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RhoA/ROCK通路调控前列腺增生细胞上皮间质转化
目的:通过研究RhoA/ROCK通路对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的良性前列腺增生(BPH)上皮细胞发生的上皮-间质转化(EMT)的影响,提示BPH的可能发生机制,为治疗BPH提供新的靶点.方法:TGF-p处理BPH上皮细胞系(BPH-1),检测EMT相关分子和RhoA的mRNA表达.随后用ROCK抑制剂Y-27632和TGF-β共处理BPH-1,检测EMT相关分子和RhoA的mRNA和蛋白表达.结果:TGF-β诱导BPH-1细胞发生EMT,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,神经型钙黏蛋白(N cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达升高,同时BPH-1细胞RhoA的mRNA表达上调.Y-27632能够逆转TGF-β诱导的BPH-1细胞E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达改变,差异具有统计学意义.结论:EMT在BPH的发生过程中可能有着重要作用,而RhoA/ROCK通路参与了TGF-β诱导的EMT的调控.
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TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化
目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用.方法:用不同浓度(0,10,25,50,100 ng/ml)IL-17刺激A549细胞48 h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达.将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17 (100 ng/ml)组、IL-17+SB431542组.48 h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达.结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50 ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/mlIL-17组时表达上调;TGF-β1在25 ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关.与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加.结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化.
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TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化
目的:探讨TGFβ1-Smad信号通路在IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化中的作用.方法:体外培养人肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为对照组、TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组、IL-33组、IL-33+TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组.给予相应处理,24 h后收集各处理组细胞.RT-PCR和Western blot检测转化生长因子β1(TGFβ1)、上皮细胞标志物E钙黏素(E-cad)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.Western-blot检测Smad信号通路Smad3、p-Smad3的表达水平.结果:与对照组比较,TGFβ受体抑制剂组Smad3蛋白,p-Smad3蛋白,TGFβ1、E-cad、a-SMA的mRNA及蛋白表达表达水平均未见明显变化(P＞0.05);与对照组比较,IL-33组Smad3蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),TGFβ1 mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05),E-cad mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.05),α-SMAmRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05);IL-33+TGFβ受体抑制剂组与IL-33组比较,Smad3蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),TGFβ1的mRNA及蛋白表达未见明显改变(P＞0.05),E-cad的mRNA及蛋白表达明显升高(P＜0.05),α-SMA的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论:TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化.
关键词： 上皮-间质转化 IL-33 TGFβ1-Smad信号通路 -
地塞米松对内毒素诱导的肾小管上皮-间质转化的抑制作用
目的:探讨地塞米松(dex)抑制内毒素诱导的大鼠正常肾小管上皮细胞(NRK-52E)上皮-间质转化的作用和机制.方法:按照不同的处理方式分为:对照组(Control),内毒素组(LPS 5 mg/L),地塞米松小剂量组(LPS 5mg/L+dex 0.5 mg/L),地塞米松中剂量组(LPS 5 mg/L+dex 5 mg/L)和地塞米松大剂量组(LPS 5 mg/L+dex50 mg/L).处理24 h后,取各组培养基200μl,1 500 g、15 min离心后去沉淀,分析IL-1和TNF-α的分泌量.通过细胞免疫荧光检测上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维黏连蛋白(Fibronectin).Western blotting检测核转录因子(NF-κB-p65),磷酸化Smad3(p-Smad3),核因子转录抑制蛋白α(IκB-α)的表达.结果:ELISA结果显示,内毒素组IL-1,TNF-α分泌较对照组明显增多,加入地塞米松后分泌逐渐减少,大剂量效果尤为显著.细胞免疫荧光结果显示,内毒素组较对照组E-cadherin的表达减少,α-SMA和Fibronectin表达增多,加入地塞米松后能够阻止这种改变,并呈剂量依赖.Western blotting结果显示地塞米松能上调IκB-a表达,并减少NF-κB-p65,p-Smad3的表达.结论:地塞米松可能通过NF-κB/Smad信号通路抑制内毒素诱导的肾小管上皮-间质转化.
