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乳胶层析法快速检测学生抗-HBs结果分析
近年来,检测乙肝两对半的实验方法主要还是ELISA法,但乳胶层析法由于可测血清和末梢全血、即采即测等优点,也越来越多被使用,特别是在学校大规模体检中,为节省人力而被使用.为了解该法检测结果的可靠性,现用该法与ELISA法同时对一所初中学校学生进行抗-HBs检测,并对结果进行分析比较,现报告如下.
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酶联免疫吸附法测定全血普乐可复浓度
目的 探讨酶联免疫吸附法(ELISA)测定全血普乐可复(FK506)浓度的准确性及其在器官移植术后抗排斥治疗中的应用.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)对27例肾移植术后患者不同时期全血中FK506谷值浓度进行监测,并结合临床调整剂量,分析该法准确性及对临床FK506应用的指导作用.结果 在256个血样的50次检测中,质控检测结果全部在控制范围内,高低浓度两个质控与文献报道一致.结论 ELISA法灵敏度高、特异性强,是一种较为理想的FK506血药浓度常规检测方法,适宜医院开展,是目前国内检测全血FK506浓度的首选方法.
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无偿献血者HIV初筛检测策略及确证结果对比分析
目的 采用酶联免疫检测(ELISA)和核酸检测(NAT)并行的模式,同时结合蛋白免疫印迹(WB)试验结果,全面评估酶联免疫检测和核酸检测在降低输血相关感染风险中的相关性.方法 统计2015年5月～2016年7月281例ELISA呈反应性标本,分析2种ELISA初筛试剂、NAT及WB检测结果.结果 ①ELISA初筛试验:281例标本中S/CO≥1的万泰试剂110例,伯乐试剂156例;S/CO值0.75～1.0中万泰试剂20例,伯乐试剂39例;②WB检测结果:阳性27例,不确定12例,阴性242例.初筛检测S/CO值在0.75～1.0的所有标本,经WB检测没有阳性结果;③NAT检测结果:49例核酸阳性,232例核酸阴性.结论 两种ELISA初筛试剂检测标本反应率不同,差异有统计学意义;ELISA方法的检测结果处于强反应性水平时,NAT及WB检测结果符合率较高,ELISA弱反应性标本中2种方法的符合率较低,减掉1遍ELISA对检测试剂和人员均提出了更高的要求.献血前的招募、征询工作应加强,确保从低危人群中招募献血者,确保临床用血安全.
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血站酶联免疫检测联合核酸检测降低输血传播疾病残余风险的效果分析
目的 采用酶联免疫检测联合核酸检测模式进行试验,全面评估这种检测模式是否能有效降低输血传播疾病的残余风险,从而为改进该检测模式提供依据.方法 对本市2013年1月1日-2014年12月31日无偿献血标本进行2遍酶联免疫检测,同时对酶联免疫检测结果为阴性和单试剂阳性的标本进行核酸检测,并分别进行统计分析.结果 酶联免疫检测共59 018份,不合格标本中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV抗原/抗体单试剂不合格标本数为398份,双试剂均为阳性的有193份;核酸检测57 318份,32份HBV DNA有反应性,总阳性率为0.9‰.结论 虽然在酶联免疫检测试验中,设置了“灰区”,但仍无法解决因病毒变异、隐匿性感染、“窗口期”等造成的漏检问题,因此,应采取酶联免疫检测和核酸检测相结合的模式进行试验才能有效降低输血传播疾病的残余风险.
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血站实验室酶联免疫检测性能验证方法的探讨
中国合格评定国家认可委员会(CNAS)明确要求申请ISO 15189认可的实验室必须对申请的检测系统进行性能验证,才能被受理认可[1].本实验室已经通过了ISO 15189,并分别对生化、酶联免疫和核酸检测系统进行了性能验证.早期已经对生化检测方法的性能验证进行了报道[2],本文主要讨论酶联免疫检测方法的性能验证.
