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LC-MS/MS分子网络及其对中药研究的启发
近年来,LC-MS/MS的分子网络技术已广泛应用于微生物、海洋生物、真菌及植物等来源的天然产物的研究,关于分子网络在中药方面的研究应用却鲜有报道.以分子网络为主题,首先对分子网络进行简要介绍,并对分子网络方面的文献进行了调研;随后,对分子网络策略在化学成分定性表征、化学成分定量表征及质量控制、指导活性化合物的分离、提取工艺的优化以及疾病诊断和个性化治疗5个方面的应用进行综述;后,对分子网络在中药研究方面的应用进行了展望,旨在为中药研究提供新的思路和方法,以期促进中医药的现代化发展.
关键词： LC-MS/MS 分子网络 全球天然产物社会分子网络 中药 中医药 -
不同化学环境下的马钱子碱和士的宁在大鼠肝微粒体内代谢动力学研究
目的 研究马钱子碱(BRU)与士的宁(STR)单体、马钱子总生物碱和马钱子提取物中活性成分BRU与STR在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学,考察BRU与STR单体、马钱子总生物碱和提取物中的BRU与STR在大鼠肝微粒体中的代谢差异.方法 采用LC-MS/MS法测定BRU和STR单体、总生物碱和提取物种BRU和STR在体外代谢系统中的含量变化,并计算其酶促反应动力学参数.结果 与BRU与STR单体组相比,马钱子总生物碱和提取物中2种单体成分的大反应速度(Vmax)和米氏常数(Km)值均显著降低;与马钱子总碱组相比,马钱子提取物中2种单体成分的Vmax和Km值均显著升高.马钱子总生物碱组、单体成分组和马钱子提取物组中BRU的清除率(CLint)之间无明显差异;而三者中STR的CLint依次减少.结论 马钱子总碱、马钱子提取物中的BRU和STR及BRU与STR单体均可被肝微粒体代谢,且各组中BRU和STR的代谢动力学参数具有明显差异.
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依那普利在大鼠体内的药动学研究
目的：通过 LC-MS/MS 法测定大鼠血浆中依那普利活性代谢产物依那普利拉浓度，研究依那普利在大鼠体内的药动学。方法 Wistar大鼠ig依那普利15 mg/kg，采用固相萃取法对大鼠血浆样品预处理，洗脱液为甲醇、水。色谱与质谱条件为Diamond C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈–5 mmol/L乙酸铵（45∶55）；体积流量：0.5 mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL。采用ESI（＋）离子源；干燥气（N2）体积流量11.0 L/min，压力275.8 kPa，温度350℃；毛细管电压3500 V；多级反应监测（MRM）模式，正离子模式；EMV为400 eV。结果血浆中内源性物质对测定无干扰，依那普利拉的线性范围为20～1500 ng/mL，低定量限为20 ng/mL。准确度和精密度良好。血浆样本中依那普利拉的提取回收率大于85%，且无浓度相关性。经2次冻融以及冷冻14 d稳定良好。大鼠体内依那普利拉的主要药动学参数：AUC0-t为（8015±297.7）ng/mL·h，Cmax为（1405±269.10）ng/mL，tmax为（2.45±0.19）h，t1/2为（4.82±0.32）h，Clz/F为（2.18±0.10） L/kg·h，Vz/F为（12.63±1.31）L/kg。结论本方法专属性强、灵敏度高、准确性好。通过测定代谢产物依那普利拉经时血药浓度，可以考察依那普利的药动学特征。
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夏天无提取物在小鼠体内药动学研究
目的：建立测定阿片碱在小鼠血浆中浓度的 LC-MS/MS 方法，并将该方法用于夏天无提取物在小鼠体内的药动学研究。方法采用LC-MS/MS法。色谱条件采用安捷伦Zorbax C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.8μm），流动相为甲醇-水（含0.1%甲酸），梯度洗脱；体积流量：0.2 mL/min；柱温：35℃；进样量：5μL。质谱条件采用离子源：ESI源，正离子检测，高纯氮气用作干燥气（15 L/min）和气帘气（50 L/min），气体温度340℃；以多反应监测（multiple reaction monitoring， MRM）为扫描模式。采用回归方程计算小鼠血浆中阿片碱。小鼠ig给予夏天无提取物的羧甲基纤维素钠混悬液，制备血药质量浓度-时间曲线，计算药动学参数。结果阿片碱在0.4～200.0 ng/mL线性关系良好，精密度RSD均小于15%，准确度在±15%以内，提取回收率在90%以上，基质效应在90%～110%。药动学参数大血药浓度（Cmax）和达峰时间（tmax）分别为134.6 ng/m、1.5 h。结论该方法适合小鼠ig夏天无提取物后阿片碱在小鼠体内的药动学研究。
