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应用反转录PCR和实时荧光定量PCR技术判定现场物证生物属性
目的 探寻分子生物学方法判定刑事案件现场物证的生物属性的可行性. 方法 取30份现场生物检材,其中血液(斑)、唾液(斑)、精液(斑)各10份,分别进行常规检验法和分子生物学方法,通过DNA-RNA共提取技术,将其中的mRNA运用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术反转录成cDNA,根据3种生物检材不同的目标基因设计3对特异性引物,进行实时荧光定量PCR扩增,通过熔解曲线测定不同的熔解温度(Tm)和不同长度的扩增片段来区分生物检材. 结果 血液(斑)的Tm值为(84.5±0.2)℃,片段长度177 bp;唾液(斑)的Tm值为(76.9±0.3)℃,片段长度134 bp;精液(斑)的Tm值为(88.5±0.2)℃,片段长度294 bp. 结论 与常规检验法比较,联合应用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术判定检材的生物属性特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠,可应用于日常法医物证检验.
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宫颈癌中骨桥蛋白的表达及与新辅助化疗敏感性关系的研究
目的 探讨骨桥蛋白(OPN)在宫颈癌组织及血清中的表达及与新辅助化疗敏感性关系.方法 采用实时荧光定量PCR法检测49例宫颈癌患者(其中包括20例新辅助化疗患者)、28例宫颈正常患者组织中OPN mRNA的表达及20例行新辅助化疗前、后宫颈癌组织中OPN mRNA的表达水平；同时采用ELISA法测定上述患者血清中OPN的表达水平.结果 OPN在宫颈癌组织及血清中的表达均明显高于正常宫颈组织,且差异有显著性(P＜0.05)；新辅助化疗患者化疗后血清及组织中OPN的表达水平均明显下降(P＜0.05).结论 OPN在宫颈癌中明显高表达,在宫颈癌的发生、发展中起着重要的作用,且与宫颈癌的新辅助化疗敏感性密切相关.
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实时荧光定量PCR技术在细菌学检测方面应用进展
实时荧光定量PCR技术在细菌学检测方面应用日渐广泛,本文对实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、结核分枝杆菌等病原菌的检测方面的应用进展进行了综述,为更深入的研究各种病原菌奠定基础.
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TaqMan探针法实时荧光定量PCR的应用和研究进展
TaqMan探针法实时荧光定量PCR因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用,内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度,增加了其可靠性和实用性.然而,这一技术也因为假阴性和假阳性问题存在着改进的空间.本文从TaqMan探针法的简介、研究进展以及应用前景展开综述.
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宫颈疾病中HPV高危亚型分型定量研究及其临床意义
目的 探讨不同程度宫颈疾病患者中HPV高危亚型分型定量检测的意义.方法 应用实时荧光定量PCR技术,对东海县人民医院近两年的97例诊断为宫颈疾病的石蜡组织切片进行HPV 8种高危亚型分型定量.结果 8种高危亚型的总感染率为35.2%,慢性宫颈炎(19%)、宫颈炎伴磷化(14.3%)、宫颈息肉伴磷化(33.3%)、CINI(41.7%)、CINII(50%)、CINIII(66.6%)、宫颈癌(72.7%)的感染率具有显著性差异(P<0.05).8种高危亚型中HPV16(44%)为主要感染亚型,特别在宫颈癌患者中的感染率高,达75%.HPV的复合感染率为28%,在宫颈癌(25%)、宫颈上皮内瘤变(44.4%)、非宫颈癌类宫颈疾病(12.5%)中复合感染率无显著性差异(P>0.05).高危亚型的病毒载量研究显示宫颈癌(5.90×107U/ml)和宫颈癌前病变(4.99×106U/ml)的平均病毒载量高于宫颈其他类疾病(1.11E×104U/ml).8种高危亚型平均感染年龄统计显示,HPV16/18/45、HPV31、HPV33/52/58/67分别为53.9、46.3、45.6.结论 HPV高危亚型的感染概率随宫颈疾病的严重程度增加而增加,特别HPV16亚型与宫颈癌的发生有密切的关系.HPV定量值显示高病毒载量的持续感染增加了宫颈癌发生的风险性.
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应用实时荧光定量PCR技术检测外周血白细胞分子标志物评估胰岛素敏感性的研究
[目的] 通过建立实时荧光定量PCR技术检测外周白细胞中mRNA基因表达差异的方法来评定或预测胰岛素抵抗的发生,以期了解其在2型糖尿病发生中所发挥的作用.[方法] 应用实时荧光定量PCR技术检测中国北方居民,年龄、性别相匹配的胰岛素抵抗者和胰岛素敏感者外周血白细胞mRNA基因表达水平,根据候选基因(未知序列)的mRNA表达浓度差异,了解胰岛素抵抗的发生情况.[结果] (1)建立由外周血提取RNA,并逆转录为cDNA的方法;(2)应用实时荧光定量PCR技术检测候选基因;(3)初步了解两组人群外周白细胞mRNA特异性表达的差异.[结论] 应用β-actin作为管家基因建立较稳定的实时定量PCR方法能够应用于分子流行病学分析.候选基因在不同人群的表达差异表明可能做为早期预测胰岛素抵抗的一种基因.
