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缺氧时肺动脉平滑肌细胞血红素氧合酶/一氧化碳系统的变化及其对Ⅰ型胶原的影响
目的:研究缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC) 诱导型血红素氧合酶(HO-1)/一氧化碳(CO)系统的变化及其对胶原合成的影响,探讨血红素氧合酶/一氧化碳(HO/CO)系统对缺氧性肺血管重建中胶原代谢的作用及其机制.方法:原代培养的大鼠PASMC, 用分光光度计检测PASMC培养液中CO相对含量的变化,Western blot检测PASMC HO-1和转化生长因子-β3(TGF-β3)表达的变化,用免疫细胞化学法分别观察PASMC HO-1、TGF-β3、Ⅰ型胶原蛋白表达的变化,原位杂交法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化.结果: 缺氧24 h 诱导PASMC表达TGF-β3、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA,与对照组比较缺氧使HO-1蛋白表达增加67.45% (P＜0.01)、CO含量增加35.41%(P＜0.05). ZnPP(HO-1抑制剂)使缺氧24 h大鼠PASMC的CO含量降低7.88% (P＜0.01)、 HO-1蛋白表达减少23.9%(P＜0.05) 、TGF-β3蛋白表达增高393% (P＜0.01) 、Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均增加.Hemin(HO-1诱导剂)使缺氧24 h大鼠PASMC的CO含量增加8.83%(P＜0.01)、HO-1表达增高105% (P＜0.05) 、TGF-β3蛋白表达降低68.12% (P＜0.01),Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达均减少.结论:缺氧刺激下大鼠PASMC HO/CO系统上调,内源性CO能够抑制Ⅰ型胶原蛋白的合成和TGF-β3蛋白表达,从而对缺氧大鼠肺动脉胶原代谢发挥重要的调节作用.
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高肺血流量对大鼠肺动脉压及肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响
目的:建立左向右分流所致肺动脉高压的大鼠模型,探讨高肺血流量对肺血流动力学及肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用腹主动脉-下腔静脉分流术建立左向右分流的大鼠模型,观察术后6周和11周肺血流动力学,右心室肥厚和肺动脉舒张反应的改变.采用免疫组织化学和原位缺口末端标记方法对11周组大鼠肺血管平滑肌细胞进行增殖和凋亡状态的研究.结果:术后6 周与11周大鼠肺动脉收缩压、肺动脉平均压、右心室(RV)与左心室加室间隔(LV+S)的比值较同龄对照组明显增加,而且11周分流组肺动脉收缩压较6周分流组进一步增高.在11周分流组大鼠中,乙酰胆碱(ACh)产生的肺动脉环舒张反应较对照组明显减弱,而硝普钠(SNP)产生的肺动脉环舒张百分比无明显变化.11周分流组大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖指数(PI)、凋亡指数(AI)、PI/AI比值明显高于11周对照组大鼠肺动脉平滑肌细胞.结论:腹主动脉-下腔静脉分流术可导致肺动脉高压形成.高肺血流量引起的内皮依赖性肺血管舒张功能失调对肺动脉高压的形成有重要的影响,肺动脉平滑肌细胞增殖的增加和凋亡的相对减少在肺动脉高压的发生中起重要作用.该模型简单、可靠、重复性好.
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二氧化硫衍生物舒张大鼠离体主动脉血管环的效应及其机制研究
目的:探讨二氧化硫(sulfur dioxide, SO2)及其衍生物的舒张血管作用及其机制.方法:离体大鼠主动脉环灌流,应用去甲肾上腺素(noradrenaline, NE)预收缩主动脉环后,观察其对SO2供体--亚硫酸钠/亚硫酸氢钠混合液(Na2SO3/NaHSO3, 3:1物质的量比)的舒张反应;观察应用KATP通道阻断剂格列本脲和钙通道阻断剂尼卡地平对Na2SO3/NaHSO3血管效应的影响;观察应用内源性SO2生成酶抑制剂天冬氨酸异羟肟酸(hydroxamate,HDX)和Na2SO3/NaHSO3预孵育血管组织后NE缩血管效应的变化.结果:大鼠离体主动脉环对Na2SO3/NaHSO3呈浓度(0～12 mmol/L)依赖性的舒张反应,IC50值为(7.28±0.12) mmol/L,大舒张率(Emax)为78.79%±3.24%.格列本脲(1×10-6 mol/L)抑制低浓度Na2SO3/NaHSO3(≤4 mmol/L)的舒血管效应,而对高浓度(＞6 mmol/L)的舒血管效应无明显影响.经尼卡地平(1×10-9 mol/L)预孵育的血管环对NE的收缩反应明显减弱,Na2SO3/NaHSO3则不能舒张该血管.反之,预先用HDX(1×10-4 mol/L)孵育阻断内源性SO2生成后,血管环对NE的收缩反应增强[EC50从(6.48±0.84)×10-7 mol/L降至(3.97±1.63)×10-7 mol/L,P＜0.01];而用Na2SO3/NaHSO3预先孵育的血管对NE的收缩反应曲线右移[EC50从(6.48±0.84)×10-7 mol/L升至(4.93±0.81)×10-5 mol/L,P＜0.01].结论:SO2具有明显的舒张血管平滑肌作用,其作用机制与钙离子通道及KATP通道有关,推测机体内源性SO2具有血管功能调节意义.
