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中药有效成分影响宫颈癌 Hela 细胞凋亡机制的研究进展
目的：随着宫颈癌发病率的逐年上升，中药在治疗宫颈癌放化疗副反应及术后并发症中的作用逐渐被重视。大量研究发现诱导宫颈癌Hela细胞凋亡可以通过影响Bcl－2基因家族、Caspase蛋白酶家族、Fas／Fasl基因系统、某些相关基因的表达等方式来实现。文章从目前国内外研究比较热门的一些中药入手，综述这些中药的有效成分在宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。例如文中提到中药温莪术有效成分β－榄香烯是通过下调Bcl－2基因表达来促进Hela凋亡；栝楼根的有效活性成分天花粉蛋白促凋亡过程与Caspase家族有关；薏苡仁酯诱导Fas表达上调、Fasl表达下调来促进宫颈癌Hela细胞凋亡。研究中药有效成分影响宫颈癌Hela细胞凋亡机制的目的是为临床应用中药治疗宫颈癌提供科学依据和筛选抗宫颈癌新药提供思路。
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硝酸甘油对肿瘤细胞增殖及蛋白表达的调控
目的探讨硝酸甘油(GTN)作为一氧化氮供体对人宫颈癌Hela细胞增殖及全细胞蛋白质组学表达的调控意义.方法分别用细胞形态学和噻唑蓝比色法(MTT)观察经GTN作用的Hela细胞生长和增殖状况;双向凝胶电泳技术分离Hela细胞蛋白质,观察GTN对细胞蛋白表达谱的影响.结果培养液中GTN浓度为40 μg/ml时Hela细胞分离、皱缩,出现小球状或异型性,细胞外杂质增多,密度明显下降(0.0825,P<0.05); MTT检测细胞增殖抑制率为73.3%;双向电泳分析显示GTN组与对照组Hela细胞蛋白质点匹配率为86%,GTN组较对照组312个(47%)蛋白点表达明显改变, 101个(15.2%)上调,211个(31.8%)下调,且有17个蛋白点只在GTN组细胞中表达,21个蛋白点只在对照组细胞中表达.结论一定浓度的GTN能够抑制肿瘤细胞的生长和调控细胞内蛋白质表达.
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IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响
目的 探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响.方法 将携带有目的 基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌Hela细胞,用MTT法检测细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率.同时以转染空载体pAd track CMV的Hela细胞和野生型Hela细胞作为空载体对照和阴性对照.结果 经MTT法测定,三组之间OD值总体上有差异(P<0.001),IL-24组OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),而空质粒组和阴性对照组的OD值无明显差异(P=0.661);经流式细胞仪测定,三组之间的细胞早期凋亡率总体上有差异(P<0.05), IL-24组细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),而空质粒组和阴性对照组的细胞早期凋亡率无明显差异(P>0.05);与空质粒组和阴性对照组相比,IL-24组G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),而空质粒组和阴性对照组无明显差异(P>0.05).结论 IL-24对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用.
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原花青素对宫颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响
目的 探讨原花青素对官颈癌HeLa细胞Caspase-3和Survivin基因表达的影响.方法 将按照不同终浓度原花青素(0,37.5μmol/L,75.0 μmol/L,150.0μmol/L,300.0μmo/L和600.0 μmol/L)处理宫颈癌HeLa细胞,分别纳入对照组(空白对照),37.5μmol/L PC组,75.0μmol/L PC组,150.0μmol/L PC组,300.0 μmol/L PC组和600.0 μmol/L PC组.继续培养24 h,收集细胞进行实验.采用RT-PCR检测Caspase-3 mRNA和Survivin mRNA表达变化.采取Western blot检测caspase-3和survivin蛋白表达的变化.采用比色法检测caspase-3相对活性.结果 随着原花青索浓度增加,Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平逐渐增加,而Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平逐渐减少;随着处理官颈癌HeLa细胞原花青素浓度升高,caspase-3相对活性逐渐增加,且差异有显著意义(P＜0.05),在原花青素为600.0/μmol/L 时,活性大.结论 原花青素可剂量依赖性地增加Caspase-3 mRNA和caspase-3蛋白表达水平及caspase-3活性,并且可剂量依赖性减少Survivin mRNA和survivin蛋白表达水平.
