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TCDD诱导的胎鼠腭裂发生过程中TGF-β3、Dnmts启动子区CpG岛甲基化状态研究
目的 研究2,3,7,8-四氯二苯二噁英(2,3,7,8-tetrachlrodibenzo-p-dioxin,TCDD)诱导的胎鼠腭发育过程中转化生长因子β3(transforming growth factor beta 3,TGF-β3)、DNA甲基转移酶(DNA methyhransferases,Dnmts)基因启动子区CpG岛甲基化状态与TGF-β3、Dnmts表达量的相关性.方法 将18只C57BL/6J孕鼠完全随机分为TCDD组和对照组,每组各9只.TCDD组于妊娠第10.5天(gestation day,GD10.5)给予28 μg/kg的TCDD口服,对照组给予等体重体积的玉米油口服.分别于GD13.5、14.5、15.5处死孕鼠,收集2组胎鼠腭突组织.通过试剂盒进行基因组DNA提取、亚硫酸氢盐转化、甲基化特异性PCR,将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,分析2组各时间点腭组织表达的TGF-β3、Dnmts启动子CpG岛甲基化状态.应用IBM SPSS 20.0软件进行统计分析,两样本间均数比较均采用独立样本t检验,所有结果作K-S检验均符合正态分布,方差不齐者采用校正t检验,P＜0.05表示差异有统计学意义.结果 2组各时间点TGF-β3启动子区CpG岛均处于低甲基化水平,TCDD组和对照组GD13.5、GD14.5、GD15.5甲基化程度分别为(8.6±0.8)％和(8.7±0.8)％、(1 1.5±1.4)％和(11.7±1.0)％、(12.0±0.7)％和(12.1±0.5)％,相同时间点TCDD组与对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).Dnmt1启动子区CpG岛均处于高甲基化水平,TCDD组和对照组GD13.5、GDI4.5、GD15.5甲基化程度分别为(73.9±1.1)％和(72.6±0.8)％、(70.8±1.7)％和(70.7±1.0)％、(69.4±2.2)％和(69.7±0.5)％,相同时间点TCDD组与对照组间差异亦无统计学意义(P＞0.05).TCDD组Dnmt3a启动子区CpG岛1的甲基化水平在GD13.5和GD15.5高于对照组,分别为(21.9±1.1)％和(8.1±0.6)％(P＜0.01)、(43.4±0.4)％和(32.9±0.7)％(P＜0.01),在GD14.5低于对照组,分别为(33.2±0.5)％和(42.9±0.3)％(P＜0.01).对照组Dnmt3a启动子区CpG岛2的甲基化水平在各时间点均高于TCDD组,GD13.5、GD14.5、GD15.5甲基化程度分别为(82.0±0.7)％和(32.3±0.6)％(P＜0.01)、(62.7±1.0)％和(25.5±1.4)％(P＜0.01)、(47.2±0.4)％和(30.3±1.4)％(P＜0.01).结论 TCDD诱导的胎鼠腭发育期间Dnmt3a启动子区接近第1外显子处CpG岛2的低甲基化水平,可能是Dnmt3a基因在GD13.5高表达的原因,并因此诱发胎鼠腭裂的基因组呈高甲基化状态.TGF-β3和Dnmt1启动子区CpG岛甲基化状态与TCDD作用无关.
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DNA甲基转移酶1与3B在子宫内膜异位症血与腹腔液的表达及相关性研究
目的 测定不同期别子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者血液及腹腔液中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)1及DNMT 3B的表达水平,探讨EMS DNMT 1及DNMT 3B的表达水平与发病的关系.方法 采用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定56例EMS患者(35例Ⅰ～Ⅱ期、21例Ⅲ～Ⅳ期)及25例非内异症对照者血及腹腔液中DNMT 1、DNMT 3B的水平,分析其改变与疾病的关系及其二者在两样本中的相关关系.结果 EMS组血中DNMT1、3B及腹腔液DNMT 3B水平明显高于对照组(P＜0.05).血DNMT1、DNMT3B的表达水平在EMSⅢ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期与对照组,Ⅰ～Ⅱ期DNMT 3B亦较对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05);腹腔液中DNMT 1、3B的表达水平在EMS Ⅰ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期与对照组,其中DNMT 3B在三组之间差异有统计学意义(P＜0.05),而DNMT 1的组间差异无统计学意义(P＞0.05).增殖期腹腔液中DNMT 1水平高于分泌期(P＜0.05).血中DNMT 1与DNMT 3B表达呈现正相关关系,腹腔液中的二者亦为正相关(r血清=0.252,P血清=0.023; r腹腔液=0.379,P腹腔液=0.000);DNMT 3B水平在血与腹腔液中呈正相关,DNMT1在两样本中无相关性.结论 EMS患者DNMT1及DNMT3B表达水平的升高,及不同期别EMS血与腹腔局部DNMT的差异性变化,提示甲基化改变在EMS发生发展中起重要作用.
