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沙奎那韦致大鼠INS-1细胞胰岛素抵抗
目的 探讨HIV-1蛋白酶抑制剂沙奎那韦对大鼠INS-1细胞内胰岛素信号转导通路及β细胞功能的影响. 方法 INS-1细胞经10μmol/L沙奎那韦处理48h后,台盼蓝染色计数细胞,MTT试验评估沙奎那韦对细胞活力的影响,Western印迹法测定100nmol/L胰岛素刺激的细胞裂解产物中的胰岛素信号转导蛋白的含量及其磷酸化,免疫酶标法测定20mmol/L葡萄糖刺激的胰岛素释放量,并用细胞内DNA含量标准化. 结果 沙奎那韦处理后,INS-1细胞内胰岛素刺激的胰岛素受体底物1(IRS-1)及IRS-2酪氨酸磷酸化和Akt-Thr~(308)磷酸化分别降低了60%、66%和55%,基础胰岛素分泌速率和葡萄糖刺激的胰岛素释放速率分别下降了39%和49%. 结论 沙奎那韦可损害胰岛β细胞内胰岛素信号的转导,导致β细胞自身胰岛素抵抗,这一作用可能影响胰岛β细胞功能.
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两种非核苷类逆转录酶抑制剂与已上市药物联合应用的体外抗HIV活性研究
目的:评价两种非核苷类逆转录酶抑制剂(JB25、JB26)与3种已上市药物齐多夫定(AZT)、依非韦仑(EFV)、沙奎那韦(SQV)联合应用的体外抗HIV活性.方法:将10个浓度的JB25、JB26分别与AZT、EFV、SQV的7个浓度组成各种浓度的组合,加入384孔细胞培养板,与HIV-1 ⅢB急性感染的MT-2细胞共培养3 d,后利用TZM bl细胞报告基因检测HIV-1的表达,共重复3次.利用MacSynergy Ⅱ软件对数据进行分析,得到药物相互作用的情况.结果:JB25与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是244.45/-5.05, 119.58/-65.93,145.83/-0.32(nmol/L)~2%;JB26与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是398.90/0, 103.62/-0.49, 138.473/-0.27(nmol/L)~2%.结论:两种非核苷类逆转录酶抑制剂与3种已上市的药物在体外联合应用,具有协同抗HIV作用,MacSynergy Ⅱ软件可以全面评价两种药物的联合作用情况.
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体外研究黄酮类和芪类化合物对血脑屏障P-糖蛋白外排沙奎那韦的影响
目的 研究9种黄酮类化合物和5种芪类化合物对血脑屏障上p-糖蛋白(P-gp)外排沙奎那韦的影响.方法 以过表达P-gp的马丁达比犬肾上皮细胞(MDCKII-MDR1)作为血脑屏障体外模型.药物干预分为16组(n=4),包括阴性对照组、阳性对照组、黄酮类实验Ⅰ-Ⅸ组和芪类实验组Ⅰ-Ⅴ组.药物干预分别为50 μmol·L-1沙奎那韦(阴性对照组);50μmol·L-1沙奎那韦联用50μmol·L-1维拉帕米(阳性对照组);50μmol·L-1沙奎那韦联用25 μmol·L-1黄酮类(黄酮类实验Ⅰ-Ⅸ组)或联用25 μ.mol·L-1芪类化合物(芪类实验组Ⅰ-Ⅴ组).药物干预时间均为4h.用液相色谱质谱联用技术测定沙奎那韦在各组细胞内的积聚量.结果 细胞内沙奎那韦积聚量:与阴性对照组(101.46±22.00) ng·mg-1相比,柚皮素组(229.41 ±74.86) ng·mg-1、桑黄素组(149.89±30.38)ng·mg-1、白杨黄素组(209.75±65.35)ng ·mg-1、氧化白藜芦醇组(178.54±44.40) ng·mg-1、染料木黄酮组(294.49±66.35)ng·mg-1、表儿茶素组(212.27±49.70) ng·mg-1、三乙酰白藜芦醇组(290.94±45.54)ng·mg-1和白藜芦醇三甲醚组(205.55±35.16)ng·mg-1,均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);异槲皮苷组(61.98±11.02)ng·mg-1、槲皮素组(41.54±4.92) ng·mg-1和白藜芦醇组(29.59±4.61)ng·mg-细胞内沙奎那韦积聚量,均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 一些黄酮类、芪类化合物可能对P-gp介导的沙奎那韦在血脑屏障上的转运过程产生调节作用.
