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表皮干细胞的研究现况
皮肤是人体面积大的器官,由表皮和真皮构成,借皮下组织与深层组织相连.皮肤与外界直接接触,能阻挡异物和病原体侵入,防止体液丢失,具有重要的屏障保护作用.皮肤是再生能力较强的组织,皮肤的外层表皮,主要是由角质形成细胞组成.表皮的基底层由位于基底膜上的基底细胞组成,是表皮角质形成细胞的生发层.基底层的角质形成细胞经过棘细胞层和颗粒细胞层逐步分化成熟并不断从角质层的表面脱落,丢失的细胞由基底层的增殖细胞补充.表皮维持这种细胞不断更新的能力表明在基底层的角质形成细胞中存在干细胞(stem cell)[1].
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人表皮干细胞的分离培养
目的 探索人表皮干细胞原代培养方法.方法 将皮肤标本进行分离,用DispaseⅡ酶消化表皮皮片后,重悬细胞,接种于铺有Ⅳ型胶原的培养瓶进行培养.表皮干细胞的鉴定采用免疫细胞化学技术检测其表面标记物β1整合素、CK19的表达.对表皮干细胞与角质形成细胞的克隆形成情况进行比较.结果 倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长状况良好,表皮干细胞β1整合素及CK19角蛋白染色阳性.表皮干细胞克隆形成率高于角质形成细胞(P＜0.05).结论 采用本方法进行人表皮干细胞的培养较为理想.
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银屑病患者表皮干细胞分离、培养及生物学特性初步研究
目的 对寻常型银屑病患者表皮千细胞(epidermal stem cells,ESCs)进行分离、纯化培养及鉴定,比较银屑病患者和正常人表皮千细胞生物学特性的差异.方法 利用DispaseⅡ酶、胰酶消化,Ⅳ型胶原快速黏附,无血清培养基(DK-SFM)培养,倒置相差显微镜观察形态变化,细胞计数仪计数以及共聚焦荧光显微镜下观察角蛋白19(K19)和角蛋白10(K10)免疫细胞化学染色.结果 经快速粘附法筛选的细胞在相差显微镜下观察,银屑病组细胞核大、体积不均一；免疫荧光显微镜下K19阳性表达及K10不表达,初步证实分离出的细胞为ESCs.结论 成功建立了银屑病ESCs分离、纯化和培养的方法,ESCs可能在银屑病皮损形成过程中起重要作用.
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雷公藤甲素体外对人表皮干细胞增殖的调控作用
目的：探讨雷公藤甲素体外对人表皮干细胞增殖的影响。方法：应用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附方法分离正常人的包皮表皮干细胞，采用细胞免疫组化法检测培养传代细胞的角蛋白19（CK19）、角蛋白10（CK10）、β1整合素表达，鉴定人表皮干细胞。培养传代细胞中加入不同浓度的雷公藤甲素，用倒置显微培养后观察细胞的形态学变化，应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖情况，探索雷公藤甲素对人表皮干细胞增殖的影响。结果：免疫组化法检测提示培养传代细胞，β1整合素、CK19表达阳性，CK10表达阴性，MTT法检显示雷公藤甲素能显著抑制人表皮干细胞的增殖，且存在一定的浓度依赖性。结论：雷公藤甲素能有效抑制人表皮干细胞增殖。
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利用表皮干细胞治疗兔角膜缘干细胞缺损
目的利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞在体外构建双层组织工程角膜,并修复兔角膜缘干细胞的缺损.方法建立兔角膜缘干细胞缺损模型,以去细胞猪角膜基质片作为支架材料,以自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞作为种子细胞,在体外构建组织工程角膜,并用来修复兔角膜缘干细胞缺损.结果利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞复合异种去角膜基质片在体外成功构建组织工程角膜;构建的组织工程角膜与正常角膜相似,具有上皮层和基质层;用组织工程角膜修复兔角膜缘干细胞缺损3个月后,损伤角膜透明度恢复良好,组织学结构基本恢复正常.结论成功构建了兔的双层组织工程眼角膜,并修复了兔角膜缘干细胞缺损.