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石杉碱甲多克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立
目的 制备珍稀药源植物蛇足石杉的活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及多克隆抗体,建立快速检测HupA的酶联免疫分析方法.方法 采用戊二醛法,将半抗原HupA与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备人工抗原HupA-BSA和包被抗原HupA-OVA.用HupA-BSA免疫新西兰大白兔,制备抗HupA的抗血清,通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测抗血清的效价和特异性.采用Protein A亲和层析法对抗血清进行纯化,以纯化后的多克隆抗体建立HupA的标准竞争抑制曲线.结果 合成的人工抗原HupA-BSA的偶联比为10.8∶1,免疫兔子得到抗HupA的抗血清,其效价为1∶64000,HupA的标准竞争抑制曲线为Y=0.215 1X-0.095 5(R2=0.987 3).结论 成功合成石杉碱甲人工抗原,经过免疫兔子制备抗石杉碱甲的多克隆抗体,建立HupA的酶联免疫检测方法.
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呼吸系统疾病患者血清PTPr含量分析
目的研究呼吸系统疾病患者血清PTPr含量及其意义.方法用ELISA法测患者血清PTPr,然后分组统计分析.结果48例肺癌PTPr含量(36.4±27.8)ng/ml,阳性(＞30ng/ml)32例(66.7%),十分显著高于以下各组(P＜0.001);肺结核病48例PTPr含量(7.9±14.1)ng/ml,阳性4例(8.3%);肺炎56例PTPr含量(11.6±16.6)ng/ml,阳性4例(7.1%);其他疾病54例PTPr含量(8.1±15.6)ng/ml,阳性4例(7.4%).结论肺癌患者血清PTPr含量显著增高.提示肺癌发生发展中信号传导分子活化增强;测定PTPr对肺癌诊断可能具有临床价值.
关键词： 磷酸酪氨酸蛋白(PTPr) 酶联免疫检测 肺癌 肺结核病 肺炎 -
核酸检测与酶联免疫检测血液病毒的对比观察
目的 分析核酸检测与酶联免疫检测血液病毒的临床价值.方法 选取我院2014年4月至2016年12月采集的100份血液标本,分别行核酸检测与酶联免疫检测,分析两种检验方法的检查结果.结果 核酸检测结果与病理诊断完全相符.两种检测方法对HCV、HIV的检出率组间差异不显著;核酸检测对HBV的检出率4.0％明显高于酶联免疫检测的0.0％(P<0.05).结论 核酸检测与酶联免疫对血液病毒的检出率相当,核酸检测在HBV检出方面更具优势.
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HIV酶免试剂在献血标本中检测效果评价
目的 评价HIV酶免试剂在献血标本中的检测效果,从而为检测试剂的选择和献血员屏蔽策略的制定提供依据.方法 统计该中心抗-HIV复检项目试剂转国产前3个月(2010年11月至2011年1月)和后3个月(2011年11月至2012年1月)再检率、反应重复率和不合格相对重合率并做配对t检验分析及2012年2月酶免全项目的再检率和反应重复率.结果 复检抗-HIV试剂转国产后稳定性明显下降,再裣率由0.20％提高至0.44％,反应重复率由76.3％降至51.4％,不合格相对重合率由47.5％降至19.6％ (P＜0.05).2012年2月再检标本结果显示初检单试剂阳性率低于复检试剂,初检试剂的再检率明显低于复检试剂.初检试剂稳定性整体好于复检试剂.结论 再检率和反应重复率可以反映检测系统(包括检测试剂)的稳定性,尽量选用稳定性高的检测试剂；酶免检测结果的影响因素极多,用“只要出现一次抗-HIV检测结果呈反应性就判不合格的标准规程”是不合理的.
