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靶向前列腺癌的纳米超声造影剂的研究
目的:对前期研究的适体修饰的多壁碳纳米管(MWCNTs)纳米靶向造影剂作进一步的研究探讨.方法:对纳米超声造影剂采用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪进行体外细胞摄取评价.采用裸鼠移植瘤模型对造影剂进行体内靶向性评价、体内显影效果与代谢分布评价.结果:体外细胞学研究表明,该造影剂可被细胞摄取,且分布于细胞质中.体内靶向性评价结果表明,该造影剂具有肿瘤靶向性,且其在体内显影效果较好.结论:该新型造影剂能够靶向显影肿瘤部位,具有良好地临床应用的潜能.
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前列腺癌新型靶向纳米超声造影剂的合成及初步评价
目的:研究制备一种前列腺癌新型靶向性纳米超声造影剂.方法:采用PEG及抗前列腺癌特异性膜抗原(PSMA)适体A10-3.2修饰多壁碳纳米管(MWCNTs)合成新型靶向纳米超声造影剂,对其进行合成验证、体外特征评价、生物相容性研究及体外显影评价.结果:Zeta电位、透射电镜扫描图(TEM)、红外分析图(FT-IR)均表明此靶向纳米造影剂合成成功.体外细胞学研究表明,该造影剂细胞毒性小、生物相容性好.体外显影结果表明,该造影剂具有良好的显影效果.结论:该新型造影剂制备成功,具备靶向显影的潜能.
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核酸适体在药物治疗中的应用
适体是能特异地识别靶分子并与之结合,进而影响靶分子生物活性的一类单链寡核苷酸,其作用类似于抗体,且具有靶标广泛、合成容易、性质稳定、容易保存运输等特点,目前已成为药物研发及临床诊断研究的新热点.本文就适体在新型药物和药物靶向给药系统领域的研发及临床应用进行了综述,并建议应对适体药物的修饰和靶向给药技术进行深入研究.
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抗肿瘤适体药物的研究进展
适体,也称为化学抗体,是近年来开发的颇具潜力的一类新型药物.适体由较短的DNA或RNA寡聚核酸组成,在体内形成专一和稳定的三维结构,可以与特定的靶蛋白结合.已批准上市的第1个适体药物为抗血管内皮生长因子的RNA分子Macugen,在临床上玻璃体内注射用于治疗年龄相关性黄斑变性.细胞和动物模型研究证明一些适体具有很好的抗癌作用,有几个适体药物已进入临床研究阶段.此文对近年来抗肿瘤适体药物的进展做一综述.
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前列腺癌主动靶向药物传递系统的研究进展
目的 介绍前列腺癌主动靶向药物传递系统的研究进展.方法 查阅近年来国内外相关文献,对前列腺癌作用靶点为基础的主动靶向药物传递系统进行总结和归纳.结果 以前列腺特异性抗原和前列腺特异性膜抗原等作为靶点,应用抗体、适体或者多肽靶向修饰的脂质体、胶束、纳米粒、前体药物传递系统,可以将药物有效传递到前列腺癌靶组织、靶细胞,提高抗肿瘤药物作用效果.结论 主动靶向前列腺癌的药物传递系统具有广闰的研究和应用前景.
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结核患者血清IgG抗体适体的制备及特异性鉴定
目的 筛选获得结核患者血清IgG抗体的特异性适体.方法 纯化结核患者血清中的IgG抗体,以IgG抗体为靶标,利用SELEX技术进行筛选,筛选得到的ssDNA适体文库,进行克隆测序、亲和性检测、二级构象分析,并用于血清标本检测,进行适体特异性的鉴定.结果 纯化获得了IgG抗体,浓度为1.3 mg/mL.SELEX筛选10轮后,随机挑选12个适体进行亲和性检测和二级结构分析.结果显示,亲和性吸光度值大于1.0的适体有4个.二级构象分析揭示,适体与靶分子的结合基础为口袋颈环鼓包结构和分枝的连接角度.对亲和性吸光度值大于1.0的4个适体,经29份临床标本检测进行特异性的进一步验证显示,其中有3个适体对结核病组与健康对照组的检测结果具有显著差异.结论 初步筛选获得结核患者血清IgG抗体的适体,并有较高的特异性.
