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清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制
目的 探讨清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制.方法 将45只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、利巴韦林组[利巴韦林颗粒0.05 g/(kg·d)]和清肺低剂量组[清肺口服液37g/(kg·d)]、清肺高剂量组[清肺口服液111 g/(kg·d)],每组9只.除空白组外,其余各组均给予呼吸道合胞病毒(RSV) 50μl/只滴入鼻孔造模,造模48 h后开始给药.24h后观测肺组织病理改变程度,检测肺组织中γ干扰素(IFN-γ)、T-bet、GATA3蛋白水平及脾组织中Th1/Th2细胞平衡水平. 结果 与空白组比较,模型组肺组织病理评分显著增高、IFN-γ水平降低、Th 1/Th2水平下降(P＜0.01);与模型组比较,利巴韦林组、清肺高剂量组肺组织病理评分显著下降、IFN-γ水平升高、Th1/Th2水平升高(P＜0.01).与空白组比较,模型组T-bet水平降低而GATA3水平升高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组T-bet水平升高而GATA3水平下降(P＜0.01). 结论 早期采用清肺口服液干预呼吸道合胞病毒肺炎可抑制炎症变化,其机制可能与降低肺组织GATA3水平,升高T-bet水平,诱生IFN-γ表达,从而达到Th1/Th2细胞平衡相关.
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定喘汤对呼吸道合胞病毒感染大鼠细胞免疫的影响
目的 观察定喘汤对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠病毒载量及细胞免疫的影响.方法 将36只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组和定喘汤组,每组9只.除正常组外,其余各组大鼠采用经鼻腔接种RSV Long株病毒液方法制备RSV感染大鼠模型.造模后定喘汤组予定喘汤2g/(kg·d),利巴韦林组予利巴韦林颗粒1 mg/(kg·d),正常组与模型组予等体积生理盐水灌胃,均每日1次,共7天.检测各组大鼠灌胃第3、5、7天肺组织病毒载量及外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4 +/CD8+水平.结果 定喘汤组、利巴韦林组各时间点肺组织病毒载量均低于模型组(P＜0.05).与正常组比较,模型组第3、5天外周血CD3+水平,第5天CD4+水平,第5、7天CD8+水平,第7天CD4+/CD8+值降低(P＜0.05).与模型组比较,利巴韦林组第7天CD8+水平升高,定喘汤组第5天CD4+水平升高、第7天CD4+/CD8+值降低(P＜0.05).与利巴韦林组各时间点比较,定喘汤组各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).与本组第3天比较,利巴韦林组和定喘汤组第5天CD8+水平降低,定喘汤CD3+水平升高(P＜0.05).与本组第5天比较,利巴韦林组和定喘汤组第7天CD4+和CD8+水平均升高(P＜0.05).结论 定喘汤可有效降低RSV感染大鼠肺组织病毒载量,对外周血免疫抑制细胞具有良好的调节作用,且存在一定的时间-效应关系.
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金欣口服液含药血清对RSV感染RAW264.7细胞TLR3信号转导通路的影响
目的 探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的信号转导通路影响及其可能作用机制.方法 分别以金欣口服液76.8g/(kg·d)、利巴韦林颗粒128.lmg/ (kg-d)予大鼠灌胃3天,制备金欣口服液、利巴韦林颗粒含药血清.RSV感染RAW264.7细胞分为模型组、利巴韦林组与金欣组.利巴韦林组与金欣组分别给予利巴韦林与金欣口服液含药血清2.5ml进行干预.另设正常细胞作为正常组.正常组与模型组加入2％ FBS维持液2.5ml.12h后收集细胞,检测RAW264.7细胞Toll样受体3(TLR3)、TANK结合激酶1 (TBKl)和干扰素调节因子3(IRF3) mRNA及其蛋白表达.结果 RSV感染RAW264.7细胞12h后可诱导TLR3、TBK1和IRF3 mRNA及其蛋白的高表达(P＜0.01),金欣口服液含药血清及利巴韦林均可下调TLR3、TBK1和IRF3 mRNA及其蛋白的高表达(P＜0.01),其中金欣口服液对TLR3蛋白的下调作用优于利巴韦林(P＜0.05).结论 RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活,上调TBK1和IRF3的表达,而金欣口服液含药血清能够抑制TLR3信号转导通路,从而起到抗RSV的作用.