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芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响
目的 探讨芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响.方法 通过四甲基偶氮唑蓝法及平板克隆形成实验研究芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞生长的影响.结果 不同浓度的芹菜素(5、10、20 mg/L)对HeLa细胞的生长均有显著的抑制作用,随着芹菜素浓度的增加,抑制作用显著增强;平板克隆实验结果表明,芹菜素能使HeLa细胞的平板克隆形成能力减弱,不论从克隆的大小还是克隆的数目上,实验组均较对照组明显下降,芹菜素浓度越大,平板克隆形成能力越弱.结论 芹菜素在体外对宫颈癌HeLa细胞的生长有显著的抑制作用.
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siRNA沉默Bmi－1基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响
目的：探讨siRNA沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因（ Bmi－1）表达对宫颈癌细胞增殖的影响研究。方法通过脂质体转染 siRNA Bmi－1及阴性对照（ control ）到人宫颈癌 Hela 细胞，采用Realtime PCR及western blot法检测细胞中Bmi－1的表达。 MTT法检测细胞活力，Annexin V－PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况，流式细胞术检测细胞周期，western blot法检测细胞中p16，p53，CyclinD1及Rb的表达。结果与Control组比较，siRNA Bmi－1组细胞中Bmi－1蛋白及mRNA表达量皆显著降低（P＜0．01），同时细胞活力下降，细胞凋亡率提高（ P＜0．01），细胞周期阻滞在G1期（ P＜0．01），细胞中p16表达量上调（ P＜0．01）， p53及CyclinD1表达量下调（P＜0．01），Rb磷酸化水平降低（P＜0．01）。结论 Bmi－1具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖的作用，可能与调控细胞周期相关蛋白表达有关。
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热疗对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
目的:观察不同加温温度对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响.方法:人宫颈癌Hela细胞株常规方法培养,采用水浴加热法(温度为41℃、42.5℃、43.5℃、)对细胞进行加温处理,处理后继续培养24h.用流式细胞仪检测细胞凋亡,单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)法检测DNA受损状态.结果:随着温度的增加细胞凋亡率增加,42.5℃、43.5℃加温1h后细胞凋亡率高分别为30.7%和34.6,坏死细胞分别为13.2%和29.6%.单细胞凝胶电泳发现42.5℃加温1h后40.0%的细胞有DNA损伤,43.5℃加温1h后80.0%以上的细胞DNA损伤,而41℃加温处理1h后仅有20.0%细胞DNA受损.结论:单独加温处理1h可诱导细胞凋亡,并导致细胞DNA损伤.
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PJA1诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的初步研究
目的:探讨PJA1在宫颈癌Hela细胞中的促凋亡作用.方法:采用流式细胞仪检测转染PJA1后的宫颈癌细胞12,24,36,48 h的凋亡变化.采用Western免疫印迹(Western Blot)检测凋亡通路.结果:宫颈癌Hela细胞在转染PJA1后12 h凋亡率低,48 h高,并且在凋亡中与caspase通路相关.结论:PJA1可以通过caspase通路促进宫颈癌Hela细胞凋亡.
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玉竹提取物B对Hela细胞凋亡的影响
目的观察中药玉竹提取物B(EB-PAOA)是否能引起人宫颈癌Hela细胞的凋亡.方法将体外培养的人宫颈癌Hela细胞与不同浓度的EB-PAOA共育,通过倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察,确认凋亡细胞;通过流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期的分布.结果经过EB-PAOA处理后,在倒置显微镜和透射电镜下可观察到EB-PAOA引起的典型的凋亡形态学变化;流式细胞仪测定显示经EB-PAOA处理后的Hela细胞凋亡率呈时间-剂量依赖性,G0/G1期细胞减少,S期细胞减少,G2/M期细胞增多.结论EB-PAOA能够诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡,EB-PAOA抑制Hela细胞生长的机制之一是诱导该细胞凋亡.
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雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭转移的影响及机制
目的 探讨雷帕霉素对女性宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭转移的机制.方法 培养女性宫颈癌HeLa细胞,根据雷帕霉素剂量不同分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,比较4组HeLa细胞增殖、侵袭、转移能力.结果 4组HeLa细胞各项指标差异均有统计学意义(P＜0.05),随雷帕霉素剂量增加,HeLa细胞抑制率呈明显升高趋势(P＜0.05),侵袭试验、转移试验透膜细胞数,均呈明显减少趋势(P＜0.05),Akt、mTOR磷酸化水平呈明显降低趋势(P＜0.05),HIF-1α mRNA、VEGF mRNA表达水平呈明显降低趋势(P＜0.05).结论 雷帕霉素能够有效抑制女性宫颈癌HeLa细胞的增殖、侵袭、转移,且抑制作用存在剂量依赖性.
