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LC-MS代谢组学技术在肾毒性评价及生物标示物鉴定中的应用
肾毒性作为一种临床常见的毒副作用,导致机体氨基酸代谢和脂类代谢的异常.为此,肾毒性作用机制以及疾病诊断、药物治疗的相关性研究已受到越来越多的关注.在肾毒性研究与评价中,基于液相色谱-质谱(LC-MS)的代谢组学技术已应用于评价肾毒性和鉴定生物标示物,并且快速而准确地预测和诊断肾毒性.在查阅国内文献3篇和国外文献44篇的基础上(1999-2014),本文总结并分析了基于LC-MS的代谢组学技术在化学药物、中药、化学试剂、重金属等诱导的肾毒性研究中的应用进展.
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G蛋白偶联受体配体结合分析技术
G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPC Rs)是迄今发现的大的多药物靶点的受体超家族,其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病,在药物研发中扮演重要角色.测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不可缺少的部分.用于研究GPCRs与其配体结合的分析技术,可以按照标记方式的异同分为三类:同位素标记法、非同位素标记法和非标记法.非同位素标记法多采用荧光配体标记,利用竞争法或荧光共振能量转移直接获知结合情况;非标记法中利用各种生物传感器,通过检测配体结合受体后胞内分子运动引起的电信号或光信号的变化来表征结合情况.此外,质谱也已被用于受体-配体平衡解离常数的测定,显示了其在非标记结合分析及受体功能研究中的潜力.本文归纳了目前用于GPCRs结合分析的主要技术,对其原理及优缺点进行了综述,并对受体-配体结合分析中新方法的应用进行了展望.
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基于LC-MS-代谢组学技术在慢性肾脏病的应用
基于液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术的代谢组学已应用于不同的研究领域,该技术在慢性肾脏病的动物模型和临床应用取得了一定的进展.本文评述了基于LC-MS联用技术的代谢组学在慢性肾衰竭、尿毒症、IgA肾病、慢性肾小球肾炎、糖尿病肾病等应用进展.
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热降解辅助表面解吸常压化学电离质谱对阿莫西林的分析
目的:建立一种阿莫西林热降解辅助表面解吸常压化学电离质谱(TD - SDAPCI - MS)快速检测新方法.方法:利用阿莫西林抗生素的易降解并产生特定降解产物的特性,以潮湿空气作为试剂,通过电晕放电产生大量试剂离子,对阿莫西林抗生素总离子流质谱图与特征降解产物离子流图进行比对.并通过串联质谱对阿莫西林抗生素产生的特征降解产物进行了确认.结果:无需样品预处理,实现一级质谱法对阿莫西林抗生素的高通量筛选.结论:单个样品检测不超过30 s,可实现不稳定抗生素阿莫西林的高通量筛选.
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重组人粒细胞刺激因子的N端氨基酸序列异质性分析
目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的N端异质性.方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中N端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4 (2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1％三氟乙酸水溶液(A)-0.1％三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL· min-1.分别收集各组分并冷冻干燥,采用N端测序仪测定各组分的N端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对N端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围(m/z)500～3 000.结果:色谱分离得到3个组分;N端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个N端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与N端测序结果一致.结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的N端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持.
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8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷的结构修饰与抑菌作用研究
目的:对黄芩苷进行化学修饰得到8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷,对其结构进行初步分析并探讨其抑菌作用,为拓展其应用范围进行初步研究.方法:通过Mannich反应制备8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷,采用HPLC检测其纯度,质谱碳谱对其结构进行初步分析.选用8种标准菌株和其中2种细菌的临床菌株为受试菌株,以8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷为实验组,黄芩苷为对照组,检测8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷和黄芩苷对受试菌株的低抑菌浓度(MIC)、MIC50、MIC90和低杀菌浓度(MBC).结果:HPLC检测8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷的纯度为91.4％,质谱鉴定其相对分子质量为504.1501,并经碳谱检测对其结构进行了初步确认.抑菌实验结果显示,8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷和黄芩苷对受试菌株均有一定的抑菌效果.8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌标准菌株的MIC、MIC50、MIC90、MBC明显小于黄芩苷,有显著性差异(P＜0.05).结论:8-(N,N-二甲基-胺甲基)-黄芩苷对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌标准菌株的抑菌效果优于黄芩苷.