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高效液相色谱-串联质谱法检测小鼠血浆和脑组织中沙奎那韦
本研究建立并验证了一种快速且灵敏的液质联用方法,用于测定小鼠血浆和脑组织中沙奎那韦的浓度,并将其应用于初步筛选实验,以评价黄酮类化合物对沙奎那韦脑内分布影响的作用.血浆和脑组织中的沙奎那韦和内标利托那韦通过液-液萃取的方式进行提取,色谱分离过程使用C18反相色谱柱(150mm×2.1 mm,5.0μm).质谱检测过程使用三重四极杆串联质谱,以电喷雾正离子模式、质谱多反应监测技术对沙奎那韦和内标进行检测.血浆中测定标准曲线的线性范围为0.1至10 ng/mL,其低浓度为定量下限.方法日间日内精密度为7.5％-12.1％,准确度介于90.5％与107.2％之间.脑组织中测定标准曲线的线性范围为0.1至10 ng/g,其低浓度为定量下限.方法日间日内精密度为7.3％-11.9％,准确度介于90.8％与107.4％之间.该方法成功应用于初步筛选实验,评价了19种黄酮类化合物对沙奎那韦脑内分布影响的作用,结果显示biochanin A能够大程度促进沙奎那韦的脑内分布.
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白杨黄素和柚皮素对沙奎那韦在大鼠体内药动学的影响
目的 探讨大鼠中白杨黄素和柚皮素与P-糖蛋白底物沙奎那韦同服时,对后者口服生物利用度及药动学的影响.方法 将SD大鼠分为3组分别灌胃沙奎那韦(30 mg·kg-1)、沙奎那韦(30 mg·kg-1)+柚皮素(40 mg·kg-1)、沙奎那韦(30mg·kg-1)+白杨黄素(40mg· kg-1),采用LC-MS/MS测定给药后的血药浓度,计算药动学参数.结果 沙奎那韦在沙奎那韦对照组,沙奎那韦+柚皮素组和沙奎那韦+白杨黄素组大鼠体内主要药动学参数分别为:AUC0-t,882.91,861.32,934.84ng·h·mL-1;AUC0.∞,903.97,865.90,947.92 ng·h·mL-1;ρmax,177.72,89.8,130.72 ng· mL-1;tmax,1,2,0.5 h;t1/2,11.73,12.61,13.33 h;MRT0-∞,27.09,31.63,26.60 h;CL/F,21.65,21.45,20.62mL· kg-1·h-1.结论 沙奎那韦的药时曲线存在双峰现象;柚皮素和白杨黄素对沙奎那韦的口服生物利用度和药动学参数没有显著性影响.
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反相高效液相色谱法测定血浆中沙奎那韦浓度
目的 建立血浆中沙奎那韦浓度的RP-HPLC测定法.方法 以C18色谱柱为固定相、乙腈-0.01 mol·L-1 Na2HPO4(pH=7.5)=62∶38为流动相,紫外检测波长为240 nm,以盐酸维拉帕米为内标.结果 沙奎那韦在0.6～12.5 μg·mL-1的范围线形良好(Y=0.0547X-0.0236,r=0.999).0.625,3.125,12.50 μg·mL-1沙奎那韦的回收率分别为110.3%,95.8%,100.8%.三个浓度的日内RSD分别为3.3%,1.9%,1.4%,日间RSD分别为4.4%,3.1%,1.8%.结论 可用本法快速、简便、准确地测定血浆中沙奎那韦浓度.
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桑黄素和乙酰化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药代动力学的影响
目的 评估桑黄素和乙酰化白藜芦醇对大鼠体内沙奎那韦(P-gp作用底物)药物代谢动力学的影响. 方法 将SD大鼠分为4组,每组5只,即对照组、实验Ⅰ和Ⅱ组、阳性对照组,分别灌胃给予30 mg·kg-1沙奎那韦;30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1桑黄素;30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1乙酰化白藜芦醇和30 mg·kg-1沙奎那韦联用40 mg·kg-1维拉帕米.采用HPLC-MS/MS方法测定给药后不同时间沙奎那韦的血药浓度,计算药动学参数. 结果 4组大鼠体内主要药动学参数分别为:AUC0-t:381.53 μg·h·L-1,185.53 μg·h·L-1,360.43 μg·h·L-1,529.95 μg·h·L-1;AUC0-∞:409.48 μg·h·L-1,228.52 μg·h·L-1,446.67 μg·h·L-1,552.41 μg·h·L-1;Cmax:110.80 μg·L-1,86.44 μg·L-1,139.84 μg·L-1,423.60 μg·L-1;Tmax:0.25 h,0.25 h,0.25 h,0.50 h;T1/2:5.72 h,5.94 h,6.78 h,3.78 h;MRT0-∞:10.30 h,9.61 h,12.30 h,4.89 h;CL/F:7.59 mL·kg-1·h-1,13.88 mL·kg-1·h-1,7.28 mL·kg-1·h-1,5.52 mL·kg-1·h-1. 结论 沙奎那韦的药时曲线存在多峰现象;桑黄素可明显降低沙奎那韦的口服生物利用度并对其药动学参数产生影响,而乙酰化白藜芦醇对沙奎那韦的口服生物利用度和药动学参数没有明显影响.
