丙泊酚对培养的大鼠缺氧/复氧心肌细胞内游离钙的影响

目的建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,测定细胞内游离钙([Ca2+]i)观察丙泊酚对缺氧]复氧心肌细胞的保护作用.方法大鼠心肌细胞正常培养6-8天后分为4组.Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为单纯缺氧组,Ⅲ、Ⅳ组为缺氧/复氧加丙泊酚组.比较对照组(Ⅰ组)和实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)的细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化.结果心肌细胞[Ca2+]f:Ⅱ组(781.64士298.20nmol/L)与Ⅰ组(188.99±30.78nmol/L)相比较有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组(279.11±106.14nmol/L)与Ⅰ组无显著性差异(P<0.05),Ⅱ组与Ⅳ组(469.41±145.35nmol/L)有显著性差异(P<0.05),Ⅲ组与Ⅳ组有显著性差异(P<0.05).结论临床剂量丙泊酚和超临床剂量丙泊酚均可抑制钙超载,但使用临床剂量效果优于超临床剂量.静脉麻醉药丙泊酚可以通过抑制钙超载对抗缺氧所致的心肌细胞损伤.丙泊酚尚可认为具有钙拮抗剂作用.

自体骨髓基质干细胞治疗骨缺损的初步实验研究

目的探讨自体骨髓基质干细胞修复兔桡骨远端骨缺损的可行性.方法取兔髂骨骨髓,体外分离培养扩增骨髓基质干细胞,与生物材料混合后植入体内修复兔桡骨远端骨缺损.结果12周后X片、大体标本、组织切片均显示缺损处有新骨形成.结论自体骨髓基质干细胞移植是修复兔桡骨远端骨缺损的理想方法.

破骨细胞对成骨细胞作用的研究

目的:探讨破骨细胞及其亚细胞结构对成骨细胞生长和功能的影响.方法:在获取大量破骨细胞的基础上,以细胞生物学方法探讨破骨细胞及其产生骨吸收后,破骨细胞、细胞培养基和亚细胞结构对成骨细胞生长和功能、成骨细胞核结合因子Cbf α 1表达的影响.结果:破骨细胞及破骨细胞产生骨吸收后,破骨细胞、细胞培养基和亚细胞成分对成骨细胞的生长和功能均有促进作用,可使成骨细胞的Cbfα1 mRNA的表达明显增强.

血清饥饿对大鼠血管平滑肌细胞黏附和铺展的影响

目的：探讨血清饥饿对大鼠血管平滑肌细胞黏附和铺展的影响。方法：培养大鼠血管平滑肌细胞，分为对照组与实验组。对照组给予含10%血清的DMEM，实验组给予DMEM，比较两组细胞黏附数及铺展情况。结果：实验组平滑肌细胞黏附数目平均(127±11)个，对照组细胞黏附数目(194±9)个。对照组细胞铺展较开，并有伪足伸出，实验组平滑肌细胞铺展效果较差，伪足伸出不明显。结论：血清饥饿在一定程度上能抑制大鼠血管平滑肌细胞的黏附和铺展。

胰岛素对牛胸主动脉内皮细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的:评价胰岛素对培养的牛胸主动脉内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响.方法:取新生的小牛胸主动脉,做血管内皮细胞原代及传代培养,取4～6代培养细胞分组应用不同浓度的胰岛素(30mU/L、300mU/L、3000mU/L)干预培养过程,48h后应用免疫组化法测定内皮细胞VEGF及其受体(flt-1、flk-1/KDR)的表达水平.结果:低浓度胰岛素组(30mU/L、300mU/L)内皮细胞VEGF表达明显高于不用胰岛素组(P<0.01);高浓度组(3000mU/L)内皮细胞VEGF表达明显低于不用胰岛素组(P＜0.05);各组内皮细胞VEGF受体(flt-1及flk-1/KDR)的表达无明显差异(P＞0.05).结论:低浓度胰岛素促进小牛主动脉血管内皮细胞VEGF表达;高浓度胰岛素可抑制血管内皮细胞VEGF表达;胰岛素对小牛主动脉血管内皮细胞VEGF受体(flt-1、flk-1/KDR)的表达无直接影响.

胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法.方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养细胞的进行鉴定.结果:经10～14天培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞.结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便,可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础.

改良式羊水细胞培养及收获在产前诊断染色体检查中的应用

目的 探讨改良式羊水染色体细胞培养和收获方法的成功率和效率.方法 收集2016年3-4月在本院行羊水染色体检查的标本780例,分部进行传统方法和改良后方法的细胞培养、收获,比较两种方法的质量及效率.结果 传统方法和改良方法的细胞培养成功数均为779例.接种后第7、8、9天,传统方法能够收获的标本数为733例,改良方法的为725例,两者差异无统计学意义;第14天未能收获的标本数,传统方法和改良式方法的均为1例;收获耗时,传统方法为(81 ±6) min/10个标本,改良式方法的为(50 ±4) min/10个标本;收获到适用分裂相数≥20个的标本例数,传统方法的为689例,改良式方法的为779例,两者差异有统计学意义.结论 改良式方法在不影响培养成功率和不延长收获周期的同时,提高了收获的成功率,缩短了耗时,简化了操作流程,值得推广应用.

吗啡对子宫内膜基质细胞增殖及ERmRNA表达的影响

目的研究吗啡对雌激素诱导的体外培养的人子宫内膜基质细胞的增殖作用及其ERmRNA表达的影响. 方法体外分离培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,并通过免疫细胞化学的方法进行鉴定;将基质细胞给予17-β雌三醇或/和吗啡及纳洛酮干预,观察细胞的生长增殖情况;通过RT-PCR 的方法半定量分析吗啡对基质细胞的雌激素受体ERmRNA表达的影响. 结果第一代传代的基质细胞各组接种密度间比较,差异无显著性(P＞0.05).接种用药第1、3、5、7、天进行细胞计数,细胞数较对照组增加,E+Mor组细胞数较E2组降低,差异有显著性(P ＜0.01).E+ M+N组与E2组比较,差异无显著性(P＞0.05);ER 与内参照β-actin 分别在469 bp和348 bp处出现特征性条带.雌激素组、吗啡组与对照组比较,差异有显著性 (P＜0.05),E+Mor组与对照组比较,差异无显著性(P ＞0.05).吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制基质细胞ERmRNA的表达,3组吗啡的终浓度分别为1×10-6 mol/L、1×10-5 mol/L、1×10-4 mol/L,经Spearman等级相关检验,r=-0.946,差异有显著性(P＜0.01). 结论外源性阿片类药物吗啡可以直接抑制雌激素对人子宫内膜基质细胞的促增殖作用,其机制可能是影响了雌激素受体mRNA的表达.

东北林蛙输卵管上皮细胞的培养质量控制管理

目的 探讨分析东北林蛙输卵管上皮细胞的培养,并对其质量控制进行分析研究.方法 该文对东北林蛙输卵管上皮细胞进行分离和纯化,对细胞培养所需要的条件及试剂进行比较优化,对东北林蛙输卵管上皮细胞进行培养传代.结果 通过上述分离方法分离获得林蛙输卵管上皮细胞,通过台盼蓝染色看出活细胞达95%以上,分离方法可行.通过显微镜观察发现,分离所得的输卵管细胞为圆饼状,胞浆饱满,细胞核清晰可见,呈悬浮状态,培养24 h后,细胞大部分都处于贴壁状态,多数伸展呈卵圆形,类似眼睛状,成簇生长,排列紧密,7 d后长满培养瓶瓶底,开始传代培养.结论 该研究建立的东北林蛙原代输卵管上皮细胞分离培养方法可获纯度较高的输卵管上皮细胞,值得实验室细胞培养质量控制管理.