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核酸适配子在胶质瘤中的研究进展
核酸适配子是由指数级富集配体系统进化技术（SELEX）从寡核苷酸文库中筛选合成所得的一类核酸分子，它可特异结合靶分子，具有识别或抑制靶分子生物学活性的作用。针对胶质瘤的适配子是以胶质瘤细胞或已知的生物标志分子为靶标筛选得到的，它们可与纳米粒子、药物或分子探针相结合，用于胶质瘤的显像、靶向治疗和药物转运。
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基于适配子的分子探针在肿瘤分子影像学中的应用
理想的分子影像探针应具有一定的特异性、敏感性、安全性。适配子是可与靶分子高特异性和高亲和力结合的单链 DNA 或 RNA 分子，具有靶分子广泛、分子小、易生产和修饰、免疫原性低、渗透性强等特点，是一种新型的分子影像探针。目前基于适配子的肿瘤分子影像学研究越来越多，为肿瘤的诊断和治疗提供了新的技术和工具。
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核酸适配体分子探针在肿瘤诊断和治疗中的研究进展
核酸适配体是用配体指数富集法进化系统（SELEX）技术在体外合成筛选所得的单链寡核苷酸，通过折叠成独特的空间结构特异性识别结合靶标分子。核酸适配体功能上类似于抗体，但与靶向目标的特异结合优于抗体，被作为新型分子探针用于肿瘤检测与治疗领域。
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SELEX技术原理及应用进展
SELEX技术即指数富集配基的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponcntial enrichment),它应用大容量的随机寡核苷酸文库并结合体外PCR扩增技术.
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骨肉瘤靶向治疗新进展
骨肉瘤是一种严重威胁儿童及青少年生命健康的恶性肿瘤,发病率高,但治愈率差,目前新辅助化疗联合手术切除治疗骨肉瘤已取得一定效果,但大剂量的化疗药物在治疗肿瘤的同时,也产生了明显的毒副反应,因此,急切需要寻找一种毒副反应轻、有效率高的骨肉瘤治疗方法,靶向治疗被认为具有这一潜质.其中适体靶向治疗肿瘤目前已成为国内外研究的热点.本文将详细介绍适体及适体靶向治疗肿瘤的作用.
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适体在病原生物感染诊断和治疗中的应用
适体是通过指数富集配基的系统进化技术获得的,能与靶物特异、高亲和力结合的单链DNA或RNA序列.随着越来越多与毒素、蛋白质、微生物等靶物质特异性结合适体的筛选,适体作为抗体的替代品在疾病的诊断和治疗领域已显示了巨大的潜能.现简要综述国内外应用适体技术诊断和治疗病原生物感染的新进展.
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适体的临床应用
适体(aptamer)因其与靶分子结合的高亲合力及强特异性,而具有广泛的应用价值.近年来对适体功能的研究多集中在分子和细胞水平,要将适体应用于临床治疗必须进一步对适体在动物体内及人体内的活性功能进行研究.本文对已处于动物实验或临床实验阶段的适体进行综述.
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急性髓系白血病细胞单链DNA适体的体外筛选
目的:筛选识别急性髓系白血病M2型(acute myeloblastic leukemia M2 subtype,AML-M2) CD33+/CD34-细胞的核酸适体(aptamers).方法:以AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34-细胞为反筛选细胞,采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment,C-SELEX)技术,体外反复筛选单链DNA( single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库的适体,经聚合酶链式反应(polymerasechain reaction,PCR)扩增产生次级文库.然后将终轮次的次级ssDNA文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级结构.结果:琼脂糖凝胶电泳结果显示:每轮筛选出来的次级ssDNA文库PCR扩增产物均可见到清晰的DNA条带.经过13轮的反复筛选,次级ssDNA文库与细胞结合的荧光强度从2.14％上升到51.12％,至第13轮趋于稳定状态.对30个克隆子序列测定结果显示:22个适体一级结构分别含有AAGTA,TATCT,AGATG和AAATT 4个保守序列,另8个适体无此保守序列.二级结构模拟结果显示:30个适体含有4种不同的茎环、凸环模拟结构.结论:C-SELEX技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选,筛选到的AML-M2型白血病CD33+/CD34-细胞适体有望用于白血病的诊断与治疗.