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毛囊干细胞在组织再生及皮肤组织工程中的研究进展
毛囊干细胞属于毛囊表皮干细胞系，与表皮干细胞同属上皮来源的成体干细胞。由于其具有来源广泛、取材容易、不涉及伦理及道德问题等优势而逐渐成为干细胞治疗领域的新宠。现就其在组织再生及皮肤组织工程中的研究进展综述如下。一、毛囊干细胞的特性毛囊干细胞主要存在于毛囊隆突区及毛囊的下1/3[1]。
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蜂胶对糖尿病大鼠创面表皮干细胞表达的影响
目的:观察蜂胶对四氧嘧啶糖尿病大鼠创面表皮干细胞动员的影响.方法:健康Wistar大鼠被随机分为4组:盐水对照组(n=18)、蜂胶对照组(n=18)、盐水模型组(n=22)和蜂胶模型组(n=18).模型组大鼠为尾静脉注射四氧嘧啶制造的糖尿病模型.造模4周后所有大鼠背部两侧制造直径1.8cm的圆形全皮层皮肤创面.分别用盐水或蜂胶处理伤口,观察各组的创面愈合时间.免疫组化法检测角蛋白14(K14)、角蛋白19(K19)、整合素β1的表达;Western Blot测定K19、整合素β1的蛋白表达水平.结果:与盐水处理相比,蜂胶能明显缩短创面愈合时间(P＜0.01),促进创面K14、K19、整合素β1的表达(P＜0.01).结论:蜂胶可以促进糖尿病大鼠创面表皮干细胞活性,加速创面愈合.
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表皮干细胞鉴别与分离的研究进展
近年来,对干细胞的深入研究揭示了表皮主要由三种细胞成分组成:表皮干细胞(epidermalstem cells,ESCs)及其子代细胞--短暂增殖(transit amplifying,TA)细胞、有丝分裂后(post-mitotic differ-entiating,PMD)细胞.但由于尚未找到能够有效区别ESCs与TA细胞的方法,限制了以ESCs的分离及体外培养为基础的研究工作与临床应用.本文就ESCs的鉴别、分离方法的研究进展进行综述.
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间充质干细胞在治疗皮肤缺损中的应用
在皮肤组织工程种子细胞的研究中,表皮干细胞在皮肤再生过程中起了至关重要的作用.但是,对表皮干细胞或前体细胞的分离和扩增水平有限,限制了其临床应用.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可诱导分化为皮肤表皮细胞和血管内皮细胞,并具有独特的生物学特性,如来源广泛、易分离培养扩增及免疫源性低等,使其可能成为皮肤组织工程中的种子细胞,为皮肤缺损临床治疗另辟新径.就MSCs治疗皮肤缺损的临床应用作一概述.
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组织工程皮肤的种子细胞--表皮干细胞的生物学行为研究进展
近年来,组织工程皮肤的研究已成为当前研究的热点之一.但直到现在还没有任何一种组织工程皮肤能作为理想的合适的皮肤覆盖物,以满足临床严重烧伤病人的需求,其中原因之一是未找到合适的种子细胞.通过对皮肤发育生物学研究发现,表皮干细胞在皮肤形成过程中起重要作用,皮肤的多层表皮结构通常是由表皮干细胞再生而来,因此,表皮干细胞可能成为构建组织工程皮肤的种子细胞,但目前我们对它还了解甚少.现就表皮干细胞的有关生物学行为包括一般特性、分布位置、表面标志物、可能的应用前景等方面的研究进展作一综述.
