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流行性乙型脑炎疫苗纯化工艺的建立
目前我国流行性乙型脑炎(乙脑)疫苗已形成规模化生产,并取得了较好的预防效果[1],但此种疫苗属粗制疫苗,其抗原含量较低,异源蛋白和亚细胞成分较多,临床应用存在一定副反应,因此有必要将疫苗进行浓缩纯化,以提高疫苗的免疫效果和降低副反应.经过几年的探索,我们建立了乙脑疫苗的纯化工艺,并在国内率先通过国家新药评审.现将纯化工艺报告如下.
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大孔吸附树脂纯化桑叶总黄酮的工艺优化
目的：通过静态吸附解吸法优选适宜的大孔树脂，并对筛选出的树脂进行工艺优化，确定大孔吸附树脂纯化桑叶总黄酮的佳工艺。方法采用比较AB－8、D－101、HPD－400三种大孔吸附树脂对桑叶总黄酮的静态吸附率与解吸率，筛选出佳吸附剂，进一步考察大孔吸附树脂动态吸附量、洗脱剂乙醇的体积分数与洗脱曲线，优化桑叶总黄酮的纯化工艺。结果 D－101树脂具有较好的吸附及解吸附性能，其佳工艺为：上样液质量浓度为0．1 g生药／ml，上样大量10BV，洗脱剂为70％乙醇，洗脱剂用量5BV。结论 D101树脂综合性能好，适合于桑叶总黄酮的分离纯化。
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大孔吸附柱色谱法优选接骨木的纯化工艺
目的：优选接骨木的纯化工艺。方法：以莫诺苷为指标，采用不同型号大孔吸附树脂优选接骨木根皮乙醇提取物的佳纯化工艺。上样量小于1、250（莫诺苷、树脂）的接骨木醇提取物，水洗脱通过AB-8型大孔吸附柱色谱，弃去20倍柱体积的水洗脱液，以10%乙醇完全洗脱，洗脱液，浓缩，冷冻干燥，即得接骨木总苷。结果：总苷中莫诺苷含量大于50%。结论：该提取工艺简单、可靠、重复性好，适用于工业生产。
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痛安注射液青风藤中间体纯化工艺研究＊
目的：为了提高青风藤中间体中青藤碱的转移率，优化了痛安注射液青风藤中间体的纯化工艺。方法：以青藤碱转移率及青风藤中间体指纹图谱稳定性为指标，考察萃取过程中药液不同pH值对青藤碱转移率的影响；以青藤碱转移率为指标，考察酸水溶解过程中不同pH值盐酸酸水液对溶解效果的影响；以青藤碱转移率为指标，分别考察减压抽滤、板框式过滤器、高速管式分离机、平板直联式离心机等四种分离方式对青风藤酸水溶解液分离效果的影响。结果：萃取前青风藤药液pH值为10-11时，青藤碱在萃取过程中转移率高并且制备得到的痛安注射液成品指纹图谱稳定性好；酸溶过程中盐酸酸水溶液pH值范围为2.0-2.5时，青藤碱转移率高，为92.94%；高速管式分离方式对青风藤酸水溶解液分离效果好，青藤碱转移率为93.34%。结论：优化后的生产工艺，可以有效提高目标产物青风藤中间体中青藤碱的转移率，同时成品指纹图谱稳定，操作简单，重复性好。
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基于指纹图谱考察不同型号大孔树脂对莱菔子水提液的纯化效果
目的:考察不同型号大孔吸附树脂对莱菔子水提液的纯化效果.方法:采用HPLC测定芥子碱硫氰酸盐含量,流动相乙腈(A)-0.1％磷酸(B)进行梯度洗脱(0～15 min,5％～10％A;15～17 min,10％ ～12.5％A;17～27 min,12.5％～14％A:27～55 min,14％ ～25％ A;55 ～57 min,25％ ～70％ A;57 ～70 min,70％ ～ 100％A),检测波长225 nm.以芥子碱硫氰酸盐洗脱率和HPLC指纹图谱共有峰的总有效成分洗脱率为指标,比较各型号树脂纯化效果,筛选佳型号大孔树脂.结果:各树脂对芥子碱硫氰酸盐洗脱率的影响顺序为AB-8＞ NKA-9＞ HPD100C＞ HPD400＞ X-5＞ HPD750＞ HPD722＞ D101＞ DM130,对总有效成分洗脱率的影响顺序则为HPD400＞ HPD100C＞ HPD722＞ AB-8＞ NKA-9＞ HPD750＞ DM-130＞ D101＞ X-5.AB-8型树脂对芥子碱硫氰酸盐的洗脱率达96.39％,对总有效成分的洗脱率70.03％.结论:采用AB-8型大孔吸附树脂纯化莱菔子水提取液有效成分是可行的.
