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肝脏星状细胞在肝细胞癌上皮间质转化中的作用及临床意义
目的 探讨肝星型细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的表达与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的关系,并结合临床资料分析HSCs对原发性肝癌(primary hepatocelluar carcinoma,HCC)生物学行为的影响.方法 通过免疫组织化学方法检测30例肝细胞癌癌组织及23例癌旁组织中的活化HSCs的特异性标记蛋白α-SMA及Twist,同时结合临床资料进行分析.结果 肝细胞癌癌组织及癌旁组织中,α-SMA阳性表达率分别为60.0％和30.4％,组间差异有统计学意义(P＜0.05);Twist阳性表达率分别为66.7％和39.1％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).肝癌组中α-SMA和twist阳性表达组和阴性表达组之间的肿瘤分化程度和分期差异有统计学意义(P＜0.05).30例肝癌病理标本中,α-SMA与twist蛋白表达呈正相关(r=0.433,P＜0.05).结论 HSCs在HCC中高表达,对评估肝癌EMT及预后具有重要意义.
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microRNA-320d通过PBX3抑制子宫内膜癌JEC细胞上皮-间质转化功能
[目的]研究microRNA-320d(miR-320d)对子宫内膜癌JEC细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制.[方法]JEC子宫内膜癌细胞株分别转染miR-320d mimics和negative control mimic,分别作为M320d、NCM组,并设立未转染对照control组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-320d含量.Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力.Western-blot法检测3组细胞α-Catenin和PBX3表达水平,及PBX3过表达对miR-320d抑制EMT的拮抗作用.双荧光素酶实验检测miR-320d与PBX3的关系.[结果]M320d组miR-320d的表达水平为control组的(808.25±15.58)倍(P<0.05).M320d组迁移细胞数量29.56±0.59低于control组的94.48±1.02(P<0.05).M320d组侵袭细胞数量7.33±0.84低于control组的86.28±3.51(P<0.05).M320d组细胞α-Catenin、E-cadherin蛋白表达量(0.365±0.017、0.261±0.008)高于对照组(0.114±0.010、0.151±0.021),Vimentin蛋白表达量(0.105±0.009)低于对照组(0.211±0.025),PBX3蛋白表达量(0.181±0.002)低于对照组(0.311±0.007).PBX3过表达M320d组子宫内膜癌细胞中α-Catenin、E-cadherin蛋白表达量(0.139±0.019、0.143±0.007)低于对照组(0.399±0.034、0.261±0.017),Vimentin蛋白表达量(0.234±0.008)高于对照组(0.105±0.009),差异均有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶检验结果显示PBX3为miR-320d的下游靶基因.[结论]miR-320d可能通过降低下游靶基因PBX3水平影响EMT相关蛋白表达,抑制子宫内膜癌JEC细胞的上皮-间质转化功能.
关键词： 子宫内膜癌 微小RNA-320d 上皮-间质转化 -
结直肠癌中表皮生长因子受体与上皮-间质转化相关蛋白的表达及相关性
目的 探讨结直肠癌中表皮生长因子受体(EGFR)与上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin (E-cad)、Vimentin表达的相关性.方法 收集手术切除的结直肠癌组织标本107例,采用免疫组织化学方法检测癌组织EGFR、E-cad和Vimentin的表达,并分析其相关性.结果 结直肠癌组织中EGFR的阳性表达率为45.8％ (49/107),E-cad的阳性表达率为60.75％ (65/107),Vimentin的阳性表达率为10.3％(11/107).EGFR、E-cad及Vimentin表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移及Dukes分期相关(P＜0.05,P＜0.01).EGFR与E-cad的表达相关(r =0.493,P＜0.05).结论 EMT参与结直肠癌的发展,尤其在促进肿瘤浸润转移中发挥着重要作用.EGFR的表达与EMT相关,可能诱导EMT的发生.