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金欣浓缩液保留灌肠对呼吸道合胞病毒感染模型大鼠TNF-α、SIgA的影响
目的 探讨中药复方金欣浓缩液保留灌肠治疗呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎的作用机制.方法 将56只SD大鼠随机分为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量组及预先给药组,利巴韦林组,每组8只.金欣高、中、低剂量组在大鼠RSV滴鼻3天后分别以0.50g/ml、0.99g/ml、1.98g/ml保留灌肠给药30min,利巴韦林组予以利巴韦林颗粒剂(1g/ml)灌胃.预先给药组在大鼠RSV滴鼻第1天的同时保留灌肠,剂量及操作方法均同金欣中剂量组.各组均每天给药2次,每次1ml/100g,预先给药组连续给药10天,其余各组连续给药7天.测定各组大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)及支气管肺泡灌洗液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的含量.结果 与模型组及金欣低剂量组相比,预先给药组、金欣中剂量组TNF-α水平显著增高(P＜0.05或P＜0.01);金欣各用药组和利巴韦林组TNF-α水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组及利巴韦林组相比,预先给药组及金欣高、中剂量组的SIgA含量均显著增高(P＜0.01);金欣高剂量组SIgA含量亦明显高于预先给药组及金欣中、低剂量组(P＜0.05或P＜0.01).结论金欣浓缩液保留灌肠后可能通过增加RSV感染幼年SD模型大鼠的TNF-α、SIgA的分泌量,发挥抗病毒作用,且存在一定的量效关系.
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清气解毒方含药血清干预呼吸道合胞病毒感染人喉癌上皮细胞Hep-2的体外实验研究
目的 探讨清气解毒方抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用及可能机制.方法 3只新西兰白兔分为空白血清组、利巴韦林组和清气解毒方组,每组1只.清气解毒方组灌胃量为36.32 mg/(kg·d),利巴韦林组给药量为18.24 mg/(kg·d),空白血清组给予50ml生理盐水灌胃,均连续灌胃3天后制备含药血清.检测RSV半数感染量(TCID50)并筛选清气解毒方、利巴韦林药物大无毒浓度用于后续实验.Hep-2细胞以1×105/ml种于96孔板中,分为细胞组、病毒组、利巴韦林组和清气解毒方组,每组设6个复孔.利巴韦林组加入利巴韦林血清,清气解毒方组加入清气解毒方血清,细胞组和病毒组加入细胞维持液.分别培养48、72、96h后检测各组细胞病毒抑制情况,96h后观察各组细胞周期及凋亡率.结果 呼吸道合胞病毒A亚型(Long株)TCID50为10-4.581/100 μl.终筛选出浓度为40％的清气解毒方含药血清作为其大细胞无毒浓度,即0.363 g/ml;浓度为50％的利巴韦林含药血清作为其大细胞无毒浓度,即0.228 mg/ml.与细胞组比较,感染后48、72、96h病毒组OD值明显降低(P＜0.01);与病毒组比较,利巴韦林组和清气解毒方组在48、72、96h时OD值均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).清气解毒方组在48、72、96h病毒抑制率分别为42.1％、57.0％、66.6％,低于同时间利巴韦林组的51.2％、69.6％、77.3％.与细胞组比较,病毒组G1期明显升高,S期明显降低,凋亡率亦升高(P＜0.05或P＜0.01);与病毒组比较,利巴韦林组与清气解毒方组G1期明显降低,S期和G2期明显升高,凋亡率亦降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 清气解毒方具有一定的体外抗RSV作用,效果略差于利巴韦林.