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DNA甲基转移酶在儿童免疫性血小板减少症中的蛋白表达
目的 通过检测DNA甲基转移酶(DNMTs)在儿童免疫性血小板减少症(ITP)外周血中蛋白水平的表达,探讨其与儿童ITP的发病机制的关系.方法 收集2015年5月-2016年5月在新乡医学院第一附属医院门诊、病房就诊和治疗的60例新诊断ITP患儿(实验组)和门诊健康体检的36例儿童(对照组)为研究对象.无菌采集其空腹外周血2 mL,采取酶联免疫吸附法检测血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平.分别分析年龄、性别、血小板计数(PLT)对血清DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的影响,及DNMT1、DNMT3a、DNMT3b三者之间的关系.结果 (1)新诊断ITP患儿PLT为(21.3 ±26.1)×109/L,明显低于健康对照组(261.2±78.4)×109/L,差异有显著性(t=-17.777,P=0.000).(2)ITP患儿DNMT1、DNMT3a、DNMT3b (ug/L)的蛋白表达水平分别为(1.43±0.96)、(0.67±0.39)、(0.53±0.39),明显低于对照组(2.05±1.24)、(1.04±0.58)、(0.73±0.45),差异有显著性(t=-2.547,-3.692,-2.341;P=0.013,0.000,0.021).经Person相关性分析,ITP患儿血小板计数与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平无明显相关性(r=-0.062、0.161、0.079,P=0.636、0.220、0.549).DNMT1与DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达无相关性(r=-0.025,-0.057;P=0.851、0.665),DNMT3a、3b的蛋白表达正相关性(r=0.259,P =0.046).结论 新诊断ITP患儿外周血中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平显著降低,提示DNA甲基转移酶的异常表达可能与儿童ITP的发病机制相关,推测在儿童ITP患儿DNA甲基化过程中,DNMT3a、DNMT3b起着相互协调的作用.
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肝癌患者p16基因甲基化与DNMTs表达相关性分析
目的:研究p16基因启动子区域异常甲基化所导致的基因表达异常在肝癌形成过程中的作用,探讨p16基因甲基化与DNMTs(DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B)表达之间的相关性.方法:检测肝癌患者癌组织、癌旁组织和肝硬化组织中p16基因的异常甲基化状态及p16、DNMTs基因mRNA的表达水平；采用甲基化特异性PCR技术检测甲基化状态,荧光定量技术检测mRNA的表达.结果:p16基因在肝癌组织、肝硬化组织和癌旁组织中的甲基化率分别为70.5％ (31/44)、37.1％(13/35)和9.1 ％(4/44),肝癌组织和肝硬化组织中的甲基化改变与癌旁组织比较差异有统计学意义,P＜0.01.31例甲基化阳性组织中17例p16基因表达降低或缺失,13例甲基化阴性组织中2例基因表达降低或缺失,甲基化阳性与阴性的p16基因表达水平存在明显差异.癌组织和肝硬化组织中4种DNMT mRNA水平均高于相应癌旁组织.其中DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达水平差异有统计学意义,DNMT1:P值分别为0.009和0.020;DNMT3A:P值分别为0.005和0.010；DNMT3B:P值分别为0.039和0.036.DNMT2 mRNA的表达水平虽然高于相应癌旁组织,但差异无统计学意义,P值分别为0.120和0.350.DNMT1、DNMT 3A和DNMT3B的表达与p16甲基化有相关性,P值分别为0.013、0.025和0.041.结论:p16基因甲基化是肝癌的早期、频发事件,其改变是其基因表达下降甚至失活的重要原因.DNMTs活性的改变可能促进p16基因的异常甲基化.
