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柚皮素对四氯化碳致小鼠化学性肝损伤中氧化应激介质生成影响的实验研究
目的 考察柚皮素(黄酮类化合物)对小鼠化学性肝损伤中氧化应激介质生成的影响.方法 用灌胃法,小鼠连续7天预给予柚皮素(25,50,100 mg·kg-1),第7日经腹腔单次注射四氯化碳(CCl4,1 mL·kg-1)诱发化学性肝损伤.24 h后用紫外分光光度法测定血清转氨酶(ALT、AST)水平,氧化应激介质丙二醛(MDA)含量,及肝微粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性;用单细胞凝胶电泳法检测肝细胞中DNA氧化损伤水平.结果 与对照组相比,CCl4化学损伤组小鼠的血清ALT水平显著升高,氧化应激介质生成增多,肝细胞DNA氧化损伤断裂显著增多.柚皮素预处理组,CC4l急性肝损伤中血清转氨酶水平虽然未见明显变化,但柚皮素在其高剂量组(100 mg·kg-1)可使MDA水平有下降趋势,SOD活性有升高趋势且可显著性地降低CCl4损伤所致彗星拖尾细胞的百分率.结论 预先给予柚皮素(25,50,100mg·kg-1)可使CCl4所致急性肝损伤中氧化应激反应减轻,并可显著降低肝细胞核DNA单链断裂氧化损伤水平.
关键词： 柚皮素 四氯化碳化学性肝损伤 DNA氧化性损伤 -
柚皮素固体脂质纳米粒制剂的制备、表征及药动学评价
目的:制备柚皮素固体脂质纳米粒冻干粉,考察其理化性质及经大鼠肺部给药后的体内药动学行为.方法:采用乳化蒸发-低温固化法,以包封率为考察指标,正交试验优化其处方并考察其粒径、形态、电位及体外释放.以外观,色泽,再分散性为考察指标筛选佳冻干保护剂,采用傅里叶红外光谱(FT-IR)分析药物在纳米粒中的理化性质.通过肺部给药考察柚皮素固体脂质纳米粒和柚皮素溶液在大鼠体内的药动学行为.结果:柚皮素固体脂质纳米粒外观呈球形,分布比较均匀,平均粒径为(134.81 ±14) nm,多分散系数(PDI)为0.238,Zeta电位为(-27.6±0.87)mV,包封率为(81.2±1.6)％,载药量为(8.11±0.5)％(n=3),5％甘露醇为冻干保护剂好,药物和载体间属于物理吸附,体外溶出实验表明柚皮素固体脂质纳米粒与原料药相比具有明显的缓释作用.柚皮素原料药和纳米粒的Cmax分别为(173.00±25.05)和(280.00±36.34) ng· mL-,t1/2分别为(5.23±0.22)和(19.03±8.00)h,AUC0-t分别为(939.32±190.18)和(3 440.23±533.88) ng·mL-1·h,MRT分别为(7.29±0.44)和(24.29±9.27)h.结论:本文成功研制了柚皮素固体脂质纳米粒新剂型,体外释药结果表明该制剂具有明显的缓释作用,改善了其溶解度和稳定性差的缺陷,提高了药物的体内生物利用度,为肺部给药系统提供了适宜的新剂型,因此,柚皮素固体脂质纳米粒是一种具有研究潜质的适合肺部给药系统的新剂型.
