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德阳市健康人群五种疫苗可预防疾病的抗体水平监测分析
目的 了解四川省德阳市健康人群麻疹、风疹、腮腺炎、百日咳和白喉等疾病抗体水平.方法 于2012年和2016年分别在四川省德阳市分层随机抽取＜1岁、1～2岁、3～4岁、5～6岁、7～14岁、15～19岁、≥20岁等7个年龄组健康人群共428名作为监测对象,均采集4～5 mL静脉血并分离血清标本2 mL.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标本中麻疹、风疹、腮腺炎、百日咳、白喉IgG抗体水平,计算几何平均浓度(GMC)及抗体阳性率.结果 428名研究对象中,麻疹、风疹、腮腺炎、百日咳和白喉IgG抗体阳性率分别为78.74％(337/428)、64.95％(278/428)、65.65％(281/428)、27.34％(117/428)、81.31％(348/428),麻疹保护性抗体阳性率为35.51％(152/428);5种疾病GMC分别为881.54 mIU/mL、97.62 IU/mL、456.70 U/mL、34.70 IU/mL、2.15IU/mL.麻疹IgG抗体阳性率＜1岁组低(49.15％,29/59);风疹IgG抗体阳性率＜1岁组低(40.68％,24/59);腮腺炎IgG抗体＜1岁组低(33.90％,20/59);百日咳IgG抗体阳性率1～2岁组低(13.33％,8/60);白喉IgG抗体阳性率≥20岁组低(66.67％,46/69).麻疹、风疹、腮腺炎抗体GMC均＜1岁组低(627.70 mIU/mL、57.58 IU/mL、166.87 U/mL);百日咳抗体GMC在3～4岁组低(22.18 IU/mL);白喉抗体GMC≥20岁组低(0.11 IU/mL).结论 德阳市健康人群麻疹、风疹、腮腺炎、百日咳和白喉抗体水平相对较低,重点加强8月龄麻疹风疹二联疫苗接种率和接种及时性;加强适龄儿童含腮腺炎成分疫苗、百白破成分疫苗的接种率.
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本草九代口服液对小鼠的免疫调节作用
目的受试物对小鼠的免疫调节作用方法 160只雌性小鼠,按体重随机分为4组,每组40只.设1个对照组和3个剂量组(1 670、16 700、50 000μl/kg).依薛彬等方法检测免疫指标.结果本实验在小鼠经口给予本草九代口服液后,各实验组及对照组体重增长良好.在本草九代口服液给予剂量为1 670和16 700μl/kg时,淋巴细胞增殖能力增加,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);剂量为16 700μl/kg时,小鼠的吞噬率、吞噬指数及抗体积数均增加,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);剂量为50000μl/kg时,抗体生成细胞数和足跖增加厚度均显著高于对照组(P＜0.01).结论不同剂量的本草九代口服液对小鼠体液免疫、细胞免疫、巨噬细胞吞噬功能均有不同程度的提高作用,除PFC数和足跖厚度两项指标的高剂量组效果明显外,其他如巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化能力、抗体积数均以中剂量组效果为佳.而近年来对多糖的免疫调节与剂量关系的实验研究认为,多糖的免疫调节量效关系呈钟罩形,存在着作用的适剂量范围.因此,并非推荐食用量越大,功效成分浓度越高,免疫调节作用就越强.此次的研究结果也证实了如上观点.本研究说明,本草九代口服液对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫均有一定的促进作用.