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生长抑素联合吉西他滨对人胰腺癌PANC-1细胞的影响
目的 研究生长抑素(SST)、吉西他滨(Gem)单药或联合用药对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移的影响及机制.方法 (1)体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,使用不同浓度SST、Gem及联合用药干预不同时间;(2)MTT法检测各浓度药物对细胞增殖抑制的影响(细胞抑制率);(3)应用划痕实验检测各浓度药物对细胞的侵袭能力的影响(伤痕愈合面积比);(4)Western blot法检测各浓度药物对细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达.结果 (1)MTT实验:不同浓度SST、Gem对细胞增殖具有抑制作用,与浓度和时间呈正相关;联合用药组比单药组抑制作用更强;(2)划痕实验:药物浓度越高伤痕愈合指数越小,联合用药组伤痕愈合指数小;(3)免疫印迹分析显示,E-cadherin表达与SST浓度呈正相关,而Vimentin表达与SST浓度呈负相关;联合用药效应强.结论 SST可协同Gem抑制人胰腺癌细胞PANC-1的增殖及迁移,其机制可能与逆转上皮间质转化有关.
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高糖诱导肾小管上皮细胞发生上皮-间质转化过程中Snail 1对IGF-1表达的影响
目的 研究锌指转录因子1(Snail 1)对高糖诱导的发生上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)表达的影响,探讨糖尿病肾脏病发生机制及Snail 1与自分泌IGF-1的相关性.方法 大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E),分组如下:对照组、高糖组、高糖+NT组、高糖+siRNA组.分别于培养48 h、72 h收获细胞.用免疫荧光、原位杂交等方法检测细胞Snail 1、IGF-1、 E-钙黏蛋白(E-cadherin)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)mRNA及蛋白的表达.结果 与对照组相比,高糖组细胞IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01).E-cadherin的mRNA及蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组相比,高糖+siRNA组细胞IGF-1、Snail 1和FN的mRNA及蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.01),E-cadherin的mRNA及蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);与高糖组相比,高糖+NT组IGF-1、Snail 1、E-cadherin和FN的mRNA及蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05).Spearman′s相关性分析显示,NRK-52E细胞中Snail 1与IGF-1蛋白的表达呈正相关(r=0.936,P<0.05).结论 高糖诱导肾小管上皮细胞发生EMT的过程中Snail 1可能通过调节IGF-1促进糖尿病肾脏病肾脏纤维化.
关键词： 糖尿病肾脏病 肾纤维化 上皮-间质转化 锌指转录因子1 胰岛素样生长因子-1 -
miR-211对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化功能的影响及机制
目的 研究microRNA-211(miR-211)对卵巢癌SKOV-3细胞上皮-间质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法 SKOV-3卵巢癌细胞株分别转染miR-211模拟物(211M组)及其阴性对照模拟物(NCM组),并设立未转染对照组,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-211含量;Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法检测3组细胞Snail、α-连环蛋白(α-Catenin)和与性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)表达水平;采用Western blot法检测SOX4过表达对miR-211抑制EMT的拮抗作用;双荧光素酶实验检测miR-211与SOX4的关系.结果 211M组miR-211的表达水平明显上调,表达水平为未转染对照组的(706.67±30.95)倍(P<0.05).211M组迁移细胞数量为(12.32±0.77)个/视野,明显低于未转染对照组的(82.25±1.05)个/视野(P<0.05).211M组侵袭细胞数量为(9.22±0.32)个/视野,明显低于未转染对照组的(62.10±1.77)个/视野(P<0.05).211M组细胞Snail蛋白表达量明显降低,α-Catenin蛋白表达量明显升高,SOX4蛋白表达量明显降低.SOX4+211M组卵巢癌细胞中Snail蛋白表达量明显升高, α-Catenin蛋白表达量明显降低.双荧光素酶检验结果显示SOX4为miR-211的下游靶基因.结论 miR-211可能通过降低下游靶基因SOX4水平影响EMT相关蛋白表达,抑制卵巢癌SKOV-3细胞的EMT功能.
