Western blot检测肿瘤血管生成相关分子HIF-1α、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、p53和PTEN的表达水平.结果缺氧状况下,多种肿瘤细胞系中Rac1的mRNA表达水平均明显增高;Rac1活性迅速升高,约3 h达到高峰,且其活性与HIF-1α、VEGF呈正相关;而与p53、PTEN呈负相关.结论 Rho家族蛋白分子Rac1在缺氧诱导下被激活,且Rac1可能与缺氧诱导的肿瘤血管生成相关.
关键词： 缺氧 Rho GTPases Rac1 肿瘤血管生成 -
Rac1活化在大肠癌细胞SW480迁移侵袭中的作用
目的 研究Rac1的活化在大肠癌迁移侵袭中的作用.方法 对大肠癌SW480细胞株,分别导入活化的Rac1 L61重组体和对照用质粒;采用配体结合免疫共沉淀法通过Western blot检测细胞中活化Rac1的含量,进一步用Transwell小室研究具有不同活性Rac1的SW480细胞其迁移及侵袭能力.结果 SW480细胞的转染效率高达80%以上,配体结合免疫共沉淀结果显示,转染Rac1 L61重组体后Rac1的活性显著高于对照组;应用Transwell小室对SW480细胞迁移及侵袭能力研究时,发现Rac1活性高的实验组迁移及侵袭的细胞数显著高于对照组(迁移细胞数43±9:22±5,P＜0.01;侵袭细胞数73±13:38±1,P＜0.01).结论 Rac1的活化在大肠癌迁移侵袭中起重要的作用.
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Rac1基因对纤维肉瘤细胞侵袭胶原蛋白屏障的影响和机制研究
目的 体外研究外源Rac1基因表达对HT1080纤维肉瘤细胞侵袭胶原蛋白屏障的影响及其机制.方法 将转染显性负调控突变体Rac1V12N17(HN)、持续活化型Rac1V12(HV)或空载体(HW)纤维肉瘤HT1080细胞,在含胶原蛋白凝胶三维基质中培养,用得克萨斯红结合的鬼笔环肽染色显示细胞肌动蛋白骨架结构.用胶原蛋白凝胶薄膜覆盖滤膜的Transwell小室进行细胞侵袭胶原屏障实验,并观察2种蛋白酶抑制剂对上述细胞侵袭实验的影响.采用明胶酶谱法检测在三维基质中培养的上述转染细胞分泌型基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达和活化.结果 胶原蛋白凝胶中培养的HV和HN细胞在形态上表现出明显差异,前者有更多伪足样突起;HV细胞侵袭胶原屏障能力大于HW细胞,而后者又强于HN细胞,这种差别在应用广谱MMP抑制剂后消失,而抑肽酶则无影响;外源Rac1的表达促进胶原和纤维蛋白基质中培养的HT1080纤维肉瘤细胞分泌型MMP-2的表达和活化.结论 外源持续活化型Rac1基因在纤维肉瘤HT1080细胞内稳定表达,可诱导细胞内肌动蛋白聚集,增强细胞侵袭胶原屏障能力.Rac1表达促进MMP-2活化可能是其重要机制之一.
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Rac1在运动促进骨骼肌葡萄糖摄取过程中的作用研究进展
营养过剩和缺乏运动将引起肥胖、2型糖尿病(T2DM)等代谢性疾病的发生,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是众多代谢性疾病的重要病理生理学基础.目前普遍认为运动通过调节机体糖代谢可明显改善IR的症状,已被广泛应用于肥胖、T2DM、高脂血症等一系列代谢性疾病的防治,但目前对运动防治代谢性疾病的确切调节机制仍不完全清楚.新研究发现,哺乳动物组织细胞内重要信号转导因子Ras-相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)参与肌动蛋白细胞骨架重构,调节骨骼肌细胞葡萄糖转运体4(Glucose transporter 4,GLUT4)转位,在运动促进骨骼肌葡萄糖转运过程中发挥重要作用.本文对Rac1在运动促进骨骼肌组织葡萄糖摄取中的作用研究进展进行综述,以期为揭示运动防治代谢性疾病的机制提供理论依据.
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Rac1基因多态性在湖北汉族肾移植患者中的分布
目的 研究Rac1基因中7个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点在湖北汉族肾移植患者中的分布特点,为探讨Rac1基因多态性与肾移植患者使用嘌呤类药物效应的关联性提供依据.方法 应用实时荧光TaqMan-MGB探针等位基因分型技术,对湖北汉族194例肾移植患者和200例健康人群的Rac1基因7个单核苷酸多态性位点的基因型进行分析,并对2种人群间的基因型与等位基因进行比较.结果 Rac1基因上所选的7个单核苷酸多态性位点均符合Hardy-Weinberg平衡,其中rs702482与rs836488,rs10951982与rs9374位点间存在高度连锁不平衡;筛选出5个标签单核苷酸多态性:rs836488、rs9374、rs6954996、rs12977、rs702483.结论 Rac1基因7个单核苷酸多态性位点的基因型及等位基因的分布,在肾移植患者和健康人群间无显著性差异.性别对基因型及等位基因的分布影响在统计学上无差异.
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侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子及Rho GTP酶的影响
目的 探讨侯氏黑散对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA表达的影响.方法 采取线栓法制备永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMACO)模型.大鼠采用数字表法随机分为假手术组、模型组、侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组.运用Western blotting法和RT-PCR法检测术后7d大鼠缺血侧皮质Netrin-1、DCC、Rac1、Cdc42、RhoA蛋白和基因的表达.结果 与模型组相比,侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠Netrin-1蛋白的表达明显升高(P＜0.01),侯氏黑散中剂量组大鼠Netrin-1基因的表达升高(P＜0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠DCC、Rac1、Cdc42蛋白和基因的表达明显升高(P＜0.05);侯氏黑散小剂量组、侯氏黑散中剂量组、金纳多组大鼠RhoA蛋白和基因的表达则明显下降(P＜0.01).结论 侯氏黑散通过对脑缺血大鼠神经导向因子Netrin-1/DCC和分子开关Rac1/Cdc42/RhoA的调节促进脑缺血后神经功能的修复.
