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柚皮素对高脂饮食肥胖大鼠下丘脑神经肽Y和刺鼠色蛋白相关蛋白mRNA表达的影响
目的 观察柚皮素对高脂饮食肥胖大鼠下丘脑神经肽Y (NPY)和刺鼠色蛋白相关蛋白(AGRP)mRNA表达的影响.方法 SD大鼠44只随机分为正常对照组、高脂饮食组、高脂饮食+柚皮素低、中、高剂量组[柚皮素剂量分别为12.5、25.0及50.0 mg/(kg·d)]每天定时灌胃,记录进食量.8周末采血测血清瘦素,并取下丘脑,提取下丘脑总RNA,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定NPY和AGRP mRNA的含量.结果 给予高脂饮食后大鼠血清瘦素增高,下丘脑NPY和AGRP mRNA的表达增高,高脂饮食大鼠给予柚皮素后,血清瘦素水平降低,下丘脑NPY和AGRP mRNA的表达降低.结论 柚皮素可明显降低血清瘦素水平,降低下丘脑NPY和AGRP mRNA的表达.
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柚皮素抑制高脂饮食肥胖大鼠体重的实验研究
目的 观察柚皮素对高脂饮食肥胖大鼠的影响并初步探讨其作用机制.方法 SD大鼠44只随机分为正常对照组、高脂饮食组、高脂饮食+柚皮素低、中、高剂量组[柚皮素剂量分别为12.5、25、50mg/(kg·d)].观察体重、热量摄入、血脂、血清游离脂肪酸(FFA)、血糖(BG)、胰岛素(In)、血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、丙二醛(MDA)含量和总抗氧化能力(T-AOC)的变化.结果 给予高脂饮食后大鼠体重、热量摄入明显增加,BG和In浓度升高,FFA和低密度脂蛋白(LDL)增加,高密度脂蛋白(HDL)减少,血清GPT和MDA升高,但T-AOC降低.高脂饮食大鼠给予柚皮素后,体重减轻,热量摄入减少,BG、In、FFA降低,GPT和MDA减少,T-AOC增高.结论 柚皮素可明显抑制高脂饮食大鼠的体重增加,并对肝细胞有一定的保护作用.其作用可能是通过改善体内脂肪代谢和胰岛素抵抗、提高机体的抗氧化能力实现的.
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柚皮素对炎症性气道黏液高分泌的作用
目的 探讨柚皮素对炎性刺激时气道上皮细胞黏液高分泌的作用和相关的分子机制.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和活性氧(Ros)清除剂DMTU进行干预,用活性氧试剂盒测定各组细胞中ROS的含量,观察黏蛋白(MUC)5AC、表皮细胞生长因子受体(EGFR)和磷酸化EGFR(P-EGFR)的表达.培养细胞经甲基偶氮唑盐法测定活性后分为对照组、FINE处理组、DMTU组、柚皮素组和柚皮素+DMTU组.逆转录PCR方法检测各组MUC5AC mRNA、EGFRmRNA的变化;western blot法检测EGFR和P-EGFR蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察察MUC5AC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察柚皮素作用前后黏蛋白的分布.结果 不同浓度的HNE处理A549后,细胞内ROS的含量逐渐增加,而柚皮素预处理组与50nmol/L的HNE刺激组相比细胞内ROS的含量明显减少(P<0.01);HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.92±0.08)和(152±6)μg/mg,EGFRmRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.91±0.05)和(0.86±0.03)μg/mg,均较对照组[(0.70±0.02),(112±4)μg/mg和(0.73±0.10),(0.39±0.03)μg/mg]明显升高(P<0.05),P-EGFR和总EGFR.蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01);给予柚皮素预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR和P-EGFK表达下调;而柚皮素+DMTU组MUC5ACmRNA和MUC5AC的蛋白较单独DMTU处理组更为明显,其吸光度和面积积分值分别为(0.40±0.03)和(113±2)μg/mg(P<0.01),差异均有统计学意义.结论 HNE可刺激气道上皮细胞产生大量ROS,柚皮素可抑制ROS的产生、下调ROS诱导的EGFR表达水平、并部分阻断EGFR磷酸化,从而抑制炎性刺激时气道黏液高分泌的形成.