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DNA甲基化抑制剂研究进展
DNA甲基化由DNA甲基转移酶催化发生,是真核细胞DNA正常的表观遗传学修饰方式.但异常甲基化常导致肿瘤的发生,以地西他滨为代表的DNA甲基转移酶抑制剂是一类甲基化调节剂,能通过对抑癌基因去甲基化调节达到治疗肿瘤的目的 .本文阐述了DNA甲基化与肿瘤的关系,以及DNA甲基化抑制剂的研究进展.
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异烟肼致肝细胞损伤中GSTP1启动子区甲基化
目的 通过异烟肼损伤HL-7702肝细胞,探索谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)启动子区CpG岛甲基化与损伤的关系.方法 将细胞分为对照组与不同浓度异烟肼(200、400和800 mg/L)处理组,采用比色法检测HL-7702细胞外乳酸脱氢酶(LDH)活性水平;采用实时荧光定量PCR分别检测各组3种DNA甲基转移酶(DNMT)DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和GSTP1的mRNA表达;采用酶联免疫法(ELISA)检测3种DNA甲基转移酶蛋白表达;采用亚硫酸盐修饰后测序法(BSP)检测GSTP1启动子区CpG岛的甲基化水平.结果 异烟肼处理细胞上清液中LDH活性水平升高,细胞损伤程度随异烟肼浓度升高而加剧.与对照组比较,400和800 mg/L异烟肼组GSTP1 mRNA表达随异烟肼浓度增加而显著升高(P<0.05,P<0.01),异烟肼高剂量组GSTP1启动子区CpG岛甲基化较对照组降低.3种DNMT蛋白表达水平随异烟肼浓度增加表达升高,高剂量异烟肼组的3种DNA甲基转移酶mRNA和蛋白表达较对照组均显著性增强(P<0.01).结论 异烟肼损伤的肝细胞HL-7702的GSTP1启动子区CpG岛呈低甲基化.
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异硫氰酸苯己酯诱导Molt-4细胞p15基因去甲基化及机制研究
研究新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂异硫氰酸苯己酯(PHI)对急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞p15基因的去甲基化作用及诱导沉默基冈重新表达作用,并进一步探讨其作用机制.应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测PHI作用前后Molt-4细胞株p15基因甲基化状态的变化;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Molt-4细胞经过PHI处理后DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、p15基因的mRNA的表达变化;用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Molt-4细胞经过PHI处理后的P15蛋白的表达.结果显示,PHI作用于Molt-4细胞5 d后,p15基因的甲基化程度减弱,p15基因的异常高甲基化现象被逆转,沉默的p15基因重新表达,p15 mRNA、P15蛋白表达增加,并呈浓度依赖性;PHI可下调DNMT1和DNMT3B的mRNA表达(P＜0.05),而对DNMT3A的mRNA表达作用不明显(P＞0.05).PHI可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3B的活性,诱导p15基因产生去甲基化,或者(和)是通过改变p15基因附近组夤白的乙酰化水平,导致染色体空间结构发生变化,增加转录因子的进入,从而诱导p15基因重新表达.
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冠心病患者CD14+单核细胞总体DNA异常甲基化及其机制研究
目的 探讨冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组总体DNA异常甲基化及其机制.方法 密度梯度离心法和磁珠分选法分离试验组(冠心病患者)和对照组(非冠心病患者)外周血CD14+单核细胞.用基因组总体甲基化定量试剂盒检测DNA总体甲基化水平;用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测DNA甲基转移酶(DNMTs)和甲基结合蛋白2(MBD2)的mRNA表达水平.结果 对照组与试验组CD14+单核细胞DNA总体甲基化水平分别为0.30±0.04,0.44±0.03,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组与试验组DNMT1 mRNA表达水平分别为2.16±0.32,1.40±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05);DNMT3A mRNA表达水平分别为0.56±0.05,0.89±0.12,差异有统计学意义(P＜0.05);DNMT3B mRNA表达水平分别为0.59±0.07,0.97±0.10,差异有统计学意义(P＜0.01);MBD2 mRNA表达水平分别为1.68±0.20,1.20±0.08,差异有统计学意义(P＜0.05).冠心病试验组中,CD14+单核细胞DNMT1的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈明显正相关(r =0.648),差异有统计学意义(P＜0.05);DNMT3B的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈明显正相关(r=0.700),差异有统计学意义(P＜0.05);MBD2的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈显著负相关(r=-0.540),差异有统计学意义(P＜0.05),而表达升高的DNMT3A与总体甲基化水平没有明显相关性(P＞0.05).结论 冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA呈总体高甲基化,可能是DNMT1、DNMT3A和DNMT3B和MBD2共同作用的结果.