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柚皮素固体脂质纳米粒的制备及体内外初步评价
目的:制备柚皮素固体脂质纳米粒(NRG-SLN),并对其体外和体内的性质进行初步评价.方法:采用溶剂注入法制备NRG-SLN,并对其包封率、载药量、粒径、Zeta电位和体外释放率等性质进行考察,同时采用人肺癌细胞系Calu-3细胞和SD大鼠分别进行细胞毒性、细胞摄取和药动学研究.结果:NRG-SLN为椭圆形大小均匀的粒子,平均粒径、Zeta电位、包封率和载药量分别为(103.9±2.2) nm(PDI=0.226±0.02),(-31.3±3.1)mV,(82.13±3.44)％和(8.31±0.21)％.体外释放表明NRG溶液在5h内基本释放完全,而NRG-SLN混悬液释放了约35％,24 h累积释放达到80％,有明显的缓释效果.DSC分析表明药物以无定型形式存在.细胞实验说明固体脂质纳米粒载体没有细胞毒性,粒径小、摄取效果较好.体内试验表明NRG-SLN口服生物利用度(AUC0～∞)比NRG原料药高了约2.93倍(P＜0.05).结论:本实验成功制备了无细胞毒性的NRG-SLN,提高了NRG的水溶性和体内生物利用度.
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柚皮素对缺血再灌注损伤细胞间黏附分子-1和核因子-κB 的影响
目的：探讨柚皮素（NAR）对心肌缺血再灌注（MI/R）损伤大鼠细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和核因子-κB （NF-κB）的影响。方法采用结扎左冠脉前降支30 min 再灌注2 h 的方法复制 MI/R 损伤大鼠模型，随机分为5组（n=10）：假手术组，模型组，NAR 高、中、低剂量组（100、50、25 mg·kg-1），于术前1周开始腹腔注射给药，每日1次。再灌注后取心脏，染色法测定心肌梗死面积；免疫组化法测定心肌组织 NF-κB 和 ICAM-1表达情况；取心肌匀浆，髓过氧化物酶（MPO）法测定中性粒细胞浸润情况。结果 NAR 高剂量可缩小心肌梗死面积至32.91%，与模型组（39.78%）比较差异有统计学意义（P <0.05）；NAR 各剂量组心肌 MPO 活力分别降低至330.54、322.74、280.64 U·g-1，与模型组（423.9 U·g-1）比较差异均有统计学意义（P<0.05或 P<0.01）；与模型组（65.22%）比较，NAR 各剂量组心肌组织 ICAM-1阳性表达分别降低到50.12%、44.75%、42.05%（P<0.01）；与模型组（38.41%）比较，NAR 各剂量可使心肌组织 NF-κB 的阳性表达分别降低至32.05%、30.22%、29.16%（P <0.05或 P <0.01）。结论 NAR 预处理通过抑制中性粒细胞浸润，下调 NF-κB 和 ICAM-1的表达，抑制炎症反应，进而实现对 MI/R 所致心肌损伤的保护作用。
关键词： 柚皮素 心肌缺血再灌注损伤 细胞间黏附分子 -1 核因子 -κB -
高效液相色谱-质谱联用法测定大鼠血浆中柚皮素及其葡萄糖醛酸结合物的血药浓度
目的 建立柚皮素血浆浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)分析方法,研究柚皮素及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠体内的药动学.方法 色谱柱为Shimpack ODS C18柱(2.3 mm×75 mm,3μm),流动相为体积比0.1％醋酸水溶液和甲醇,梯度洗脱,流速0.2 mL·min-,MRM负离子模式扫描,定量离子对为m/z 271.1→151.0(柚皮素),301.2→164.1(橙皮素,内标).结果 柚皮素血浆加标样品在10 ng·mL-1 ～4 μg·mL-1内线性关系良好(r=0.999 7),高、中、低浓度回收率均在85％ ～ 115％之间.采用该方法系统研究了灌胃给药时不同给药剂量下大鼠的柚皮素及其葡萄糖醛酸结合物的血药浓度情况.结论 所建方法快速,灵敏,重现性好.柚皮素在血中达峰较快,且大部分与血液中的葡萄糖醛酸结合,少部分以游离形式存在.