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西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒的初步研究
本研究为了解西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)及基因型别.首先采用直接免疫荧光法检测2011年4～7月西藏自治区人民医院儿科病房因急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本中7种常见的呼吸道病毒及人类偏肺病毒( Human metapneumovirus,hMPV)的抗原.然后对RSV抗原阳性的标本分别提取RNA,用逆转录-巢式聚合酶链反应法(Nest-PCR)确定RSV型别,同时用实时荧光PCR( Real-Time PCR)方法进行验证.再通过对G蛋白基因PCR扩增产物序列测定确定RSV的基因型.通过与GenBank中不同地区RSV分离株的G蛋白基因序列比对,了解西藏地区RSV G蛋白的结构特点及变异情况.结果表明,从167例标本中检测出呼吸道病毒抗原阳性的为65例,总阳性率为38.9％(65/167),其中RSV 45例,占阳性标本的69.2％(45/65),对其中42例RSV阳性标本进行了PCR分型,其中40例为A亚型,2例为B亚型.对7株A亚型RSV G蛋白基因PCR产物测序结果显示,全部为GA2基因型.西藏RSV与RSV原型株A2株核苷酸的同源性为90.7％～91.8％,氨基酸的同源性只有86.5％～87.2％.氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守序列的两端.7株西藏A亚型RSV G蛋白的核苷酸序列与GenBank中不同的RSV分离株相比同源性为90.7％～91.8％.西藏地区2011年春季小儿急性呼吸道感染的病毒病原主要为呼吸道合胞病毒,A亚型是2011年西藏地区的流行优势型别,其G蛋白胞外区基因具有较高的变异性.
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两种单负链RNA呼吸道病毒——流感病毒和呼吸道合胞病毒感染对粘蛋白1表达调控差异的研究
为进一步了解流感病毒(IFZ)是否像呼吸道合胞病毒(RSV)一样在感染过程中可以上调呼吸道上皮细胞粘蛋白1(MUC1)的表达,进而限制炎症的发展.我们利用qRT-PCR和Western Blot检测两种呼吸道单负链RNA病毒感染人呼吸道上皮细胞系——A549细胞后对MUC1的表达调控.分别利用人喉上皮细胞系——HEp-2细胞系和MDCK细胞系培养并收集RSV和IFZ.相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24 h后,分别裂解各组细胞,收集总RNA,应用qRT-PCR检测MUC1 mRNA的表达情况;或相同滴度的两种病毒分别感染A549细胞24 h和48 h后,裂解细胞收集总蛋白,同时收集细胞培养上清,应用Western Blot检测MUC1蛋白的表达情况,应用ELISA检测上清中TNF-α水平.结果显示,虽然两种病毒都能上调TNF-α水平,但只有RSV可以上调呼吸道上皮细胞MUC1表达,并呈剂量效应,而IFZ不能上调呼吸道上皮细胞MUC1的表达.本研究首次探讨两种常见呼吸道单负链RNA病毒感染呼吸道上皮细胞后对MUC1表达调控的差异,初步证实临床上IFZ感染后病情自限性的机制不同于RSV感染,与MUC1的表达上调无关.
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雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制呼吸道合胞病毒复制的初步研究
建立呼吸道合胞病毒A型(RSV-A型)感染Hep-2细胞模型,通过预防、治疗及直接灭活三种不同给药方式,观察中药雄黄对RSV-A型感染Hep-2细胞病变(CPE)的抑制作用.用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度.以MTT法计算药物的半数中毒剂量(TCs0).通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对RSV-A型感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.雄黄纳米微粒TC50值为0.649 μg/mL.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻RSV-A感染Hep-2细胞的CPE程度,其抑制RSV-A型感染Hep-2细胞病变的半数有效浓度(IC50)分别为0.20 μg/mL、0.13μg/mL、0.16 μg/mL,治疗指数(TI)分别为3.18、4.99和4.11,雄黄纳米微粒对RSV-A型感染Hep-2细胞病变的抑制作用存在着明显的量效关系.雄黄纳米微粒按预防、治疗及直接灭活给药方式给药时,其中治疗给药方式更有利于减轻RSV-A感染Hep-2细胞引起的病变.