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薯莨中鞣质纯化工艺优选
目的:优选薯莨中鞣质的纯化工艺条件.方法:以鞣质含量和保留率为指标,采用静态吸附法考察不同大孔树脂的吸附、洗脱性能,通过单因素试验和L9(34)正交试验对薯莨中鞣质的纯化工艺条件进行优化.结果:选用AB-8型大孔吸附树脂,其佳纯化工艺条件为上样量以每克树脂儿茶素不超过17.25 mg为宜,加3 BV水洗除杂,用1.5 BV 40％乙醇以0.5BV·h-1洗脱,收集洗脱液,鞣质保留率82.02％,鞣质纯度64.39％.结论:优选的纯化工艺合理、稳定可行,可为薯莨中鞣质的工业化纯化提供实验依据.
关键词： 薯莨 AB-8型大孔吸附树脂 纯化工艺 正交试验 鞣质 -
半枝莲总黄酮AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺优选
目的:优选半枝莲总黄酮提取液的前处理工艺及AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺.方法:以野黄芩苷转移率、溶液颜色及澄清度为指标,考察半枝莲提取液的前处理工艺.以野黄芩苷转移率和出膏率为指标,采用单因素试验考察洗脱剂浓度、水洗量、洗脱流速等对半枝莲总黄酮AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺的影响.结果:前处理工艺为调节提取液pH 3.0～3.3,离心2次,野黄芩苷转移率达90％.AB-8型树脂纯化的佳工艺条件为径高比1∶5,上样液质量浓度0.17g·mL-1,药材量-树脂体积(1∶2),上样流速2 BV·h-1,水洗量4.5 BV,洗脱溶剂40％乙醇,洗脱剂用量5.5 BV,洗脱流速4 BV·h-1;野黄芩苷转移率约93％,质量分数约8％,出膏率约2.5％.结论:提取液的前处理工艺可显著降低半枝莲纯化物的出膏率和颜色,优选的AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺稳定可行,适用于工业化生产.
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AB-8大孔吸附树脂同时分离纯化毛冬青总黄酮、总皂苷工艺
目的:研究大孔吸附树脂纯化毛冬青总黄酮、总皂苷的工艺条件.方法:以总黄酮、总皂苷的吸附率和转移率为指标,考察上样药液质量浓度、pH、树脂径高比、树脂药材比、洗脱乙醇体积分数等影响因素.结果:毛冬青纯化工艺为上样药液质量浓度0.4 g·mL-1,药液pH 4.5,药材-树脂比1:8,树脂径高比1:15,分别用12 BV水洗,10 BV 30％乙醇洗脱,10 BV70％乙醇洗脱得总皂苷.结论:采用大孔吸附树脂可较好地纯化毛冬青总黄酮与总皂苷,纯化后毛冬青总黄酮含量、总皂苷均达50％以上.
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AB-8大孔吸附树脂纯化双黄连中金银花、连翘提取物工艺
目的:优化AB-8大孔吸附树脂纯化双黄连中金银花、连翘提取物的工艺.方法:以提取物中总酚、总黄酮的含量为考察指标,从树脂径高比、吸附浓度、吸附流速、洗脱剂浓度等方面对大孔吸附树脂纯化工艺进行优化.结果:佳纯化工艺为金银花、连翘提取物,加蒸馏水稀释成1.5 g·mL-1(生药量),树脂柱径高比1∶10,大吸附量与树脂体积比为1∶3.3,水洗3倍树脂体积,4BV 70％乙醇洗脱.结论:AB-8大孔吸附树脂纯化金银花、连翘提取物的佳工艺稳定可行.