关键词： 黏蛋白 人中性粒细胞弹性蛋白酶 表皮细胞生长因子受体 柚皮素 活性氧清除剂 -
柚皮素对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力的影响
目的:探讨柚皮素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、柚皮素组.侧脑室注射链脲佐菌素(ICV-STZ)(3 mg/kg,共2次)制备AD模型.柚皮素组行柚皮素灌胃,其余两组生理盐水灌胃,1次/d,连续3w.以Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力；测试完成后取各组大鼠脑组织,用化学比色法测定其超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；免疫组织化学染色法观察其Aβ42和Aβ40的表达情况；Western blotting法定量检测其Tau蛋白的表达及磷酸化程度.结果:水迷宫结果显示,与假手术组比较,模型组平均逃避潜伏期显著延长(P＜0.05),在原平台活动时间显著缩短(P＜0.05)；与模型组比较,柚皮素组平均逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05),在原平台活动时间显著延长(P＜0.05)；化学比色法结果显示,模型组较假手术组肠组织SOD活性显著降低(P＜0.05)；而柚皮素组较模型组肠组织SOD活性显著升高(P＜0.05)；与假手术组比较,模型组肠组织MDA含量显著升高(P＜0.05)；与模型组比较,柚皮素组MDA含量显著降低(P＜0.05)；免疫组化结果显示,模型组Aβ40、Aβ42阳性表达较对照组显著增多(P＜0.05),柚皮素组较模型组阳性表达显著降低(P ＜0.05)；Tau蛋白表达在各组间无差异,但模型组Tau蛋白磷酸化程度较对照组显著增强(P＜0.05),柚皮素组较模型组显著减弱(P＜0.05).结论:柚皮素可通过氧化应激途径较好地改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力.
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菝葜降血糖活性成分及对相关酶的抑制作用
目的:研究中药菝葜中的降血糖活性成分及对α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶的抑制作用.方法:采用有机溶剂萃取、硅胶柱层析等分离纯化技术进行降咀糖活性成分的分离纯化,并通过理化性质和波谱数据鉴定活性物质的结构,继而通过动物实验模型和酶-抑制剂模型研究该活性物质的降血糖作用和酶学性质.结果:从菝葜中分离并鉴定出一种具有显著降血糖活性的化合物.结构为3(S)-5,7,4'-三羟基二氢黄酮(柚皮素),具有α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶抑制活性.结论:柚皮素为首次从菝葜中分离得到的降血糖有效成分,其显著的酶抑制活性为进一步阐明菝葜的降血糖机制提供了参考.
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降香总黄酮含量测定方法的研究
目的:建立一个适合降香总黄酮的含量测定方法.方法:比较了四种常用总黄酮定量方法,并提出新的含量测定方法.结果:常用的测定法Ⅰ、Ⅲ加样回收率太低,方法Ⅱ加样回收率太高,方法Ⅳ的干扰太大,甲醇钠显色法的加样回收率、稳定性均较好.结论:用柚皮素为对照品,甲醇钠显色,紫外分光光度法测量的方法适合测定降香总黄酮含量.
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白土茯苓的化学成分研究
从白土茯苓中分离得到6个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(Ⅰ)、胡萝卜苷(Ⅱ)、3,3′,5,5′-tetrahydroxy-4′-methoxystilbene(Ⅲ)、柚皮素(Ⅳ)、α-L-正丁基山梨糖苷(Ⅴ)和甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷(大泽米苷,Ⅵ).其中化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ为首次从该属植物中分离得到.本文还首次对化合物Ⅵ的NMR谱数据进行了归属.
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火炭母化学成分研究
从火炭母中分得3种黄酮类化合物,鉴定为槲皮苷、异槲皮苷、柚皮素,它们均系首次从该植物中分离得到.
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柚皮素胃漂浮微丸研究
目的:结合固体分散技术制备柚皮素的海藻酸钙胃漂浮微丸,考察其漂浮率、包封率及体外释放.方法:以Eudragit RLPO为载体材料制备柚皮素固体分散体,粉碎后分散于添加制泡剂的海藻酸钠溶液中,并缓慢滴人添加醋酸的壳聚糖-氯化钙溶液中反应固化,干燥后得到胃漂浮缓释微丸.考察固体分散体对微丸体外释药的影响.结果:成功制备了柚皮素胃漂浮微丸,其在人工胃液中9 h漂浮率大于70%.包封率70%-80%.9 h释放柚皮素65%-70%.结论:运用固体分散技术提高了柚皮素的海藻酸钙胃漂浮微丸在人工胃液中的释放,为多单元胃漂浮给药系统发展提供了思路.