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树鼩呼吸道合胞病毒感染动物模型的建立
探讨用灵长类动物树鼠句建立呼吸道合胞病毒(RSV)感染动物模型的可行性.28只树鼠句随机分为7组,每组4只,鼻内滴入106PFU RSV,感染后每24h检测1组.另取7只树鼠句鼻内滴入100μl Hep-2细胞培养液,滴鼻后每24h检测1只作对照.无菌取树鼠句肺组织进行病毒分离、空斑形成实验检测病毒滴度、病理检查和RT-PCR检测肺组织内RSV mRNA表达.结果显示:树鼠句感染RSV后,无明显呼吸道感染症状;树鼠句肺组织匀浆接种于Hep-2细胞上,第3、4、5实验组出现细胞病变效应(CPE);树鼠句感染RSV后肺部病理改变在3～7d较为明显,主要为间质改变;在106PFU感染浓度下树鼠句肺组织内RSV处于低水平复制,复制的高峰期在3～5d,峰值在第4d.提示:树鼠句可以用来建立RSV感染的动物模型.
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稳定表达呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1细胞的构建及其生物特性研究
获得稳定表达RSV病毒NS1基因的HEp-2-NS1细胞株并对其生物学特性进行初步研究.采用RT-PCR方法从RSV病毒中获得NS1全长基因,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体与包装质粒PIK通过磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT细胞,产生的逆转录病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,用QPCR、细胞病变染色法、RT-PCR和间接免疫荧光法检测细胞中NS1 mRNA和蛋白表达情况.结果表明重组逆转录病毒载体pBABE-NS1经双酶切及测序鉴定正确；筛选获得5株阳性单克隆细胞株,QPCR结果显示HEp-2-NS1细胞有NS1基因扩增,其中d株的相对表达量是正常细胞对照组的8 483倍；在外源干扰素作用下,HEp-2-NS1细胞仍对VSV病毒保持敏感,细胞感染病毒48h后染色结果显示全部死亡；对第3代及第30代细胞的RT-PCR和间接免疫荧光法检测结果显示,导入的NS1基因在HEp-2细胞中不仅能转录成相应的mRNA而且能成功稳定地表达.成功构建了稳定表达RSV病毒非结构蛋白NS1的HEp-2-NS1改造细胞株,为建立适用于临床分离的转基因细胞提供良好的基础.
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呼吸道合胞病毒F基因及蛋白的相关研究进展
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)属副粘病毒科肺炎病毒属,是婴幼儿呼吸道感染重要的病毒病原.F基因序列保守,变异性小,国内外对F基因变异研究并不多.F蛋白(Fusion glycoprotein)为RSV跨膜糖蛋白,介导病毒与细胞膜的融合和穿入,诱导的中和抗体可以同时抑制A、B两个亚型的病毒感染,故F蛋白是单克隆抗体药物及疫苗研制的主要对象.在无有效疫苗的情况下,目前抗F蛋白单克隆抗体是降低高危患儿RSV感染入院率和疾病严重程度的重要方法,但单克隆抗体的使用可造成进化压力,产生抗体耐药株.本文对近10年来有关RSV的F基因变异、抗F蛋白单克隆抗体药物及F蛋白相关疫苗的研究进展进行综述.