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土荆皮酸对HeLa细胞端粒酶活性和细胞周期的影响
目的:研究土荆皮酸对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响.方法:采用PCR-ELISA方法检测HeLa细胞经PAB作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布.结果:经PAB作用后,HeLa细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;PAB作用24 h后,HeLa细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性.结论:PAB能抑制HeLa细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关.
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灰树花多糖诱导HeLa细胞凋亡的体外实验
目的 观察灰树花多糖(PGF)对HeLa凋亡的影响.方法 采用MTT法研究PGF对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,HE染色观察凋亡细胞形态,免疫组化法检测caspase-3蛋白表达.结果 PGF以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长,HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测到caspase-3蛋白高表达.结论 PGF促进HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与caspase-3蛋白表达增高有关.
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白藜芦醇对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响
近年我国宫颈癌(Cervical Carcinoma)的发病率呈逐渐上升趋势,成为危害妇女生命及降低妇女生活质量的主要疾病之一.从中草药和天然植物中提取和寻找防治肿瘤的有效成分己成为治疗肿瘤的希望和新途径.很多学者认为,治疗肿瘤有效的途径是诱导肿瘤细胞凋亡,因而,诱导细胞凋亡己成为寻找抗肿瘤药物的新切入点及评价疗效的一项新指标.细胞凋亡是基因调节的细胞主动死亡过程,它不引起炎症反应,对机体无不良影响.因而促使肿瘤细胞凋亡成为治疗肿瘤的一个新方向.已发现白藜芦醇对白血病,乳腺癌,肝癌,卵巢癌,结肠癌,胃腺癌,前列腺癌,喉癌等多种肿瘤细胞均有明显的细胞凋亡诱导作用[1-2].根据目前研究来看,白藜芦醇诱导肿瘤细胞发生凋亡不是单一机制可以实现的,而是多方面机制来实现的.本研究为Res应用于临床宫颈癌治疗提供理论依据.
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木犀草素对宫颈癌HeLa细胞增殖及蛋白激酶C活性的影响
目的 研究中药木犀草素对人宫颈癌HeLa细胞蛋白激酶C(PKC)及细胞增殖的影响,并探讨其抗肿瘤机制.方法 分别以不同浓度的木犀草素作用于HeLa细胞后,用MTT法检测HeLa细胞生长抑制率,同步采用Western blot法检测 HeLa细胞PKC活性水平.结果 木犀草素作用于HeLa细胞后,细胞生长抑制率与对照组相比明显增高(P<0.05),且呈时间和剂量依赖性.各组HeLa细胞PKC的表达均呈阳性,且随木犀草素浓度的升高,PKC的表达呈明显下降趋势.结论 木犀草素可能通过下调肿瘤细胞PKC活性,抑制肿瘤细胞增殖而达到抗肿瘤活性.
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蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究
目的 观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制.方法 采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调.结论 蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关.
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RNA干扰抑制p62基因表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响
目的:研究shRNA降低p62基因表达对人宫颈腺癌HeLa细胞增殖的影响.方法:构建具有沉默p62表达的慢病毒载体短发夹RNA(shRNA)序列,采用Polybrene将其转染入宫颈腺癌HeLa细胞中(shRNA组),设立shNC作为阴性对照组,另设未加慢病毒转染载体的空白对照组.采用实时荧光定量qRT-PCR技术检测各组相对空白对照组的p62基因相对表达量;采用CCK-8实验检测3组细胞的增殖情况,采用集落克隆形成实验检测3组细胞的克隆形成率.结果:沉默p62基因表达的宫颈癌HeLa细胞成功构建;shRNA组p62mRNA相对空白对照组的相对表达量为(0.18 ± 0.08),而shNC组的p62mRNA相对空白对照组的相对表达量为(1.01 ± 0.12)(t=9.97,P<0.01);shRNA的干扰效率为81.00%;shRNA组较阴性对照组和空白对照组细胞增殖速度变慢(P<0.05),克隆形成率减少(P<0.01).结论:p62基因沉默后,宫颈癌HeLa细胞的增殖速度变慢.p62基因在宫颈癌HeLa细胞的增殖中起着重要的作用.