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动态检测尿Livin mRNA表达对膀胱癌早期诊断的临床价值
目的 动态检测膀胱癌患者手术前、后尿Livin mRNA表达情况,探讨其对膀胱癌早期诊断的临床价值.方法 采用实时荧光定量PCR方法检测30例膀胱移行细胞癌患者术前、术后1周、1个月、3个月、6个月至18个月及30例非泌尿系统肿瘤患者及30例健康志愿者尿Livin mRNA表达情况,并结合临床资料进行分析.结果 Livin mRNA在30例病例组术前尿液中出现高表达,相对拷贝数为(96.33±35.79)/ul,且随着肿瘤临床分期、分级由低到高,其表达水平亦有随之增加的趋势;30例对照组中有2例出现较高表达,相对拷贝数分别为43.17和47.52,其余为低表达,相对拷贝数为(16.25±7.81)/ul;30例正常组为低表达,相对拷贝数为13.74±1.57.病例组术前尿Livin mRNA表达水平明显高于对照组和正常组,其差异有统计学意义(P<0.05);术后1周(27.35±2.21)/ul较术前显著下降(P<0.05);术后1个月(16.72±2.45)/ul、3个月(15.54±2.14)/ul、6个月(14.33±1.71)/ul与对照组和正常组相比差异无统计学意义(P>0.05).随访至术后18个月,5例复发者再次手术前(98.27±26.55)/ul与初次术后6个月相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 动态检测尿Livin mRNA表达的高特异性、高敏感性,可作为膀胱癌早期诊断的一个无创性指标.
关键词： 膀胱移行细胞癌 实时荧光定量PCR LivinmRNA表达 -
慢性丙肝患者血清中HCV-RNA与HCV-Ab的相关性分析
目的：探讨慢性丙型肝炎患者外周血中HCV RNA与HCV-Ab联合检测在丙型肝炎诊断的应用价值，为临床提供诊断治疗依据。方法：收集92例可疑慢性丙型肝炎患者血清，采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)进行丙型肝炎病毒检测及ELISA法检HCV-Ab。结果：HCV RNA阳性率为78.3%（72/92）；抗-HCV阳性率为73.9%（68/92）后，利用SPSS软件做统计分析。结论：HCV RNA含量与抗-HCV含量呈正相关（r=0.892，P＜0.01），且有符合性和互补性。
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实时荧光定量PCR监测BCR/ABL在慢性粒细胞白血病中的临床意义
目的 评价bcr-abl融合基因动态检测在慢性粒细胞白血病诊断、疗效监测中的临床意义.方法 实验纳入2009年01月-2013年01月我院初诊的慢性粒细胞白血病慢性期患者70例,根据bcr-abl融合基因表达情况及自身条件给予分组治疗,甲磺酸伊马替尼治疗组54例;羟基脲+干扰素治疗组16例,并采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)技术对患者bcr-abl融合基因进行动态监测.结果 初诊时66例患者bcr-abl融合基因阳性.结论 采用RQ-PCR技术对CML患者进行bcr-abl融合基因的实时动态检测,有助于疾病早期诊断、疗效评价、预后判断及个体化分层治疗.
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类风湿性关节炎患者外周血mRNA中IL-21的表达
目的 本研究通过检测类风湿性关节炎( Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血mRNA水平IL-21 的表达,探讨IL-21 在RA患者外周血基因水平的表达和临床意义. 方法 选取2013年3月至2014年10月的40 名RA患者、30名健康志愿者和10名骨性关节炎患者,分离外周血PBMC提取mR-NA,通过实时荧光定量PCR检测IL-21 的表达. 结果 RA组IL-21表达明显高于正常对照组和骨性关节炎组,差异有统计学意义(p<0.05). RA活动期患者IL-21明显高于非活动期患者(p<0.05). 结论 IL-21 在外周血mRNA水平的高表达可能成为诊断以及判断RA疾病活动期的重要生物学标记物,推测IL-21 的升高促进RA患者TNF-α的上调和Th17细胞的增殖,为临床上针对IL-21的联合靶向治疗提供了新的思路.