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结核分枝杆菌休眠相关抗原Rv1733c DNA疫苗的构建及免疫学特性研究
目的 构建结核分枝杆菌(Mtb)休眠相关抗原Rv1733c的真核表达载体,并评价其作为DNA疫苗的免疫学特性.方法 利用限制性酶切的方法从本室前期保存的pMD-18T-Rv1733c质粒中构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c.将pcDNA-Rv1733c重组质粒稳定转染P815细胞,并用间接免疫荧光法检测Rv1733c的表达.采用数字表法随机将BALB/c小鼠分为3组,每组10只,即pcDNA-Rv1733c质粒DNA组、生理盐水组和BCG组.pcDNA-Rv1733c质粒DNA组和生理盐水组采用肌内注射方式免疫,间隔2周免疫1次,共免疫3次.BCG组采用皮下免疫一次.各组小鼠每2周采血,ELISA检测血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1抗体亚类比率与比值.初次免疫8周后,MTS[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2 H-etrazolium,inner salt](四氮唑蓝盐化合物)法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖、ELISPOT检测脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平.流式细胞法检测脾淋巴细胞中CD4+和CD8+T细胞所占比率；LDH法检测CTL(cytotoxic T lymphocytes;细胞毒性T淋巴细胞)活性.结果 成功构建Rv1733c的真核表达载体pcDNA-Rv1733c.间接免疫荧光实验表明pcDNA-Rv1733c质粒稳定转染的P815细胞中能够稳定表达Rv1733c蛋白.pcDNA-Rv1733c质粒DNA免疫小鼠后能诱导小鼠产生特异性抗体,抗体亚类以IgG2a为主,随着免疫时间的延长,IgG2a/IgG1的比值趋于平衡；脾淋巴细胞增殖指数(2.00±0.36)高于BCG组(1.1±0.06)(t=3.096,P＜0.05)；特异性分泌IFN-γ的脾淋巴细胞频数(41.48±5.30)SFC/ 106高于生理盐水组(2.75±1.37)SFC/106(t=4.752,P＜0.05)；然而脾淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞所占比率[分别为(18.15±2.30)％、(7.68±1.34)％]、CTL杀伤活性[(29.52±1.96)％]都与生理盐水组相当[(16.43±2.02)％ (t=0.571,P＞0.05)、(7.32±0.42)％(t=0.234,P＞0.05)、(25.28±2.51)％(t=0.726,P＞0.05)].结论 成功构建Rv1733c真核表达载体pcDNA-Rv1733c;并能够诱导小鼠机体产生特异性的体液和细胞免疫应答,提示用于结核病新型疫苗的研究具有一定的意义.
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复苏促生长因子结构域及其突变体重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究
目的 评价复苏促生长因子结构域蛋白(Rpfd)及其突变体蛋白(Rpfd1、Rpfd2)等3种重组蛋白的免疫效能.方法 2011年11月至2012年2月间,分别以本实验前期制备的重组蛋白Rpfd(A组)、Rpfd1(A1组)、Rpfd2(A2组)分别于0、2、4周免疫无特定病原体(SPF)级BALB/c小鼠,每组14只,并分别以BCG(B组)和生理盐水(C组)同期免疫同种小鼠各14只作为对照.第5周,每组取7只小鼠摘眼球取血,ELISA法检测血清特异性抗体、血清IFN-γ和IL-2表达水平；第8周,每组剩余7只小鼠用1×105 CFU结核分枝杆菌标准株H37Rv感染小鼠,第9周检测感染后小鼠血清细胞因子IFN-γ和IL-2水平.结果 (1)抗体水平:①Rpfd抗原包被.A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(0.990±0.272)高于B组(0.631±0.180) (t=4.635,P＜0.05)；A2组(1.470±0.455)高于B组(t=6.634,P＜0.05).②Rpfd1抗原包被.A组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.030±0.304)高于B组(0.573±0.004)(t=5.276,P＜0.05)；A1组(1.368±0.171)高于B组(t＝17.20,P＜0.05)；A2组(2.766±0.245)高于B组(t＝31.643,P＜0.05)；③Rpfd2抗原包被.A1组刺激小鼠产生抗体A450的检测值(1.055±0.202)高于B组(0.538±0.100)(t＝8.009,P＜0.05)；A2组(1.605±0.544)高于B组(t=8.192,P＜0.05).(2) IFN-γ水平:①感染前.A组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(553.47±132.00) pg/ml]高于B组[(385.28±129.07) pg/ml](t=3.150,P＜0.05)；②感染后.A1蛋白组刺激小鼠产生IFN-γ水平[(492.41±211.74) pg/ml]高于B组[(335.36±207.72) pg/ml](t＝2.874,P＜0.05)；A2组[(543.09±223.07) pg/ml]高于B组(t=3.15,P＜0.05).(3) IL-2水平:①感染前.A组刺激小鼠产生IL-2水平[(1490.05±215.35) pg/ml]高于B组[(718.70±269.29) pg/ml](t=7.763,P＜0.05)；A1组[(1738.91±358.40) pg/ml]高于B组(t=7.903,P＜0.05)；A2组[(2270.74±193.40) pg/ml]高于B组(t=16.308,P＜0.05)；②感染后.A组刺激小鼠产生IL-2水平[(806.81±306.39) pg/ml]高于B组[(335.26±176.81) pg/ml](t=4.627,P＜0.05)；A1组[(1373.22±143.75) pg/ml]高于B组(t=15.90,P＜0.05).结论 Rpfd、Rpfd1、Rpfd2蛋白具有启动宿主体液免疫功能及增强宿主细胞免疫功能的双重作用,可能成为预防及治疗Mtb感染的免疫新策略.