关键词： 柚皮素 高效液相色谱-质谱联用法 血药浓度 葡萄糖醛酸结合物 -
基于超临界萃取与模拟移动床技术的铁皮石斛化学成分研究
目的 对铁皮石斛化学成分提取并筛选主要活性指标,建立可靠的分离测定方法.方法 采用超临界二氧化碳萃取(SFE)和模拟移动床(SMB)对铁皮石斛成分进行提取与分离.结果 优SFE萃取条件下,可得铁皮石斛粗萃物和柚皮素分别为46 g·kg-1和30 mg·kg-1;粗萃物中柚皮素在优超临界流体模拟移动床(SF-SMB)条件下,得率由1 199 mg· kg-1提高至2 400 mg·kg-,粗萃物中特征峰(peak X)含量由4.99％增加至20.44％;分离纯化SF-SMB萃出液中富集的特征峰(peak X),采用GC-MS/IR鉴定出该化合物为4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯酚.结论 本实验可为铁皮石斛质量控制研究提供良好基础,可为铁皮石斛天然成分的工业化提取提供新思路.
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应用UssingChamber技术评价芹菜素与柚皮素经大鼠肠黏膜透过特征
目的 研究芹菜素与柚皮素经大鼠空肠、回肠与结肠黏膜的区段透过特征.方法 采用体外Ussing Chamber方法,分别评价50 μmol·L-1芹莱素及柚皮素经空肠、回肠和结肠黏膜经对吸收方向(M-S)与分泌方向(S-M)的累计透过率和表观渗透系数(Papp),芹莱素与柚皮素在接收池的样品浓度用HPLC测定.结果 芹菜素与柚皮素在结肠的透过性显著高于空肠(P<0.01)和回肠(P<0.05).比较M-S方向和S-M方向的透过性发现,芹莱素空肠与回肠经两个方向的透过性无显著差异,但经结肠透过时,吸收方向的透过性显著高于分泌方向的透过性(P <0.01);柚皮素在空肠、回肠及结肠黏膜经两个方向的透过性均无显著差异.结论 芹莱素与柚皮素在大鼠肠黏膜中的透过性存在区段性差异,结肠部位吸收好.芹莱素与柚皮素除被动扩散外,可能受到肠黏膜转运体的调控.
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白杨黄素和柚皮素对沙奎那韦在大鼠体内药动学的影响
目的 探讨大鼠中白杨黄素和柚皮素与P-糖蛋白底物沙奎那韦同服时,对后者口服生物利用度及药动学的影响.方法 将SD大鼠分为3组分别灌胃沙奎那韦(30 mg·kg-1)、沙奎那韦(30 mg·kg-1)+柚皮素(40 mg·kg-1)、沙奎那韦(30mg·kg-1)+白杨黄素(40mg· kg-1),采用LC-MS/MS测定给药后的血药浓度,计算药动学参数.结果 沙奎那韦在沙奎那韦对照组,沙奎那韦+柚皮素组和沙奎那韦+白杨黄素组大鼠体内主要药动学参数分别为:AUC0-t,882.91,861.32,934.84ng·h·mL-1;AUC0.∞,903.97,865.90,947.92 ng·h·mL-1;ρmax,177.72,89.8,130.72 ng· mL-1;tmax,1,2,0.5 h;t1/2,11.73,12.61,13.33 h;MRT0-∞,27.09,31.63,26.60 h;CL/F,21.65,21.45,20.62mL· kg-1·h-1.结论 沙奎那韦的药时曲线存在双峰现象;柚皮素和白杨黄素对沙奎那韦的口服生物利用度和药动学参数没有显著性影响.
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岩青兰化学成分的研究(Ⅱ)
目的对岩青兰地上全草的化学成分进行研究.方法采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离,通过理化和波谱方法鉴定其结构.结果得到9个化合物,分别为β-谷甾醇(Ⅰ),白桦脂醇(Ⅱ),白桦脂酸(Ⅲ),间羟基苯甲酸(Ⅳ),3-甲氧基-4-羟基-苯甲酸(Ⅴ),3,5-二甲氧基-4-羟基-苯甲酸(Ⅵ),柚皮素(Ⅶ),胡萝卜苷(Ⅷ),柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅸ).结论以上化合物均为首次从本植物中分离得到.
