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HSVI立即早期基因研究进展
相对于其它病毒而言,单纯疱疹病毒的基因组巨人,基因数日繁多,根据其基因转录的先后顺序,分为立即早期、早期利晚期基因二类.作为病毒首先表达的立即早期基因,它们的表达产物都为非结构蛋白,可对病毒的复制进行调控,决定了病毒进入细胞后的命运.因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义.
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即刻早期和晚期基因的转录产物在巨细胞病毒感染中的诊断作用
近年来对于巨细胞病毒(CMV)的即刻早期(IE)基因和晚期(L)基因的结构和功能有了较为深入的研究.应用核酸杂交技术和聚合酶链反应等先进技术检测IE-mRNA和L-mRNA能在早期特异性地诊断CMV活动性感染,对于临床治疗和预后监测有重要的指导意义.
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EBV立即早期基因-BRLF1和BZLF1的研究进展
BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因.它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制.它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关.不同的细胞环境可能对它们的转录产生影响.Rta和Zta都包含CTL识别的表位,可能在病毒裂解周期的早期成为免疫系统识别的位点.对它们的研究还为某些EBV相关肿瘤的筛查和治疗提供了线索.这两个基因对EBV再激活的作用倍受关注.本文主要对BRLF1和BZLF1的基因结构和功能做一综述.Epstein-Barr病毒(EBV)是疱疹病毒科γ亚科成员,世界人口的90%感染此病毒.EBV可引起传染性单核细胞增多症,与Burkitt's淋巴瘤、鼻咽癌的发生密切相关.EBV有潜伏周期和裂解周期两种状态.EBV进入细胞后,通常很快进入潜伏期,病毒基因组环化成游离体(episome)并以此形式持续存在于细胞内.但病毒在少数感染细胞中可以进入增殖期,并产生病毒颗粒.研究表明,BZLF1和BRLF1两个基因在病毒由潜伏周期向裂解周期转变的过程中起重要作用.
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真菌菌丝体提取物抑制人巨细胞病毒基因转录水平的研究
目的 研究真菌菌丝体提取物对人巨细胞病毒基因转录的抑制作用,探讨其抗HCMV效果及其机制. 方法 建立抗HCMV细胞模型,用半定量PCR检测细胞感染后不同时间UL122、UL123、UL44、UL57、UL86 mRNA表达量的变化. 结果 UL122、UL123 mRNA的表达高峰为HCMV感染细胞后24 h,UL44、UL57 mRNA的表达高峰为感染后96 h,UL86 mRNA的表达高峰为感染后120 h.真菌菌丝体提取物与HCMV作用后接种细胞及HCMV接种细胞后加入真菌菌丝体提取物24h检测UL122、UL123 mRNA的表达量均显著降低.而病毒完成穿入过程后加入50 μg/ml真菌菌丝体提取物与加入5μg/ml组相比UL122、UL123 mRNA表达量更少.HCMV进入细胞6h后加入真菌菌丝体提取物再培养96 h,UL44、UL57 mRNA的表达量无显著变化.HCMV进入细胞24 h后加入真菌菌丝体提取物再培养120 h,UL86 mRNA的表达表达量无显著变化. 结论 真菌菌丝体提取物可显著抑制HCMV AD169毒株IE基因(UL122、UL123)的转录,导致其mRNA表达显著降低,且抑制作用存在量效关系;但对E基因(UL44、UL57)和L基因(UL86)转录水平抑制作用不明显,表明真菌菌丝体提取物抗HCMV的重要作用机制是通过抑制HCMV IE基因的转录和翻译,进而抑制病毒的复制增殖.
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用逆转录聚合酶链反应法检测人巨细胞病毒晚期mRNA
人类HCMV感染非常普遍,在成人可达80%~96.74%[1],而只有活动性感染才可导致病理性损害.因此建立一个快速、准确、敏感的HCMV活动性感染的检测方法,对HCMV感染的诊断和治疗具有重要意义.我们采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,通过检测HCMV晚期基因的转录产物-mRNA,初步建立了一个HCMV活动性感染的检测方法,报道如下.
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I型单纯疱疹病毒ICPO蛋白:病毒与细胞间相互作用的重要调控因子
I型单纯疱疹病毒(HSV-1)的基因表达具有很高的时序性,按其先后顺序可以将病毒的基因分为立即早期基因、早期基因和晚期基因3类.
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密码优化的HPV11晚期基因在293T细胞中的表达
目的:检测密码优化的HPV晚期基因在293T细胞中的表达.方法:对HPV11晚期基因进行密码优化,然后将其构建在哺乳动物细胞内质粒上.通过瞬时转染,将hL1、hL1+hL2、h(L1+L2)质粒分别导入宿主293T细胞.应用免疫组化技术,检测HPV11衣壳蛋白的存在.结果:293T. hL1细胞爬片行免疫组化染色为阳性,可见部分细胞呈棕黄着色,293T.(hLl+hL2)细胞及293T.h(Ll+L2)细胞爬片行免疫组化染色为阳性,可见大量细胞均呈棕黄着色,不含HPV11晚期基因的对照组293T.EGFPC1细胞衣壳抗原免疫组化未见阳性着色.结论:经过密码优化的HPV11晚期基因可产生高表达的衣壳蛋白.
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3全基因组在感染宿主菌PA3过程中的分时期表达研究
目的 明确铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后其全基因组的分时期表达模式.方法 利用基因芯片检测噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后不同时间(5 min,10min,20min,30 min,80 min)其全基因组(含71个预测的ORF)在转录水平的表达谱变化,并进行非临督层次聚类(hierarchical clustering)分析.利用蛋白质合成抑制剂氯霉素(Cm)和DNA复制抑制剂磷酸乙酸(PAA)实验确定PaP3全基因组的分时期表达情况.结果 根据时间表达模式的不同,PaP3全基因组可分为3大类:15个早期基因(ORF 71-57)、35个中期基因(ORF 56-22)及21个晚期基因(ORF 21-1).在PaP3基因组结构中,这3类基因各自串联分布且可能受不同的操纵子调控.结论 PaP3感染过程中其早期、中期及晚期基因随时间有序表达,为深入了解噬菌体基因表达模式及生命复制周期奠定基础,并为了解噬菌体与宿主及机体免疫系统的的相互作用提供了基础.
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c-fos与心血管疾病
立早基因c-los属核内蛋白类细胞癌基因,膜信号通过第二信使激活细胞浆内转录因子,促进e-los基因转录.c-fos转录产物FOS蛋白与另一核内原癌基因c-jun的产物JUN通过"亮氨酸拉链"形成异源二聚体,构成转录因子,与核内DNA结合,调节种种晚期基因的转录,发挥第三信使作用[1-3].