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应用SELDI-ToF-MS技术初步建立子宫内膜异位症诊断模型
目的:分析子宫内膜异位症(EMs)患者血清差异蛋白谱,初步建立EMs的诊断模型.方法:采用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,用弱阳离子交换芯片(WCX2)和分析软件对79例EMs(EMs组)及72例非EMs妇女(对照组)血清样品进行检测,在不同的月经周期中分别筛选差异蛋白,建立诊断模型并进行盲法验证.结果:在质荷比(m/z)2 000-30 000的范围内,得到16个有统计学差异(P<0.01)的差异蛋白,进一步按月经周期分期分析,增生期和分泌期分别得到3个和6个有统计学差异的蛋白峰.增生期所建的诊断模型敏感性和特异性分别为94.3%和97.1%.盲筛结果敏感性为90.7%,特异性为93.0%,阳性预测值为92.9%,阴性预测值为90.9%.结论:利用增生期血清样品建立的诊断模型敏感性和特异性高,对EMs临床诊断和发病机理的理解具有重要意义.
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卵巢蛋白质组研究中双向凝胶电泳和质谱技术的建立和应用
目的:探讨双向凝胶电泳和质谱技术在卵巢功能研究中的应用.方法:分别用11 cm和24 cm的胶条进行双向凝胶电泳,分离成年雌鼠卵巢总蛋白,并作质谱鉴定.结果:双向凝胶电泳分离蛋白样品分辨率较高,质谱技术鉴定蛋白快速方便,这两种技术促进了女性生殖蛋白质组方面的研究.结论:快速而有着高分辨率的双向电泳技术及质谱对蛋白质的鉴定,在对女性生殖领域的蛋白质组研究中有着广泛的应用前景.
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液相色谱串联质谱法测定人血浆中奥马曲拉及其代谢物
目的:建立液相色谱串联质谱法测定人血浆中奥马曲拉(BMS-186716)及其四种代谢物(BMS-196087,BMS-225308,BMS-198433和BMS-253653).方法:以甲基丙烯酸酯对奥马曲拉、BMS-196087和BMS-253653结构中的游离巯基进行衍生化处理后,采用液相进行测定.结果:奥马曲拉及其代谢物在下列范围内具有良好的线性关系:BMS-186716,0.2-250 μg/L;BMS-196087,0.5-250 μg/L;BMS-225308,1-250 μg/L;BMS-198433,2-250 μg/L;BMS-253653,10-2500μg/L低检测浓度分别为0.2 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L和10 μg/L;平均萃取回收率分别为60.5%、88.%、76.3%、71.2%、26.6%;日内精密度和日间精密度(RSD%)均在±15%之内,相对回收率在85%-115%之间;血浆样品可耐受3次冻融,室温下可稳定放置6小时,萃取后的样品室温下放置24小时没有任何异常变化,长期稳定性实验显示血浆样品在-30℃条件下可冻存3个月.结论:本方法准确、灵敏、快速、选择性好,能用于奥马曲拉及其代谢物的临床药代动力学研究.
关键词： 奥马曲拉 BMS-186716 高效液相色谱 质谱 -
GST pull-down联合质谱筛选丙型肝炎病毒蛋白NS5A结构域Ⅰ的相互作用蛋白
目的 对1b型丙型肝炎病毒Con1株的NS5A结构域Ⅰ宿主相互作用蛋白进行鉴定分析,为研究NS5A功能及其参与病毒复制机制提供理论基础.方法 构建pGEX-4T-1-Con1-NS5A-35-215质粒,诱导表达GST-Con1-NS5 A-35-215融合蛋白并纯化.采用GST pull-down联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对其相互作用蛋白进行鉴定,并使用OmicsBean在线软件对Con1-NS5A-35-215相互作用蛋白进行GO功能富集分析和信号通路分析.结果 在Huh7.5.1细胞裂解液中鉴定到547个潜在相互作用蛋白.GO功能富集分析发现相互作用蛋白主要参与细胞运输、应激反应、凋亡、蛋白泛素化等生物学过程.信号通路分析发现相互作用蛋白主要参与蛋白酶体、糖代谢、氨基酸合成、RNA转运等通路.通过免疫印迹验证了Con1-NS5A-35-215可与ACBD3和Vps35结合.结论 NS5A结构域Ⅰ通过其相互作用蛋白参与多种生物学过程,如调控细胞内运输、应激反应、蛋白稳态等过程.与ACBD3和Vps35相互作用的NS5A的片段缩短为35-215.
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大鼠脑出血后72 h脑组织的定量蛋白质组学分析
目的 鉴定大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后的差异蛋白,分析它们在ICH中的病理生理机制,为进一步筛选特异性功能相关蛋白和药物靶点提供线索.方法 制作大鼠ICH模型,应用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析/电离飞行时间串联质谱技术和Western Blot法,鉴定大鼠ICH后72 h脑组织和正常脑组织的差异蛋白并进行验证.结果 在18次重复实验中,共鉴定出39种差异蛋白,其中上调蛋白15种、下调蛋白24种.应用Western Blot法对其中2种关键性蛋白进行了验证.这些差异蛋白涉及细胞骨架、能量代谢酶类、细胞凋亡等方面.结论 细胞骨架蛋白与ICH的发病机制密切相关,为探索ICH的病理生理过程和治疗靶点提供关键信息和理论依据.