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丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增生
目的:研究同型半胱氨酸(HCY)促进血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖及其机制.方法:采用同位素技术测定3H-TdR参入和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果:HCY促进VSMC增殖,同时HCY增加MAPK活性,二者均具有剂量效应关系,而且二者之间呈显著正相关.结论:HCY促进VSMC增殖,可能是通过增加MAPK活性的途径实现的.
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钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用
目的:探讨钙信号在尾加压素-Ⅱ(urotensin-Ⅱ,UⅡ)促血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖中的作用.方法:在离体培养的VSMC上,用流式细胞仪和3H-TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2+摄入的影响;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变.结果:UⅡ(10-9～10-7molL-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成,并诱导细胞由静止向增殖状态转化.与对照组相比10-8 mol*L-1 UⅡ使细胞的增殖指数[(G2-M+S)%]增加192%(P<0.01).钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2+螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应,其中UⅡ(10-8 mol*L-1)与尼卡地平(10-5 mol*L-1)共同孵育的VSMC DNA合成量仅为单纯UⅡ(10-8 mol*L-1)组的59.0%. UⅡ(10-10～10-8 mol*L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2+的摄入增加,尼卡地平(10-5 mol*L-1)也可显著对抗UⅡ(10-8 mol*L-1)对45Ca2+摄入的诱导作用(P值均小于0.01).用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2+浓度迅速升高,持续约3 min,形成钙波.结论: UⅡ可通过促进细胞Ca2+摄取和增加细胞内Ca2+浓度,发挥其促进VSMC增殖的作用.
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干扰素-γ、一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖的关系
目的:研究干扰素-γ与一氧化氮合酶、一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系.方法:将不同质量浓度的干扰素-γ(250～1000U.ml-1)作用于培养的血管平滑肌细胞中, 采用[3H]-TdR掺入、细胞生长曲线和定量RT-PCR等方法检测血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达, 一氧化氮产生及血管平滑肌细胞增殖.结果:干扰素-γ可以诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因及酶蛋白,产生一氧化氮并呈质量浓度依赖.同时还发现干扰素-γ抑制血管平滑肌细胞的DNA合成及细胞增殖与一氧化氮的产生是相平行的.结论:干扰素-γ能通过诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因产生一氧化氮来抑制血管平滑肌细胞增殖.
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钙调神经磷酸酶对血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G表达的影响
目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中蛋白激酶G(PKG Iα)表达的影响.方法:对大鼠VSMCs培养并行细胞鉴定,分为对照组、低浓度环孢菌素A(CsA,0.5 mg/L)干预组、高浓度CsA(5 mg/L)干预组以及苯肾上腺素(PE)刺激组(5 mg/L CsA+10 μmol/L PE).其中CsA为CaN特异性抑制剂,PE为已知的CaN激活剂,能够刺激细胞增殖.应用RT-PCR、免疫细胞化学及Western blot法定性及定量测定VSMCs增殖中PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平.结果:0.5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA以及蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义,而5 mg/L CsA组PKG Iα mRNA及蛋白的表达明显高于对照组,5 mg/L CsA+10 μmol/L PE组中PKG Iα mRNA的表达比5 mg/L CsA组减少了32.2%,蛋白的表达减少了36.7%,但仍明显高于对照组.结论:CaN能够调节培养VSMCs中PKG Iα的表达,增殖细胞用CaN特异性抑制剂CsA灭活CaN后,PKG Iα的表达明显增加,给予PE再次激活CaN后,PKG Iα的表达明显减少.