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健康志愿者单次和多次口服美敏伪麻缓释胶囊的药动学研究
目的：研究美敏伪麻缓释胶囊经单、多次给药后的药动学特征，评估其在健康志愿者体内的安全性。方法22例受试者随机、开放试验设计，研究单、多次给药药动学特征。血浆中氯苯那敏、伪麻黄碱、右美沙芬、右啡烷采用LC-MS/MS法测定，药动学参数采用WinNonlin软件计算。安全性特征以记录到的所有不良事件来进行评价。结果整个研究过程中没有严重不良事件报告。单次口服美敏伪麻缓释胶囊后，伪麻黄碱、氯苯那敏、右美沙芬和右啡烷均在3～5 h达峰，t1/2分别为6.30±1.17、23.3±6.91、10.4±2.19、8.62±3.04 h，Cmax分别为203±40.4、5.05±1.39、4.29±3.95、1.95±0.72 ng/mL， AUClast分别为2050±559、137±47.5、61.3±67.5、17.2±6.58μg·h/L，AUCinf分别为2140±570、161±63.8、17.6±6.65、62.8±69.3μg·h/L。在2次/d，连续给药4 d后基本达到稳态血药浓度，伪麻黄碱、氯苯那敏、右美沙芬和右啡烷的Cmax、Cmin、AUCtau, ss与单次给药比较均有不同程度的升高，波动系数的平均值为107%～271%。结论美敏伪麻缓释胶囊多次给药后4 d达到稳态血药浓度，暴露均较单次给药后有所增高，在健康志愿者体内安全性良好。
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生川乌瓜蒌不同配伍中乌头类生物碱在大鼠体内的药动学研究
目的：考察生川乌瓜蒌不同配伍比例醇提液中乌头类生物碱在大鼠体内的药动学研究，比较瓜蒌对其药动学行为的影响。方法建立灵敏、专属、快速的测定大鼠血浆中6种乌头类生物碱的液相色谱-串联质谱方法。大鼠随机分为3组，分别ig生川乌与瓜蒌1∶0、6∶1、1∶6配伍醇提液，在不同的时间点采血分析，经DAS 2.0软件计算主要药动学参数。结果乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的药动学参数tmax和t1/2发生了显著变化，且变化趋势基本一致，在生川乌与瓜蒌6∶1配伍组tmax显著减小（P＜0.05），生川乌与瓜蒌1∶6配伍组tmax显著增加（P＜0.01、0.001），且t1/2显著降低（P＜0.05、0.01），提示生川乌与瓜蒌不同配伍比例影响了3种生物碱的吸收和消除过程。结论生川乌与瓜蒌配伍影响了乌头类生物碱的药动学过程，配伍比例是其配伍禁忌的重要条件。
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国产与进口头孢地尼颗粒在健康人体的生物等效性研究
目的：建立测定人血浆中头孢地尼的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，并用于评价头孢地尼颗粒在人体的生物等效性。方法24名健康男性受试者随机交叉单剂量口服头孢地尼颗粒受试制剂和参比制剂100 mg，采用LC-MS/MS法测定人血浆样本中头孢地尼，WinNonlin 6.3软件计算其药动学参数，并评价两种制剂的生物等效性。结果血浆中头孢地尼的线性范围为10.0～2000 ng/mL（r＝0.9997），定量下限为10.0 ng/mL；批内、批间精密度（RSD）均小于6.0%，准确度（RE）在±4.0%以内；随着放置时间的延长，血浆中头孢地尼在室温条件下降解程度增加。受试制剂和参比制剂的AUC0-t分别为（6238.22±1993.74）、（6331.35±1850.42）ng·h/mL，AUC0-∞分别为（6343.68±2070.73）、（6429.76±1901.33） ng·h/mL，Cmax分别为（1290±391）、（1330±384）ng/mL，tmax分别为2.50（2.00～4.50）、2.50（2.00～3.50）h，t1/2分别为（1.61±0.17）、（1.61±0.17）h。AUC0-t、AUC0-∞和Cmax的几何平均数比值（GMR）分别为97.88%、97.95%、96.75%，其90%置信区间分别为91.75%～104.42%、91.76%～104.56%、90.43%～103.52%。结论该方法快速、灵敏、准确、专属性强、重现性好，适用于人血浆头孢地尼的测定。头孢地尼颗粒受试制剂和参比制剂具有生物等效性。
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硝西泮中一种未知杂质的结构确证
目的: 对硝西泮原料药中一种未知杂质进行结构确证.方法: 应用HPLC-MS/MS、核磁共振(1H-NMR、13C-NMR) 技术,对硝西泮原料药中一种未知杂质进行结构分析.结果: 首次发现并确定硝西泮未知杂质的结构.结论: 该方法可为硝西泮的质量控制提供依据.