聚维酮碘对脊髓灰质炎病毒杀灭效果及影响因素的观察

为科学评价化学消毒剂对脊髓灰质炎病毒灭活效果及影响因素,以聚维酮碘为观察对象,采用悬液定量试验法进行了实验室观察.结果,在检测聚维酮碘对脊髓灰质炎病毒灭活效果评价试验中,去除残余消毒剂可采用中和稀释法,配制中和剂可用Hanks生理盐水或0.03 mol/L磷酸盐缓冲液;采用含5%新生牛血清的细胞维持液作稀释液,对Vero细胞贴壁生长基本无毒性作用.结果显示,以含有效碘1000 mg/L的聚维酮碘消毒剂,作用10 min,对悬液内脊髓灰质炎病毒灭活效果达到消毒合格要求;有机干扰物对聚维酮碘灭活病毒的效果有一定的影响.

体外受精胚胎移植细胞培养中霉菌污染的调查

流感样病例暴发流行的病原学研究与方法比较

目的 对 2007 年 5 月下旬至 6 月上旬深圳市龙岗区某鞋厂流感暴发流行情况进行病原学研究.方法 采集发热患者的鼻咽拭子 27 份,急性期患者血清标本 17 份和恢复期患者血清标本 12 份.27 份鼻咽拭子标本,采用荧光定量 RT-PCR 方法 、胶体金法、MDCK 细胞培养、鸡胚分离培养方法 进行病原学检测;血清标本采用血清学和血凝抑制试验检测.结果 27 份鼻咽拭子标本中荧光定量 RT-PCR 检测阳性 17 份,阳性率为 62.96%(17/27);胶体金法检测阳性 12 份,阳性率 44.44%(12/27);MDCK 细胞分离培养,其中 2 份鼻咽拭子标本中分离出 2 株 H3N2 亚型流感病毒,阳性率 7.41%(2/27);鸡胚分离培养未分离出流感病毒.6 例病人的双份血清学检测结果 显示:恢复期抗体比较急性期抗体有 4 倍或以上增长. 结论 该起流感样病例暴发流行由 H3N2 亚型流感病毒引起.荧光定量 PCR 法的特异性高、灵敏度好,可用于流感病毒的快速检测.

进口和国产Vero细胞狂犬病疫苗安全性分析

近年我国已推广应用国产经Vero传代细胞培养制成的纯化狂犬病疫苗.我们于2002年2～12月按<国际临床试验规范>(GCP)方法对进口和国产Vero细胞狂犬病疫苗的安全性进行了临床试验观察.

一例婴儿接种狂犬疫苗效果观察

1999年9月30日-例刚出生28 d(3.6 kg)的男性婴儿被狗咬伤右脸部眼下1 cm处,有1 cm×0.2 cm牙痕平排两处,出血,伤口用流动清水、肥皂反复擦洗3～4次,再用碘酒消毒,接着使用地鼠肾细胞培养的狂犬疫苗制剂,按0、3、7、14、30 d各1针,肌肉注射(疫苗系武汉生物制品所生产,批号981233,有效期2000.2,2ml一支滴度大于2.5IU).

广州市番禺区2000～2001年被动物致伤者免疫效果监测

广州市番禺区自1990年以来,虽已无狂犬病发生,但每年因犬类等动物咬伤人的数量有不断增多的趋势,从而增加了发生狂犬病的危险.自1990年开始,开展了狂犬病疫苗免疫效果的监测.监测中发现,老年人的免疫效果一直不理想.2001年引入法国进口纯化的Vero细胞培养狂犬病疫苗--维尔博疫苗,主要针对老年人进行暴露后接种.现将番禺区2000～2001年50岁以上人群狂犬病疫苗接种后的抗体检测情况报告如下.