关键词： 钙神经素 环GMP依赖性蛋白激酶类 肌 平滑 血管 -
辛伐他汀和西立伐他汀对体外培养血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响
目的:观察辛伐他汀和西立伐他汀对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和迁移的影响.以探讨他汀类药可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用.方法:采用体外兔髂动脉VSMC培养技术,以3H-TdR的参入量表示VSMC的DNA合成情况,以Sarkar建立的方法测定VSMC的迁移距离,观察辛伐他汀和西立伐他汀对VSMC增殖和迁移的影响.结果:辛伐他汀10-8～10-5 mol@L-1对VSMC DNA合成的抑制率为14.0%～78.8%,西立伐他汀10-9～10-6mol@L-1对VSMC DNA合成的抑制率为0.9%～63.6%;辛伐他汀10-6～10-5mol@L-1、西立伐他汀10-7～10-6mol@L-1明显抑制VSMC迁移.两种药物对VSMC增殖和迁移的抑制呈剂量依赖关系.结论:辛伐他汀和西立伐他汀可剂量依赖性地抑制VSMC的增殖和迁移,这种非调脂作用可能在延缓动脉粥样硬化发生、发展,减少再狭窄发生率或减轻再狭窄病变方面有积极影响.
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氧化型胆固醇诱导兔血管平滑肌细胞凋亡
目的：研究氧化型胆固醇(Triol与25-OH)对兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)凋亡的诱导，并观察其时效与量效关系。方法：原代培养兔VSMC，利用光镜、电镜、DNA电泳及TUNEL法作为凋亡检测法。结果：光镜、电镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变，电泳示“DNA ladder”，TUNEL法示正常兔VSMC凋亡率为3.62％，用Triol和25-OH不同质量浓度(5、10、15、20 mg*L－1)分别处理细胞24 h后，凋亡率明显升高；用Triol和25-OH（15 mg*L－1）分别处理细胞0、12、24、36 h后，凋亡率随时间延长而增加。结论：氧化型胆固醇(Triol与25-OH)可以诱导血管平滑肌细胞发生凋亡，且呈时间和剂量依赖性。
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增殖抑制基因诱导血管平滑肌细胞凋亡
目的:研究增殖抑制基因(hyperplasia suppressor gene,HSG)诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用,探讨其可能的机制.方法:采用重组复制缺陷型腺病毒载体携带大鼠HSG基因,转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞后,通过荧光染色检测细胞核的完整性,用流式细胞术检测细胞DNA含量的变化,用测定caspase-3活性等方法评价过表达HSG对细胞凋亡的作用;进行Western印迹检测过表达HSG对凋亡信号通路相关蛋白表达的影响.结果:用流式细胞术和细胞核染色结果显示过表达HSG能诱导血管平滑肌细胞凋亡,与对照组相比,流式细胞术检测到过表达HSG 72 h显著增加亚二倍体细胞百分率(39.6%±3.2% vs. 2.6%±0.9%,P＜ 0.01).测定细胞内caspase-3活性发现,与对照组相比,过表达HSG能增高caspase-3活性(0.354±0.104 vs. 0.064±0.022,P＜0.01).Western印迹显示HSG能增加细胞色素c的释放和下调Bcl-2的表达(0.26 ± 0.03 vs. 1.06±0.07,P＜0.01).结论:HSG通过影响Bcl-2/Bax的表达,促进细胞色素c的释放继而激活caspase-3诱导血管平滑肌细胞凋亡,活化线粒体途径可能是其诱导凋亡的机制之一.
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L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡
目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.
