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调经孕育方药服用者血清对人子宫内膜体外培养细胞早孕相关因子表达和诱导间质细胞蜕膜化的免疫组织化学观察
目的:研究服用调经孕育方药者血清对人子宫内膜体外培养细胞5种早孕相关因子和诱导间质细胞蜕膜化的观察.方法:人子宫内膜体外培养细胞,加入服用方药前后的LH-2、LH+(7+10)实验血清作用6d后,进行免疫组织化学染色,比较分析不同血清的表达强度.结果:5种观察因子中,服药后血清作用的细胞LN、TGF、LIF、VEGF表达强度明显增强,而FGF的表达无明显变化;间质细胞蜕膜化的特异性PRL染色证实,发生蜕膜化的细胞占10%～15%.结论:服用方药后的实验血清,可明显促进体外培养的内膜细胞在生长和分化过程中4种早孕相关因子的表达,诱导间质细胞发生蜕膜化.
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扶正祛瘀中药抑制子宫肌瘤细胞增殖的研究
目的:研究扶正祛瘀中药抑制子宫肌瘤增殖的作用机制.方法:体外原代培养子宫肌瘤细胞并传代后,加入扶正祛瘀中药,继续培养,MTT法检测扶正祛瘀中药对子宫肌瘤细胞增殖的影响,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:扶正祛瘀组对子宫肌瘤细胞增殖有明显抑制作用(P＜0.01);扶正祛瘀组子宫肌瘤细胞PCNA的表达明显降低,与空白对照组比较有统计学意义(P＜0.01).结论:扶正祛瘀中药可能通过降低PCNA的表达,抑制子宫肌瘤细胞增殖,进而控制肌瘤的生长.
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黄芪组分配伍对乳鼠肥大心肌细胞肌酸激酶同功酶mRNA表达的影响
目的:探讨黄芪组分(黄芪皂苷和黄芪多糖)对心肌细胞能量代谢的干预作用及其分子机制,为中药防治心衰提供实验依据.方法:体外培养的乳鼠心肌细胞,加血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)造成肥大心肌细胞模型,黄芪组分配伍干预后,采用RT-PCR法测定肌酸激酶(CK)同功酶的mRNA表达.结果:1.AngⅡ作用24 h后,CK.B亚基的表达增加而CK-M亚基的表达减少.48 h该作用持续存在;2.黄芪不同组分及配伍干预48 h,心肌细胞的CK-B亚基及CK-M亚基表达趋于正常.结论:黄芪组分及组分配伍可在分子水平上抑制AngⅡ对心肌细胞CK同功酶mRNA表达的影响,提示黄芪可能是通过对肥大心肌细胞能量代谢的干预作用预防心衰的发生发展.
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天螺多糖抑制HBV复制的体外实验研究
天螺多糖是我院首次以天螺(江西巴蜗牛,Bradybana.Jiangxinensis)为原料采用溶剂提取法制取的生物活性物质[1].为进一步了解天螺多糖的药理活性及其细胞毒性,我们以HBV转染的人肝癌细胞2.2.15细胞株为靶细胞,通过细胞培养实验观察其对HBV-DNA复制的抑制作用.
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大鼠血管外膜成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究
目的:建立大鼠血管外膜成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的方法,并对其生物学特征进行观察.方法:通过组织块贴壁法,以含20%胎牛血清的DMEM诱导细胞生长,0.25%的胰酶消化细胞传代后用含10%胎牛血清的DMEM在37 ℃,5%CO2,饱和湿度下培养.倒置显微镜下观察成纤维细胞形态,进行细胞中间丝蛋白的免疫化学鉴定,并绘制细胞生长曲线.结果:成纤维细胞能够迅速从组织块长出并增殖,波形蛋白免疫细胞化学染色为阳性,结蛋白及第Ⅷ因子染色为阴性,细胞在第(2～4)天进入指数生长期.结论:该方法所获得的血管外膜成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平研究血管再狭窄机制提供了充足可靠的靶细胞模型.
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人参皂苷Rg1对体外胚鼠皮层神经干细胞的增殖和神经胶质定向分化的影响
目的:探讨人参皂苷Rg1对体外胚鼠皮层神经干细胞的增殖和神经胶质定向分化的影响.方法:本研究采用MTT法测定人参皂苷Rg1对胚鼠皮层神经干细胞的佳剂量和佳作用时间点,氧糖剥夺(OGD)后的细胞损伤模型,免疫荧光染色鉴定神经干细胞增殖和神经胶质样定向分化.结果:分离后体外培养的胚鼠皮层细胞表达Nestin并自我复制,为神经干细胞,人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的佳剂量是0.016μg/mL,0.016μg/mL人参皂苷Rg1对神经干细胞的增殖佳作用时间点是6h.在人参皂苷Rg1的作用下,神经干细胞及OGD后的神经干细胞中Nestin、BrdU、光密度、阳性细胞Vimentin的面密度数目及Nestin/BrdU、Nestin/Vimentin双标染色细胞数目有显著提高(P＜0.05,P＜0.01).结论:人参皂苷Rg1具有促进皮层神经干细胞增殖和神经胶质样定向分化的作用,这一机制可能是人参皂苷Rg1中具有类似于生长因子或刺激某些细胞分泌生长因子,促进神经干细胞的胶质样分化和增殖.