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2种酶联免疫试剂和核酸同步筛查HIV的策略评价
目的 评价酶联免疫法(ELISA)第三代试剂、第四代试剂和核酸同步检测无偿献血者人类免疫缺陷病毒(HIV)的检测策略.方法 采用1种第三代、1种第四代ELISA试剂和1种核酸检测试剂分别对2016年1月至2017年6月无偿献血者血浆样本进行平行检测.初筛结果 为反应性的标本送检至确证实验室,采用免疫印迹法(WB)进行HIV-1抗体确证.结果第三代抗-HIV诊断ELISA试剂与WB的阳性符合率为72.11％;第四代抗-HIV诊断ELISA试剂与WB的阳性符合率为37.06％;核酸检测与WB的阳性符合率为93.04％;3种方法同步检测与WB的阳性符合率为100.00％.结论 使用ELISA第三代与第四代HIV筛查试剂和核酸同步检测可以提高筛查无偿献血者HIV的能力,降低经血传播HIV的风险.
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贵阳地区无偿献血人群HCV筛查的结果分析
目的 比较献血人群抗-HCV反应性、HCV核酸检测结果及HCV重组免疫印迹试验(RIBA)确证实验结果.方法 对2013年10月至2015年3月采集的无偿献血者血液标本,采用2个不同厂家的国产酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测和1个进口核酸检测试剂及配套检测系统对HCV进行筛查,对抗-HCV呈反应性或/和NAT检测阳性标本进行RIBA,将2种ELISA试剂检测反应性的结果与核酸检测结果、RIBA确证实验结果进行分析与比较.结果 共检测133 959例无偿献血者标本,其中覆盖核酸检测结果的标本113 380例,抗-HCV检测呈反应性标本比例0.19％(252/133 959),NAT检测阳性共27例,阳性检出的比例0.02％(27/113 380);HCV反应性标本经RIBA确证实验确证阳性的比例19.8％(50/252)、阴性的比例54.8％(138/252)、不确定的比例25.4％(64/252);27例核酸检测阳性的标本均为ELISA检测双试剂反应性和确证实验阳性;2家ELISA试剂检测结果、RIBA确证实验结果和核酸检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 选用2次ELISA+1次核酸检测的检测策略更为安全;针对较高比例的假阳性标本,应建立献血者跟踪随访制度,大限度地保留献血人群.
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杀虫剂残杀威人工抗原的制备及免疫效价检测
[目的]制备杀虫剂残杀威(propoxur)人工抗原以及免疫效价的检测.[方法]将杀虫剂残杀威,通过戊二醛法与载体鸡卵清蛋白OVA相偶联,所得的半抗原偶联物为免疫原,用紫外光谱、红外光谱扫描分析所制备的人工抗原,然后免疫小鼠检测效价.[结果]将制备的抗原免疫BALB/e小鼠,免疫后采血测其效价,即通过酶联免疫法(ELISA)检测免疫小鼠所产生的抗体,检测结果为阳性.[结论]小鼠产生独特型抗体.
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血液HIV、HBV和HCV筛查策略的探讨
目的 比较2种ELISA试剂加1种NAT试剂与1种ELISA试剂加1种NAT试剂筛查血液HBV、HCV、HIV的实验效果.方法 以126 457(人)份献血者标本为检测对象,采用A、B2种国产ELISA试剂平行检测其抗-HIV-1/2和抗-HCV,A、C2种国产的ELISA试剂平行检测HBsAg,以1种进口的NAT检测系统及配套试剂检测HBVDNA、HIV RNA和HCV RNA.对ELISA单试剂反应性、NAT阴性的标本做血清学确证试验,阳性者给予追踪随访.结果 在本组献血者标本中共检出ELISA单试剂反应性、NAT阴性标本的比例为2.78‰(352/126 457),血清学确证试验阳性率0.13‰(17/126 457),其中抗-HCV:A试剂反应性79例,确证试验(RIBA)阳性1例,随访3个月后仍为阳性;B试剂反应性36例,RIBA阳性4例,随访3个月后,4例中RIBA试验1例转为阴性,1例转为不确定,2例仍为阳性.HBsAg:A试剂反应性比例为0.88‰(112/126 457),确证试验(中和试验)阳性率0.09‰(11/126457),有8例实现成功随访,3个月后2例转为阴性,1例转为A和C双试剂反应性,但NAT阴性、中和试验阳性,5例仍为A试剂反应性及中和试验阳性、但4例NAT转为阳性;C试剂反应性比例0.03‰(37/126 457),中和试验阳性率0.01‰(1/126 457),3个月后随访仍为阳性.抗-HIV-1/2:ELISA单试剂反应性、NAT阴性比例为0.69‰(88/126457),确证试验(WB)均为阴性.HBsAg ELISA A试剂反应性、NAT阳性比例0.04‰(5/126 457);未检出抗-HIV-1/2、抗-HCV ELISA单试剂反应性伴NAT阳性标本.结论 1种ELISA试剂加1种NAT试剂的血液筛查模式,其HCV和HBV的残余风险高于2种ELISA试剂加1种NAT试剂,而2种试剂模式检测HIV的残余风险没有差别.