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干扰素联合布地奈德雾化吸入治疗对小儿RSV毛细支气管炎的免疫调节作用
目的 观察干扰素联合布地奈德雾化吸入治疗小儿RSV毛细支气管炎的临床疗效及对免疫功能的调节作用.方法 100例RSV毛细支气管炎患儿随机分为观察组和治疗组,各50例.治疗组给予常规治疗,观察组在此基础上加用干扰素联合布地奈德雾化吸入.对比两组患儿临床疗效及治疗前、治疗6d后免疫学指标变化.结果 治疗6d后,两组患儿临床症状及体征均有明显改善,观察组总有效率96.00％,治疗组总有效率80.00％,差异具有统计学意义(P＜0.01).患儿外周血清IL-2、IL-6、IL-17及IgE水平改变得到纠正,与治疗前相比,IL-2水平显著升高,IL-6、IL-17及IgE水平显著降低(P＜0.01),观察组免疫学指标改善效果更佳.结论 干扰素联合布地奈德雾化吸入有助于改善RSV毛细支气管炎患儿临床症状及体征,缩短治疗时间,提高总有效率,对患儿免疫功能紊乱具有明显的调节作用.
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呼吸道合胞病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测效能评价
目的 评估呼吸道合胞病毒(RSV)荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能.方法 以培养的RSV和其他呼吸道病原体以及280例具有上呼吸道感染症状的患者作为标本来源.分别anjiang采用RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条和胶体金快速检测试纸条检测同一份标本,分析两种检测试纸条的检测效能.结果 荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条；对甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒和肺炎支原体无特异性反应.结论 RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条在检测性能上高于胶体金快速检测试纸条.
关键词： 呼吸道合胞病毒 荧光纳米颗粒快速检测试纸条 胶体金快速检测试纸条 灵敏度 特异性 -
病毒在哮喘发作的研究进展
哮喘的本质是气道的炎性反应,规律吸入糖皮质激素和β2受体激动剂可控制哮喘,但在此治疗基础上乎吸道病毒感染仍可导致哮喘的发作.固有及适应性免疫缺陷削弱抗病毒反应,而过敏性炎性反应有协同作用.随着对其机制的深入了解,为开辟新的防治提供新思路.
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儿童呼吸道感染临床病毒学研究
目的了解广州地区呼吸道病毒感染情况.方法采用咽拭子和部分血清进行病毒分离、红细胞凝集试验、红细胞凝集抑制试验和免疫酶标固相吸附试验进行研究.结果 4298例咽拭子中分出流感病毒200例,其中上呼吸道流感病毒172例阳性,占流感病毒阳性率的86.0%;分出呼吸道合胞病毒150例,下呼吸道合胞病毒139阳性,占呼吸道合胞病毒阳性率92.7%;及分出单疱病毒20例;单疱病毒阳性率0.5%.460例肺炎和支炎血清检测巨细胞病毒IgM 82例阳性,CMV-IgM阳性率17.7%.结论流感病毒为上呼吸道感染的主要病原,呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒是下呼吸道感染的主要病原.流感病毒流行有2个高峰(每年3～4月及7～8月份).单疱病毒在上下呼吸道感染中为散发病例.
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广州地区2011-2013年儿童呼吸道合胞病毒流行特征分析
目的 了解广州地区2011-2013年急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒(RSV)的流行情况.方法 用实时荧光PCR方法对本院收治的27 116例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本进行RSV检测.随机取30例RSV阳性标本,扩增其G基因并测序.从30例阳性标本中随机取3例,扩增RSV全基因组并测序.结果 27 116例标本中共检出RSV阳性4421例,阳性率为16.30％(4 421/27 116).30株测序标本中,21株属于NA1型,2株属于ON1型,7株属于BA9型.27株G基因的GenBank登陆号是KM586819～KM586845.3株全基因组的GenBank登陆号是KM517572、KM578843、KM517573.结论 RSV是引起2011-2013年广州地区儿童急性呼吸道感染的重要病原体.NA1型和BA9型分别是RSV A、B亚型的优势基因型.