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肺纤方提取物干预肺纤维化模型大鼠微血管内皮细胞黏附及游走迁移作用研究
目的:通过观察肺纤方干预肺间质纤维化大鼠肺微血管内皮细胞体外培养的影响,探讨肺纤方抗肺间质纤维化微血管内皮细胞黏附及游走的机制.方法:从肺纤维化模型组大鼠分离培养肺微血管内皮细胞.将其等量分为空白对照组,氯沙坦(10μg/mL)组,泼尼松(5μ g/mL)组,肺纤方大、中、小剂量(100、60、20μ∥mL)组.WST-1法检测肺微血管内皮细胞的生长黏附率.Transwell法检测肺微血管内皮细胞的迁移细胞进行计数.结果:与空白对照组、泼尼松组比较,肺纤方大、中剂量和氯沙坦可以显著抑制肺微血管内皮细胞的黏附率,作用48h尤为明显(P＜0.01).与空白对照组、泼尼松组比较,肺纤方大、中剂量和氯沙坦可抑制内皮细胞的迁移(P＜0.01).结论:肺纤方可以显著抑制肺间质纤维化大鼠肺微血管内皮细胞的黏附和游走迁移,从而具有抗肺间质纤维化作用.
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大黄与(庶)虫对药含药血清对胰岛素样生长因子-Ⅰ和表皮生长因子促进人子宫肌瘤细胞增殖的影响
目的:观察大黄(庶)虫对药不同剂量含药血清对胰岛素样生长因子-Ⅰ( IGF-I)和表皮生长因子(EGF)促进原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响.方法:原代培养并建立人子宫平滑肌瘤细胞系,采用中药血清药理学方法处理细胞,以MTT比色法检测不同剂量含药血清作用于经IGF-I、EGF处理的子宫肌瘤细胞12、24、48、72h的光密度值,计算细胞存活率.结果:大黄(庶)虫对药含药血清可抑制IGF-I、EGF对子宫肌瘤细胞的促增殖作用.结论:大黄(庶)虫对药含药血清通过抑制IGF-I、EGF对子宫肌瘤细胞的增殖作用,发挥其抑制肌瘤生长的作用,这可能是该对药治疗子宫肌瘤的机理之一.
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安体优调节BCAP37细胞TIMP2表达的体外实验研究
吴良村从事肿瘤防治工作40余载,精心研制了安体优(黄芩、天冬等),用于防治肿瘤患者术后的转移和复发,取得了一定的疗效.为探讨安体优防治肿瘤转移和复发的机理,进一步推广其在肿瘤临床中的使用,我们提取了安体优的主要成分黄芩甙,结合细胞培养、MTT和RT-PCR等技术,发现黄芩甙在转录水平对tissue inhibitor metalloproteinase 2 (TIMP2)有一定的调节作用.
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脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型
目的:建立机械性损伤引起星形胶质细胞反应性增生的体外培养模型.方法:体外分离培养新生Wistar大鼠脊髓的星形胶质细胞,培养至16d进行划伤实验,分为划伤组和对照组(未划伤);每组有7个时间点,分别为划伤后0、2h、6h、12h、24h、48h、72h.用免疫组织化学的方法进行染色,观察划伤组和对照组星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达, 并且进行半定量图像分析.结果:从划伤后2h～72h,同对照组相比,划伤组星型胶质细胞明显增生,细胞内GFAP的表达明显增高.结论:星形胶质细胞反应性增生的体外培养划伤模型能模拟脊髓组织受到机械损伤后,胶质细胞反应性增生及细胞内GFAP表达升高的过程.
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调经孕育方药对人子宫内膜体外培养细胞生长发育及诱导间质细胞蜕膜化的血清药理学研究
子宫是哺乳类动物孕育胎儿的器官,性周期中,在内分泌激素的调节下,子宫内膜呈规律的周期性变化,这种变化是胚泡着床的基础.子宫内膜组织主要由上皮和间质2种细胞组成,女性月经周期中内膜的周期性变化主要就是这2种细胞和细胞间质的变化,这种变化表现了女性月经周期的各种反应,使增殖、分化、分泌和蜕膜化等得以实现.中药口服后进入体内,首先进入血液并通过血循环达到靶器官而发挥作用,子宫是该方药归经的主要靶器官之一.
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启膈方对人食管癌细胞株EC109、人胃癌细胞株MGC黏附的影响
1材料1.1 细胞株、药物与试剂EC109人食管癌细胞株、MGC人胃癌细胞株均由河北医科大学四院科研中心提供.