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正交试验优选蜂病康合剂壳聚糖纯化工艺
目的:探讨壳聚糖澄清剂用于蜂病康提取液的纯化工艺.方法:以纯化后药液中黄芩苷含量为指标,采用正交试验优选絮凝澄清条件,并与传统醇沉工艺比较.结果:正交优选工艺优于醇沉工艺,佳絮凝澄清条件为水提液浓缩到1∶8,壳聚糖用量15％,温度50℃.结论:壳聚糖澄清剂可用于蜂病康合剂的精制.
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AB-8型大孔吸附树脂纯化复方通脉颗粒有效部位的工艺优选
目的:优选复方通脉颗粒的大孔树脂纯化工艺.方法:以总酚酸,葛根素的吸附-洗脱率为指标,采用单因素试验考察上样液质量浓度、径高比、洗脱剂等对复方通脉颗粒大孔树脂纯化工艺的影响.结果:优选的纯化工艺为上样液质量浓度110 g·L-1,树脂柱径高比1∶10,树脂体积与上样量比2.8∶1(吸附3h),加2BV水洗除杂,用6 BV 50％乙醇洗脱,收集洗脱液.结论:该纯化工艺合理、稳定,可推广于大生产应用.
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洋金花中醉茄内酯总甾体的纯化工艺优选
目的:优选洋金花中醉茄内酯总甾体的大孔吸附树脂纯化工艺.方法:以醉茄内酯总甾体含量和纯度为指标,通过比较不同型号大孔树脂对甾体成分的吸附性能和解析能力,筛选树脂类型.采用单因素试验考察上样量、树脂量、上样速度、洗脱剂种类、洗脱速度、用量等对纯化工艺的影响.结果:选用D941型大孔树脂,其佳纯化工艺为上样量-树脂量＜7.5g·L-1,上样液pH 7,加3 BV水以6 BV·h-1流速洗脱,总甾体的纯度＞90％.结论:该优选工艺简单可行,纯化效果好.
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天山雪莲黄酮类成分大孔树脂纯化工艺优选
目的:优选天山雪莲总黄酮的大孔树脂纯化工艺.方法:以芦丁为指标成分,通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,采用单因素试验考察上样量、上样流速、洗脱流速、洗脱剂用量对天山雪莲黄酮纯化工艺的影响.结果:X-5型大孔树脂纯化效果好,佳纯化工艺条件为上样液质量浓度50 g·L-1,上样量6 BV,上样流速3 BV·h-1,加水3 BV洗去水溶性杂质,加20％乙醇6 BV除去其他杂质,加40％乙醇5 BV洗脱,洗脱流速3 BV·h-1,收集40％乙醇洗脱液;树脂纯化前后提取物中芦丁质量分数由1.07％提高至12.14％.结论:X-5型树脂可用于富集天山雪莲中黄酮类成分.
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冻融-酶解-膜分离复合技术纯化板蓝根多糖的工艺优选
目的:优选冻融-酶解-膜分离复合技术纯化板蓝根多糖的工艺.方法:以板蓝根多糖和剩余蛋白含量为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察酶解温度、酶解时间、酶用量对板蓝根多糖纯化工艺的影响.结果:佳纯化工艺为板蓝根残渣水提取液反复冻融3次,过滤,按3.5万U·g-1加入蛋白酶2,酶解温度35℃,酶解时间3h,酶解后用截留相对分子质量30 kD中空纤维组件超滤.结论:优选的纯化工艺稳定可行,冻融-酶解-膜分离复合技术可用于板蓝根多糖的纯化.
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多指标优化吴茱萸的提取纯化工艺
目的:优选吴茱萸的提取纯化工艺.方法:以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱转移率的综合评分为指标,采用正交试验考察溶媒倍数、溶剂浓度、提取次数和提取时间对吴茱萸醇提工艺的影响；以吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的质量分数为指标,通过单因素试验考察吴茱萸提取液逐步水沉纯化工艺.结果:佳提取工艺为加16倍量70％乙醇回流提取3次,每次3h;佳逐步水沉纯化工艺为回收乙醇,离心,取沉淀加20倍量90％乙醇超声提取15 min,离心,取上清液,加1/4倍量水进行二次水沉.结论:优选的提取、纯化工艺可确保吴茱萸中有效成分大限度保留.