关键词： 细胞-指数富集配体系统进化 急性髓系白血病 M2型 适体 -
基于邻位连接技术(PLA)的生物检测新策略
邻位连接技术( PLA)是近年来发展起来的一种蛋白质检测方法.该技术的核心理念来源于适体技术、连接酶技术和Taqman探针技术,其主要形式包括均相、固相和原位3种.PLA具有特异、灵敏、快速、高通量和多功能等优点,不但能够检测蛋白质,亚细胞结构和细胞等生物样本,还能检测大分子间的相互作用,现已逐步被应用于医学和生物学等众多领域.
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适体技术在临床治疗及药物研究中的应用
适体是近年来出现的广泛用于临床治疗研究的核酸之一,具有比抗体和反义核酸优越的性质和特点,极具临床治疗价值,目前正处于初期临床实验阶段,本文对适体在临床治疗研究取得的成果作一综述,并提出相关亟须解决的问题.
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筛选环孢霉素A适体的SELEX技术的建立
目的:运用指数富集的配体系统进化(SELEX)技术,筛选并鉴定环孢霉素A(CsA)特异性的适体.方法:合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,通过SELEX方法,即以磁珠作为筛选介质,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,筛选针对CsA的适体,将后一轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行一级结构和二级结构分析.结果:经过10轮的筛选,ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势,随机挑选的19个克隆适体根据一级结构的同源性可分为5个家族,二级结构预测以茎环(发夹)为主.结论:我们通过改良SELEX方法筛选得到了CsA特异性的适体.
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适体在均相检测中的应用
核酸适体是通过指数式富集法配体进化(SELEX)技术从人工合成的DNA或RNA随机库中筛选出来的,能够与目标分子进行高亲和性和高特异性结合的寡核苷酸序列[1-2].适体,经常被称作"合成抗体",可以在疾病的诊断和治疗方面与抗体相媲美:适体与靶物质结合具有很高的亲和力,解离常数可达nmol,甚至pmol水平,有时甚至优于抗体;适体的靶分子广泛,包括蛋白质、多糖、金属离子、核酸或病原微生物,理论上,适体可以从任何靶分子得到,包括毒性和非免疫原性复合物;而且适体稳定性强,易于被各种化学标记物修饰,可广泛应用于生物技术不同领域,包括基础研究、药物的研发和纯化过程、临床诊断等[3].适体可以固定或不固定的配体方式分别用于非均相或均相检测中.大多数传统的诊断方法建立在配体或受体固定的基础上.这些检测方法费时费力,操作繁杂,不适于自动化分析.近国内外学者相继建立均相检测方法,简单,易实行,快速并且可自动化.本文对适体在均相检测中的应用进行综述.
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基于核酸电化学适体生物传感器的研究进展
生物传感器作为一种新兴技术,具有快速、灵敏、高通量等优点,可以满足临床诊断和环境监测的需要[1].生物传感器由识别元件、理化换能器及信号放大装置构成[2].在其设计中,抗体和核酸是常用的分子识别元件.目前,抗体制备主要依靠单克隆技术,其制备周期长、成本高;抗体对pH、温度等环境要求较高,贮存时间较短,这些因素限制了抗体在生物传感器中的应用[3].
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适配子及其临床诊断的应用进展
1990年,2名科学家采用体外筛选与PCR相结合的新技术从人工构建的寡核苷酸文库中分别筛选到了与有机染料和噬菌体DNA聚合酶特异性结合的寡核苷酸序列[1-2].这种新技术后来被命名为指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),筛选到的寡核苷酸被命名为适配子(aptamer).适配子是人工合成的单链寡核苷酸(DNA或RNA),能够与靶物质进行高特异性与亲和性地结合,其功能类似抗体,但比抗体具有更多的优势,因此颇受学者们的青睐.