维尔博狂犬病疫苗安全性分析

2000年6～12月，按《国际临床试验规范》(GCP)方法对巴斯德梅里厄血清疫苗公司生产的维尔博狂犬病疫苗的安全性进行了临床试验观察。　　一、材料与方法　　1.实验对象：选择2000年6～8月来就医的被动物致伤者100例，按GCP入选排除标准确定观察对象，同时签定观察对象知情同意书和双方协议书。每组50例，所有观察对象均不使用抗狂犬病血清。　　2.使用疫苗：维尔博狂犬病疫苗(实验组)为进口VERO细胞精制纯化疫苗，由法国万安特-巴斯德公司生产，是一种经活化、提纯并真空冻干的狂犬病疫苗，稀释液0.5 ml，批号：P1241-1；人用精制狂犬病疫苗(对照组)系辽宁生物技术公司生产(地鼠肾细胞培养)，每支1 ml，批号：20000306-6。于上臂三角肌肌注。　　3.免疫程序：为0、3、7、14、28 d 5针接种。　　4.安全性观察方法：所有观察对象常规接种5针疫苗，并按“双盲法”分别登记和记录各项观察指标(局部和全身副反应)。　　5.评价标准：　　(1)安全性观察指标：第0～45 d局部和全身副反应发生的百分率，副反应类型及其程度。　　(2)观察参数：本实验使用世界卫生组织(WHO)推荐的说明生物制品安全性的参数(1989年9月WHO ART)，严密观察与记录。　　二、结果　　1.一般情况：观察对象共100例，男性48例(占48.0%)，女性52例(占52.0%)；年龄 小的5岁，大的78岁，11～50岁之间的共70例(占70.0%)。伤口Ⅱ度以下，即：轻度 抓伤或无出血的皮肤擦伤。致伤动物：被犬、猫、鼠、猴致伤分别为51、44、4、1例。致伤 部位： 上肢68例(占68.0%)，下肢32例(占32.0%)。地区分布：老城区74例(占74.0%) ，新城区18例(占18.0%)，郊区8例(占8.0%)。　　2.安全性(局部和全身毒副反应)观察：①局部反应：实验组：50例受试者共观察250针次。在D 0针次无局部反应。D3～D14针次注射后24 h出现局部反应者9针次，出现率为3.6% 。其中局部轻度疼痛者8针次(占3.2%)，轻度肿胀者1针次(0.4%)。24 h之内症状消 失者6针次，48 h内消失者3针次。对照组：50例受试者共观察250针次。在D 0～D28针次注射后24 h出现局部反应者64针次，出现率为25.6%，其中局部疼痛者44针次，占17.6%(轻度40针次，中度3针次，重度1针次)。轻度搔痒者2针次，轻度硬结者2针次，轻度青紫者1针 次，肿胀者11针次(轻度8针次，中度3针次)。出现红斑者4针次(轻度3针次，中度1针次)。 以上局部症状在24 h内消失者30针次，48 h内消失者18针次，72 h内消失者9针次，96 h内 消失者7针次。②全身反应：实验组：50例中共有4例于注射后24 h内出现全身反应，反应发 生率为8.0%，分别为轻度乏力2例、头痛和恶心各1例。症状于24 h内消失者1例，48 h 内消失者3例。对照组：50例中有17例于注射后24 h内出现全身反应，反应发生率34.0% ，其中乏力者10例(轻度6例、中度4例)，轻度发热者2例、头昏2例、畏寒1例、胸闷1例、皮 肤过敏1例。上述症状24 h内消失者7例，48 h内消失者4例，72 h内消失者1例。　　三、讨论　　众所周知，狂犬病是一种高度致死性的传染病，一旦发病100%死亡。因此，在暴露前、后如何正确、及时地选择安全、有效、稳定、高纯度、中和抗体产生快并能保持较长时间的狂犬病疫苗，是广大防疫工作者的当务之急。大量临床试验显示，根据WHO推荐的方法，使用维尔博狂犬病疫苗以后，几乎100%的病人在免疫后第14 d或28 d获得阳转(用免疫荧光法和小 鼠综合试验法)，抗体滴度很高 ，这一点在临床试验中已得到证实。本次实验组选用的狂犬病疫苗为WHO推荐的、能够控制 和重复进行工业大生产的VERO细胞狂犬病疫苗。该疫苗是经VERO传代细胞培养，具有良好的 耐受性、免疫原性和安全性。国产精制狂犬病疫苗是经地鼠肾单层细胞培养，其抗体滴 度比国产浓缩狂犬病疫苗高3～5倍，这标志着我国狂犬病疫苗的质量又上了一个台阶。 从近几年我国部分省、市防疫部门使用的浓缩狂犬病疫苗效果来看，维尔博狂犬病疫苗免疫 原性及安全性观察均在目前我国使用的国产浓缩狂犬病疫苗之前列［1，2］。本实验 观察中，两组在接种疫苗后局部及全身毒副反应发生率差异有显著性，局部反应：χ2＝ 48.52，P＜0.01；全身反应：χ2＝8.40，P＜0.05。 实 验组毒副反应(局部及全身)不仅例数少、程度轻、而且症状消失快。由此可见，实验组安全 性观察明显优于对照组。