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开展核酸检测后凉山地区献血者HIV/HBV/HCV筛查策略探讨
目的 探讨开展核酸检测后适合本地区传染病流行特征的献血者HIV/HBV/HCV筛查策略.方法 收集本站开展NAT前后各2年献血者筛查数据及标本,分别为37 428和40 020份,对NAT阴性、单试剂ELISA阳性477份标本做补充试验和确证检测,对检测结果进行分析.结果 开展NAT前后本地区献血者的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV阳性率分别为1.12％ (64/37 428)vs1.06％ (423/40 020)、0.67％ (250/37 428)vs0.53％ (212/40 020) (P＜0.05)、0.50％(189/37 428)vs 0.41％(163/40 020) (P ＜0.05).开展NAT后,3项指标ELISA检出总阳性率1.99％(798/40 020),NAT联检阳性率0.74％ (276/40 020),ELISA与NAT联检同时阳性率0.53％ (211/40 020);ELISA阴性标本中,NAT联检阳性率为0.21％ (85/40 020),鉴别试验阴性比例70.59％ (60/85),阳性比例29.41％ (25/85),其中HBV DNA阳性率0.057％ (23/40 020)、HIV RNA及HCV RNA阳性率均为0.002％ (1/40 020);NAT阴性标本中,ELISA双试剂检测阳性率为0.17％ (67/40 020),ELISA单试剂检测阳性率为1.30％ (520/40 020),其中HBsAg阳性率为0.55％(220/40 020)、抗-HCV阳性率为0.40％(160/40 020),抗-HIV阳性率为0.35％(140/40020).对520份单试剂阳性标本中的477份标本做确证检测,HBsAg阳性17份、抗-HCV阳性9份、抗-HIV阳性1份.结论 本地区开展献血者NAT的HIV/HBV/HCV筛查对减低输血残余风险具有重要意义;若采用ELISA单试剂检测加NAT检测的模式,需对ELISA方法和试剂做谨慎评估.
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ISO15189在酶联免疫检测性能验证方法的探讨
目的 经血传播疾病的抗原抗体检测采用酶联免疫方法,对这些方法进行性能验证,以符合ISO15189的要求.方法 血液筛查检测采用的酶联免疫方法共有8个检测系统,针对这8个检测系统进行重复性、精密度、灵敏度及特异性、符合性、低检出限、CUTOFF值的验证.结果 7个方面的性能验证数据与相应的标准进行比较,8个检测系统所有的性能验证结果都符合相应标准的要求.结论 针对酶联免疫检测采用的性能验证方法能够满足ISO15189的要求,同时也符合实验室的要求,能够提高实验室对检测系统的性能指标的认识,对实验室管理水平的提高起到了重要的作用.
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磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价
目前在国内检测人血清内的激素可采用放射免疫(RIA)、酶免疫(EIA)和时间分辨荧光免疫等方法[1].瑞士雪兰诺诊断中心发明的磁分离酶联免疫是一种非同位素标记的酶免疫检测技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA).我们用磁分离酶联免疫方法测定了30份人血清标本中的六种内分泌激素(FSH、LH、PRL、P、E2、T),通过其线性特征、显色稳定性、精密度、特异性等实验结果,并与放射免疫法测定结果作比较,对该方法作出初步的评价.