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呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定检测方法的建立及应用
目的建它呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,应用其对来源于本院的临床样本进行检测.方法建立ELISA方法,检测标本中的呼吸道合胞病毒,与呼吸道合胞病毒细胞培养检测方法进行对照,并利用该方法进行该病毒2007年在广州市的流行性分析.结果本方法的灵敏度略高于呼吸道合胞病毒的细胞培养检测方法,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)无特异性反应.结论本呼吸道合胞病毒抗原ELISA检测方法可用于呼吸道合胞病毒感染的临床诊断和鉴别诊断.
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呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展
呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV) 是引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染如支气管炎和肺炎的常见病原体,导致患者住院治疗甚至死亡.虽然RSV疫苗的研究已有近60年历史,但依然没有商品化的疫苗可用.近年来,随着RSV分子生物学研究的深入和新型疫苗设计策略的应用,RSV疫苗研究进展迅速.目前正在研制多种针对不同免疫对象的候选疫苗,包括减毒活疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗和纳米颗粒疫苗等,其中亚单位疫苗和纳米颗粒疫苗适用于孕妇和老人,减毒活疫苗、载体疫苗和部分亚单位疫苗有望用于婴幼儿.本文介绍了RSV的生物学特性、 RSV疫苗研究面临的困难和正在进行临床试验的RSV候选疫苗的研究进展,为RSV疫苗的研发提供参考和借鉴.
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阻断Notch信号对疫苗增强性免疫病理的作用
目的 探讨阻断Notch信号对FI-RSV疫苗增强性免疫病理的调节作用. 方法 制备加入佐剂Al(OH)3的FI-RSV疫苗,肌注免疫C57BL/6小鼠2次,检测抗体;攻毒后,检测各组体重变化,并作肺组织切片及染色检查和细胞因子转录表达检测. 结果 免疫前各组血清IgG抗体水平无显著差异;免疫后,FI-RSV+ Al(OH)3组体重下降显著;病理切片PAS染色显示FI-RSV+ Al(OH)3和FI-RSV+ Al(OH)3+L-685,458组的粘液分泌均较明显,病理切片HE染色显示FI-RSV+ Al(OH)3和FI-RSV+Al(OH)3+L-685,458组肺部均显示大量炎症细胞浸润,炎症反应较强,FI-RSV+Al(OH)3组炎症反应倾向于肺泡壁,FI-RSV+ Al(OH)3+ L-685,458组炎症反应倾向于气管壁和血管周;FI-RSV+Al(OH)3组肺组织RSV-N基因的表达量与FI-RSV+ Al(OH)3+L-685,458组比较差异无统计学意义(P＞0.05),FI-RSV+Al(OH)3组的IFN-γ、TNF-α、T-bet、IL-17、ROR-γt基因的表达量显著高于其他两组(P＜0.05),FI-RSV+ Al(OH)3 +L-685,458组IL-4、IL-5、GATA-3基因的表达量显著高于其他两组(P＜0.05). 结论 Al(OH)3单独作为佐剂比添加L-685,458诱发Th1及Th17型优势应答和以肺泡壁反应为主的炎症反应强;Notch信号阻断后诱发的Th2型优势应答及以气管壁和血管周反应的炎症反应更强.
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3种常见呼吸道病毒检测基因芯片的制备
目的 建立一种可同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒的基因芯片方法. 方法 根据GenBank已发表的鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列,应用生物学软件设计相应的引物和寡核苷酸探针,构建检测芯片；使用巢式PCR扩增标记目的片段,将其与检测基因芯片进行杂交和扫描分析；通过特异性、灵敏性和重复性试验评估基因芯片方法. 结果 设计的全部探针均能与相应的标记样品特异性杂交,其中探针1a和1b可特异检测鼻病毒；探针2a、2b和2c可特异检测呼吸道合胞病毒,探针3a和3b可特异检测腺病毒.基因芯片法检测3种病毒的低拷贝数分别是2.59×10 2个/μl、2.21×101个/μl和2.05×102个/μl. 结论 构建的基因芯片可特异性检测样品中低滴度的鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒,有望为临床提供确诊依据.
