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脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响
目的 探讨益气活血治法之代表中药复方脑络欣通及其拆方(益气方、活血方)对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响以及在不同时间点局灶性脑缺血再灌注模型大鼠GFAP蛋白表达的特点.方法 将健康的Wistar大鼠120只先饲养观察3天,随机分为假手术组、模型组、益气活血方(脑络欣通)组、益气方组和活血方组5组,每组24只,1天、3天、7天三个不同时间点各8只.采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别观察益气活血、益气、活血3种治法及其代表方药在缺血2h时分别再灌注1天、3天和7天的治疗效果;以免疫组化染色SABC法检测胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达.结果 缺血再灌注各时间点,假手术组无强阳性表达,模型组明显可见GFAP表达,与假手术组比较有显著性差异(P＜0.01);各治疗组GFAP阳性染色的阳性细胞总面积表达增加,与模型组比较,其中再灌注1天时无显著性差异(P＞0.05),再灌注3天、7天时脑络欣通组和益气方组与模型组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组间比较,1天无差异,3天脑络欣通组GFAP表达高,与益气方组和活血方组比较有显著性差异(P＜0.01);7天各治疗组间无显著性差异(P＞0.05).结论 经过益气活血法(脑络欣通)及其拆方(益气方、活血方)干预后,脑络欣通在调节GFAP(3天上调、7天下调)表达的效应上要优于其拆方(益气方、活血方).
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脑络欣通影响气虚血瘀证脑缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区神经元凋亡的机制研究
目的:探讨中药复方脑络欣通改善脑缺血损伤的作用机制.方法:采用多因素复合制作气虚血瘀证大鼠脑缺血动物模型,观察中药脑络欣通对脑缺血-再灌注损伤的预防与治疗作用.用免疫组化方法观察缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白、Bax蛋白及脑源性神经营养因子的表达;用TUNEL法观察缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区神经元的凋亡现象;用硫代巴比妥酸比色法测定海马匀浆丙二醛浓度.结果:(1)预防及治疗给药可以减少缺血-再灌注模型大鼠海马CAI区神经元的凋亡现象,并可以使缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白及脑源性神经营养因子表达升高,使Bax蛋白的表达减少;(2)预防组可以降低缺血急性期病理性升高的丙二醛含量.结论:脑络欣通可以减少缺血-再灌注模型大鼠海马CA1区神经元的凋亡现象,其机制可能与减少脑缺血-再灌注后自由基损伤有关,并通过影响凋亡相关蛋白的表达减少神经元凋亡.
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益气活血方对脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡及HSP70蛋白表达的影响
益气活血方脑络欣通主要由黄芪、三七、川芎、蜈蚣等组成,具有益气活血功效.以往的研究证实,脑络欣通能改善脑供血,降低脑水肿,改善血液流变学,调整血栓素A2(TAX2)及前列腺素I2(PGI2)等的动态平衡,调节神经递质及细胞因子,对脑缺血损伤具有保护作用[1,2].
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新安医家验方脑络欣通改善缺血性中风作用机制研究的思路与方法
始于宋,盛于明清的新安医学,得益于家族世医传承而延绵不绝.歙县王氏内科作为名医世家之一,在临床上积累了丰富的经验,并形成自身学术与临床特色,是新安医学的重要组成部分.新安王氏医学对心脑血管疾病的诊疗有深刻的认识和独具特色的临证经验,尤其是益气活血法治疗气虚血瘀型缺血性中风.文章对中风病气虚血瘀病机理论溯源、益气活血疗法和近年来课题组对益气活血法及其代表方剂脑络欣通治疗缺血性中风的实验研究的思路与方法进行总结和梳理.
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脑络欣通对脑缺血再灌注大鼠Fas、FasL蛋白表达、脑水肿及神经体征的影响
目的:探讨脑络欣通对气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑水肿、神经体征及Fas和FasL蛋白表达的影响.方法:采用气虚血瘀证大鼠以线栓法阻塞其大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注1、3、7d.用干湿重法、Long等评分标准,评价脑水肿、神经缺损体征;用免疫组化染色法分别检测缺血皮质Fas、FasL蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组脑组织含水量、神经体征明显改善,Fas、FasL蛋白表达显著降低.结论:脑络欣通可能通过抑制Fas、FasL蛋白表达,降低脑组织含水量和神经缺损体征分数,改善气虚血瘀证大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.