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内皮素参与溶血磷脂酸促血管平滑肌细胞的增殖
目的:观察内皮素(endothelin, ET)对溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用.方法:离体培养的VSMCs经不同浓度的LPA孵育后测定[3H]-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入,ET mRNA含量及ET的合成和释放量.结果:LPA(5、10和20 μmol*L-1)增加VSMCs ET mRNA表达,VSMCs ET mRNA含量分别较对照组高16%、21%和23%.LPA亦以浓度依赖的方式增加VSMCs ET的合成释放.5～20 μmol*L-1 LPA处理组细胞培养上清中ET 含量较对照组高140%～200%(P<0.01).5～20 μmol*L-1 LPA以浓度依赖的方式促进VSMCs DNA合成,非选择性的ETA受体拮抗剂BQ123显著拮抗LPA刺激的VSMCs的DNA合成增加.结论:LPA可促进VSMCs的ET产生, LPA的促VSMCs增殖效应部分是通过ET/ETA受体途径介导.提示LPA和ET作为内源性活性物质相互协调发挥其生物学效应.
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大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制
目的:观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期时相的影响,了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制.方法:指数增长期的平滑肌细胞同步化于G0期后,加入20 mg*L-1大黄素于含胎牛血清10%(体积分数)的细胞培养液中,24 h后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗PCNA蛋白单克隆抗体染色.结果:与对照组比较,用了大黄素以后,G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,下降率为75.5%,平滑肌细胞抗PCNA单克隆抗体染色呈阴性.表明PCNA蛋白的表达受到抑制,细胞受阻于G0期.结论:抑制PCNA蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一.
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microRNA 在高磷诱导血管平滑肌细胞钙化早期的动态变化
目的：观察高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化早期 microRNA 表达变化，分析其可能参与的信号通路途径。方法：采用高磷（无机磷2．6 mmol／L）刺激大鼠血管平滑肌细胞系 A7r5钙化7 d，邻甲酚酞络合酮比色法和考马斯亮蓝法检测细胞内钙含量，RT-PCR 法检测平滑肌细胞表型和钙化相关基因的表达变化，茜素红染色观察钙结节。microRNA microarray 法检测高磷刺激后0、3、12 h，680种 microRNA 表达变化。采用 TAM软件分析不同时间点间信号激活情况。结果：高磷诱导的 A7r5细胞钙盐含量升高9．6倍（P ＜0．05），平滑肌细胞表型 mRNA（SM-αactin， SM22）下调（P ＜0．05），钙化相关 mRNA（BMP2、MSX2、Runx2）上调（P ＜0．05），茜素红染色后可见高磷刺激组有明显钙结节。680种 microRNA 在3个时间点的表达各不相同，只有6种 microRNA 分别逐级上调或渐渐下调。26种信号通路被明显激活，其中包括细胞凋亡、分化增殖等已知与钙化相关的信号通路。结论：microRNA 参与调节血管钙化是一种动态微调的过程，为血管钙化研究带来新的思路。
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金属硫蛋白对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:研究金属硫蛋白对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用过氧化氢和甲萘醌分别作为内源性和外源性活性氧刺激平滑肌细胞增殖,应用细胞总蛋白定量,3H-TdR参入,细胞周期时相测定等方法测定细胞增殖.结果:过氧化氢(25μmol.L-1)和甲萘醌(0.5μmol.L-1)可诱导培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖, 使其蛋白总量增加,S期细胞比例增高,DNA合成率增加.金属硫蛋白可以抑制过氧化氢和甲萘醌诱导的血管平滑肌细胞增殖.结论:金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用.
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金属硫蛋白对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:研究金属硫蛋白对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用过氧化氢和甲萘醌分别作为内源性和外源性活性氧刺激平滑肌细胞增殖,应用细胞总蛋白定量,3H-TdR参入,细胞周期时相测定等方法测定细胞增殖.结果:过氧化氢(25μmol.L-1)和甲萘醌(0.5μmol.L-1)可诱导培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖, 使其蛋白总量增加,S期细胞比例增高,DNA合成率增加.金属硫蛋白可以抑制过氧化氢和甲萘醌诱导的血管平滑肌细胞增殖.结论:金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用.