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HPV16E6对ZEB1介导的宫颈癌细胞上皮间质转化的促进作用
目的:探讨宫颈癌细胞中HPV16 E6病毒蛋白对E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)及其介导的上皮间质转化(EMT)的影响.方法:构建HPV16 E6质粒并转染至宫颈癌细胞C33A(E6-C33A组),同时设置Control-C33A组;设计合成靶向E6特异性shRNA,使Siha细胞中E6低表达(shE6-Siha组),设置Control-Siha组.划痕实验比较各组细胞迁移情况;荧光定量PCR和Western Blot检测EMT相关指标(E-cadherin、vimentin)及ZEB1的表达;生物信息学方法预测HPV16 E6和ZEB1的三级结构及二者的相互作用,免疫共沉淀进行验证.结果:划痕实验显示E6-C33A组细胞迁移能力显著高于Control-C33A组;而shE6-Siha组细胞迁移能力显著低于Control-Siha组;与Control-C33A组相比,E6-C33A组中ZEB1、vimentin的表达量明显升高,E-cadherin表达则降低;与Control-Siha组相比,shE6-Siha组ZEB1、vimentin表达下降,E-cadherin表达升高.免疫共沉淀证明HPV16 E6与ZEB1存在相互作用.结论:HPV16 E6可促进ZEB1的表达,诱发宫颈癌细胞的EMT.
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细胞融合与肿瘤关系研究进展
细胞融合,是生物体在发展和达到动态平衡过程中产生的.而肿瘤的发展是一个多步骤的复杂过程,从肿瘤的发生及生长,到肿瘤发生转移,这些过程都与细胞融合关系密切.目前对细胞融合与肿瘤之间关系的研究较多,主要集中于几个方面:细胞融合研究机制;不同细胞之间的融合;细胞融合与其它学说如上皮-间质转化(EMT)、染色体非整倍性、肿瘤异质性等之间的关系;细胞融合与血管生成和肿瘤转移的研究等等.本文主要从以上几个方面人手,初步探究细胞融合与肿瘤之间的关系,从而为肿瘤治疗提供新的目标和方向.
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双氢青蒿素逆转乳腺癌细胞MCF-7上皮-间质转化的分子机制
目的:探讨上皮-间质转化(EMT)参与乳腺癌细胞侵袭和转移的过程;双氢青蒿素(DHA)在逆转乳腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)过程中的作用,并探讨NF-κB信号分子可能参与逆转EMT过程.方法:利用DHA处理脂多糖(LPS)诱导的乳腺癌细胞株MCF-7,观察细胞形态变化;Western Blot实验及RT-PCR检测DHA干预前后钙黏蛋白(E-cad以及波形蛋白Vimentin)表达水平的变化;Transwell实验检测DHA干预前后乳腺癌细胞侵袭能力的变化;通过WesternBlot免疫印迹检测DHA干预前后核转录因子Snail以及P65蛋白的表达变化.结果:DHA可逆转LPS诱导的乳腺癌细胞MCF-7 EMT发生,使LPS诱导的EMT相关蛋白E-cad表达上调、Vimentin表达下调;并下调Snail蛋白及NF-κB P65的表达.DHA可抑制发生EMT的乳腺癌细胞运动及侵袭.结论:①LPS可诱导乳腺癌细胞系发生EMT,并增强细胞侵袭能力;②DHA逆转乳腺癌细胞EMT,抑制NF-κB信号通路进而下调核转录因子Snail的表达.