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柚皮苷及其代谢物柚皮素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究
目的 比较研究柚皮苷及其代谢物柚皮素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟的影响.方法 无菌条件下剥离新生SD大鼠颅骨,采用Ⅱ型胶原酶多次消化,分离得到原代乳鼠颅骨成骨细胞,待原代细胞铺满80％皿底时行传代培养.噻唑蓝法检测细胞的增殖情况,碱性磷酸酶活性的高低作为检测药物影响乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟的指标,筛选得到佳的药物浓度.在乳鼠颅骨成骨细胞的培养体系中添加佳浓度的柚皮苷和柚皮素,酶联免疫分析法检测柚皮苷组、柚皮素组和对照组之间骨钙素、骨形态发生蛋白-2、骨桥蛋白和Ⅰ型胶原的分泌量,比较钙化结节数量的差异,并用实时定量荧光逆转录聚合酶链反应法检测成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子-1、Runx-2、Osterix、OPG及RANKL的基因表达情况.结果 柚皮苷和柚皮素均能明显提高乳鼠颅骨成骨细胞的碱性磷酸酶活性,刺激骨钙素、骨形态发生蛋白-2、骨桥蛋白和Ⅰ型胶原的分泌,增加钙化结节数量,并促进成骨相关基因的mRNA表达,但柚皮素的活性明显高于柚皮苷.结论 柚皮素促进乳鼠颅骨成骨细胞分分化成熟的活性显著高于柚皮苷,说明柚皮苷经代谢后,其代谢产物柚皮素的促骨形成活性得到增强,在抗骨质疏松新药的开发及剂型设计方面均具有一定的指导意义.
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不同剂量柚皮素对CNE2细胞生长的双向调节作用及其机制研究
目的 探讨不同剂量柚皮素(naringenin)对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制.方法 以不同剂量(0、5、10、20、40、60、80、100、200、400、800 μg·mL-1)柚皮素处理CNE2细胞,作用不同时间(24、48、72 h)后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长率的变化;以较高剂量(0、200、400μg·mL-1)柚皮素处理CNE2细胞48 h,进行Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡形态变化及细胞周期流式检测;以不同剂量(0,40,200 μg·mL-1)柚皮素处理CNE2细胞,作用不同时间(24、48 h)后,通过流式细胞仪对其活性氧含量(ROS)进行测定,并对其增殖凋亡调控相关基因P53及C-fos进行mRNA表达水平的检测.结果 不同剂量柚皮素对CNE2细胞的生长具有双向调节作用,较低剂量能使CNE2细胞内活性氧含量低水平升高,从而激活细胞增殖信号途径,通过诱导C-fos(P ＜0.01)及抑制P53(P ＜0.01)基因的表达体现为促进癌细胞增殖的活性;较高剂量能引发CNE2细胞内活性氧大量产生,从而激活细胞凋亡信号途径,通过诱导P53(P ＜0.01)及抑制C-fos (P＜0.01)基因的表达,对细胞周期产生阻滞(P＜0.01)并诱导细胞凋亡,有效抑制癌细胞的增殖.结论 不同剂量柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用,较低剂量体现为促癌活性,较高剂量则体现为强烈的抑癌活性.
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土茯苓化学成分的研究
土茯苓为百合科光叶菝葜的干燥根茎.具有清热解毒、除湿、利关节之功效,传统用治梅毒、淋浊,现代多用治牛皮癣、泌尿系感染等.为了寻找其生理活性成分,我们对其乙酸乙酯部分进行了化学成分研究,从中分出6个化合物,其中3个分别为β-谷甾醇、柚皮素、白藜芦醇,后两个化合物为首次从该属植物中提出,且都具有较强的生理活性;另外3个为二氢黄酮醇甙,其结构正在研究之中.