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柚皮苷及柚皮素的生物活性研究
柚皮苷为芸香科柑橘属植物次生代谢产物.研究表明,柚皮苷及其苷元柚皮素在降血脂、镇静、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌、抗动脉粥样硬化等方面具有较强的生物活性.此外,通过与药物代谢酶底物的竞争抑制作用,其还可提高某些药物的口服生物利用度.
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槲皮素单硫酸酯钠盐和柚皮素单硫酸酯钠盐对小鼠出血时间和凝血时间的影响
目的 了解槲皮素单硫酸酯钠盐(SQMS)和柚皮素单硫酸酯钠盐(SNMS)对小鼠出血时间(BT)和凝血时间(CT)的影响.方法80只昆明小鼠随机分成8组,即生理盐水组(阴性对照),低、中、高剂量SQMS和SNMS组,血栓通组(阳性对照),每组10只.BT及CT分别采用断尾法和玻片法观察.结果 SQMS和SNMS名-剂量组小鼠的BT和CT与生理盐水组比较均明显延长(P＜0.05)；除SNMS高剂量组的CT比血栓通组延长外(P＜0.05),其他各组抗凝血作用与血栓通注射液相当(P＞0.05).结论 SQMS和SNMS具有抗凝血作用.
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柚皮素单硫酸酯钠盐对血栓形成和血小板聚集的影响
目的 观察柚皮素单硫酸酯钠盐(SNMS)对血栓形成和血小板聚集的影响.方法 将30只SD大鼠随机分为5组:SNMS1组、SNMS2组、血栓通组、肝素组和对照组,每组6只,麻醉大鼠,静脉注射药物后,用血栓生成仪观察大鼠颈动脉血栓形成情况；取兔血与药物孵育5min,凝血酶(500 U/L)作用1 min后,用全血血小板聚集仪观察全血血小板聚集情况.结果 SNMS1组的颈动脉堵塞率为(10.2±17.9)%,SNMS2组为(4.1±5.2)%,两者与对照组(79.2±7.8)%比较差异有统计学意义(P＜0.01),而与血栓通组的(7.8±9.0)%和肝素组的(16.2±20.8)%相比,差异则无统计学意义(P＞0.05); 160、320、640μmol/L的SNMS均能抑制凝血酶诱导的全血血小板聚集(P＜0.01),其大聚集率分别为(8.50±3.87)、(11.50±2.38)、(9.50±3.11)Ω.结论 SNMS能够抑制血栓形成和血小板聚集.
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固相提取法测定大鼠血浆中柚皮素浓度
[目的]建立测定柚皮素血浆浓度的高效液相色谱法.[方法]血浆柚皮素提取为Water OasisTM HLB固相提取.内标为槲皮素.分析柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈:pH 2.5磷酸水溶液(33∶67),流速1.0 mL/min,检测波长为288 m,柱温为室温.[结果]柚皮素血浆浓度在0.05-10 μg/mL范围内,浓度与峰面积比有良好的线性关系(r=.9998).平均方法回收率为(105.6±5.8)%,日内RSD≤3.8%,日间RSD≤4.5%.[结论]本方法简单、可靠、准确,可用于测定柚皮素血浆浓度.