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上皮-间质转化调控蛋白在前列腺癌侵袭、转移中的作用及其临床预后诊断价值
目的 探讨上皮-间质转化(EMT)调控蛋白在前列腺癌(PCa)侵袭、转移中的作用及其对临床预后的诊断价值.方法 收集48例PCa组织样本(PCa组)和50例良性前列腺增生(BPH)组织样本(BPH组),免疫组化SP法检测样本神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,分析N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者临床资料的关系.对PCa患者进行随访,记录患者总生存期(OS);以OS作为评价指标,采用单变量和多变量Cox比例风险模型评价患者预后的影响因素.以转化生长因子β1(TGF-β1)诱导DU-145细胞发生EMT,细胞增殖实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白表达.结果 PCa组N-cadherin表达水平显著高于BPH组,E-cadherin表达水平显著低于BPH组(均P<0.05).肿瘤直径≥2.5 cm者N-cadherin高表达率显著高于肿瘤直径<2.5 cm者,Ⅳ期PCa患者N-cadherin高表达率显著高于Ⅱ期和Ⅲ期PCa患者,淋巴结转移者N-cadherin高表达率显著高于无淋巴结转移者,远处转移者N-cadherin高表达率显著高于无远处转移者(均P<0.05).Gleason分级≥7分者E-cadherin高表达率显著低于Gleason分级≤6分者,有淋巴结转移者E-cadherin高表达率显著低于无淋巴结转移者,有远处转移者E-cadherin高表达率显著低于无远处转移者(均P<0.05).N-cadherin高表达患者OS显著低于N-cadherin低表达患者(P=0.024),E-cadherin高表达患者OS显著高于E-cadherin低表达患者(P=0.017).单因素和多因素分析显示,T4期肿瘤、N-cadherin高表达、E-cadherin低表达是影响患者OS的独立危险因素(均P<0.05).细胞增殖实验显示,第24~96 h,DU-145组吸光度值显著高于NC组(均P<0.05);Transwell实验显示,DU-145组穿膜细胞数量显著多于NC组(P<0.05);Western blot实验显示,DU-145组N-cadherin蛋白表达水平显著高于NC组,E-cadherin蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.05).结论 EMT与PCa的增殖、侵袭和迁移有关,N-cadherin、E-cadherin有可能作为PCa临床预后的诊断指标之一.
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HBx基因诱导肝卵圆细胞恶性转化并促进其发生侵袭转移
目的 研究HBx对肝卵圆细胞发生恶性转化并上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 以稳定表达HBx的转基因卵圆细胞株pEGFP-HBx-LE/6为实验组,pEGFP-LE/6卵圆细胞为对照组.使用Western blotting、Transwell细胞侵袭实验、划痕实验、CCK-8等检测pEGFP-HBx-LE/6在细胞周期、分化标志物以及增殖转移能力方面的变化.结果 ①实验组细胞体积增大、具有明显异形性,CK-19、CK-7表达明显下降,AFP、HNF-4α表达升高;②实验组细胞的增殖能力明显升高,克隆形成能力、侵袭能力、划痕恢复能力明显增强;③与对照组比较,实验组E-cadherin表达水平明显下降,而N-cadherin、α-SMA、Vimentin表达水平明显上升.结论 HBx基因可诱导肝卵圆细胞向恶性转化,并促进其转移.
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长链非编码RNA-HOTAIR对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响
目的 检测乳腺癌肿瘤组织中HOX转录反义RNA(HOTAIR)的表达,并观察HOTAIR对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响.方法 应用荧光定量PCR检测32对乳腺癌患者的肿瘤组织和癌旁正常组织中HO-TAIR的表达差异;通过慢病毒转染构建稳定高表达HOTAIR的MCF-7细胞株,Transwel1检测高表达HOTAIR对细胞侵袭能力的影响,光学显微镜下观察细胞的形态学变化,Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的变化.裸鼠尾静脉注射HOTAIR高表达的MCF-7细胞,观察肝脏转移瘤的形成.结果 在32对乳腺癌临床标本中,有24例肿瘤组织中HOTAIR的表达高于癌旁正常组织;MCF-7高表达HOTAIR后,细胞的侵袭能力增强,细胞发生EMT为特征的形态学变化,EMT相关的E cadherin表达降低,而Vimentin及Slug的表达升高.高表达HOTAIR的MCF-7细胞肝脏转移瘤成瘤能力更强.结论 乳腺癌临床标本中HOTAIR的表达增高,乳腺癌细胞系MCF-7中高表达HO-TAIR可诱使其发生EMT,并促进其侵袭转移.