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实时荧光定量PCR在手足口病病原体检测中的应用探讨
目的 探究实时荧光定量PCR在手足口病病原体检测中的应用效果.方法 选择2015年6月-2017年6月我院门诊与住院部采集的手足口病患儿的咽拭子240份为研究对象,根据检测方法的差异分为实时荧光RT-PCR组和常规RT-PCR组,比较两种方式的检出阳性率与检出时间.结果 在检测相同标本数量的情况下,实时荧光法检测所需时间明显短语常规法(P＜0.05),两组EV71检出阳性率比较P＜0.01,两组检出CoxA16阳性率比较P＜0.05,差异有统计学意义.结论 实时荧光定量PCR对手足口病具有检出灵敏性高、检出时间短、检出结果直观性强等优势,能有效提高临床对于手足口病病原体的检测,为患儿的治疗提供可靠依据.
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EB病毒在儿童腺样体肥大和扁桃体炎组织内的定量研究及意义
目的 探讨EB病毒在儿童慢性扁桃体炎、腺样体肥大中的流行病学特点及其在儿童腺样体肥大、慢性扁桃体炎疾病发病机制中的作用. 方法 采用实时荧光定量PCR技术对52例慢性扁桃体炎、腺样体肥大患儿手术摘除的腺样体、扁桃体组织及血浆标本进行EB病毒定量检测. 结果 患有慢性扁桃体炎和(或)腺样体肥大的儿童扁桃体、腺样体组织中EB病毒感染率为51.9％；其中男性患儿EB病毒感染率为50.0％,女性患儿为55.6％,两者差异无统计学意义(P＞0.05).扁桃体组织EB病毒感染率为40.4％,腺样体组织为48.9％,差异无统计学意义(P＞0.05).学龄组(7～14岁)患儿扁桃体和腺样体组织EB病毒感染率为65.5％,明显高于学龄前组(2～6岁)患儿的感染率(34.8％).比较轻、中、重度肥大的腺样体组织中EB病毒-DNA拷贝数发现:重度肥大组EB病毒-DNA拷贝数明显高于其他两组(P＜0.05).52例患儿血浆标本检测发现:EB病毒-DNA拷贝数均在正常范围内(＜1×103基因拷贝/ml). 结论 腺样体肥大组织与慢性扁桃体炎组织对EB病毒有相同的易感性,男、女性患儿的扁桃体和腺样体组织对EB病毒易感性基本相同,且随着患儿年龄的增长、病程的延长,EB病毒的感染率也会相应增高.腺样体的增生、肥大与EB病毒的感染有一定相关性.
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ELISA与FQ-PCR检测乙肝病毒血清学标志物比较及其临床意义
目的:探讨FQ-PCR检测HBV-DNA与ELISA检测HBVM的结果比较及其临床意义.方法:对86例血清同时进行FQ-PCR检测HBV-DNA及ELISA方法测定HBVM.结果:乙肝血清学标志物8种常见模式,不同的血清学模式,HBV-DNA阳性率有差异,其中HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)和HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)模式的HBV-DNA阳性率高,与其余各组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:ELISA检测结果相同的患者,其体内HBV-DNA的复制情况存在很大的差别,需结合FQ-PCR检测患者血清HBV-DNA含量进行检测.
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肠道菌群失调对结直肠癌发生的影响研究
目的：用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，分析结直肠癌患者肠道菌群变化并探索肠道菌群在发病过程中的作用。方法：依据细菌基因序列，设计较具代表性的五种细菌的特异性引物，并收集结直肠癌患者的粪便标本三十份及正常对照组标本三十份。提取细菌基因组的 DNA，并且应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法测定细菌的数量，得出结论然后进行研究。结果：对照组与实验组粪便中细菌的数量为双歧杆菌属：9.15±0.73比4.42±0.39，乳酸杆菌属：7.35±0.27比5.26±0.02，结直肠癌组的数量明显减少(P<0.05)；大肠杆菌：4.58±0.22比5.72±0.37，粪肠球菌：4.85±0.14比10.50±0.20，屎肠球菌：5.13±0.33比5.64±0.06，结直肠癌组的数量明显增多(P<0.05)。结论：通过对比对照组，结直肠癌患者粪便中数量减少的菌群有双歧杆菌和乳酸杆菌；数量增多的菌群有大肠杆菌，粪肠球菌以及屎肠球菌，由此可以看出肠道菌群的失调对结直肠癌的发生有一定的影响。
关键词： 结直肠癌 实时荧光定量PCR 肠道菌群 SYBR greenⅠ -
小儿肺炎诊断中应用实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA的价值
目的 探究在小儿肺炎诊断中应用实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA的价值.方法 选取2292例疑似肺炎支原体感染患儿作为研究对象,分别采集患儿支气管肺泡灌洗液标本及咽拭子标本,所有标本均应用实时荧光定量PCR对肺炎支原体DNA检测.结果 2292例患儿肺炎支原体DNA感染阳性率为33.94%(778/2292),支气管肺泡灌洗液肺炎支原体DNA感染阳性率46.09%(719/1560)高于咽拭子标本8.06%(59/732),差异有统计学意义(X2=321.4,P＜0.05).结论 实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA用于小儿肺炎诊断,诊断效果好,值得广泛应用.