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柚皮素对单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化大鼠 KIM-1表达水平的影响
目的：观察柚皮素对单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化肾损伤因子-1（KIM-1）表达水平的影响。方法将24只SD 大鼠随机分为假手术组（Sham 组）、模型组（UUO 组）、柚皮素组（Nar 组），每组8只。UUO 组及 Nar 组行左侧输尿管结扎术， Sham 组只游离但不结扎和剪断输尿管。造模后分别给予生理盐水、柚皮素25 mg/（kg·d）。14 d 后处死大鼠，处死前收集24 h尿液，ELISA 法检测大鼠尿液 KIM-1水平，取梗阻侧肾制作标本，行 HE 及 Masson 染色，光镜下观察肾间质纤维化程度并半定量对肾小管间质损伤指数进行积分；免疫组化法检测肾间质 KIM-1的表达。结果与 Sham 组比较，UUO 组肾小管间质损伤指数（TDI）升高，差异有统计学意义（P ＜0．05），尿液、肾组织中 KIM-1水平均升高，差异也有统计学意义（P ＜0．05）。与 UUO 组比较，Nar 组 TDI 降低，差异有统计学意义（P ＜0．01），尿液、肾组织中 KIM-1水平降低，差异有统计学意义（P ＜0．05）。相关性分析示24 h 尿液及肾组织 KIM-1水平与 TDI 呈正相关（r 分别为0．862、0．866，P 均小于0．01）。结论柚皮素可减轻肾间质纤维化，降低 KIM-1的表达。
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柚皮素β-环糊精包合物的制备及对模型大鼠脉络膜新生血管形成的抑制作用
目的:制备柚皮素β-环糊精(β-CD)包合物,研究其对模型大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成的抑制作用.方法:采用饱和溶液法制备柚皮素β-CD包合物;利用红外光谱、X射线衍射法对包合物进行表征分析,测定柚皮素的含量与水溶解度;通过氪激光复制大鼠CNV模型,15只BN大鼠随机均分为溶媒对照(等容溶媒)组、柚皮素(20 mg/kg)组与柚皮素-CD包合物(97.4 mg/kg)组,腹腔注射给药,每天1次,连续4周.以脉络膜铺片法测量大鼠CNV面积.结果:柚皮素和-CD形成了稳定的包合物,柚皮素-CD包合物中柚皮素质量分数为20.53％,柚皮素在水中的溶解度为单体的11.8倍.与溶媒对照组比较,柚皮素组、柚皮素β-CD包合物组大鼠CNV面积减小,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);与柚皮素组比较,柚皮素β-CD包合物组大鼠CNV面积减小,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:柚皮素和β-CD包合后,水溶性增加;柚皮素β-CD包合物抑制模型大鼠CNV形成的作用优于柚皮素.
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柚皮素同hPPARs的亲和力与内在活性研究
目的:测定柚皮素同过氧化物酶体增殖物激活受体(hPPARs)的亲和力与内在活性,确定柚皮素是否为hPPARs的天然配体.方法:采取放射性标记配基结合试验(RBCA)鉴定柚皮素与hPPARsLBD的配体结合功能,并采用反式激活报道基因试验测定筛出柚皮素的功能活性.结果:RBCA法测得柚皮素与hPPARα的半数抑制率(IC50)为(2.11±0.35)μmol· L-1,抑制常数(Ki)为0.47 μmol·L-1；反式激活报道基因试验测得柚皮素对hPPARα、hPPARβ/δ的半数有效剂量(EC50)和大活性倍数(Emax)分别为11.4 μmol·L-1、18.1,对hPPARγ1的EC50和Emax分别为10.3μmol·L-1、16.4.结论:柚皮素能与hPPARs结合,对hPPARα、hPPARγ1、hPPARβ/δ有一定程度的内在活性,是hPPARs的天然配体.
关键词： 柚皮素 过氧化物酶体增殖物激活受体 配体 -
铁皮石斛制剂的高效液相色谱定性鉴别
目的 研究铁皮石斛制剂的高效液相色谱(HPLC)定性鉴别方法.方法 以柚皮素为对照,色谱柱为Zorbax SB C18柱(250 mm×4.6mn,5μm),流动相为A(甲醇)-B(0.2％ H3PO4水溶液)梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm.结果 比较10批次铁皮石斛制剂的HPLC图,选择柚皮素及相对保留时间比为1.11～1.14处色谱峰为参照,可用于铁皮石斛制剂的HPLC鉴别.结论 该方法操作简单、专属性强,为铁皮石斛制剂的质量控制提供了可靠的定性鉴别方法.