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人血清去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H2亚基(sH2a)酶联免疫检测法的建立及临床应用
目的 探讨肝损伤患者血清中去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)的H2亚基(sH2a)水平和肝损伤进程的相关性.方法 纳入苏州九龙医院210例血清样本,其中70例肝损伤组患者,包括肝硬化、病毒性肝炎、脂肪肝,同时纳入140例对照组样本,包括高脂、溶血、黄疸、自身免疫性疾病、健康人.检测上述人群血清sH2a蛋白水平,对ELISA结果和临床诊断结果进行统计学分析.结果 ①140例对照组和70例肝损伤组的血清样本sH2a蛋白水平分别为105.92±53.41 ng/ml和69.25±27.45 ng/ml,差异有统计学显著性意义(F=14.375,t=5.397,P=0.000).②sH2a蛋白水平诊断肝损伤的敏感度为68.57％ (95％ CI:56.37％～79.15％),特异度为82.86％ (95％ CI:75.58％～88.70％),总符合率为78.10％(95％CI:71.88％～83.49％),KAPPA系数:0.510 6(95％CI:0.387 7～0.633 6).结论 血清sH2a ELISA检测试剂盒的符合率达到临床预期要求,可以作为新的血清标志物达到辅助诊断肝损伤相关疾病的效果.
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丙型肝炎病毒优势表位抗原不同嵌合表达蛋白的血清反应性研究
目的采用含HCV不同优势表位抗原进行连接表达,对20份血清进行对比检测,探讨血清反应性.方法构建原核融合表达载体pBVIL-1,精选出HCV主要表位抗原插入表达载体在E.coli中表达,纯化后的融合抗原包被酶联板,用ELISA方法进行测定.结果不同抗原组合连接(HCV NS4-Core、NS4-Core-NS3、NS4-Core-NS5AB-NS3)对血清的反应性不同.结论含有多个抗原表位的嵌合抗原,能提高检测的灵敏度.
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S79株腮腺炎病毒制备纯化抗原用于诊断试剂的研究
以S79株腮腺炎病毒制备纯抗原,用于制备检测腮腺炎抗体(IgG)的ELISA试剂盒.将腮腺炎病毒S79株培养液用中空纤维超滤器进行浓缩,经PEG沉淀后,采用蔗糖密度梯度离心法纯化抗原;以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,制备成ELISA腮腺炎病毒抗体(IgG)诊断试剂,并与SIGMA同类产品进行比较.结果显示,经纯化的S79株抗原的比活力为412.9HAU/mg,杂蛋白清除率为99.5%.应用纯化的S79株腮腺炎病毒抗原制备的ELISA试剂,与SIGMA试剂比较,敏感度为94.4%,特异度为91.7%,一致性为93.3%.结论,以纯化的S79株腮腺炎病毒为包被抗原,可用于大批量ELISA腮腺炎抗体诊断试剂盒的制备.
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酶联免疫破伤风抗体定量试剂的研制及应用
制备一种精确的破伤风抗体定量试剂,用于人源破伤风抗体的定量及人群破伤风抗体水平的测定.以人源破伤风免疫球蛋白国家标准品建立定量反应曲线,经系统优化后建立双抗原夹心法定量检测系统.定量反应曲线显示,抗体浓度在10～120mIU/ml之间,相关系数r = 0.9993.精密度(CV)≤7 %.实际应用验证,未经(TTC)免疫的献血员中,具有保护性抗体水平(0.01IU/ml)的比例只占12.2%.经3针(TTC)免疫后,抗体水平均大于0.01IU/ml,经动物体内中和试验法(NT)定量的3批破伤风免疫球蛋白,用制备的酶联免疫破伤风抗体定量试剂测定,其回收率分别为109%、98%和93%.结论,该试剂可用于破伤风抗体的精确定量.