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IGF-1R信号通路及上皮-间质转化对非小细胞肺癌A549细胞EGFR-TKIs获得性耐药的作用
目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（ IGF-1R）信号通路及上皮-间质转化（ EMT）对EGFR野生型、K-ras突变型非小细胞肺癌A549细胞表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（ EGFR-TKIs）获得性耐药的作用。方法选用EGFR野生型、K-ras突变型的非小细胞肺癌A549细胞，用吉非替尼将其诱导成耐药细胞A549/GR。MTT法检测细胞增殖，划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力，qRT-PCR和Western blot 法分别检测EMT标志分子及IGF-1R信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果 A549/GR对吉非替尼的敏感性显著下降（P＜0.05）。与A549细胞比较，A549/GR细胞形态呈现间质化改变，侵袭和转移能力均显著增加（P＜0.05）。 A549/GR细胞中间质标志Vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增多（P＜0.05），上皮标志E-Cadherin表达量显著减少（P＜0.05）。与A549细胞相比，A549/GR细胞IGF-1R的mRNA和蛋白及其磷酸化表达量均未见明显改变（P＞0.05），而AKT磷酸化水平及其mRNA水平明显上调（P＜0.05），ERK蛋白及其磷酸化和mRNA表达量均明显增加（ P＜0.05）。 A549/GR 细胞的 EGFR 及其磷酸化蛋白表达量较 A549细胞明显下降（ P＜0.05）。结论 EMT及AKT和ERK信号通路的激活均可能在EGFR野生型、K-ras突变型A549细胞的EGFR-TKIs获得性耐药中起重要作用，但获得性耐药与IGF-1R表达无关。
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TRAF6与乳腺癌细胞迁移的关系
目的 探讨TRAF6在肿瘤细胞迁移中的作用.方法 建立对照及TRAF6稳定敲低MDA-MB-231细胞株,并用细胞迁移实验对比细胞迁移能力的差别;建立对照及TRAF6过表达HMLE细胞株,观察细胞形态的变化.结果 TRAF6稳定敲低MDA-MB-231细胞较对照细胞迁移能力显著下降(P<0.01);HLME细胞过表达TRAF6,细胞形态发生上皮-间质转化(EMT).结论 TRAF6表达水平下调抑制肿瘤细胞迁移,TRAF6可促进乳腺上皮细胞发生EMT.
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Sestrin2在miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化中的表达及六神丸干预研究
目的 探讨Sestrin2在六神丸调控miR-19诱导的非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用.方法 实验分为对照组、miR-19过表达组、六神丸组.对照组为常规血清培养的A549细胞;miR-19过表达组为常规血清培养的过表达miR-19 A549细胞;六神丸组予以六神丸含药血清干预过表达miR-19 A549细胞.48 h后分别以CCK-8检测A549细胞增殖,Transwell小室检测A549细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-19表达,蛋白印迹检测Sestrin2、PTEN以及EMT标记分子E-cadherin、Vimentin的表达.结果 细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测结果显示,六神丸组A549细胞增殖速度较对照组、miR-19过表达组明显减慢;Transwell小室实验显示,六神丸组A549细胞迁移数量较miR-19过表达组、对照组明显减少;qRT-PCR检测结果显示,六神丸组A549细胞中miR-19表达较miR 19过表达组、对照组明显降低;Western blot检测结果显示,与对照组、miR-19过表达组相比,六神丸组A549细胞中Sestrin2、E-cadherin、PTEN表达明显上调,Vimentin表达明显下调.结论 六神丸能够抑制miR-19诱发的人肺腺癌细胞株A549发生EMT,与激活Sestrin2信号通路有关.
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长链非编码RNA CCAT1对子宫内膜癌细胞迁移侵袭及上皮-间质转化的影响
目的:探讨CCAT1对子宫内膜癌细胞迁移侵袭及上皮-间质转化的影响.方法:qPCR检测CCAT1在癌组织中的表达水平,分析其与子宫内膜癌的发生及癌恶性程度的关系;靶向沉默CCAT1,划痕愈合试验和Transwell侵袭试验检测细胞迁移及侵袭能力;qPCR及Western blot检测相关分子的表达水平.结果:CCAT1的表达水平在子宫内膜癌组织中显著增高(P＜ 0.001),且与肿瘤的恶性程度呈正相关;沉默CCAT1后,子宫内膜癌细胞的迁移距离及穿膜数目均显著减少;沉默CCAT1抑制转移相关基因(MMP2和MMP9)及间质标志分子(Snail,Zeb1和Twist1)的表达水平,增强上皮标志分子(E-cadherin和ZO-1)的表达水平.结论:CCAT1在子宫内膜癌中表达上调,且其表达水平与肿瘤的恶性程度呈正相关;沉默表达CCAT1抑制子宫内膜癌细胞的迁移侵袭及上皮-间质转化功能.