关键词： 长链非编码RNA HOX转录反义RNA 乳腺癌 侵袭转移 上皮-间质转化 -
上皮-间质转化在滋养细胞分化和子痫前期中的作用
上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transi-tion,EMT)指上皮细胞经特定程序转化成具有间质表型细胞的生物学过程,转化后的细胞丧失极性和粘附功能,获得迁移和侵袭能力.1908年,Lillie首次报道了这种细胞间转化状态[1].1982年,Green-burg等[2]正式提出 EMT 概念,并认为这是一个动态可逆的过程.EMT可分为3型,1型主要与胚胎着床和器官发育相关,2型主要与创伤愈合、组织再生和器官纤维化相关,3型主要与癌症进展和转移相关[3].近年有研究认为,EMT 与滋养细胞分化及子痫前期发病相关,本文综述如下.
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盐酸川芎嗪对小鼠Lewis肺癌细胞转移及上皮-间质转化的影响
目的:探讨盐酸川芎嗪对小鼠Lewis肺癌细胞侵袭黏附能力及上皮-间质转化的影响及其作用机制.方法:对绿色荧光蛋白 (GFP) 标记的小鼠Lewis肺癌细胞株 (LLC-GFP) 进行体外培养, 经盐酸川芎嗪干预24 h后, 分别采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率, 细胞黏附实验、Transwell小室实验检测细胞侵袭、黏附能力的改变, 流式细胞技术、Western Blot检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin) 与N-钙黏蛋白 (N-cadherin) 的表达变化.结果:与对照组比较, 盐酸川芎嗪呈剂量依赖性抑制LLC-GFP细胞的增殖;Transwell实验显示, 与对照组比较, 用药组细胞的侵袭能力呈剂量依赖性下降 (P<0.01);细胞黏附实验显示, 与对照组黏附抑制率 (14.01±1.36) ％比较, 应用盐酸川芎嗪需药物浓度达到2, 000μg/m L时才可显著增高黏附抑制率 (P<0.01);流式细胞技术及Western blot实验结果显示, 与对照组比较, 盐酸川芎嗪可下调N-cadherin蛋白, 并上调E-cadherin蛋白的表达 (P<0.01), 且呈剂量依赖性.结论:盐酸川芎嗪可显著地抑制LLC-GFP细胞的生长, 抑制侵袭和黏附, 其机制可能与直接抑制肿瘤细胞侵袭, 抑制相关黏附蛋白N-cadherin, 促进黏附分子E-cadherin蛋白表达有关.
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骨形态发生蛋白与卵巢癌的相关研究进展
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是TGF-β超家族中大的配体亚家族,早被发现其可诱导骨和软骨的形成.研究发现BMPs参与多种生物学过程,如细胞增生、转移、分化和凋亡.近年来发现BMPs参与卵巢癌等肿瘤的演进过程,其在卵巢癌的形成、发展、侵袭和迁移过程中扮演重要的角色.
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Hippo信号通路与肾病
Hippo信号通路是近年来备受关注的一条调节器官生长和组织大小的重要信号通路,其已被证实在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用.目前Hippo信号通路与肾病的相关性研究仍处于起步阶段.在急性肾损伤(acute renal injury,AKI)方面,Hippo信号通路可能参与小管上皮细胞的凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及AKI进展至慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)等多个环节.此外,Hippo信号通路还参与多种慢性肾脏病,包括局灶节段性肾小球硬化症、糖尿病肾病、多囊肾等的发生和疾病进展.
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转录因子在上皮间质转化中分子机制研究进展
上皮细胞-间充质转化(epithelia-mesenchymal transition,EMT),是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,目前研究证实这种表型的转化与转录因子密不可分.与其他转录因子相比,转录因子SNAIL、TWIST、ZEB为促进EMT过程的主要转录因子,本文总结国内外与EMT相关研究并对转录因子及其在EMT过程中的分子机制加以综述.
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FOXC1在肿瘤进展中的作用
FOXC1是转录因子FOX超家族的成员,广泛存在于人体的多种组织和器官中,参与胚胎时期眼睛、心脏、肾、脑膜、骨骼发育的调控.作为转录因子,FOXC1蛋白通过作用于靶基因的启动子或与其他转录因子相互作用激活转录,并从上皮-间质转化、细胞信号转导和血管内皮细胞迁移等多方面影响肿瘤细胞的生长周期和增殖活动.FOXC1参与多种肿瘤的发生和发展的过程,其表达的水平还可作为某些肿瘤预后评估的指标,并有望成为肿瘤靶向治疗的新位点.