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市售防蛀剂(含对二氯苯)亚急性染毒对小鼠免疫功能的影响
目的研究市售防蛀剂(含对二氯苯)对小鼠免疫器官、单核-巨噬细胞、细胞免疫、体液免疫功能的影响.方法用ICR雄性小鼠随机分为5组:阴性对照组用食用油;实验组分为190、375、750 mg/kg防蛀剂灌胃染毒30 d;阳性对照组用环磷酰胺50 mg/kg隔日腹腔注射,共2次.采用免疫器官系数、碳粒廓清指数、血清溶血素及迟发性变态反应(足跖增厚法)指标,观察对小鼠免疫功能的影响.结果高剂量组小鼠胸腺系数减小(P＜0.01),中、高剂量组小鼠肝脏系数明显增加(P＜0.01),吞噬指数明显降低(P＜0.05),血清溶血素抗体水平降低,对迟发性变态反应无影响.结论在本实验剂量与条件下,该防蛀剂具有抑制小鼠胸腺发育、引起肝脏肿大,对单核-吞噬细胞有抑制作用,降低血清溶血素,对小鼠免疫功能有抑制作用.
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重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3不同剂量对免疫保护性的影响
目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨佳的免疫剂量.方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB/c小鼠并进行攻击感染实验.在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率.并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体.结果成功表达出rSj14-3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28.20%、第2组43.10%、第3组40.00%;各组的减卵率分别为(按以上组序)41.80%、57.50%、55.70%.各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6.8、第2组t=8.7、第3组t=7.3,各组P值均＜0.01;减卵率:第1组t=11.23、第2组t=11.54、第3组t=7.99,各组P值均＜0.01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:x2=8.96,P＜0.05;减卵率:x2=15.69,P＜0.05)、第1组与第3组间(减虫率:x2=6.52,P＜0.05;减卵率:x2=12.52,P＜0.05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:x2=1.20,P＞0.05;减卵率:x2=0.93,P＞0.05).各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显.结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性好.
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外周血CD4+CD25+调节性T细胞与乙型肝炎疫苗接种后应答关系的研究
目的 通过检测乙型肝炎(简称乙肝)疫苗接种后弱应答和无应答人外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞(CD4+ CD25+ regulatory T cell,简称Treg细胞)的频率,探讨CD4+ CD25+ 调节性T细胞与乙肝疫苗接种后弱和(或)无应答之间的关系.方法 利用流式细胞分析方法 对25例乙肝疫苗无应答、30例乙肝疫苗弱应答者外周血Treg细胞的频率进行分析,另外选取20例乙肝疫苗强应答者作为对照.结果 强应答组Treg细胞的频率为(4.32±1.21)%,弱应答组Treg细胞的频率为(7.01±1.06)%,无应答组Treg细胞的频率为(12.75±2.01)%,无应答组和弱应答组与强应答组相比Treg细胞频率显著升高(t=8.426,t=3.289,P值均＜0.01).结论 乙肝疫苗接种后无应答和弱应答现象与外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞频率升高存在一定关系.
关键词： 肝炎疫苗 乙型 抗体生成 CD4阳性T淋巴细胞 流式细胞术 -
成年人乙型肝炎疫苗无或弱应答者三种方案再免疫的效果分析
目的 探讨成年人乙型肝炎(简称乙肝)疫苗接种后无或弱免疫应答者三种不同方案再免疫的效果.方法 采用随机(数字表法)、开放性的研究方法 ,对2年内至少完成1个标准乙肝疫苗免疫接种程序、复查乙肝病毒标志物均阴性者,随机(数字表法)地接受3种再免疫方案,A组:34例,先予粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)300μg皮下注射,次日开始按常规程序予乙肝疫苗接种,10μg/次;B组:33例,单纯乙肝疫苗接种,20μg/次;C组:33例,单纯乙肝疫苗复种,10μg/次.接种首针前及首针后第1、2,8个月(T1、T2、T8)检测乙肝病毒表面抗体(抗-HBs).结果 T1时,联合GM-CSF组、20 μg组和10μg组抗-HBs阳性率分别为26.47%,48.48%和18.18%(X2=7.20,P=0.027);T8时,20μg组抗-HBs阳性率达75.76%,联合GM-CSF组达64.71%,均高于10μg组的39.39%(X2=9.07,P=0.011).20μg 峭组在T1 时抗-HBs滴度(417.00±69.36)高于联合GMCSF组(203.74±79.56),在,T2时抗-HBs滴度(458.17±64.09)高于复种组(257.86±76.60),T8时20μg组(532.73±68.82)和联合GM-CSF组(501.48±70.00)抗-HBs滴度均高于10μg组(256.12±75.39)(t=4.27,P=0.0173).结论 对乙肝疫苗无(弱)应答者增加疫苗剂量和联合GM-CSF方案进行加强免疫是有效的措施,免疫效果均优于单纯复种.