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基于尤斯灌流室技术的泽泻汤大鼠肠吸收研究
[目的]研究泽泻汤中成分白术内酯Ⅱ和Ⅲ在大鼠不同肠段的跨膜吸收特征.[方法]采用Agilent Zorbax Plus C18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水(42:58),流速:0.3 mL/min.质谱电喷雾离子源,阳离子MRM模式,白术内酯Ⅱ和Ⅲ的定量离子分别为m/z233.2→m/z187,m/z249.15→m/z231.尤斯灌流室法考察泽泻汤在大鼠离体十二指肠、空肠、回肠、结肠的吸收,接收侧样品10000 r/min离心15 min后用液相色谱-质谱色谱法(LC-MS/MS)分析.[结果]白术内酯Ⅱ在大鼠不同肠黏膜的表观渗透系数范围在6.10~25.22×10-6 cm/s之间,白术内酯Ⅲ在1.88~5.41×10-6 cm/s之间,两者佳吸收部位是结肠.[结论]该方法专属性好,准确度高,可用于泽泻汤中白术内酯Ⅱ和Ⅲ的大鼠肠吸收研究.
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炮制时间对杜仲指标成分含量及药代动力学影响研究
[目的]#建立液相色谱-质谱/质谱联用法（LC-MS/MS）应用于同时测定不同炮制时间杜仲中主要成分京尼平苷（GP）、京尼平苷酸（GPA）、桃叶珊瑚苷（AU）、松脂醇二葡萄糖苷（SG）的定量分析方法，研究不同炮制时间对杜仲中4个指标成分在大鼠体内药代动力学行为的影响。[方法]按照杜仲的药典盐炮制方法炮制，分别于0、1、2、4h取样。以马钱子素（MS）为内标，应用LC-MS/MS建立的方法测定不同炮制时间杜仲中4个目标成分含量及药代动力学入血成分含量。[结果]各目标成分在测定范围内呈良好线性关系；杜仲炮制时间宜控制在2h较为合理。[结论]本研究从体内暴露角度描述了炮制对目标成分的影响，研究结果对杜仲的炮制和临床应用具有指导意义。
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LC-MS/MS法测定升麻葛根汤颗粒在犬体内的药代动力学研究
[目的]建立液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)的方法测定犬灌胃给药升麻葛根汤颗粒后葛根素、芍药苷、异阿魏酸的药代动力学.[方法]采用Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相:0.05％甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱;流速:0.2 mL/min;柱温:25℃;进样量:5μL.以甲苯磺丁脲为内标,采用电喷雾离子源(ESI离子源),在负离子检测方式下进行多反应离子检测(MRM),检测离子对分别为m/z 415.2→294.9(葛根素)、m/z 525.0→449.0(芍药苷)、m/z 193.05→133.9(异阿魏酸)、m/z 269.09→169.9(甲苯磺丁脲,内标).[结果]葛根素、芍药苷、异阿魏酸在10～4000 ng/mL范围内线性关系良好.血浆中内源性物质不干扰测定,方法回收率、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品的测定要求.[结论]该方法准确度强,专属性好,灵敏度高,可用于检测葛根素、芍药苷、异阿魏酸的药代动力学.