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siRNA干扰Rac1表达对人品状体上皮细胞增殖和迁移能力的影响
目的 研究Rac1对人品状体上皮细胞SRA01/04增殖和迁移能力的影响,探究Rac1在后囊下混浊及囊袋皱缩综合征发生、发展过程中的作用.方法 将SRA01/04细胞分为Mock组和siRac1组,构建Rac1相关siRNA并瞬时转染于siRac1组细胞中,Western blot检测Rac1蛋白表达的变化,CCK检测细胞生长周期的变化,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡变化,Transwell检测Rac1对细胞迁移能力的影响.结果 两组72 h时吸光度值均高于24 h(P＜ 0.05),siRac1组48、72 h时吸光度值均低于Mock组(P＜ 0.05);与Mock组比较,siRac1组mRNA和蛋白相对表达量明显降低,G1期细胞所占百分率明显增高,S期细胞所占百分率明显降低,穿越基质膜的细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).F-actin染色结果显示,siRac1组细胞的伪足形成能力较Mock组减弱.结论 Rac1可能通过调节晶状体上皮细胞的增殖能力和迁移能力,影响后囊下混浊及囊袋皱缩综合征的发生、发展.
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T淋巴瘤侵袭诱导基因在卵巢癌细胞株的表达及其意义
目的研究T淋巴瘤侵袭诱导基因1(Tiam1)在卵巢癌侵袭转移方面的作用.方法 RT-PCR检测Tiam1和Rac1 mRNA的表达;Westem blot法检测Tiam1蛋白质的表达;Boyden小室体外侵袭实验测定癌细胞迁移能力.结果Tiam1 mRNA和蛋白质及Rac1 mRNA在4株卵巢癌细胞A2780、Caov3、Skov3及SW626中均呈中高度表达;癌细胞平均迁移百分数分别为(27.67±3.2)%、(10±1.0)%、(22.67±2.5)%及(47.67±1.52)%.Tiam1及Rac1表达水平与癌细胞迁移潜能间均呈显著性相关,r分别为0.874和0.814,P=0.003和0.042.结论Tiam1/Rac1信号转导通路在卵巢癌细胞的侵袭和转移过程中起重要作用,为卵巢癌的基因治疗提供了新的靶点.
关键词： T淋巴瘤侵袭诱导基因 Rac1 卵巢癌细胞 侵袭 转移 -
口腔鳞状细胞癌中Rac1和E-钙黏蛋白的表达及其相关性研究
目的 研究Rac1和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在口腔癌中的表达及其相关性,并探讨与口腔癌临床病理参数的关系.方法 采用免疫组织化学SP法对22例口腔癌及8例癌旁组织标本中Rac1和E-cadherin的表达进行检测.根据临床病理参数对患者进行分组,分析各组之间Rac1和E-cadherin的表达有无差异.结果 癌旁组织与癌组织中Rac1阳性表达率分别为1/8和77.3%(17/22),癌组织中Rac1阳性表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.003).癌旁组织与癌组织E-cadherin阳性表达率分别为8/8和31.8%(7/22),癌组织中E-cadherin阳性表达率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.002).Rac1和E-cadherin的表达在不同年龄、性别患者间差异无统计学意义,Rac1表达在肿瘤有无转移患者间差异有统计学意义(P=0.021),E-cadherin表达在肿瘤有无转移患者间差异无统计学意义.Rac1和E-cadherin在口腔癌中的表达无明显相关性.结论 Rac1蛋白高表达和E-cadherin蛋白低表达可能在口腔癌的发生发展过程中起关键作用.
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Rac1降低胶质瘤手术联合放化疗敏感性
目的：探讨胶质瘤术后放化疗敏感性与Rac1表达的关系。方法：选取我院胶质瘤患者30例，术中均留取标本，术后均经过常规放化疗治疗。PCR检测30例胶质瘤标本Rac1的表达量，并随访统计30例患者复发率。利用X2检验，分析胶质瘤中Rac1表达的高低与胶质瘤术后患者经放化疗治疗后复发率的关系。结果：Rac1高表达的胶质瘤患者经术后放化疗后复发率较Rac1低表达的胶质瘤患者明显增加，差异具有统计学意义。结论：Rac1高表达的胶质瘤术后放化疗敏感性降低。
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结直肠癌中Rac1的表达研究
目的 探讨Rac1蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义.方法 本研究拟采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(S-P法)联合检测75例结直肠癌组织中Rac1蛋白的表达.结果 正常大肠黏膜中Rac1蛋白的不表达,结直肠癌中Rac1蛋白的阳性表达率明显升高,阳性表达率为76％.Rac1蛋白高表达与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有显著关系(P＜0.05).结论 结直肠癌中Rac1蛋白表达上调.Rac1蛋白的高表达可能促进结直肠癌的侵袭和转移.
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RAC1和EMT与肿瘤的关系
近年来，Rac亚家族中Racl的研究颇多，研究中发现它在各种恶性肿瘤细胞中表达增高，并可通过各种途径诱导细胞发生EMT，而EMT是肿瘤细胞侵袭转移的早期阶段。因而Racl及EMT与肿瘤之间联系密切，本文对它们之间的关系做一综述。