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益髓通经方中马钱子生物碱纯化工艺优选
目的:优选大孔吸附树脂纯化益髓通经方中马钱子生物碱的工艺条件.方法:以马钱子碱和士的宁的含量为指标,HPLC进行含量测定,通过静态吸附和解吸试验筛选大孔吸附树脂型号,采用单因素试验考察大孔树脂吸附和洗脱条件,确定益髓通经方中马钱子生物碱的纯化工艺.结果:佳纯化工艺为采用X-5型大孔吸附树脂,上样液质量浓度0.1g·mL-1,上样速度1.0 mL· min-1,上样量4 BV,吸附时间2h,加1 BV水洗除杂,用6 BV 50％乙醇以2.0 mL·min-的速度进行洗脱.结论:采用大孔吸附树脂纯化马钱子提取物中生物碱是可行的,优选的纯化工艺简单、经济.
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大孔树脂精制纯化牡丹皮中芍药苷工艺考察
目的:考察大孔树脂富集牡丹皮中芍药苷的工艺参数.方法:以芍药苷为指标,HPLC测定指标成分含量,采用静态、动态吸附-解吸试验考察大孔树脂型号并优选其富集纯化工艺条件.结果:采用AB-8型大孔树脂,上样液质量浓度0.125 g·mL-1,上样量2.25 BV,上样液pH 4,吸附流速2 BV·h-1,8 BV水洗除杂,14 BV 20％乙醇洗脱芍药苷,洗脱流速4BV·h-1.此条件下,芍药苷洗脱率达90.40％.结论:该优选工艺可较好的富集牡丹皮中有效成分芍药苷,可推广于工业化大生产.
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NKA-9型大孔树脂纯化蟾皮总生物碱工艺
目的:建立NKA-9型大孔树脂纯化蟾皮总生物碱的工艺条件.方法:以蟾皮总生物碱含量(5-羟色胺计)作为考察指标,优化NKA-9型大孔树脂吸附与解析的工艺条件.结果:优选出的佳纯化工艺为NKA-9型大孔树脂在25℃进行吸附,样品溶液pH 9,上样量为4 BV,吸附时间为8～10h,先用6 BV水洗,然后用3 BV70％的乙醇洗脱.结论:该工艺可用于蟾皮总生物碱的纯化.
关键词： NKA-9型大孔树脂 蟾皮总生物碱 纯化工艺 -
复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的大孔树脂纯化工艺优选
目的:优选大孔树脂纯化复方酪萨维口腔速崩片中蔷薇红景天提取物的工艺条件.方法:以红景天苷、酪萨维的含量及回收率为指标,通过单因素试验筛选大孔树脂型号并优选其纯化工艺.结果:AB-8型树脂分离效果较好,佳工艺为蔷薇红景天提取物加适量水充分溶解以2 BV·h-1的流速上样,径高比1∶7,红景天苷、酪萨维的比上柱量分别为7.18,10.43mg·g-1,水洗除杂,加40％乙醇12 BV洗脱,洗脱流速4 BV·h-1,树脂可重复利用3次;红景天苷、酪萨维平均提取量分别为1.870％,3.186％,平均回收率分别为82％,96.26％,平均纯度依次为5.72％,9.72％,纯度分别提高了2.51,2.94倍,浸膏得率由纯化前的13.73％减少至4.57％.结论:AB-8型大孔树脂对红景天苷和酪萨维具有良好的纯化效果,优选的工艺稳定可行.
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蜘蛛香总缬草三酯提取物的纯化工艺优选
目的:优选蜘蛛香总缬草三酯提取物的纯化工艺.方法:采用动态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号,通过单因素试验考察上样量、洗脱流速、洗脱溶剂及其用量对总缬草三酯富集纯化工艺的效果.结果:采用ADS-8型大孔吸附树脂,优选的纯化工艺为上样量42.3 mg·g-1,上样液质量浓度1.692 g·L-1,用30％乙醇除杂,用95％乙醇6 BV洗脱,洗脱流速2 mL·min-,总缬草三酯纯度51％,出膏率26％.结论:优选的纯化工艺稳定可靠、重复性好.