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柚皮素抑制DN系膜细胞炎症因子表达的分子机制研究
目的:研究柚皮素 (naringenin, NAR) 对糖尿病肾病 (diabetic nephropathy, DN) 小鼠病情影响和肾小球系膜细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor alpha, TNF-α) 和白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6) 表达的作用.方法:将10只雄性db/db DN小鼠随机分成柚皮素组和DN组, 每组各5只;5只雄性db/m正常对照小鼠为正常组进行实验.其中柚皮素组小鼠给予50 mg/ (kg×d) 柚皮素连续灌胃2周处理, DN组小鼠给予等量生理盐水连续灌胃2周处理, 正常组小鼠给予正常饮食.检测体质量、血糖、尿白蛋白排泄率 (urinary albumin excretion, UAE) 等一般指标;HE染色和电镜检测小鼠肾脏组织肾小球形态学改变.将小鼠肾小球系膜细胞给予不同葡萄糖浓度 (5 mmol/L和25 mmol/L) 的DMEM培养基培养.其中5 mmol/L葡萄糖浓度培养的细胞为正常组, 25 mmol/L葡萄糖浓度培养的细胞为高糖组, 25 mmol/L葡萄糖浓度培养基中加入柚皮素400μmol/L培养的细胞为柚皮素组.ELISA法检测炎症因子TNF-α和IL-6表达;Western blot检测细胞质和细胞核的NF-κB p65蛋白表达情况.结果:DN小鼠给予柚皮素后, UAE[ (51.48±8.54) μg/24 h]较DN组[ (99.3±5.15) μg/24 h]降低 (F=254.302, P=0.000);肾小球面积[ (2 098±571.84) μm2]较DN组[ (4 240±536.66) μm2]减少 (F=24.468, P=0.000);电镜下系膜增生抑制.同时, 给予柚皮素的肾小球系膜细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达水平 (1.99±0.29, 1.76±0.15) 较高糖组 (2.82±0.14, 2.53±0.32) 下降 (F=111.303, P=0.000;F=65.127, P=0.000);细胞核NF-κB p65 (0.29±0.01) 较高糖组 (0.81±0.02) 降低 (F=1579.764, P=0.000) .结论:柚皮素可缓解DN小鼠尿白蛋白和减少系膜增生, 其机制可能是在系膜细胞中通过抑制NF-κB介导的炎症因子表达.
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柚皮素改善糖尿病肾病模型小鼠病情及机制研究
目的 研究柚皮素对早期糖尿病肾病模型小鼠db/db 24 h尿清蛋白、血糖及其分子机制的影响.方法 15只4周龄雄性小鼠分为3组:5只db/m小鼠作为正常对照组,10只4周龄高血糖且无蛋白尿的db/db小鼠分别分到空白对照组和柚皮素组.其中柚皮素组小鼠进行袖皮素50 mg· kg-1·d-1混悬液灌胃,空白对照和正常对照组小鼠均进行等体积的生理盐水溶液灌胃,直至空白对照组db/db小鼠尿清蛋白显著高于正常对照组,共治疗6周.检测体质量、血糖、24尿清蛋白,硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO),分光光度法检测一氧化氮合酶(NOS).结果 空白对照组较正常对照组体质量、血糖、尿清蛋白、NO和NOS显著增高,而经柚皮素治疗后的柚皮素组较空白对照组病情减轻,血糖和尿清蛋白显著减轻,氧化应激相关因子NO和NOS也明显下降.结论 柚皮素可缓解抑制糖尿病肾病小鼠尿清蛋白,其机制可能通过抑制NO和NOS拮抗氧化应激,从而对糖尿病肾病治疗具有一定作用.
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柚皮素通过ROS/JNK/Bcl2通路抑制宫颈癌Hela细胞增殖和迁移
目的:探讨柚皮素对宫颈癌Hela细胞增殖和迁移影响及分子机制.方法:应用MTT法检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活力的影响,Transwell检测柚皮素对Hela细胞迁移的影响,DCFH染色检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活性氧(ROS)生成的影响,流式细胞仪检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,Western blot法检测柚皮素对细胞内p-JNK和Blc2蛋白表达的影响.结果:12.5、25、50、100、200 μg/ml柚皮素处理细胞24h,细胞活力呈浓度依赖性降低.ROS抑制剂(NAC)能显著抑制柚皮素对细胞活力的抑制作用.50 μg/ml柚皮素处理细胞24h能抑制细胞迁移、促进细胞ROS生成和细胞凋亡,细胞凋亡率为(42.2±1.6)％;促进p-JNK的表达,抑制Bcl2的表达,p-JNK表达水平为(2.34±0.12)倍,Bcl2表达水平为(0.22±0.03)倍.结论:柚皮素可诱导宫颈癌Hela细胞ROS的产生,通过激活ROS/JNK/Bcl2通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖和迁移.