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重水中氢氧同位素的质谱分析
用高分辨率质谱计分析了重水中氢与氧的同位素组成;分析了重水的分子组成、质谱中的单电荷离子;利用高分辨率质谱峰相对强度,计算了重水中的氢氧同位素组成.结果表明,高分辨率质谱法分析重水,可同时分析其中的氢同位素和氧同位素,并且用样量小,结果可靠.
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稳定同位素标记方法在蛋白质组学定量分析中的应用
蛋白质表达水平定量分析是蛋白质组学研究的一项关键内容,它依赖于精确的、高通量的、具重复性的技术.目前,应用稳定同位素标记技术定量蛋白质表达水平是准确的方法之一,且联合色谱质谱技术更具优势.本文论述了这一技术的广泛应用和新的研究进展.
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低丰度236U同位素质谱测量值的校正
在质谱测量中,低丰度236U同位素容易受到周围强峰拖尾的干扰.本工作采用BGA(Background Amendment)拖尾校正和动态本底扣除方法对MAT-262质谱仪测量236U丰度值进行校正.结果显示,在236U丰度较低的情况下,采用BGA拖尾校正具有显著的校正效果,对测量结果的校正可达2.24%,校正值更接近于标称值;动态本底扣除方法对低丰度同位素质谱测量的改善效果不明显.
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超高效液相质谱法快速测定奶粉及奶制品中的三聚氰胺
建立了奶粉及奶制品中三聚氰胺的快速检测方法.试样用1%三氯乙酸和磺基水杨酸混合液提取,二氯甲烷除去脂肪和非极性杂质,过0.20μm的滤膜后直接上机测定;检出限0.010mg/kg,线性范围0.010～0.50mg/kg,回收率70.5%～99%.本方法从样品处理到测试结果仅约1.5h,具有快速、准确、方便的特点.
关键词： 三聚氰胺 奶粉及奶制品 UPLC-MS/MS 质谱 -
儿童用品中亚硝胺检测方法研究进展
简要介绍了儿童用品中亚硝胺的来源、污染情况、相关限量法规政策及亚硝胺检测方法的新进展。亚硝胺的前处理方法从柱层析、液液萃取发展到固相萃取、固相微萃取；检测手段从专属仪器热能分析仪发展到质谱仪，并且随着多级质谱的不断发展，串联质谱法越来越成为普适的分析方法。
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HPLC/DAD/ESI/MSD测定和确证贝类样品中软骨藻酸
1前言软骨藻酸(Domoic acid,DA)是一种天然神经性氨基酸,从污染贝类中分离、提取获得.人们食用毒化的贝类,可引起记忆丧失、眩晕、昏迷甚至死亡等症状,根据这种毒素的中毒特征,被命名为记忆丧失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP).不少国家制定了20μg/g限量标准[1].目前测定贝类中软骨藻酸的方法主要有高效液相色谱法[2]、毛细管电泳法[3]、小白鼠生物学试验法[4]等,其中高效液相色谱法是检测贝类中DA公认的有效方法.本文对贝类中DA的提取、净化、色谱条件和质谱条件进行了探索,建立了贝类中DA的HPLC/DAD/ESI/MSD测定和确证方法.该方法简单易行,结果令人满意.
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色谱质谱技术在消费品安全检测中的应用进展
随着REACH、RoHS等各类法规的持续出台及人们对消费品安全问题的不断重视,日用消费品中有毒有害物质检测成为近年来分析化学的研究热点。本文以邻苯二甲酸类增塑剂、有机锡类化合物为例,回顾了色谱质谱技术在消费品（如纺织品、电子电气产品、涂料、木制品等）安全检测中的应用情况,并对未来的研究方向做了初步展望。
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SPME与GC/MS相结合检验尿液中的氯胺酮
目的应用固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术分析尿液中的氯胺酮.方法对影响SPME萃取效果的萃取头类型、萃取时间、解析时间、离子强度等因素条件进行优化,分析尿中氯胺酮.结果在0.5～2.5μg/ml范围内线性关系良好,线性相关系数为0.995 6;小检出限为2.5μg/L.结论该方法具有预处理简单、分析速度快、灵敏度高等优点,适合实际案件尿样的检验.
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公共安全中化学战剂确证的色谱分析技术
随着公共安全工作的需要,化学战剂(CWAs)的确认成功分析化学中一个重要的应用领域.色谱和质谱技术已应用于环境样品中大多数典型CWAs及其降解后产物的分析.本文综述了目前分析化学战剂的各类检测技术.