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脑络欣通对脑缺血再灌注损伤模型鼠神经细胞凋亡及相关基因的影响
目的:研究脑络欣通对脑缺血再灌注半暗带神经细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:采有气虚血瘀局灶性脑缺血再灌注模型鼠,大脑中动脉阻断2h,再灌注1d、3d,用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组缺血半暗带的凋亡细胞显著减少,bcl-2蛋白表达显著增加,bax蛋白表达显著减少.结论:脑络欣通可能通过促进bcl-2基因的表达,抑制bax基因的表达对半暗带的细胞凋亡产生抑制作用.
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脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠神经干细胞及相关调节因子影响的实验研究
中枢神经系统神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的发现,为治疗多种神经系统疾病带来了希望,显示了中枢神经系统具有一定的自我修复潜能.大量研究已经证实,脑缺血可以激活成年脑内神经干细胞的自我增殖潜能,促进神经干细胞增殖.
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脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经上皮干细胞蛋白巢蛋白表达的影响
目的 观察益气活血治法代表中药复方脑络欣通及其拆方(益气方、活血方)对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠室下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响.方法 采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别观察益气活血,益气,活血3种治法及其代表方药在缺血2 h后,分别再灌注1、3、7 d的治疗效果;免疫组化染色SABC法检测神经上皮干细胞蛋白巢蛋白表达.结果 各治疗组巢蛋白表达增加,但仅在缺血再灌注7 d时与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);益气活血法组表达明显增加,在缺血再灌注7 d时与益气法组和活血法组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 经过脑络欣通(益气活血法)及其拆方(益气方、活血方)干预后,可使内源性神经干细胞的增殖明显增加,脑络欣通在促进神经干细胞增殖(7 d)表达的效应上要优于其拆方(益气方、活血方).
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脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的作用
目的 探讨脑络欣通药物血清和左归丸药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(neural stem cell,NSC)增殖分化的作用.方法 分别采用含10%脑络欣通药物血清和含10%左归丸药物血清的培养基培养大鼠胚胎NSC,观察其促增殖效应和诱导分化效应,应用相差显微镜和免疫荧光染色对其进行比较观察.结果 脑络欣通药物血清和左归丸药物血清均可诱导绝大多数NSC分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.此外,两者还能在一定程度上促进培养的NSC生长.前者诱导NSC分化的进程虽比后者要慢,但诱导NSC向神经元方向分化的比率较高,其分化的神经元在细胞形态学上与发育成熟的神经元更为接近;后者促进NSC生长的效应较为显著.结论 脑络欣通和左归丸均能促进体外培养的NSC生长和分化,两者作用有一定差异;益气活血治法和补肾生髓治法对NSC进行诱导分化具有一定的可行性.
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脑络欣通对局灶性脑缺血大鼠凝血与纤溶系统的影响
目的 探讨脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注大鼠凝血及纤溶系统的影响及其作用机制.方法 40只Wistar大鼠中10只为正常组,另30只采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型,随机分为模型组、脑络欣通组和通心络组各10只.脑络心通组给予0.93g/ml脑络心通溶液,通心络组给予0.03g/ml通心络溶液,按1ml/(100g·d)连续14天灌胃,模型组和正常组予以等量的生理盐水.给药后14天检测各组大鼠血浆纤维蛋白降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间( APTT)和血浆纤维蛋白原(Fbg),并进行神经功能缺损评分. 结果 与模型组比较,给药后14天脑络欣通组和通心络组神经功能缺损有明显减轻(P＜0.01)；与脑络欣通组比较,给药后14天后通心络组神经功能缺损差异有统计学意义(P＜0.05).与正常组比较,模型组PT、APTT和TT均明显缩短,Fbg、FDP、D-D水平升高,脑络欣通组和通心络组的PT也明显缩短、FDP升高,脑络心通组D-D升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；与模型组比较,脑络欣通组和通心络组凝血及纤溶系统各指标差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 脑络欣通可以延长缺血后PT、APTT和TT,降低血浆FDP、D-D和Fbg水平,可能是其治疗缺血性脑血管病并起到神经保护作用机制之一.