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地西他滨的药理作用和临床评价
目的 综述地西他滨的药理作用、药动学及临床评价.方法 以近几年国内外代表性的论文来依据,进行分析、整理和归纳.结果与结论 地西他滨的适应证为骨髓增生异常综合征,另有研究,其对镰状细胞性贫血、髓性细胞白血病以及一些实体瘤也有疗效.
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缺氧对星形胶质细胞DNA甲基化及组蛋白乙酰化相关酶的表达影响
目的 研究缺氧对原代培养星形胶质细胞DNA甲基化相关酶及组蛋白乙酰化相关酶水平的影响.方法 原代培养的星形胶质细胞经氧糖剥夺处理后,Western blot方法检测细胞DNA甲基转移酶,DNA去甲基转移酶,组蛋白乙酰化酶及组蛋白去乙酰化酶的表达.结果 原代培养的星形胶质细胞缺氧处理48 h后,DNA甲基转移酶的表达升高,DNMT3A和DNMT1与对照组相比分别升高了49％和83％,DNA去甲基转移酶的表达降低了36％;组蛋白去乙酰化酶的表达升高到对照组的2.1倍,而组蛋白乙酰化酶的表达则升高得更为明显,为对照组的20倍.结论 缺氧可以改变星形胶质细胞DNA甲基化和组蛋白乙酰化相关酶的表达,从而影响基因的表达.
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PAa细胞内O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶与放射敏感性的关系
目的:探讨PAa细胞内O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-MT)与放射敏感性的关系.方法:建立裸鼠人肺腺癌PAa模型,分为4组,从接种日始,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组裸鼠每天灌服0.2 ml无菌生理盐水,35 dⅡ、Ⅳ组腹腔注射2 mg链脲菌素(STZ),36 d予Ⅲ、Ⅳ组瘤体10 GyX线照射,测瘤体直径、O6-MT含量、MGMT染色及细胞病理学镜检.结果:4组中O6-MT含量Ⅰ组高,Ⅳ组少,Ⅳ组与Ⅰ、Ⅱ组相比差异显著,Ⅳ组与Ⅲ组相比差异也显著(P＜0.05);MGMT染色强度变化与O6-MT含量一致.瘤体生长Ⅰ、Ⅱ组瘤体放疗后4 d后明显增大,Ⅲ组6 d后明显增大,与Ⅰ、Ⅱ组相比增长减慢,Ⅳ组瘤体在4 d后明显减少;病理学镜检Ⅲ组见小的散在坏死灶,Ⅳ组坏死区域增加.通过对O6-MT活性、MGMT染色强度与病理学镜检、瘤体大小对比,细胞内O6-MT含量与放射敏感性密切相关,O6-MT含量低组别放疗效果好.结论:O6-MT含量决定其放射敏感性,据O6-MT活性高低预测其放射敏感性,STZ可提高放疗疗效.
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不同价态砷对DNA和砷甲基转移酶的影响
目的 观察不同价态、不同剂量砷染毒大鼠肝脏中DNA甲基转移酶和砷甲基转移酶mRNA的表达情况,寻找两者间的相关性及不同价态砷(iAs3+和iAs5+)体内甲基化间的差异.方法 将35只健康清洁级Wistar雄性大鼠按体重随机分为7组,分别为正常对照(去离子水)组和低剂量(1/45 LD50,2.33 mg/kg)、中剂量(1/15 LD5o,6.67 mg/kg)、高剂量(1/5LD50,20.00 mg/kg)砷酸氢钠(iAs5+)染毒组以及低剂量(2.33 mg/kg)、中剂量(6.67 mg/kg)、高剂量(20.00 mg/kg)亚砷酸钠(iAs3+)组,每组5只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒90 d.采用实时荧光定量PCR法测定肝脏中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)和砷甲基转移酶(As3MT) mRNA的表达情况.结果 与对照组相比,各染毒组大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量较高,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量较低,高、低剂量亚砷酸钠染毒组和高剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1mRNA的表达量均较高,中剂量亚砷酸钠染毒组和低剂量砷酸氢钠染毒组DNMT1mRNA的表达量均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈上升趋势,DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达量呈下降趋势；随着砷酸氢钠染毒剂量的升高,大鼠肝脏中As3MT mRNA的表达量呈下降趋势,DNMT3A、DNMT3B、DNMT1mRNA的表达量呈上升趋势.As3MT的表达量与DNMT3A和DNMT3B表达量呈负相关(P＜0.01)；与DNMT1表达量无相关关系(P＞0.01).结论 长期亚慢性暴露iAs3+和iAs5均可促进As3MT的表达,抑制DNMT3A及DNMT3B的表达,但iAs3+和iAs5+间在剂量-效应关系上呈反向性；机体As3MT表达上调与DNMT3A和DNMT3B表达抑制间具有协同效应,并可导致基因低甲基化.
