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蛋白质组学新技术在白血病中的应用
蛋白质组学(proteomes)是当今生物领域中极其活跃的学科,主要以生物质谱技术为支撑平台,并结合生物信息学对蛋白质进行研究.此外,发展高通量和高精度的蛋白质相互作用检测技术已受到密切关注,如蛋白质芯片、抗体芯片、荧光能量传递技术等.在白血病的发病机制、早期诊断、指导治疗、寻找药物靶分子及预后判断等方面,蛋白质组学技术发挥了积极作用.
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临床代谢组学及其应用
临床代谢组学是系统生物学研究重要的组成部分，定量定性分析机体受到刺激或者疾病扰动前后小分子代谢产物的动态变化，研究机体整体代谢网络扰动的一门技术。近几年，其在疾病研究、药物毒性分析、临床营养研究，以及在细胞代谢组学等领域飞速发展，但是对临床生物样本的精确定性识别和定量计算仍然需要进一步突破。使用恰当的方式将代谢组学数据数字化，从而建立恰当的测度空间是未来综合系统代谢组学发展方向。
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蛋白组学技术在输血医学研究中的应用
蛋白质组是基因组表达的全部蛋白质,蛋白质组学是以蛋白南组的存在及活动方式为研究对象,包括细胞、组织和体液等表达的全部蛋白质.
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人参皂苷Rg3对肺癌细胞蛋白表达的影响研究
背景与目的 肺癌是对人类健康和生命危害大的恶性肿瘤.肺癌转移是肺癌的恶性标志和特征,也是肺癌病人治疗失败和死亡的主要原因.人参皂苷Rg3具有明显的抗肿瘤效应,该研究将应用双向凝胶电泳技术探讨人参皂苷Rg3抗肺癌侵袭转移分子作用机制.方法 筛选人参皂苷Rg3作用于人肺巨细胞癌高转移细胞株的半抑制浓度(IC50),用0.1倍半抑制浓度(0.1 × IC50)的Rg3溶液作用人肺巨细胞癌高转移细胞株95D 72 h,利用同相PH梯度双向凝胶电泳分离Rg3处理前后人肺巨细胞癌高转移细胞株95D的总蛋白,用图像分析软件比较分析Rg3处理前后细胞间的差异表达蛋白质.对15个差异表达的蛋13质点通过MALD-TOF-MS/MS,LC-MS/MS和蛋白质数据库检索进行鉴定.结果 人参皂苷Rg3作用人肺巨细胞癌高转移细胞株95D的半抑制浓度为100μg/mL.有12个蛋白点仅在对照组细胞株中出现,有6个蛋白点仅在药物处理组出现;在对照组与药物处理组中都存在,但在对照组中高表达的蛋白点有7个,在药物处理组中高表达的蛋白点有2个.通过对差异明显的15个蛋白质点进行质谱鉴定和蛋白质数据库查询.发现氯离子通道蛋白1(Chloride intracelular channel protein 1)、泛素结合酶E2-25 Kda(Ubiquitin-Conjugating Enzyme E2-25 Kda)等蛋白只在对照组有表达;14-3-30蛋白(14-3-3 protein theta)、ski作用蛋白(SKI-interacting protein)只在药物处理组有表达;膜联蛋白A2(annexin A2)、肌动蛋白结合蛋白Ⅱ同构体b(profilin 2 isoform b)等蛋白在对照组的表达量显著高于药物处理组;14-3-3ξ蛋白(14-3-3 protein zela),真核翻译起始因子4H(Eukaryotic translation initiation factor 4H)在药物处理组的表达量显著高于对照组.结论 该研究结果提示Rg3处理前后人肺巨细胞癌高转移细胞株蛋白质组的表达存在明显差异,鉴定的差异蛋白质多与肿瘤的侵袭转移相关.这些差异蛋白质有可能为进一步发现与肺癌转移相关的分子标志物和阐明人参皂苷Rg3抗肺癌侵袭转移的分子作用机制提供线索.