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转录因子FoxO1对神经母细胞瘤侵袭迁移和上皮-间质转化的影响及其机制
目的 探究转录因子FoxO1在神经母细胞瘤侵袭迁移和上皮-间质转化中发挥的作用并探究其分子机制.方法 使用慢病毒转染构建FoxO1稳定过表达和敲低细胞系;应用Transwell小室检测不同处理神经母细胞瘤细胞侵袭迁移能力的变化;使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测神经母细胞瘤细胞中FoxO1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和ZEB2蛋白表达水平变化;应用qRT-PCR检测FoxO1和ZEB2的mRNA水平改变.结果 成功构建FoxO1稳定过表达和敲低细胞系;FoxO1稳定过表达后细胞侵袭迁移能力减弱,细胞发生间质-上皮转化,E-cadherin蛋白水平上调而N-cadherin和Vimentin蛋白水平下调;FoxO1稳定敲低后细胞侵袭迁移能力增强,细胞发生上皮-间质转化,E-cadherin蛋白水平下调而N-cadherin和Vimentin蛋白水平上调;FoxO1抑制ZEB2蛋白和mRNA水平,ZEB2敲低后FoxO1调节上皮-间质转化作用减弱.结论 转录因子FoxO1通过下调ZEB2表达水平抑制神经母细胞瘤细胞侵袭迁移和上皮-间质转化,发挥抑癌作用.
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上皮-间质转化对EGFR突变型非小细胞肺癌细胞株PC-9放射敏感性的影响
目地:探讨上皮-间质转化(EMT)在EGFR突变型非小细胞肺癌(NSCLC)细胞EGFR-TKI获得性耐药前后放射敏感性变化中的作用.方法:选用EGFR19外显子缺失突变的人肺腺癌细胞PC-9及对吉非替尼获得性耐药的PC-9/AB.采用免疫印迹法检测EMT相关蛋白;划痕实验检测细胞迁移能力;CCK-8法、克隆形成实验以及流式细胞术检测细胞放射敏感性.结果:PC-9/AB出现EMT,其放射敏感性显著低于PC-9(P<0.05);逆转EMT的PC-9/AB-CDH1放射敏感性较PC-9/AB恢复(P<0.05);PC-9/TGF发生EMT的同时放射敏感性下降(P<0.05).结论:EMT是EGFR突变型NSCLC细胞EGFR-TKI耐药后发生放射抵抗的机制之一,该机制可能通过TGF-β通路实现.
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靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究
目的：探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition， EMT）与多药耐药（multidrug resistance， MDR）基因的相互关系，为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法：采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、肺耐药蛋白（lung resistance p rotein，LRP）的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail，采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。 Snail下降后，Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果：Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73．1％、53．8％、51．9％，P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因；A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论：在NSCLC中，Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关；阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。
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Fascin1基因沉默对人鼻咽癌细胞CNE-2上皮-间质转化的抑制作用
目的：研究聚束蛋白（Fascin1）基因沉默后对人鼻咽癌细胞 CNE-2上皮-间质转化的影响，以探讨Fascin1在鼻咽癌发展中的作用。方法：构建Fascin1-shRNA干扰载体，包装成慢病毒以感染CNE-2，构建干扰Fascin1表达的CNE-2细胞系；定量PCR及Western-blot 法检测Fascin1、E-cadherin Vimentin 及Twist1的mRNA及蛋白表达变化；Transwell小室法及划痕实验检测细胞运动能力的变化，Matrigel法检测细胞侵袭能力的变化。结果：干扰组（shRNA-Fascin1）与对照组（shRNA-ctrl）比较，Fascin1蛋白及 mRNA 表达均明显降低；下调Fascin1后 CNE-2细胞侵袭能力无明显变化，但细胞运动能力明显降低，且与 EMT 相关的上皮型钙黏附素（E-cadherin）表达上调（P ＜0．05），而 Vimentin 表达下调（P ＝0．0062），Twist1表达下调（P ＝0．0019）。结论：靶向抑制Fascin1基因表达可降低CNE-2细胞运动能力，抑制CNE-2细胞EMT，其机制可能与下调Vimentin和Twist1表达及上调E-cadherin表达有关。
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FMNL3基因与结直肠癌上皮-间质转化关系的初步研究
目的:对FMNL3与上皮-间质转化(EMT)标志物在结直肠癌组织和细胞中的表达及其相关性进行初步研究.方法:(1)采用免疫组化法检测结直肠癌及癌旁石蜡组织标本中FMNL3蛋白与EMT相关上皮和间质标志物的表达情况并进行相关性分析;(2) RT-qPCR法分析不同转移潜能的结直肠癌细胞株中FMNL3基因与EMT相关上皮和间质标记物的表达情况.结果:FMNL3、Vimentin在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常黏膜组织(P＜0.01),淋巴结转移癌中的表达高于结直肠癌原位组织(P＜0.05),而CK、E-cadherin的表达趋势正好相反(P＜0.01).统计学相关性分析结果显示:FMNL3的表达与CK、E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.573,P=0.000;r=-0.486,P=0.000),而与Vimentin呈正相关(r=0.526,P=0.000).与低转移潜能的SW480和HT29相比,高转移潜能的SW620和LOVO细胞中FMNL3及Vimentin的表达更高,而CK、E-cadherin的表达更低(均P＜0.05).结论:FMNL3与EMT相关,并可能通过促进结直肠癌细胞EMT而促进其转移.