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高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氟曲马唑浓度的效果
目的 探讨高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中氟曲马唑的效果.方法 分析物和内标经乙醚和正己烷(1:1)提取,首次采用LC-MS/MS法测定血浆中氟曲马唑浓度.色谱条件为C18色谱柱(2.1 mm×50 mm),流动相为甲醇:1‰甲酸=80:20;多反应监测(MRM)氟曲马唑([M+H]+,m/z 279.0→183.1)和内标辛伐他汀([M+H]+,m/z 441.0→295.1).结果 在0.0996~9.96 ng/ml内,氟曲马唑与内标的峰面积比值与浓度的线性关系良好,定量限为0.0996 ng/ml,提取回收率>78.83%,日内、日间精密度良好(RSD<9.26%).结论 本次建立的LC-MS/MS法可用于测定氟曲马唑在人体血浆中的浓度.
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基于LC-MS/MS的动物源性食品中吡喹酮残留测定分析
目的 对采取LC-MS/MS法测定分析动物源性食品中吡喹酮残留的效果进行分析探讨,为今后的应用工作提供可靠的参考依据.方法 采取乙酸乙酯对样品中的吡喹酮残留进行提取,经LC-MS/MS法进行测定,计算回收率和RSD.结果 本次试验中发现在10-40ug/kg范围内回收率在92.3%-110.0%之间.结论 采取LC-MS/MS法能够对动物源性食品中吡喹酮的残留进行准确的测定与分析,然吡喹酮残留物的提取条件以及流动相等因素会对LC-MS/MS测定产生一定程度的影响,在今后的检测过程中应给予关注.
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液相色谱-质谱/质谱联用技术在临床诊断和疾病筛查中的应用
寻找并研究体内生物标志物并将其应用于疾病的诊断筛查、病程分级、疾病早期预测以及疾病的治疗具有非常重要的意义.由于生物标志物往往都存在于复杂生物基质(血浆、尿液、唾液、泪液、呼出液、胆汁等)内,且非常微量,受生物基质本身干扰比较大,这就对检测技术提出了非常高的要求.液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)联用技术具有高通量、高灵敏度、高专一性,所需样品量少,样品前处理简单,分析速度快,能够多组分同时分析的特点,非常适合对复杂的生物基质进行定量分析.近年来,越来越多的人开始尝试将LC-MS/MS联用技术应用于临床的疾病诊断和筛查,使其临床应用范围越来越广.
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LC-MS/MS测定养血清脑颗粒中15个生物碱成分的含量
目的:建立LC-MS/MS方法,对养血清脑颗粒中15个生物碱成分进行含量测定.方法:采用HSS T3色谱柱(2.1 mm ×100 mm,1.8μm),乙腈-0.1％甲酸水为流动相,流速200 μL·min-1,柱温30℃,电喷雾离子化(ESI),多反应监测离子扫描(MRM),于正离子模式下检测目标化合物,选样量2μL.结果:小檗碱、药根碱、巴马汀、黄连碱、四氢黄连碱、四氢小檗碱、延胡索甲素、延胡索乙素、原阿片碱、钩藤碱、毛钩藤碱、帽柱木菲碱、异帽柱木菲碱、坡绕定、异坡绕定的线性关系良好(r=0.99),各成分加样回收率在89％～107％之间,准确度与精密度良好.结论:该方法操作简便、灵敏度高、分析速度快,可同时测定养血清脑颗粒中多个生物碱成分的含量,有助于快速进行该药品的多成分质量控制.
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LC-MS/MS法测定布洛芬颗粒剂的人体生物等效性研究
目的 研究布洛芬颗粒在健康人体内的药动学及其生物利用度,以评价其与布洛芬混悬液的生物等效性.方法 23例健康男性志愿受试者,采用随机、开放、单剂量、双周期自身交叉试验设计.分别口服布洛芬颗粒(受试制剂)与布洛芬混悬液(参比制剂)后,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定血浆中布洛芬的药物浓度.结果 受试制剂与参比制剂的Cmax分别为(17.438 6±5.304 0)、(18.557 7±4.641 7) mg/L,AUC0-24分别为(59.000 3±13.935 3)、(58.506 4±16.720 2) mg/(h·L),AUC0-∞分别为(59.718 0±14.020 0)、(59.227 8±16.815 8) mg/(h·L),Tmax分别为(1.478 3±0.922 9)、(1.021 7±0.822 0) h.结论 空腹口服布洛芬颗粒受试制剂与参比制剂具有生物等效性.