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脑络欣通对大脑中动脉闭塞缺血再灌注损伤模型大鼠空间认知功能和局部脑血流量的影响
目的 研究脑络欣通对脑缺血大鼠再灌注损伤的作用机制.方法 将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、脑络欣通组和通心络组各10只,采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,2h后拔出栓线少许(约5mm)造成缺血再灌注损伤.脑络欣通组给予浓度为85.8 mg/ml脑络欣通溶液1ml/(100g·d),通心络组给予浓度为30 mg/ml通心络胶囊溶液1 ml/(100 g·d),模型组和正常组予以等量生理盐水,各组大鼠连续灌胃14天.采用Morris水迷宫实验检测大鼠在不同时间点逃避潜伏期(EL)及120s内通过原平台所在位置的次数(Visits),分别在造模过程中插线后5min、缺血2h再灌注以及造模后7、14天监测各组大鼠局部脑血流量(rCBF).结果 与正常组比较,模型组和通心络组大鼠在各时间点EL都明显延长,Visits明显减少(P＜0.01)；与模型组比较,脑络欣通组大鼠各时间点EL显著缩短、Visits显著增加(P＜0.01)；脑络欣通组大鼠各时间点EL、Visits和通心络组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).与正常组比较,其余各组大鼠在各时间点rCBF均低于正常组(P＜0.01)；与模型组比较,脑络欣通组和通心络组在第7天和第14天大鼠rCBF明显恢复(P＜0.01).结论 脑络欣通可能通过增加模型大鼠rCBF而改善学习记忆能力,从而对脑缺血再灌注损伤起到保护作用.
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脑络欣通对局灶性脑缺血 - 再灌注大鼠血液流变学及相关调节因子的作用
目的 观察脑络欣通对大脑中动脉闭塞缺血 - 再灌注(MCAO/R)大鼠血液流变学及相关调节因子的影响.方法 将Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、通心络组、脑络欣通低剂量(40 mg/ml)组、中剂量(80 mg/ml )组及高剂量(100 mg/ml)组,每组各10只.采用线栓法制备大脑中动脉闭塞缺血 - 再灌注(MCAO/R)模型.采用全自动血液流变仪检测全血黏度、血浆黏度、红细胞比容(HCT);高性能血凝仪检测血浆纤维蛋白原(FIB)含量;运用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验,检测血小板生成素(TPO)、内皮素(ET)水平;运用激光多普勒仪,于造模后第14天监测各组大鼠的局部脑血流量(rCBF).结果 ①假手术组、通心络组、脑络欣通3个剂量组大鼠的全血黏度各项、血浆黏度、HCT和FIB指标均低于模型组,差异有统计学意义,P＜0.01.②通心络组、脑络欣通中剂量和高剂量组的HCT低于脑络欣通低剂量组,差异有统计学意义,P＜0.01.③假手术组、通心络组及脑络欣通3个剂量组大鼠的TPO、ET水平均低于模型组,rCBF高于模型组,差异具有统计学意义,P＜0.01或P＜0.05.④脑络欣通中剂量组大鼠TPO水平低于脑络欣通低剂量组,rCBF高于脑络欣通低剂量组,差异具有统计学意义,P＜0.05.结论 脑络欣通可以改善MCAO/R模型大鼠的血液流变学指标,调节凝血纤溶系统相关因子,对缺血性脑血管病可能具有良好的作用.
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脑络欣通对大鼠脑缺血再灌注后海马mRNA的特异性表达及Wnt/β-catenin的影响
目的 研究脑络欣通对大鼠脑缺血再灌注损伤神经保护的作用机制. 方法 雄性SD大鼠144只,随机分为假手术组、模型组、对照组、治疗组,每组36只,各组随机数字表法分成1、3、7 d组,每个时间节点12只.复制脑缺血再灌注(MCAO/R)大鼠模型.治疗组造模后分别于1、3、7 d给予脑络欣通,对照组造模后分别1、3、7 d给予通心络.脑络欣通配制成浓度为0.26 g/mL的溶液,通心络配制成浓度为0.02 g/mL的溶液,均按10 mL/(kg·d)灌胃给药.假手术组及模型组分别1、3、7 d予以等量生理盐水灌胃.采用激光多普勒血流仪(LDF)测定大鼠缺血侧局部脑血流量(rCBF).解剖大鼠取出脑组织并分离海马,采用HE染色法检测大鼠海马DG区;采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)测定miRNA9a、miRNA15a、miRNA124的表达;采用Western blot法检测Wnt3a、Wnt5a、β-catenin的表达. 结果 与假手术组比较,模型组大鼠脑组织明显缺血,脑血流量显著降低(P<0.01),海马中miRNA9a、miRNA15a表达均显著降低(P<0.01), miRNA124显著增高(P<0.01),Wnt3a、Wnt5a、β-catenin表达显著增高(P<0.01);与模型组比较,脑络欣通1、3、7 d组大鼠脑血流量恢复明显,海马中miRNA9a、miRNA15a表达显著增高(P<0.01),miRNA124表达水平显著降低(P<0.01),Wnt3a、Wnt5a、β-catenin表达显著增高(P<0.01). 结论 脑络欣通对于MCAO/R大鼠脑损伤有明显疗效,可通过提高局部脑血流量,提高海马miRNA9a、miRNA15a表达,降低海马miRNA124表达,提高Wnt3a、Wnt5a、β-catenin的表达,起到抑制缺血再灌注对大鼠脑组织损伤的作用.