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微囊藻毒素-LR对小鼠肝细胞DNA甲基化的影响
目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)暴露对小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶(DNMTs)mRNA表达的影响.方法 将40只健康SPF级昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组(含0.02％ DMSO)和5、10、20 μg/kg MC-LR染毒组,每组10只,雌雄各半.采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒20 d.采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠肝细胞DNA中的脱氧胞苷和5-甲基脱氧胞苷含量,并计算DNA的总体甲基化水平;采用实时荧光定量PCR法检测DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3BmRNA的表达水平.结果 10、20 μg/kg MC-LR染毒组小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平,DNMT1、DNMT3A及DNMT3B mRNA的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).小鼠肝细胞DNA总体甲基化水平与DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达水平均呈正相关(P＜0.05).结论 MC-LR可抑制小鼠肝细胞DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达,降低DNA总体甲基化水平.
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三种DNA甲基转移酶在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨肝细胞癌组织中三种甲基转移酶(DNMT)蛋白表达的差异及其临床意义.方法:收集38例肝癌标本,取癌区组织各3块,制作组织芯片,应用免疫组化SP法分析肝癌组织中DNMT蛋白的表达,并分析其与肝癌各临床、病理参数间的关系.结果:在38例肝癌组织中,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b蛋白的表达阳性率分别为55.3%、48.5%和65.8%.DNMT蛋白质着色主要分布在细胞核,散在分布于胞浆.DNMT1蛋白质表达与门脉癌栓和肿瘤无包膜等参数显著相关;组织中DNMT1表达与DNMT3b表达具有相关性,二者同时表达与门脉癌栓和肿瘤无包膜等参数显著相关.但三种DNMT蛋白的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无显著相关性(P>0.05).结论:肝细胞癌组织中存在三种DNMT蛋白的过表达,DNMT1和DNMT3b的高表达与门脉癌栓和肿瘤无包膜等参数显著相关,二者协同作用可能在肝癌的发生和发展中起重要作用.
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DNA甲基转移酶DNMT1在子宫内膜癌中的表达
抑癌基因启动子区CpG岛甲基化与基因失活有关,是诸多恶性肿瘤发生过程中的重要分子事件,而有研究表明肿瘤组织中DNA甲基转移酶活性及表达量的异常导致此过甲基化现象.
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DNA甲基转移酶抑制剂guadecitabine
DNA甲基化过程广泛存在于哺乳动物细胞内,在表观遗传修饰和染色质稳定性中都起着关键的作用.DNA高甲基化修饰通常在肿瘤发展的进程中有着重要影响.guadecitabine是由Astex公司研发的新型的DNA甲基转移酶抑制剂.作为地西他滨的前药,guadecitabine在体内经磷酸酯酶水解得到地西他滨,掺入DNA链中,与DNA甲基转移酶共价结合,不可逆地抑制DNA甲基化过程.临床研究表明,guadecitabine在针对骨髓增生异常综合征和急性骨髓性白血病等肿瘤的治疗中具有明显的有效性和安全性.