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齐墩果酸对宫颈癌细胞HeLa侵袭及凋亡的影响
目的 探讨齐墩果酸对宫颈癌HeLa细胞侵袭以及细胞凋亡的影响.方法 以Hela细胞为研究对象,不同浓度的齐墩果酸处理细胞,CCK-8法观察其对HeLa细胞生长的抑制率；Transwell体外侵袭模型检测其对HeLa细胞侵袭能力的影响；Western blot检测不同浓度作用下HeLa细胞caspase-3、bcl-2蛋白表达的变化;ELISA检测各组细胞MMP-2、MMP-9的表达.结果 齐墩果酸对对HeLa细胞的增殖及侵袭具有明显的抑制作用.0.2、0.4、0.8μmol/L的齐墩果酸作用下,HeLa细胞caspase-3的表达量分别比未处理组提高了0.31、0.80、0.98倍,而bcl-2的表达量分别降低了26.49％、49.72％和59.46％.不同浓度齐墩果酸作用下,HeLa细胞MMP-2和MMP-9的表达均有所下降,且呈一定的剂量依赖性.结论 齐墩果酸可以抑制HeLa细胞的侵袭,并且诱导细胞的凋亡.
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组蛋白去乙酰化酶1siRNA提高人宫颈癌HeLa细胞的化疗敏感性
目的 探讨应用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达,提高人类宫颈癌HeLa细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性的作用与机制.方法 合成针对HDAC1的siRNA采用脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,将其分为siRNA组、阴性siRNA组及对照组.对照组、siRNA组和阴性siRNA组通过DDP处理后分别作为对照+DDP组、siRNA+ DDP组和阴性siRNA+ DDP组.采用PCR检测HDAC1 mRNA表达,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HeLa细胞对DDP的敏感性.结果 与阴性siRNA组及对照组比较,siRNA组HeLa细胞的凋亡率增加,差异具有统计学意义(P＜0.05);和阴性siRNA组及对照组比较,siRNA组HDAC1 mRNA表达量降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),siRNA+ DDP组IC50值低于阴性siRNA +DDP组及对照+DDP组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 HDAC1 siRNA可抑制HDAC1基因的表达水平,使组蛋白去乙酰化水平增加,提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性.
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白黎芦醇对宫颈癌Hela细胞中人程序化死亡分子5蛋白、mRNA表达的影响
目的 探讨白黎芦醇对宫颈癌Hela细胞凋亡相关基因人程序化死亡分子5(PDCD5)蛋白、mRNA表达的影响.方法 将宫颈癌Hela细胞随机分为空白对照组及4个浓度的白黎芦醇组[分别用25、50、100、200 μmol·L-1白藜芦醇处理宫颈癌Hela细胞24、48、72 h],运用免疫细胞化学、原位杂交技术分别检测处理前后宫颈癌Hela细胞中PDCD5蛋白、mRNA的表达.应用TUNEL法检测各组细胞凋亡的情况.结果 4种不同浓度的白黎芦醇分别处理宫颈癌Hela细胞24、48、72 h后,与空白对照组比较,PDCD5蛋白、mRNA的表达均有明显升高,且白藜芦醇的浓度越高,其表达也越高,差异均有统计学意义(P均＜0.05);同一浓度白藜芦醇处理组中,随着时间延长,PDCD5蛋白、mRNA的表达也均升高,差异均有统计学意义(P均＜0.05).4种不同浓度的白黎芦醇分别处理宫颈癌Hela细胞24、48、72 h后,与空白对照组比较,细胞凋亡指数明显增加,且随白藜芦醇的浓度的增加而升高,差异有统计学意义(P＜0.05);但同一浓度白藜芦醇处理组细胞凋亡指数随白藜芦醇的作用时间延长增加均不显著,差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 PDCD5蛋白在宫颈癌Hela细胞中的表达可能与宫颈癌的发生、发展过程相关,白黎芦醇可上调宫颈癌Hela细胞中PDCD5蛋白、mRNA的表达,进而诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡.