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激素退热后患无穷
发热是小孩常见的症状，感冒又是引起发热的主要原因。研究表明，中度发热（体温58．5～59．5℃）可提高机体的防御功能，促进白细胞和抗体生成增多，有利于消除炎症。
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抗免促孕胶囊治疗抗精子抗体所致免疫性不孕症临床观察
抗精子抗体所致免疫性不孕是不孕不育科常见病之一.近年来,笔者应用自制的抗免促孕胶囊治疗116例,疗效满意,现总结如下.
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注射用布氏菌活疫苗免疫学评价
目的以小鼠为动物模型，通过检测布氏菌活疫苗免疫小鼠产生的体液免疫、细胞免疫应答及保护力，对其进行免疫学评价。
方法将30只小鼠随机分为3组，皮下免疫布氏活疫苗，免疫4周后分离血清及脾脏淋巴细胞。ELISA法检测免疫动物血清中总 IgG 抗体，抗体亚类 IgG1及 IgG2a；ELISPOT 法检测分泌 IFN-γ、IL-4的脾脏淋巴细胞数目，以及用 ELISA 方法检测体外再刺激后小鼠脾细胞分泌IFN-γ、IL-4的细胞因子水平；用羊布氏菌弱毒株 M5攻击免疫动物，通过脾脏细菌计数评价布氏活疫苗的免疫保护作用。
结果用 ELISA 法检测到免疫布氏活苗的小鼠体内有特异性抗体产生；ELISPOT 可检测到较高的分泌 IFN-γ脾脏淋巴细胞数目，ELISA 方法可检测到较高的 IFN-γ水平，表明布氏活疫苗主要诱导 Th1型免疫应答；通过布氏活疫苗保护力分析，表明该疫苗具有较好的免疫保护效果。
结论布氏疫苗采用注射免疫途径是可行的，免疫后能获得较好的免疫效果。 -
蛋白表达的亚细胞定位影响基因免疫诱导的体液免疫应答水平的研究
目的 研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考.方法 利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPV16L1 融合蛋白和截短型 EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS 真核表达载体;通过转染 CHO 细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA 载体免疫 BALB/c 小鼠;EGFP 作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度.结果 ①重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 转染的CHO 细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体转染的 CHO 细胞质内可见到绿色荧光;②两种不同的重组 pcDNA 载体均可诱导 BALB/c 小鼠体液免疫反应,但重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450 值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450值(P < 0.001).结论 表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的 的基因疫苗的设计提供了参考.
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鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究
目的 通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价.方法 将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体；充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体.结果 血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体.肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生.结论 鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗.
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抗阿尔茨海默病Aβ人源单链抗体基因的筛选和表达
目的 从人源噬菌体单链抗体库中筛选与阿尔茨海默病发病中起关键作用的β淀粉样多肽(Aβ)1-42特异性结合的单链可变区抗体(scFv)基因,利用原核生物大肠杆菌进行可溶性表达,以获得抗AB1-42人源抗体.方法 利用噬菌体展示技术对人源噬菌体单链抗体库进行多轮富集,以Aβ1-42为抗原经酶联免疫吸附(ELISA)检测,筛选与Aβ1-42特异性结合的阳性噬菌体克隆,再用阳性噬菌体感染E.coli HB2151进行可溶性表达,经SDS-PAGE、Western blot及ELISA法检测scFv单抗的可溶性表达水平及抗原结合活性.并对阳性scFv抗体基因进行基因测序鉴定.结果 获得了7个特异性的抗Aβ1-42 scFv阳性噬菌体克隆,其中4个克隆ELISA检测吸光度值(A值)高于阴性对照5倍以上;其中1株(A 10)获得可溶性单链抗体的成功表达,表达产物主要位于菌体中,ELISA效价显示在全菌蛋白中A值高于对照5倍以上.其相对分子质量约为33 000.DNA测序表明所获抗体的可变区基因属于scFv抗体基因,推导得到的氨基酸序列具有典型的抗体可变区结构.结论 用人源噬菌体单链抗体库筛选出抗Aβ1-42的人源抗体单链可变区基因,并成功表达了具有抗原结合活性的可溶性单链抗体,为进一步研究阿尔茨海默病的发病机制和治疗奠定了基础.