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上皮-间质转化与肿瘤的浸润和转移
上皮-间质转化(epithelial-mesenehymal transitions,EMT)是指上皮细胞失去极性,经过细胞骨架重塑,转变成具有迁移能力的间充质表型的过程,是多细胞生物胚胎发生发育过程中的基础.细胞因子TGF-β、转录因子Snail、基质金属蛋白酶MMPs、病毒癌基因可以诱导EMT.肿瘤细胞EMT与肿瘤细胞的浸润、转移、信号转导有关,研究肿瘤细胞EMT将为寻找抗肿瘤治疗靶点奠定基础.
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miR-126靶向EGFL7抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231上皮-间质转化
目的:探讨表皮生长因子样结构域7(epidermal growth factor-like domain 7,EGFL7)参与肿瘤细胞侵袭的可能分子机制.方法:设计构建miR-126过表达质粒,将该质粒转染并筛选培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western印迹法检测EGFL7,Wnt-1,β-catenin,E-cadherin蛋白的表达变化,免疫组织化学检测Vimentin蛋白的表达并观察细胞形态变化,RT-PCR检测Twist和Slug转录因子mRNA表达,Transwell小室体外侵袭实验观察肿瘤细胞的体外侵袭能力.结果:成功建立过表达miR-126的转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231/miR-126,稳定转染细胞株EGFL7蛋白表达下调(P＜0.01),并下调Wnt-1/β-catenin蛋白水平(P=0.02/P＜0.01),E-cadherin蛋白表达上调(P＜0.01),Vimentin蛋白表达下调,且细胞形态由梭形间充质样向多边形上皮样转化;Twist和Slug转录因子表达下调(P＜0.01),肿瘤细胞体外侵袭能力减弱(P＜0.01).结论:miR-126通过靶向调节EGFL7调控Wnt-1/β-catenin信号通路及Twist,Slug转录因子,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),降低了乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭能力,EGFL7可作为一种预测乳腺癌转移的重要生物标志物,并可能成为一种潜在的治疗靶点.
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Endophilin A2与胃癌BGC-823细胞转移及上皮-间质转化的关系
目的:探究Endophilin A2在胃癌转移及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用及相关机制.方法:通过免疫组织化学法测定37例胃癌原发灶组织和35例胃癌转移淋巴结中Endophilin A2蛋白的分布和表达情况.在BGC-823细胞转染腺病毒过表达EndophilinA2后,通过划痕实验和Transwell实验观察其迁移能力;Western印迹检测EMT及相关信号通路蛋白的水平.结果:免疫组织化学结果显示胃癌淋巴结转移灶中Endophilin A2蛋白的表达明显低于原发灶.BGC-823细胞中过表达Endophilin A2之后细胞的迁移能力降低,上皮细胞标志物上皮黏附蛋白(epithelium cadherin,E-cadherin)的表达升高,同时黏附蛋白辅助因子p-catenin的表达升高,而间质细胞标志物神经钙黏蛋白(nervous cadherin,N-cadherin)和波形蛋白vimentin的表达明显下降.Endophilin A2过表达之后,Notch和snail的表达也明显降低.结论:Endophilin A2与胃癌淋巴转移密切相关,过表达Endophilin A2可能通过Notch/snail通路抑制胃癌细胞BGC-823的EMT进程.
关键词： Endophilin A2 上皮-间质转化 胃癌 -
上皮-间质转化在蒿甲醚逆转结直肠癌细胞放化疗抵抗中的作用
目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在蒿甲醚(artemether,ARE)对同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116(HCT1 16CRR)的逆转作用中的作用.方法:实验分为四组:1)对照组;2)单纯放化疗组;3)ARE联合放化疗组;4)ARE组.采用Real-time PCR和Westernblot,检测各组EMT相关指标E-cadherin,N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot结果显示E-cadherin mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＜ARE联合放化疗组＜对照组＜ARE组;N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＞ARE联合放化疗组＞对照组＞ARE组.结论:EMT在ARE逆转同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116CRR细胞系的放化疗抵抗作用中有重要的作用,即上调E-cadherin mRNA及其蛋白的表达,下调N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达.