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高同型半胱氨酸和高胆固醇血症联合作用对大鼠基因组DNA总甲基化状态的影响
目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHCY)和高胆固醇血症(HTC)联合作用对大鼠主动脉基因组DNA总甲基转移酶活力(DNMT)及总甲基化水平的影响.方法:44只健康清洁级成年Wistar雄性大鼠按2×2析因设计随机分为阴性对照组、高同型半胱氨酸(HCY)组、高总胆固醇(TC)组、高HCY+高TC组,每组11只.对照组给予普通大鼠饲料,其余各组给予相应的配方饲料.喂养3个月后心脏取血检测血清中HCY、TC等相关指标.提取主动脉基因组DNA检测基因组DNA总甲基化水平；提取主动脉核蛋白检测基因组DNA总甲基转移酶活力.结果:HHCY和HTC联合作用大鼠血清HCY较高,产生相可作用(P＜0.01),表现为协同作用,而对大鼠血清TC、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)无交互作用.HHCY和HTC联合作用主动脉基因组DNA总甲基转移酶活力较高,产生相互作用(P＜0.01),表现为协同作用,总基因组DNA甲基化水平降低,即去甲基化程度的增加,产生相互作用(P＜0.01),表现为协同作用.结论:HHCY和HTC联合作用使得大鼠主动脉基因组DNA总DNMT活力增高,基因组DNA总甲基化水平降低,可能是AS发生发展的重要机制之一.
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急性白血病患者DNA甲基转移酶活性测定及其意义
目的 探讨DNA甲基转移酶(Dnmt)在急性白血病患者疾病发展中的意义.方法 应用同位素标记法测定47例急性白血病患者(初治组19例,完全缓解组20例,难治组8例)和18例健康对照者的Dnmt活性,以同位素液闪计数值的大小表示Dnmt活性大小.结果 急性白血病初治组和难治组患者Dnmt活性放射液闪计数值与对照组相比差别有显著性意义(P＜0.01),而完全缓解组与对照组相比差别无显著性意义(P＞0.05).结论 初治型和难治型急性白血病患者Dnmt活性升高,而完全缓解期Dnmt活性下降,故Dnmt活性可作为判断急性白血病病情发展和预后的指标之一.
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DNA甲基转移酶与CD11a基因表达对原发性抗中性粒细胞胞质抗体相关性小血管炎发病的影响
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)、甲基转移酶3a(DNMT3a)、甲基转移酶3b(DNMT3b)与CD11a的相互关系,以及与中国广西人群中原发性抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性小血管炎(AAV)发病的相关关系.方法 采用荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测3种甲基转移酶以及CD1 1a的mRNA在33例广西活动期AAV患者和45名健康对照组外周血单个核细胞中的表达,采用t检验及Spearman、Pearson进行相关分析.结果 ①AAV患者组的DNMT1的mRNA表达水平0.5±0.3明显低于健康对照组0.8±0.3,差异有统计学意义(t=4.446,P＜0.01)；②AAV患者组的DNMT3a、DNMT3b的mRNA表达水平与健康对照组之间的差异无统计学意义(P＞0.05)；③AAV患者组的CD11a的mRNA表达水平0.63±0.46高于健康对照组0.04±0.22(t=2.402,P＜0.05)；④AAV患者中DNMT1的表达水平与患者BAVS评分呈负相关(r=-0.414,P＜0.05)；⑤AAV患者中CD11a的表达水平与BAVS评分呈正相关(r=0.435,P＜0.05)；⑥AAV患者中DNMT1与CD11a的表达水平呈负相关(r=-0.15,P＜0.05).⑦AAV患者中BAVS评分与肾脏病理活动指数(AI)呈正相关(r=0.786,P＜0.05).结论 中国广西人群中,AAV患者外周血单个核细胞中DNMT1基因表达的降低可能是造成DNA低甲基化的重要原因,可能诱导CD11a等相关致病基因过度表达从而引起AAV的发病.
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硼替佐米对K562细胞株DNA甲基转移酶表达的影响
目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib,商品名:万珂)对K562细胞株DNA甲基转移酶(DNMTs)表达、细胞凋亡的影响.方法 常规体外培养白血病K562细胞株,随机将处于对数生长期的细胞分为12、24、36h 3个作用时间组,予以不同浓度的硼替佐米:0,6,20,60 nmol/L,蛋白印迹法检测胞内DNMT1的表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与阴性对照组相比,硼替佐米可显著抑制DNMT1表达.硼替佐米作用于细胞12、24、36 h后细胞凋亡率逐渐增加,60 nmol/L硼替佐米作用36 h后细胞凋亡率为(61.68±3.20)％.结论 硼替佐米抑制K562细胞株DNMT1表达,诱导细胞凋亡,该作用呈浓度依赖性.