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柚皮素对人肺鳞癌NCI-H2170细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨柚皮素对人肺鳞癌细胞NCI-H2170的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用MTT法检测柚皮素对NCI-H2170细胞增殖的影响,Hoechst33258/PI染色检测NCI-H2170细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变.Western blot检测柚皮素处理NCI-H2170细胞24 h后PARP、Bcl-2、Bid、procaspase-3及procaspase-8蛋白的表达.结果 柚皮素处理人肺鳞癌NCI-H2170细胞24 h后,浓度依赖性地抑制NCI-H2170细胞增殖;其中12.5 μmol/L处理组与对照组比较,差异无统计学(P＞ 0.05);25、50、100 μmol/L处理组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析结果显示:不同浓度的柚皮素处理NCI-H2170细胞24 h后,与对照组比较,12.5 μmol/L处理组差异无统计学意义(P＞0.05);25、50、100 μmol/L处理组G1期细胞显著增多,S期及G2期细胞显著减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).25、50、100μmol/L处理组与对照组相比,柚皮素上调Bid表达,促进PARP降解,Bcl-2、procaspase-3和procaspase-8降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 柚皮素抑制人肺鳞癌NCI-H2170细胞增殖,并能诱导NCI-H2170细胞产生G1期阻滞,诱导细胞凋亡.
关键词： 柚皮素 人肺鳞癌NCI-H2170细胞 细胞凋亡 增殖 细胞周期 -
柚皮素诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究
目的：研究柚皮素对肺腺癌A549细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察柚皮素对A549细胞增殖的抑制作用；Hoechst 33342染色后于倒置荧光显微镜下观察柚皮素对A549细胞形态的影响；通过Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测柚皮素对A549细胞诱导凋亡的作用。结果柚皮素可抑制A549细胞的增殖，且呈现时效、量效依赖关系；Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜下发现不同浓度柚皮素作用细胞48h后出现细胞核破裂、浓染，呈现明显的凋亡形态学特征；200μM、400μM 柚皮素作用细胞48h 后 A549细胞凋亡率分别为（12.15±2.14）%和（25.26±3.37）%。结论柚皮素可能通过诱导细胞凋亡从而发挥其抑制A549细胞增殖的作用。
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柚皮素抗乳腺癌作用机制的研究进展
柚皮素(naringenin)是柚皮苷的苷元,一种单体,属于二氢黄酮类化合物,主要存在于芸香科植物葡萄柚、西红柿、葡萄以及柑橘类水果中,是合成雌激素的天然替代物之一,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤及抗病毒等多重生物学活性和药理作用.目前越来越多的学者致力于柚皮素的研究,本文就近年来柚皮素抗乳腺癌作用的分子机制研究做一综述.
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鬼针草化学成分研究
目的 研究鬼针草Bidens bipinnata的化学成分.方法 应用硅胶、Sephadex LH-20、制备液相等多种色谱技术进行分离纯化,并通过多种波谱分析方法鉴定化合物.结果 从鬼针草95％乙醇提取物中分离得到18个化合物,分别鉴定为槲皮素-5-O-β-D吡喃葡萄糖苷(1)、奥卡宁-4’-O-β-D-(2”,4”,6”-三乙酰基)-吡喃葡萄糖苷(2)、奥卡宁-4’-O-β-D-(3”,4”-二乙酰基-6”-反式-对-香豆酰基)-吡喃葡萄糖苷(3)、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、金丝桃苷(9)、芦丁(10)、柚皮素(11)、芹菜素(12)、槲皮素(13)、5,7-二羟基色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(14)、咖啡酸(15)、没食子酸(16)、β-谷甾醇(17)、胡萝卜苷(18).结论 化合物1和11为首次从鬼针草属植物中分离得到,化合物3～7、14、15、18为首次从鬼针草中分离得到.