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调控鞘氨醇激酶1基因对胃癌细胞增殖、侵袭及上皮-间质转化的影响
目的:探讨鞘氨醇激酶1(SPHK1)对胃癌细胞增殖、侵袭能力及上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制.方法:通过稳定转染构建SPHK1过表达胃癌细胞株和siRNA转染抑制SPHK1表达.分别应用MTT方法评价不同SPHK1表达水平对胃癌细胞增殖能力的影响；Transwell小室模型观察细胞侵袭能力的变化；Real-time PCR和Western blot方法评价TGF-3对SPHK1表达水平的作用,以及SPHK1对EMT的影响.结果:成功构建SPHK1过表达的稳定细胞表达株及对照细胞；过表达SPHK1显著增加胃癌细胞的增殖、侵袭能力,而抑制SPHK1表达引起相反的变化.SPHK1可以负调控EMT上皮性标志分子E-cadherin表达,正调控间质性分子Vimentin和转录因子Snail.结论:SPHK1可促进胃癌细胞的增殖和侵袭能力,其机制可能是通过促进EMT而发挥作用.
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沉默Tiam1基因对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化的影响
目的:探讨RNAi技术沉默Tiam1对大肠癌LoVo细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法:应用RNAi技术将Tiam1的特异性干扰片段转染处理LoVo细胞,采用Real time-RT PCR方法检测Tiam1表达水平和沉默前后LoVo细胞E-cadherin、Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的表达水平;扫描电镜、透射电镜,HE染色观察细胞结构及形态变化;考马斯亮蓝染色观察细胞骨架变化.结果:与对照组比较,RNAi组的Tiam1 mRNA表达水平明显降低;RNAi组的E-cadherin mRNA表达水平比对照组上调,差异具有统计学意义(P ＜ 0.05),RNAi组Vimentin、RhoA、RhoC、Rac1的mRNA表达水平与对照组比较差异均无显著性(全部P ＞ 0.05);扫描电镜显示RNAi组细胞胞体比对照组变圆、细胞突起明显变短或消失,丝状微绒毛减少,变为扁平盘状突起;透射电镜显示RNAi组细胞表面丝状微绒毛比对照组有较明显减少;HE染色显示对照组细胞散在生长,呈细长梭形,RNAi组细胞生长较集中,呈圆形或类圆形;RNAi组细胞质中丝网状的骨架蛋白结构及点状肌动蛋白小体比对照组减少.结论:沉默Tiam1能在一定程度上使已发生EMT的大肠癌细胞出现上皮表型及降低其迁移运动能力,对EMT有一定程度的逆转作用,推测Tiam1通过诱导EMT来促进大肠癌侵袭、转移,至于其确切机制尚待进一步研究.