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过表达细胞周期蛋白的D1对成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞的作用
目的:观察过表达细胞周期蛋白D1(CCND1)对成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞的调控作用.方法:构建携带CCND1基因的真核表达载体PEGFP-N1-CCND1,将PEGFP-N1-CCND1转染人成熟表皮细胞,5d后,倒置显微镜下观察细胞形态;细胞计数法观察细胞的增殖情况;免疫荧光法检测表皮干细胞标志抗原β1整合素和成熟表皮细胞标志抗原CK10的表达变化.结果:转染PEGFP-N1-CCND1后,细胞体积变小,核浆比例增大;细胞增殖较快,细胞数量比对照组增加了4倍(P＜0.01);表型检测结果显示,转染PEGFP-N1-CCND1组,表达干细胞标志性蛋白β1整合素表达阳性,成熟表皮细胞标志性蛋白CK10表达阴性,而转染空载体组则相反.结论:CCND1过表达能够诱导成熟表皮细胞去分化为表皮干细胞.
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正常皮肤和瘢痕组织表达β1整合素与系列角蛋白的比较性研究
目的：研究幼儿与成人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮细胞表达β1整合素及系列角蛋白的特征与规律，以确定表皮干细胞及短暂扩充细胞分布、数量的差异及这些改变与瘢痕愈合关系。方法：分别取4～10岁幼儿及35～51岁成人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织。采用免疫组织化学方法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和角蛋白19（K19）及分化表皮细胞表达的角蛋白14与10（K14和K10）。结果：瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少，阳性强度降低；瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2～3层，明显少于健康皮肤；而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛。结论：瘢痕组织表皮基底层具有增殖能力的表皮干细胞和短暂扩充细胞明显少于健康皮肤，且瘢痕组织表皮干细胞的分化过程与健康皮肤不同，处于有丝分裂后细胞阶段的细胞比例降低，而终末分化细胞的比例明显增高。瘢痕组织表皮的增殖能力下降、细胞的分化行为紊乱可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一。
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表皮细胞逆分化成表皮干细胞的形态学证据
众所周知,多能(或定向)干细胞能生长或分化成各种(或相应)的组织细胞,但成熟的组织细胞能否逆分化为干细胞,一直缺乏实验证据.近,解放军第三○四医院创伤研究室付小兵教授领导的课题组的研究工作,为表皮细胞的逆分化现象提供了直接的形态学证据.研究结果发表在英国著名的"柳叶刀(Lancet)"医学杂志上.研究人员从经过重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)处理过的溃疡创面获得表皮组织,用过氧化酶标记的链霉卵白素染色后,发现表皮棘细胞层中有许多细胞能表达表皮干细胞的标志物——角蛋白19和β1整合素,并观察到在位于角质层与基底层之间的颗粒细胞层和透明细胞层中有成群的角蛋白19和β1整合素阳性的干细胞岛;而未经rhEGF处理的溃疡创面仅在表皮细胞基底膜上有单层细胞表达角蛋白19和β1整合素.进一步的研究发现,采用能区别基底层细胞和角质层细胞的方法——角蛋白10和角蛋白14染色,那些角蛋白19和β1整合素表达强阳性的细胞,角蛋白14染色呈弱阳性,角蛋白10染色阴性,表明这些细胞是低分化的表皮干细胞.为了证实此项发现的普遍性,研究人员分别对正常组织以及处于不同生长发育阶段的表皮组织标本进行研究,均未观察到表皮颗粒细胞层和透明细胞层中有成群的角蛋白19和β1整合素阳性的干细胞岛.为了排除实验误差,研究人员还经多角度和多层切片进行观察,均获得相同的结果.研究者认为 ,此项研究发现为表皮细胞的逆分化现象提供了直接的形态学证据.由于干细胞岛只在经表皮细胞生长因子处理过的溃疡创面中观察到,提示rhEGF可能具有促进表皮细胞逆分化并形成表皮干细胞的潜在作用.
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人表皮干细胞的体外分离和培养
目的:建立人表皮干细胞的体外分离和培养体系的方法,探索表皮干细胞体外大量扩增的途径.方法:采用0.375%的DispaseⅡ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,采用MTF法筛选表皮细胞基础培养基和表皮细胞生长因子(epidermal growthfactor,EGF)的适浓度,建立表皮干细胞培养的干预体系.逐日观察培养的细胞呈表皮干细胞样的形态,免疫组化方法检测β1整合素和角蛋白19的表达.结果:以表皮细胞数量和活性作指标,不同浓度EGF干预条件细胞活性不同,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液为适培养液,可使细胞呈表皮干细胞克隆样生长,β1整合素和角蛋白19表皮干细胞活性表达呈阳性.结论:采用0.375%的Dispase Ⅱ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液培养,此方法是一种简便、快速、经济的表皮干细胞分离和培养的方法.