乙型脑炎灭活疫苗接种反应分析及其预防

我国使用地鼠肾细胞培养工艺生产的流行性乙型脑炎灭活疫苗(乙脑灭活疫苗)已有30多年历史.为切实反映当前疫苗使用过程中接种反应的真实状况,对乙脑灭活疫苗质量与免疫接种反应之间的关系等做出评价,1998年江苏省开展了乙脑灭活疫苗免疫接种反应的前瞻性调查.

严重急性呼吸综合征实验室的生物安全管理

2003年3月1日,北京市出现首例严重急性呼吸综合征(SARS)患者,我中心便正式开始了该病的实验室检测工作.2003年3～6月,共检测SARS标本数千份,有的标本病毒含量高达105拷贝;检测方法有细胞培养、电镜、PCR、实时荧光PCR、免疫荧光实验、酶联免疫吸附实验等.由于条件所限,这些实验均在二级生物安全实验室中完成,甚至是早期的病毒分离、阳性毒株的培养及鉴定.由于我们实验室科学、严格的生物安全管理制度,未出现人员感染、样品污染及环境污染等事故.我们积累了一些经验或心得,对今后出现的其他病原未明、传播机制不清、生物安全等级不明疾病的研究,尤其对那些尚无P3实验室的单位有着很好的借鉴意义.

银杏叶提取物对视网膜神经细胞活性的影响

目的 测定银杏叶提取物(EGb761)对SD大鼠视网膜神经细胞活性的影响,初步探讨Egb 761对大鼠视网膜神经细胞作用机理.方法 建立体外培养大鼠视网膜神经细胞,用MTT法检测不同浓度Egb 761对视网膜神经细胞活性的影响.结果 Egb 761对视网膜神经细胞有显著的保护作用,且随浓度的增加,保护作用加大.结论 Egb 761有较好的保护视网膜神经细胞的作用.

黄芪组分配伍对血管紧张素Ⅱ致肥大心肌细胞模型线粒体活力的影响

目的 在原代培养的心肌细胞上观察血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及黄芪组分对心肌细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活力的影响,旨在探讨黄芪组分(包括黄芪皂苷和黄芪多糖)对心肌细胞能量代谢的干预作用,为中药防治心衰提供实验依据.方法 利用培养的乳鼠心肌细胞,根据活细胞线粒体琥珀酸脱氢酶在能量代谢过程中可使四氮唑盐(MTT)还原产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理,应用比色法测定Ang Ⅱ对培养心肌细胞能量代谢的影响和黄芪组分的干预作用.结果 Ang Ⅱ在作用24 h后使formazan产物的吸光度A值(OD)显著增加,此后开始下降,至48 h低于正常水平,具有显著性差异(P＜O.05);48 h黄芪干预组与正常组无显著性差异.结论 黄芪皂苷和黄芪多糖可显著地拮抗Ang Ⅱ引起的心肌细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活力下降,从而改善心肌细胞能量代谢.