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LC-MS/MS法测定人血浆中辛伐他汀浓度
目的:建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在人体内的药代动力学.方法:血浆样品经乙酸乙酯萃取后,在正离子检测方式下选择多反应监测扫描方式进行质谱分析.结果:血浆中的内源性物质对样品测定无干扰,专属性良好.辛伐他汀的线性范围为0.1～10ng/mL,低定量限为0.1ng/mL,平均提取回收率为81.4%,日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的要求.测定的辛伐他汀片在人体内T1/2为(2.46±1.25)h；Tmax为(1.96±1.00)h；Cmax为(1.70±1.48) ng/mL；AUC0-24为(7.08±5.27 )ng·h/mL；AUC0-∞为(8.11±5.83 )ng·h/mL.结论:该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可以满足本实验低浓度药物测定及药代动力学研究.
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LC-MS/MS测定乌头属中药中8个生物碱含量
目的:建立LC-MS/MS测定乌头属中药8种生物碱含量的方法.方法:以甲醇-水(水相含0.1％甲酸和2.5 mM醋酸铵溶液)为流动相,C18柱分离,采用ESI(+)源,MRM监测,对制川乌、制草乌、制附子药材饮片中的双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱),单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱),胺醇型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱)进行含量测定.结果:上述8种生物碱的线性关系良好,精密度、重复性的RSD都低于6％,加样回收率为95.77％～101.90％.结论:该方法简便、快速、精密度高、重复性好,可应用于乌头属中药的质量控制.
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LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中美托拉宗的浓度
目的 建立Beagle犬血浆中美托拉宗浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法.方法 色谱柱:依利特C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-5 mmol· L-1醋酸铰-甲酸(体积比为60.00∶ 40.00∶0.05),血浆样品采用乙腈沉淀蛋白法处理,以多反应监测(multiple reaction montoring,MRM)扫描方式检测,测定Beagle犬口服美托拉宗后血浆中药物浓度.结果 血浆中美托拉宗质量浓度在0.5 ～200.0 μg·L-1内线性关系良好,r=0.9952；日内和日间精密度RSD≤12.2％；美托拉宗的平均提取回收率为66.0％～72.9％,基质效应符合有关规定,美托拉宗在Beagle犬血浆中主要药物动力学参数:t1/2为(7.6±2.1)h,ρmax为(144.2±29.5) μg·L-1,AUC0-∞为(2081.5±516.0)μg·h·L-1.结论 该方法适用于美托拉宗在Beagle犬体内的药物动力学研究.
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LC-MS/MS法测定大鼠血浆中20(R/S)-25-OH-PPD及其立体选择性药代动力学研究
目的 建立大鼠血浆中20(R/S)-25-OH-PPD差向异构体的LC-MS/MS法,并研究20(R/S)-25-OH-PPD在大鼠体内立体选择性药代动力学行为.方法 色谱柱:Shiseido C18(150 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-5 mmol· L-1醋酸铵缓冲溶液(体积比为73∶27)为流动相,等度洗脱方式进行分离,样品经沉淀蛋白法处理后进行分析.结果 20(R)和20(S)构型在5.0～2000 μg·L-1质量浓度内线性关系良好;日内和日间精密度(CV)不大于6.2％;大鼠血浆中20(R)-25-OH-PPD和20(S)-25-OH-PPD的提取回收率分别在78.3％～85.2％和81.6％～ 86.8％内,基质效应分别在103.3％ ～ 105.9％和100.6％～107.2％内.大鼠静注或灌胃分别给予25-OH-PPD差向异构体后,血浆中S构型的浓度明显高于R构型,S构型半衰期明显长于R构型,R、S构型间未见相互转化.结论 本方法可用于同时测定20(R/S)-25-OH-PPD,并成功应用于25-OH-PPD差向异构体在大鼠体内的立体选择性药代动力学研究.