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脑络欣通药物血清对大鼠胚胎神经干细胞生长分化的影响
目的 研究不同浓度脑络欣通药物血清对体外培养的大鼠胚胎神经干细胞(NSC)生长分化的影响.方法 采用细胞培养、血清药理学、免疫组化等方法,观察不同浓度脑络欣通药物血清对大鼠NSC生长分化的影响.结果 不同浓度脑络欣通药物血清均可在一定程度上促进大鼠NSC生长,以10%的药物血清作用明显.不同浓度药物血清均可诱导绝大多数NSC分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.10%药物血清诱导大鼠NSC向神经元方向分化的比例高,且使分化的神经元在细胞形态学上更为接近发育成熟.结论 脑络欣通有促进NSC生长分化的作用.不同浓度脑络欣通药物血清对离体培养大鼠NSC的生长和分化有不同影响,10%药物血清是佳作用浓度.
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脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证的临床研究
目的评价脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证的临床疗效,观察脑络欣通对梗死后神经功能缺损程度和日常生活能力、中医证候积分及凝血功能变化的影响.方法将符合纳入标准的90例脑梗死恢复期气虚血瘀证患者随机分为脑络欣通组、通心络组、对照组,对照组给予常规治疗,通心络组在常规治疗基础上给予通心络胶囊,脑络欣通组在常规治疗基础上加用脑络欣通.观察治疗前、治疗后14 d、治疗后28 d三个不同时点的神经功能缺损程度评分、日常生活活动能力评分、中医证候积分值、凝血功能等指标变化.结果脑络欣通治疗脑梗死恢复期气虚血瘀证28 d的总有效率为93.3%,优于通心络组和对照组(P<0.05或P<0.01),同时脑络欣通能改善病人的神经功能缺损程度、提高病人日常生活活动能力,明显降低中医证候积分值,改善凝血相关指标.结论脑络欣通对脑梗死恢复期气虚血瘀证患者有较好的治疗作用,其临床疗效优于通心络组.
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脑络欣通对脑缺血模型鼠神经细胞凋亡及eNOS、iNOS蛋白表达的影响
目的:研究脑络欣通对脑缺血再灌注神经细胞凋亡及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响.方法:采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复合制作出大鼠气虚血瘀证模型,然后用线栓法阻断模型鼠大脑中动脉2小时,再灌注1d,3d,用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和iNOS、eNOS蛋白表达.结果:与模型组比较,脑络欣通组模型鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少,eNOS蛋白表达显著增加,iNOS蛋白表达显著减少.结论:脑络欣通可能通过促进eNOS蛋白的表达,抑制iNOS蛋白的表达,是其抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一.