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微生物代谢组学的研究策略及其在人体微生物中的应用
微生物代谢组学诞生于1992年，其研究一般包括样本采集、样本检测和数据分析。早期，微生物代谢组学主要用于不同菌株特性的生物学鉴定；目前，代谢组学技术已应用于微生物表型分类、突变体筛选，代谢途径和微生物代谢工程，发酵工程监控和优化，微生物环境污染物等方面。在口腔医学领域，微生物代谢组学技术在微生物鉴定以及龋病、牙周病、唇腭裂和口腔肿瘤研究中皆有应用，多的还是用于口腔中的致龋菌和牙周致病菌代谢产物的分析。微生物代谢组学技术可以很好地检测出不同菌株间的差异，因而有望成为口腔微生物快速鉴定的新技术。本文就微生物代谢组学的研究策略及应用进展作一综述并提出未来研究中面临的难题。
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慢性牙周炎患者和健康者非刺激性全唾液中的差异蛋白比较
目的 比较慢性牙周炎患者和健康对照者非刺激性全唾液(WUS)中的差异表达蛋白.方法 采集5名慢性牙周炎患者和5名健康者的WUS,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白,将二者之间的差异蛋白质点进行基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱鉴定.结果 通过软件对2组样品的双向胶上的点进行对比分析,发现17个差异点,经质谱鉴定明确了13个点的蛋白类型,其中737、725、692、986为同一种蛋白,716、535为相同蛋白,分别是血清白蛋白、β-纤维蛋白、重组N-叶apo型人血清转铁蛋白2型晶体B链、免疫球蛋白α-1链C区、人血清白蛋白GA复合物、Rca-Rhogdi复合物的B链、PR02044、理论蛋白以及未命名蛋白,而且它们在慢性牙周炎患者全唾液中的表达均上调.结论 比较慢性牙周炎患者和健康者WUS中的蛋白图谱时,发现至少9种与疾病相关的差异蛋白.这种蛋白组学技术也许能更好地理解慢性牙周炎的发病机制.
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ESI和质谱阐明新型抗MRSA抗生素中小组分WAP-8294A II结构特性
由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的院内感染仍然是很严重的临床问题,在治疗MRSA引起的感染时,常用的抗生素有:糖肽类抗生素(万古霉素、替考拉宁),氨基糖苷类抗生素(阿贝卡星arbekacin).
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柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用测定青藏高原产沙棘果实中的5种三萜酸成分
目的 采用柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用(HPLC-FLD-APCI/MS)分析青藏高原沙棘果实中的三萜酸.方法 选择2-(7H-二苯并[a,g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯作为HPLC柱前荧光衍生标记试剂,采用Hypersil BDS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为5％乙腈(A)-乙腈(B),流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,进样量10 μL,检测波长为λex=300 nm、λem=395 nm.结果 5种三萜酸衍生物均具有较好的线性、精密度、回收率和较低的检测限,其r均大于0.9994,检测限为1.21～1.54 ng·mL-1.结论 青藏高原产沙棘果实中富含三萜酸,尤其是熊果酸和齐墩果酸,还含有少量的桦木酸;不同产地沙棘果实中所含三萜酸的种类相同,但含量存在一定的差异.
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人参叶中三萜皂苷类成分的研究
目的 研究人参叶中的微量皂苷类化合物.方法 利用正相硅胶柱层析和反相硅胶制备色谱技术,分离人参叶中的微量成分,并运用质谱和核磁共振技术鉴定其结构.结果 从人参叶中分离得到5个微量成分,分别鉴定为:人参皂苷Rk1(Ⅰ)、Rk3(Ⅱ)、Rh4(Ⅲ)、RgS(Ⅳ)和Rg6(Ⅴ).结论 化合物Ⅰ～Ⅳ为首次从人参叶中分离得到.
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卡莫司他衍生物的合成
目的 合成一种具有游离伯胺的卡莫司他衍生物.方法 以对羟基苯乙酸为原料,经4步反应得到目标化合物.结果与结论 成功制备了目标产物,所得产物的化学结构经1HNMR、MS确认.
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抗肿瘤新药CA4P及其有关物质的IR结构解析
目的 鉴定全合成的新型抗肿瘤抑制剂Combretastatin A-4磷酸酯二钠盐(CA4P)及有关物质的化学结构.方法 采用红外分光光度法(IR),经溴化钾压片,在波数4000～400 cm<'-1>扫描.结果 光谱中各特征峰2940、2830、1600～1500、1200～1000 cm<'-1>等分别为甲基、次甲基、苯环和乙烯C=C及C-O-C等基团的伸缩振动.结论 MS和NMR数据证实了合成的目标化合物为CA4P及其有关物质.
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检测中药保健品中非法掺入的盐酸西布曲明
目的检查某些中药减肥保健品中非法掺入的化学药品盐酸西布曲明.方法采用高效液相色谱法测定中药保健品中掺入盐酸西布曲明的含量,并用薄层色谱、高效液相色谱、红外光谱以及质谱技术进行定性鉴别.结果抽取的15种样品中,有13种检出了盐酸西布曲明.结论所建方法专属性强、灵敏度高,操作简便,可作为中药保健品中掺入盐酸西布曲明监督检查的有效方法.