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黄芪组分配伍对乳鼠肥大心肌细胞肌酸激酶同功酶活性的影响
代谢障碍贯穿在心肌肥厚发生、发展的全过程中,是导致心肌肥厚发展为心衰的重要因素.CK穿梭机制障碍会导致PCr和ATP之间的能量传输发生障碍,是细胞内能量代谢障碍的原因之一.既往研究表明,黄芪具有保护心肌线粒体结构、提高生物氧化相关的多种酶的活性、减少乳酸脱氢酶外漏等作用,从而改善心肌能量代谢.AngⅡ是引起心肌细胞肥大的重要活性物质,我们在既往研究建立的AngⅡ致乳鼠心肌细胞肥大模型基础上,观察体外培养的乳鼠心肌细胞肥大模型的总CK及其同功酶的活性以及黄芪注射液(主要成分为黄芪皂苷)和注射用黄芪多糖对该作用的影响,旨在探讨黄芪组分是否能有效地干预细胞能量代谢,为中药预防和治疗心衰提供客观实验依据.
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黄茂组分对乳鼠肥大心肌细胞ATP含量的影响
目的:观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及黄芪组分对心肌细胞ATP含量的影响,旨在探讨黄芪组分对心肌细胞能量代谢的干预作用,为中药防治心衰提供实脸依据.方法:体外培养乳成心肌细胞,加AngⅡ造成肥大模型,黄芪组分干预后采用高效液相色语法(HPLC)测定ATP的含童.结果:AngⅡ作用心肌细胞24h,ATP含量无变化,48h含1增加.黄芪组分干预后48h,ATP含量高于正常组,低于模型组.结论:黄芪组分可在分子水平上抑制AngⅡ对心肌细胞ATP含量的影响.
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植物细胞制药的研究进展
植物细胞工程制药是植物细胞技术在生物制药工业方面的应用.本文介绍了植物细胞工程制药所涉及的主要技术及其进展,包括大规模植物细胞培养生产药用成分,植物生物反应器,生物酶解技术,转基因植物生产药物等,在此基础上探讨了植物细胞工程制药的发展趋势.
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中医硕士研究生细胞培养教学的探索与思考
细胞培养技术应用于医学、药学及生命科学等各个领域,是硕士研究生开展医学研究的一项基本技能.根据近几年的细胞培养教学情况,全文将从教学内容、教学方法及模式、教学评价体系等方面入手,以提高学生实践操作与科研创新能力为基本落脚点,展开对硕士研究生细胞培养教学的一些探索与思考,为建设高端中医类科研型人才贡献力量.
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本科生细胞培养课程的教学探索
细胞培养技术是细胞学、遗传学、免疫学、药理毒理学、实验医学和肿瘤学研究常用的技术之一.为了帮助学生了解细胞培养相关基础知识,掌握一定的细胞培养实验技能,启发学生的科研思维,提高学生实验操作技能,为培养科研兴趣打下良好基础,我们在有限的学时内,对医学专业本科生中开设细胞培养课程进行了初步探索.
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羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响
目的 观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响.方法 采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用.结果 低浓度羟基喜树碱作用24 h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到 50 μg/mL 时,抑制作用明显增强,抑制率迭 44.17%,药物浓度达到100 μg/mL 时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100 μg/mL 药物组作用48 h抑制率达 70.98%.结论 羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性.
关键词： 羟基喜树碱 A549人肺腺癌细胞 细胞培养 MTT检测 -
黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究
目的 探讨中药黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病的作用机制.方法 采用体外细胞培养技术,选用人角质形成细胞株colo-16,观察黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激前后人角质形成细胞增殖的影响.结果 黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液在TNF-α刺激前后均表现出显著的抑制人角质形成细胞增殖的作用,与对照组甲氨喋呤和环孢素A相比较,差异有显著性意义(P<0.01).结论 中药复方通过抑制人角质形成细胞的异常增殖对银屑病有治疗作用.
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补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响
目的研究补肾活血中药对体外培养成骨细胞活性的影响.方法取二次酶消化法培养的胎鼠颅骨第三代成骨细胞,随机分为5组,即:细胞对照组、空白血清组、含药血清组、原药组、阳性对照药α D3组,分别加入普通细胞培养液、含空白血清及不同浓度补肾活血中药含药血清、补肾活血中药原药液、阳性对照药(αD3)的条件培养液,分别在培养第3天和第6天进行各试验组成骨细胞碱性磷酸酶及骨钙蛋白分泌量测定,观察补肾活血中药含药血清及原药液对成骨细胞活性的影响.结果含药血清组成骨细胞活性指标碱性磷酸酶(ALP)值在培养第3天均低于空白血清组,且与含药血清浓度呈负相关关系;第6天,含药血清组各浓度组ALP值明显升高,均显著高于空白血清组,ALP值与含药血清浓度存在正相关关系;空白血清组ALP值在培养第6天时下降,其均值低于培养第3天ALP值.培养第3天及第6天,各浓度原药组ALP值均高于细胞对照组及αD3组;ALP值与原药浓度呈正相关关系.含药血清组及中药原药组骨钙素(OC)含量显著高于空白血清及其他各对照组.结论补肾活血中药含药血清及原药能够直接作用于体外培养的成骨细胞,促进成骨细胞增殖,增强其分泌活性;可延长成骨细胞活性分泌期,使其活性分泌高峰后移而峰值升高,增加其活性分泌总量.