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一氧化氮及一氧化碳对碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞增殖作用的影响
目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化碳(CO)对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)促平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖作用的影响及其机制.方法:以3H-TdR参入法测定平滑肌细胞增殖程度,放射活性法测定VSMC内蛋白磷酸化程度、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)活性.结果:孵育24 h后,bFGF刺激的VSMC增殖较对照组增加1.1倍(P<0.01),细胞内蛋白磷酸化程度增加38.2%(P<0.01),PKC及MAPK活性分别增加1.5和2.5倍(P<0.01);CO前体heme-L-lysinate(H-L-Lys)及NO前体L-Arginine(L-Arg)对静止期VSMC生长无显著影响,亦未引起细胞内蛋白磷酸化、PKC及MAPK活性发生显著改变; 5、10、20μmol.L-1 H-L-Lys使bFGF刺激的VSMC增殖分别减少43.4%、46.6%和47.6%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别下降25.6%、31.8%和33.9%(均P<0.01),MAPK活性分别降低15.0%、25.5%和40.1%(均P<0.01); 5、10、20mmol.L-1 L-Arg使bFGF刺激的VSMC增殖分别降低30.2%、40.5%和51.9%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别降低29.8%、28.9%和36.6%(均P<0.01),MAPK活性分别降低19.4%、32.4%和44.4%(均P<0.01);10 μmol.L-1 H-L-Lys和10 mmol.L-1 L-Arg引起bFGF促进的VSMC内蛋白磷酸化程度分别下降31.8%和37.4%(均P<0.01).结论:NO和CO可抑制bFGF刺激的大鼠VSMC增殖,其机制与它们抑制bFGF促进的细胞内蛋白磷酸化及PKC和MAPK活性有关.
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鼠血管平滑肌细胞转人CD59基因的实验研究
目的:在培养的鼠主动脉平滑肌细胞膜上表达人CD59蛋白, 研究通过转基因方法抑制异种移植超急性排斥反应.方法: 分别从新鲜的鼠主动脉和人脐静脉分离培养鼠主动脉平滑肌细胞、人脐静脉内皮细胞 ,并用免疫荧光和免疫组化的方法鉴定.构建含人CD59cDNA 的真核细胞表达载体LXSN-CD59,用脂质体转染法将LXSN和LXSN-CD59转化进鼠主动脉平滑肌细胞,400～800 mg*L-1 G418筛选得到稳定转化子.流式细胞仪筛选得到表达人CD59蛋白强细胞株.与含有异种活性抗体和补体的人血清和猴血清共孵育,分析乳酸脱氢酶(lac tic dehydrogenase, LDH)释放率测定人CD59蛋白功能活性.结果:与未转基因的对照组细胞比较,表达人CD59蛋白组细胞与不同浓度人血清和猴血清共孵育时,人血清和猴血清中补体及抗体对这些细胞的杀伤作用被显著抑制,统计学检验差异有显著性.结论:[ HTSS〗通过转基因方法在鼠血管平滑肌细胞膜上表达人补体调节蛋白,能使异种移植超急性排斥反应得到抑制.
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一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞HO-1 mRNA表达的影响
目的:研究一氧化氮(NO)供体sodium nitroprusside (SNP)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)HO-1 mRNA的表达及CO含量影响,以探讨NO对血红素加氧酶/一氧化碳(HO/CO)体系的调节作用.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分别与10-3 molL-1和10-4 mol*L-1的SNP在常氧及低氧12和24 h条件下共同孵育.用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)对大鼠PASMC HO-1 mRNA表达进行检测,并用分光光度计检测PASMC培养液中CO与NO相对含量的变化.结果:低氧使大鼠PASMC HO-1 mRNA的表达及CO含量呈一致性增高.给予SNP,HO-1 mRNA的表达在常氧及低氧时呈剂量和时间依赖性增高趋势,并伴随CO含量的一致性改变.结论:外源性NO能够诱导常氧及低氧大鼠PASMC HO-1 mRNA的表达,使PASMC CO释放增多,上调HO/CO体系功能.
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一氧化碳调节低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡
目的: 探讨一氧化碳对低氧大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将大鼠随机分为4组:常氧对照组(n=7)、低氧组(n=6)、低氧+锌原卟啉组(低氧+ ZnPP组,n=6)及低氧+低浓度一氧化碳组(低氧+低浓度CO组,n=5).应用Bcl-2、Caspase-3多克隆抗体和NF-κΒ单克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法(TUNEL)对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行凋亡定位及半定量分析.结果: (1)低氧组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分低于对照组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组;(2)低氧+ ZnPP组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数明显低于对照组和低氧组,平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显低于对照组,与低氧组无差异;NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组和低氧组;(3)低氧+低浓度CO组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显高于对照组、低氧组及低氧+ZnPP组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显低于低氧组及低氧+ZnPP组,与对照组差异无显著性.结论: CO促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡,同时还伴有Bcl-2和NF-κΒ的变化.