关键词： 结直肠肿瘤 T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1 RNA干扰 上皮-间质转化 -
人胰腺癌BxPC-3细胞上皮-间质转化过程中的微小RNA差异表达谱
目的 分析人胰腺癌BxPC-3细胞上皮-间质转化(EMT)过程中微小RNA(miR)表达谱的差异.方法 培养BxPC-3细胞,设立转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导96 h组(TGF-β1处理组)与未经诱导组(对照组),倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Transwell-Matrigel体外侵袭试验检测细胞的侵袭迁移能力,实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测细胞EMT相关标记物的变化.采用miR微阵列芯片技术检测BxPC-3细胞EMT前后miR表达的变化.结果 在TGF-β1的刺激下,BxPC-3细胞拉长,细胞间连接变得疏松.Transwell试验显示,TGF-β1处理组BxPC-3细胞中侵袭细胞较对照组增多(P<0.05).上皮标记物上皮钙黏素的蛋白及mRNA表达水平均下降(P均<0.05),而其间质标记物波形蛋白、神经钙黏素蛋白及mRNA表达水平均升高(P均<0.05).提取BxPC-3细胞总RNA,2组细胞样本的A260/A280比值分别为2.03、2.06,变性琼脂糖凝胶电泳结果显示RNA无降解,提示BxPC-3细胞RNA纯度及完整性符合试验要求.RNA微阵列芯片技术筛选结果显示,BxPC-3细胞有26个miR的表达水平在诱导前后比较差异有统计学意义(P均<0.05),其中15个miR表达上调和11个miR表达下调.结论 人胰腺癌细胞EMT过程中miR表达谱发生了变化,其中26个miR的表达水平在诱导EMT前后存在差异.
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微小RNA-205通过靶向调控ZEB1抑制前列腺癌细胞迁移能力的研究
目的 观察微小RNA-205(miR-205)对前列腺癌细胞PC3迁移能力以及靶基因E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响.方法 采用实时定量PCR检测各前列腺癌细胞株(PC3、LNCaP、DU145)和良性前列腺上皮细胞(PrEC)中 miR-205的mRNA相对表达量,通过miR-205模拟物(miR-205 mimics)、miR-205抑制物(miR-205 inhibitor)和相应的空载体分别转染前列腺癌细胞株PC3后,将PC3细胞分为过表达miR-205组、mimics对照组、抑制miR-205组和inhibitor对照组4组,利用细胞划痕试验和Transwell细胞侵袭试验检测各组细胞迁移和侵袭能力.采用蛋白免疫印迹法检测过表达miR-205组、mimics对照组细胞ZEB1的蛋白表达水平,并通过荧光素酶报告试验验证miR-205与ZEB1基因的直接调控关系.利用蛋白免疫印迹法检测过表达miR-205组、mimics对照组细胞的上皮钙黏素和波形蛋白表达水平.结果 前列腺癌细胞DU145、LNCaP和PC3的miR-205 mRNA相对表达量均低于良性前列腺上皮细胞PrEC(P均<0.01);PC3的miR-205 mRNA相对表达量低,选为进一步试验的细胞株.24 h后,划痕试验显示过表达miR-205组的迁移细胞数少于mimics对照组,抑制miR-205组的迁移细胞数多于inhibitor对照组(P均<0.01);Transwell细胞侵袭试验显示,过表达miR-205组侵袭细胞数少于mimics对照组,抑制miR-205组侵袭细胞数多于inhibitor对照组(P均<0.01).过表达miR-205组PC3细胞的ZEB1蛋白表达水平低于mimics对照组(P<0.01).过表达miR-205组中,携带野生型3'-非翻译区序列载体PC3细胞的荧光素酶活性值低于携带突变型3'-非翻译区序列载体PC3细胞(P<0.01).与mimics对照组相比,过表达miR-205组的上皮钙黏素蛋白表达水平降低、波形蛋白表达水平升高(P均<0.05).结论 miR-205可能通过靶向降低ZEB1基因的蛋白表达,抑制前列腺癌细胞的迁移能力.
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健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响
目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响.方法:以TGF-31诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0％、5％、10％、15％、20％、30％含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力.结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10％含药血清,24 h 15％、20％、30％含药血清,48 h 15％含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P＜0.01),其中以48 h 15％含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果明显.健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10％、15％、20％、30％浓度的含药血清都具有显著性差异(P＜0.01);而与空白血清组相比,15％、20％、30％浓度的含药血清均具有显著性差异(P＜0.01),其中以15％浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用明显.结论:15％健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果好.