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汗腺再生的研究现状
皮肤大面积烧(创)伤的患者虽然能经现代外科手段达到创面愈合,但皮肤汗腺却无法完美再生[1];另有很多种伴有皮肤汗腺发育和功能异常的遗传性疾病[2],现代医学也无法恢复其汗腺,从而这些患者的生活质量大受影响.
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人表皮干细胞的培养技术
近年来,人类组织干细胞的研究已成为国内外学者关注的焦点,表皮干细胞即是其中之一.表皮干细胞是一种在成年期还能维持较高的自我更新能力的细胞群,在正常状态下维持表皮的自我更新,当受到损伤刺激时,表皮干细胞可以参与皮肤损伤的修复[1].
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E16.5d胚胎小鼠皮肤细胞作为毛囊重建模型种子细胞的可行性研究
目的 研究胚胎小鼠皮肤及其毛囊的发育规律,探讨胚胎小鼠的皮肤细胞作为毛囊重建模型种子细胞的可行性.方法 对80只胎龄14.5-18.5 d小鼠及新出生的小鼠皮肤进行连续石蜡切片,连续切片进行HE染色,观察其组织学结构并了解其附件形成情况.免疫荧光染色观察胚胎表皮特异性蛋白细胞角蛋白8(cytokeratin 8,CK8)和18(CK18)在胚胎小鼠皮肤表达.结果 胎龄14.5 d(embryonic day 14.5,E14.5 d)的胚胎小鼠,表皮层形成表皮细胞仅为1-2层;E16.5 d的胎鼠背部皮肤较薄,表面凹凸不平并形成褶皱,未见毛囊形成;E18.5 d胎鼠毛囊发育达到旺盛的时期,毛囊数量明显增加;新出生的小鼠皮肤附件基本发育成熟.E16.5 d小鼠皮肤中表皮干细胞标记物CK8和CK18为阳性.结论 16.5 d胚胎小鼠(E16.5)的皮肤细胞可以作为毛囊重建模型的种子细胞.
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创伤愈合中bFGF bFGF受体的研究进展及其对表皮干细胞的影响
皮肤损伤是临床常见的外伤之一,大丽积的皮肤损伤会危及患者的生命.因此,研究创伤愈合具有重大的临床意义.近年来,干细胞研究已经成为医学和生物学领域中引人注目的热点之一.表皮干细胞在创伤修复中的作用也日益引起了人们的注意,因此本文主要就碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、bFGF受体及其对表皮干细胞的影响做一综述.
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创伤愈合中bFGF bFGF受体的研究进展及其对表皮干细胞的影响
皮肤损伤是临床常见的外伤之一,大丽积的皮肤损伤会危及患者的生命.因此,研究创伤愈合具有重大的临床意义.近年来,干细胞研究已经成为医学和生物学领域中引人注目的热点之一.表皮干细胞在创伤修复中的作用也日益引起了人们的注意,因此本文主要就碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、bFGF受体及其对表皮干细胞的影响做一综述.
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表皮干细胞研究进展
近年来,干细胞研究已成为当前生命科学研究的热点之一.皮肤是人体大的器官,在抵御微生物入侵、紫外线辐射、防止水分丢失、调节体温、维持人体外貌上起重要作用,同时是免疫系统的组成部分之一.但各种原因所致的皮肤损伤,目前尚缺乏有效的治疗手段.通过对皮肤发育生物学研究发现,表皮干细胞在皮肤形成过程中起重要作用,皮肤的多层表皮结构通常是由表皮干细胞再生而来.因此,现就表皮干细胞的有关生物学特性、来源、鉴定及其可能的应用前景等方面的研究进展作一综述.