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rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究
目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应；而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当；与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强；rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.
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人偏肺病毒DNA疫苗的构建和小鼠免疫反应的研究
目的 构建人偏肺病毒(hMPV)DNA疫苗,小鼠免疫后评价其细胞和体液免疫水平.方法 利用PCR方法,从hMPV的cDNA中扩增融合蛋白FATM(缺失跨膜区)基因和基质蛋白M基因,构建DNA疫苗pcDNA3.1His-FATM和pcDNA3.1His-M,瞬时转染后用Western Blot和间接免疫荧光方法检测F、M蛋白表达.疫苗肌内注射免疫小鼠,ELISA和ELISPOT方法分别检测血清IgG抗体和小鼠脾细胞CTL水平.结果 Western Blot和间接免疫荧光(IFA)方法证明构建的疫苗可表达FATM和M蛋白.peDNA3.1His-FATM单独免疫小鼠,血清抗体滴度为1:44;与pcDNA3.1His-M联合免疫后,血清抗体滴度为1:64.ELISPOT检测证明,联合免疫组小鼠脾细胞产生IFN-γ的效应CD8+T细胞数为42±8.9,高于单独免疫组32±7.4的水平.结论 DNA疫苗peDNA3.1His-F△TM可以诱导产生特异性的体液和细胞免疫,与pcDNA3.1His-M联合免疫,可以提高免疫水平.
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基于枯草芽孢杆菌系统制备的EV71 VP1重组抗原诱导小鼠免疫应答的研究
目的 观察基于枯草芽孢杆菌系统制备的EV71 VP1重组抗原诱导BALB/c小鼠产生的免疫应答反应.方法 通过建立BALB/c小鼠动物模型,分别将前期构建的基于枯草芽孢杆菌系统制备的EV71重组抗原(rVP1)、灭活EV71病毒免疫组(EV71)和空白对照组(PBS),经鼻腔接种6～8周龄BALB/c小鼠,ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG、IgA以及IgG1和IgG2a水平.结果 EV71重组抗原可以有效诱导小鼠产生高水平的体液免疫和明显的黏膜免疫应答,且能够诱发均衡的Th1、Th2免疫调节.结论 肠道病毒71型重组VP1抗原可诱发小鼠产生明显的特异性体液免疫和黏膜免疫应答.
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重型乙型肝炎前期免疫学指标分析
目的 观察重型乙型肝炎前期(以下简称重肝前期)细胞免疫及体液免疫状况.方法 选取重肝前期患者56例,慢性乙型肝炎患者40例,健康志愿者20例,采用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD3-/CD19+(B细胞)等亚群表达百分比,免疫散射比浊法检测血清IgG、补体C3,并进行统计学分析.结果 与慢性乙肝组及健康对照组相比,重肝前期组CD8+T细胞百分率明显降低(P＜0.01或P＜0.05),但其CD4+百分率及CD4+/CD8+的比值显著高于慢性乙肝组(P＜0.01或P＜0.05)；慢性乙肝组与重肝前期组外周血B细胞的平均百分率及血清IgG水平差异无统计学意义(P＞0.05)；重肝前期组血清补体C3水平显著下降(P＜0.01或P＜0.05).结论 重型乙肝前期患者存在一定程度的免疫功能紊乱,相对慢性乙肝而言,细胞免疫相对亢进,体液免疫相对受抑.
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离体免疫制备莱姆病螺旋体单克隆抗体的初步研究
制备单克隆抗体采用离体免疫时间短、抗原用量少,并有不受有毒有害物质限制、诱发抗体生成所需时间短等优点.
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半合成抗体库的构建及鉴定
目的 构建半合成抗体库,不经免疫制备抗体. 方法 通过PCR法,从人胎肝DNA扩增基因组VH段基因,从Fd基因制备含有不同长度随机化CDR3的FR3-CDR3-J-CH1片段,然后用重叠PCR法构建Fd库,与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库. 结果 通过各种组合多次建库,获得总容量为4×108的半合成抗体库,其Fd段和轻链基因的重组率均大于90%,Fab表达率为50%.挑选20个克隆测定CDR3序列符合所设计的随机序列,用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体. 结论 所构建的半合成噬菌体抗体库可以用于不经免疫制备抗体.