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酮康唑对沙奎那韦体外代谢和药物代谢动力学的影响
目的研究酮康唑对沙奎那韦的体外代谢和药物代谢动力学的影响.方法沙奎那韦分别与氟伏沙明、奎尼丁、胺碘酮、酮康唑在人肝微粒体中共同孵育,观察后者对沙奎那韦体外代谢的影响.另将沙奎那韦与酮康唑同时对Sprague-Dawley大鼠颈动脉注射给药,观察后者对沙奎那韦药代动力学的影响.结果酮康唑对沙奎那韦体外代谢有明显的抑制作用,而氟伏沙明、奎尼丁、胺碘酮对沙奎那韦体外代谢没有明显的抑制作用.酮康唑能改变沙奎那韦的AUC值(由169.68±20.38增加至252.39±50.65 mg·min-1·L-1),CL值(由29.47±7.00下降至19.81±3.05 ml·min-1·kg-1),T1/2(由1.23±0.30 min下降至0.89±0.35 min).结论酮康唑能显著抑制沙奎那韦的体外代谢,同时酮康唑对沙奎那韦的药代动力学参数也有一定影响.
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HPLC-MS/MS法定量研究氧化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药动学的影响
目的:应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立大鼠血浆中沙奎那韦的定量测定方法,并用于氧化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药动学研究.方法:液相色谱分离采用C18反相色谱柱(150 mm×2.1mm,5.0μm),流动相为乙腈/水(含0.2 mmol·L-1甲酸铵),流速为300 μL·min-1;质谱检测采用电喷雾正离子(ESI+)模式,多反应监测.血浆样品采用液-液萃取方式提取,检测反应为m/z 671.4→570.4(沙奎那韦),m/z 721.4→296.2(利托那韦,内标).将10只SD大鼠分为2组,对照组与实验组分别灌胃给予沙奎那韦(30 mg·kg-1)、沙奎那韦(30 mg·kg-1)+氧化白藜芦醇(40mg·kg-1),于不同时间取血,测定血药浓度.结果:沙奎那韦在1.0～100.0 ng·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.998 5),日内和日间精密度均小于12.16％,偏差为0.89％～6.24％,回收率为67.85％～82.38％,血浆样品稳定性好.同时服用氧化白藜芦醇时,大鼠体内沙奎那韦达峰浓度Cmax、Cmax1显著降低,而Cmax、Tmax、t1/2 、CL/F均无显著差异.结论:HPLC-MS/MS测定方法准确度高、专属性强、灵敏度高、快速高效.沙奎那韦的药时曲线存在双峰现象;氧化白藜芦醇可以显著降低沙奎那韦的达峰浓度,但对口服生物利用度等其他药动学参数没有显著性影响.
关键词： 沙奎那韦 HPLC-MS/MS 药动学 氧化白藜芦醇 鼠血浆 -
桦木酸类化合物的分离及合成研究进展
20世纪80年代以来,获得性免疫缺陷综合症(又称艾滋病)和肿瘤已经成为威胁人类健康的两大重要疾病,发病人数呈逐年上升趋势.目前,临床用于治疗艾滋病的药物主要有齐多夫定、奈韦拉平、沙奎那韦等,用于治疗癌症的天然药物主要有喜树碱、长春碱和紫衫醇的衍生物等,但这些药物都存在不良反应大及耐药性等缺点.因此,研究及开发疗效好、不良反应小的抗艾滋病和肿瘤的药物是人们关注的热点.桦木酸类系三萜类化合物,主要包括桦木酸、桦木醇和23-羟基桦木酸等,其结构详见图1.
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3种药物转运体抑制剂对沙奎那韦在大鼠肠道吸收影响的体外试验
目的:体外研究药物转运体P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白2(Mrp2)特异性抑制剂对沙奎那韦在大鼠肠道吸收的影响.方法:取大鼠用乌拉坦麻醉后,分别取十二指肠、空肠、回肠、结肠各8cm,制备离体肠外翻模型,检测不同肠段在P-gp抑制剂地高辛(10μmol·L-1)和维拉帕米(100μmol·L-1)、Mrp2抑制剂丙磺舒(600μmol·L-1)分别与沙奎那韦(12.5μg·mL-1)的混合Krebs-Ringer缓冲液(K-R液)中孵育5、10、20、30、45、60、90min后对沙奎那韦的累积吸收量；另设含沙奎那韦的K-R液为对照组.结果:沙奎那韦在大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠K-R液中的累积吸收量分别为(7.25±1.23)、(4.96±1.58)、(3.89±0.95)、(5.85±1.21)μg,吸收速率为十二指肠＞结肠＞空肠＞回肠.维拉帕米((10.03±3.56)、(7.52±2.21)、(7.45±1.8)μg)和地高辛((8.76±2.25)、(5.98±1.89)、(6.04±1.92)μg)可显著提高沙奎那韦在结肠、空肠、回肠K-R液中的累积吸收量(P＜0.05),对十二指肠无显著影响(P＞0.05)；丙磺舒对沙奎那韦在各肠段K-R液中的累积吸收量均无显著影响(P＞0.05).结论:P-gp可显著影响沙奎那韦的肠道吸收,Mrp2对沙奎那韦的肠道吸收无影响.