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脑络欣通和左归丸药物血清体外培养神经干细胞的增殖与分化
背景：神经干细胞种子来源数量相对有限，增殖分化量相对较少，如何采取有效的措施促进神经干细胞增殖、分化成为研究的焦点。
目的：比较脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的作用。
方法：体外分离培养SD大鼠胚胎神经干细胞，加入含10%的脑络欣通以及10%的左归丸药物血清培养基中共同培养。采用倒置显微镜及免疫荧光染色观察脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化的作用，采用倒置显微镜、免疫荧光染色方法进行观察比较。
结果与结论：①细胞培养24 h后倒置显微镜下观察细胞开始团生长，并聚集成球，但是细胞直径相对较小，48 h后神经球进一步增大，形态相对规则，但是未见神经球分化；②左归丸组细胞培养5 d后细胞球突起平均长度，显著大于脑络欣通组(P <0.05)；③左归丸药物血清培养下大鼠神经干细胞分化为MAP-2阳性细胞率显著低于脑络欣通组(P <0.05)，分化为胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率显著高于脑络欣通组(P <0.05)；④将培养48 h的神经球分别放2种入药物血清中培养，12 h后发现神经球贴壁生长，少量细胞迁移。随着时间的延长，迁移的细胞数量开始增多；⑤免疫细胞荧光染色下显示2种药物血清培养下神经元突出均相对较多，且突起的长度较长，神经干细胞神经元以及星形胶质细胞比例差异不显著(P >0.05)。⑥结果提示脑络欣通和左归丸药物血清对体外培养的大鼠神经干细胞增殖分化均具备明显的促进作用，均能营造更加适宜神经细胞增殖等微环境，但是2种药物存在明显的差异，通过脑络欣通和左归丸药物诱导神经细胞增殖分化是可行的。 -
脑络欣通对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马神经元内钙离子浓度的影响
目的 观察脑络欣通对血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆功能的作用及对大鼠海马神经元胞内钙离子水平的影响.方法 采取改良双侧颈总动脉结扎方法(2-VO)造模血管性痴呆大鼠;随机分为模型组、脑络欣通组(8.54 g/kg)、石杉碱甲组(0.06 mg/kg)及假手术组;大鼠灌胃给药1月后,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;流式细胞仪检测海马神经元胞内钙离子荧光强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体的表达.结果 与模型组比较,脑络欣通可明显缩短血管性痴呆模型大鼠的逃避潜伏期(P＜0.01);可显著增加血管性痴呆模型大鼠停留在站台所在象限时间及穿越平台的次数(P＜0.01);与模型组比较,脑络欣通可显著减低血管性痴呆模型大鼠海马神经元胞内Ca2水平(P＜0.01);与模型组比较,脑络欣通可增强血管性痴呆模型大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体的表达(P＜0.05).结论 脑络欣通可显著改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力,可能与通过增强大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体表达进而降低海马神经元内Ca2水平有关.
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脑络欣通及其拆方对脑缺血再灌注大鼠NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白表达的影响
目的 观察局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带NGF、PI3K、Akt以及Bad蛋白的动态表达及脑络欣通(黄芪、川芎、三七、蜈蚣等)对其影响.方法 以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注3、7、14 d,用免疫组化染色SABC法分别检测缺血半暗带NGF、PI3K、Akt、Bad的表达.结果 与模型组相比,脑络欣通组在脑缺血再灌注3、7、14 d后,能够明显增加PI3K、Akt的表达(P＜0.01或P＜0.001);在再灌注7、14 d,脑络欣通组NGF蛋白表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01);再灌注14 d,脑络欣通组Bad蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论 脑络欣通能够保护脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织,其作用机制可能与促进NGF表达,激活PI3 K/Akt通路并降低Bad蛋白表达有关.
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脑络欣通对局灶性脑缺血再灌注大鼠热休克蛋白及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响
目的:研究脑络欣通对脑缺血2 h再灌注24 h大鼠热休克蛋白70(heat-shock protein 70,HSP70)及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.方法:将40只Wistar雄性大鼠随机分成5组(n=8):假手术组、模型组、脑络欣通治疗组、脑络欣通预防组、脑安胶囊治疗组.在多因素复合制作气虚血瘀证大鼠模型基础上,用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注大鼠模型.在缺血2 h再灌注24 h取脑,用免疫组化染色法检测缺血侧神经元HSP70和bFGF蛋白表达.结果:与模型组缺血侧比较,脑络欣通预防组和治疗组缺血侧脑组织HSP70的表达明显升高,脑络欣通预防组缺血侧脑组织bFGF的表达有显著增加,且脑络欣通对HSP70和bFGF的作用优于脑安胶囊.结论:脑络欣通可能通过促进缺血侧脑组织神经元HSP70和bFGF的表达而发挥其神经保护作用.
关键词： 脑络欣通 脑缺血 气虚血瘀证 热休克蛋白质70 碱性成纤维细胞生长因子