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杜仲雄花中黄酮类化学成分及其抗氧化活性研究
目的 研究杜仲Eucommia ulmoides雄花的黄酮类化学成分,并进行抗氧化活性筛选.方法 运用硅胶、SephadexLH-20和ODS等各种色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和谱学数据鉴定化合物结构,并运用DPPH自由基和H2O2诱导PC12细胞凋亡实验测定其抗氧化活性.结果 从杜仲雄花95％乙醇提取物中共分离得到10个黄酮类化合物,分别鉴定为柚皮素(1)、槲皮素(2)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(3)、异槲皮苷(4)、江户樱花苷(5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基(1→2)-p-D-葡萄糖苷(6)、山奈酚-3-O-β-D-(6”-O-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷(7)、芦丁(8)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(9)、紫云英苷(10).结论 化合物1、5、6、9为首次从杜仲雄花中分离得到;活性测试结果表明化合物2～4、6、8具有较强的抗氧化活性,能明显抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡.
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乌拉尔甘草中黄酮类化学成分的研究
目的 研究产自内蒙古杭锦旗的乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis根中的黄酮类成分.方法 采用硅胶、聚酰胺、MCI、ODS、Sephadex LH-20、RP-HPLC等色谱方法分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果 从乌拉尔甘草根95％、70％乙醇提取物中分离得到19个化合物,分别鉴定为3-甲基山柰酚(1)、染料木素(2)、柚皮素(3)、甘草异黄酮甲(4)、甘草利酮(5)、异芒柄花素(6)、半甘草异黄酮B(7)、3’-异戊烯基染料木素(8)、黄羽扇豆魏特酮(9)、甘草黄酮醇(10)、黄宝石羽扇豆素(11)、甘草异黄酮乙(12)、异甘草黄酮醇(13)、甘草宁H (14)、粗毛甘草素A(15)、甘草西定(16)、粗毛甘草素D (17)、香豌豆酚(18)、7-甲基羽扇豆异黄酮(19).结论 化合物1、6、8、18、19为首次从甘草属植物中分离得到,化合物2～4、12、14、15为首次从该种植物中分离得到.
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甘草中2个新三萜皂苷
目的对甘草Glycyrrhiza uralensis根及根茎的化学成分进行研究.方法采用硅胶柱、ODS柱色谱、制备液相色谱等分离技术进行分离纯化,利用UV、MS、1D-NMR、2D-NMR等波谱数据鉴定化合物结构.结果从甘草正丁醇部分分离得到14个化合物,分别鉴定为macedonoside E(1)、22β-乙酰基乌拉尔甘草皂苷C(2)、甘草酸(3)、乌拉尔甘草皂苷F(4)、甘草皂苷G2(5)、22β-乙酰基甘草醛(6)、甘草酸甲酯(7)、甘草素(8)、柚皮素(9)、异甘草素(10)、芒柄花苷(11)、甘草苷(12)、异佛来心苷(13)、芹糖甘草苷(14).结论化合物1和2为新化合物.
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宽裂龙蒿地上部分化学成分研究
目的 研究宽裂龙蒿Artemisia dracunculus var.turkestanica地上部分的化学成分.方法 采用硅胶、RP18、Sephadex LH-20等柱色谱进行分离与纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从宽裂龙蒿地上部位95％乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到19种化合物,分别鉴定为1-棕榈酸单甘油酯(1)、α-亚麻酸甲酯(2)、1-油酸单甘油酯(3)、乙酰熊果酸(4)、3β,22β,24-三羟基-齐墩果-12-烯(5)、油酸(6)、棕榈酸(7)、1-亚油酸单甘油酯(8)、香草酸(9)、橙皮素(10)、柚皮素(11)、槲皮素(12)、芦丁(13)、滨蒿内酯(14)、东莨菪亭(15)、7-羟基香豆素(16)、瑞香素(17)、咖啡酸(18)、绿原酸(19).结论 所有化合物均首次从该植物中分离得到,其中化合物1～5和8为首次从该属植物中分离得到.