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检测壮腰补肾丸中非法掺入的枸橼酸西地那非
目的 建立检查壮腰补肾丸中非法掺入枸橼酸西地那非的方法.方法 采用薄层色谱、高效液相色谱(二极管阵列检测)和质谱分析方法检查.结果 样品中检出了枸橼酸西地那非.结论 所用方法专属性强、灵敏度高、操作简便,可作为药检部门监督打假的参考方法.
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硝酸异山梨酯片假冒单硝酸异山梨酯片的检测
目的 建立硝酸异山梨酯片假冒单硝酸异山梨酯片的检测方法.方法 采用TLC、HPLC和MS分析方法.结果 所抽查样品被硝酸异山梨酯假冒.结论 所用方法专属性强、灵敏度高、操作简便,可作为药检部门监督打假的参考方法.
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氟喹诺酮类化合物电喷雾质谱裂解规律
采用Finnigan三重四级杆电喷雾质谱仪,运用准-MS/MS/MS方法 ,对氟喹诺酮类化合物裂解规律进行了初步探索,通过比较9种化合物的电喷雾质谱裂解行为,发现它们在正离子软电离状态下均存在中性丢失CO2、H2O、HF和CO的裂解途径,除那氟沙星和巴洛沙星外(结构中不含哌嗪环),脱羧后均有哌嗪环结构重排反应,脱羧产物和哌嗪环结构重排产物是主要碎片离子.
关键词： 氟喹诺酮 质谱 裂解规律 准-MS/MS/MS -
Avermectin粗粉的结晶工艺研究与杂质分析
采用高效液相色谱(HPLC)-电喷雾串级质谱(ESI-MS-MS)的方法对avermectin粗粉中的杂质进行定性分析.确定了主要杂质成分为:与Bla结构相类似的B1b、Ala、A1b、A2a、A2b、B2a 6个组份,其中Ala、B1b、B2a多次结晶也不易去除.随后考察了avermectin粗粉在甲醇、乙醇、正丁醇和丙酮中的重结晶,甲醇和正丁醇对杂质的去除效果更好;乙醇与丙酮相当,但对杂质去除的选择性不同.
关键词： avermectin 高效液相色谱 质谱 杂质 结晶 -
甘松挥发性化学成分的研究
采用气相色谱一质谱联用技术对药材甘松挥发油的化学成分进行了研究,共分离鉴定出了21个化合物,其相对含量之和占挥发油总量的88.5%.其中主要成分为卡拉烯(29.44%),△1(10)-土青木香烯酮一2(16.57%)及甘松醇(8.80%)等
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吗啡成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异表达蛋白的比较研究
目的:比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质(prefrontal cortex,PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠PFC中的差异表达蛋白质.方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和吗啡成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinum v5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个；经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点:snap25亚型β-snap25突触相关蛋白25、核不均一核糖核蛋白U.结论:吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白质组存在差异；初步鉴定出了2种大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途径影响PFC神经元功能,为研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向.
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蛋白组学中非2D-PAGE的一些新技术
1 引言人类细胞中的全部基因称为基因组,由这些基因编码和调控的蛋白质则称为蛋白质组.人类基因组中有30,000个基因,而人类蛋白组却有100,000多个蛋白质,产生这么多的蛋白质与蛋白质有着复杂的翻译后修饰有关,如磷酸化,乙酰化,糖基化等等.面对如此几倍于基因数量的蛋白质,蛋白组的研究急需高分辨率、高通量和全自动化的蛋白质在线分析和鉴定技术.目前,双相聚丙稀酰氨凝胶电泳(2D-PAGE)与质谱(MS)是分辨和鉴定蛋白质常用的方法,同时也存在许多缺点,人们正在不断改进和发展新技术,加速蛋白组的研究进展.
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宫颈永生化细胞和癌细胞胞膜差异蛋白质组学研究
目的 建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞膜蛋白双向电泳图谱,寻找特征性的差异蛋白点.方法 提取两种细胞胞膜蛋白质进行双向凝胶电泳(2-dimensronal gel eleetrophoresis,2-DE),建立电泳图谱,然后筛选出差异点进行基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS/MS)分析,鉴定出蛋白质.结果 获得了分辨率和重复性均较好胞膜蛋白2 -DE图谱,并分析找出了13个的差异蛋白点,对其中3个显著差异点进行质谱分析和初步鉴定.结论 建立了H8和Caski细胞胞膜蛋白2DE图谱,并初步发现LRC8D、EDAR、MTX1蛋白在宫颈癌前病变和宫颈癌细胞胞膜中存在差异表达,为宫颈癌及癌前病变的诊断及癌变机制提供了帮助.
