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槲芪散对实验性肝损伤保护作用的病理学研究
要研究用D—半乳糖胺作肝毒剂，建立大鼠实验性肝损伤的模型，用具有益气补肾、利湿解毒和活血散结的槲芪散处理实验动物，以病理组织学、电子显微镜等技术观察该方对大鼠肝脏损伤过程的防治作用，以从肝细胞病理组织学形态、超微结构的变化中探讨该方对实验性肝损伤的保护作用。 1 材料方法……
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槲芪散治疗慢性乙型病毒性肝炎30例疗效分析
我国是病毒性肝炎的高发国,以甲、乙、丙三型为主.其中乙型肝炎属世界性疾病,全球约2.8亿人携带乙肝表面抗原(HBsAg),亚洲携带者占2.2亿人,我国属高流行地区,约40～60%人群感染过乙肝病毒(HBV),HBsAg阳性率约10%,其中60%为乙型慢性肝炎患者.随着疫苗接种的普及,发病率有望降低,但感染者的发病以及慢性病人的治疗,其形势不容乐观.
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方剂槲芪散及君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:探讨方剂槲芪散(HQS)及其君药槲寄生提取物多糖和总碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度的影响.方法:采用MTT法测定药物槲芪散(0.3125,0.625,1.25 g/L),槲寄生多糖(0.625,1.25,2.5,5 g/L)及槲寄生总碱(3,6,12 g/L)作用48,72及96 h对细胞(密度1×108/L)增殖的体外抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内活性氧浓度.结果:MTT结果显示HQS及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增殖的作用,呈现出时间-剂量依赖性,高剂量组除了HQS和槲寄生总碱48 h时间点外,A值均较对照组明显降低(HQS 72 h:1.022±0.13 vs 1.207±0.04,P＜0.01;96 h:1.235±0.20 vs 1.602±0.05,P＜0.01;槲寄生多糖48 h:0.570±0.03 vs 0.744±0.01,P＜0.01;72 h:0.803±0.04 vs 1.207±0.04,P＜0.01;96 h:0.860±0.13 vs 1.602±0.05,P＜0.01;槲寄生总碱72 h:0.919±0.14 vs 1.233±0.04,P＜0.01;96 h:0.701±0.07 vs 1.819±0.04,P＜0.01).流式细胞仪检测发现,与对照组相比,经药物作用72 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加(81.0%,86.9% vs 70.0%,P＜0.01),S期(5.9%,7.4% vs 13.5%,P＜0.01)和G2期(13.1%,5.7% vs 16.4%,P＜0.01)比例降低,HQS组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低(1.5% vs 13.5%,P＜0.01),G2期比例增加(28.2% vs 16.4%,P＜0.01);三者均使细胞凋亡增加(HQS:14.8% vs 6.0%,P＜0.01;槲寄生多糖:11.7% vs 6.0%,P＜0.01;总碱:6.7% vs 6.0%,P＜0.05).激光共聚焦显微镜检测发现,当细胞内荧光强度呈现不断升高趋势时,加入3种药物后,荧光强度瞬间下降,然后稳定在一低水平,未见明显波动.当荧光开始稳定在一基线时,加入槲寄生总碱,荧光强度陡然增强后又迅速下降到低水平,并维持一段时间,而加入HQS及槲寄生多糖未见此变化.结论:HQS、槲寄生多糖和总碱均能抑制肝癌细胞增殖并促进凋亡.
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槲芪散联合经动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌65例临床观察
目的 观察中药复方槲芪散联合经动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌对患者生存时间、生活质量及免疫功能的影响.方法 65例原发性肝癌患者用数字表法随机分为槲芪散治疗组和对照组,对照组给予槐耳颗粒,均治疗24周.比较2组患者外周血T淋巴细胞亚群和生活质量(KPS评分)变化、生存时间及临床总证候疗效.结果 槲芪散治疗组在外周血T淋巴细胞亚群和生活质量(KPS评分)变化、生存时间及临床总证候疗效方面均优于对照组.结论 槲芪散联合动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌可明显提高总有效率,改善患者生活质量,延长生存期,提高患者细胞免疫功能,对肝癌的介入治疗可发挥增效减毒的作用.
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槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的 探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.结果 槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势.结论 槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一.
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槲芪散治疗晚期原发性肝癌临床疗效分析
目的:观察钱英教授创制的槲芪散对晚期肝癌患者的临床疗效.方法:对56例晚期原发性肝癌患者分为槲芪散治疗组和基础治疗对照组,分别于基线及治疗4周、12周检测和记录患者临床症状、生活质量、肝功能等情况,与对照组加以比较.结果:治疗4周、12周,治疗组与对照组的症状积分有显著性差异(P＜0.05);治疗组较对照组生活质量评分有显著性差异(P＜0.05),治疗组患者生活质量评分高于对照组.晚期肝癌患者肝功能呈现恶化趋势,治疗第12周时,治疗组总胆红素(TBiL)升高的程度较对照组降低,降低的程度有显著性差异(P＜0.05),但在谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)指标,治疗组与对照组的组间无显著性差异.结论:槲芪散在改善患者症状方面有一定优势,可提高肝癌患者的生活质量,减轻晚期肝癌患者肝功能损害程度.
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槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/ HtrA2表达的影响
目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制.方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达.结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05).结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡.
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中药槲芪散及槲寄生总碱、多糖抑制大鼠肝癌前病变的研究
目的：研究中药槲芪散及君药槲寄生提取物--总碱、多糖对大鼠肝癌前病变的影响。方法：实验分为：单纯肝大切组；模型组：通过Solt－Farber法建立大鼠肝癌前病变；盐水组；槲芪散组；槲寄生总碱组；槲寄生多糖组。 HE染色观察治疗前后肝癌前病变程度；组织化学检测γ－GT表达情况；免疫组织化学及Western blot法检测治疗前后GST－π表达及Hedgehog信号通路表达情况。结果：肉眼观察：单纯肝大切组肝脏表面光滑；模型组肝脏表面布满大小不一结节；治疗组结节数明显减少；HE染色结果显示：单纯肝大切组肝小叶结构清晰完整；模型组大鼠肝细胞肝索结构紊乱，有明显的细胞增生灶；治疗组大鼠异常增生灶明显减少。组织化学、免疫组织化学及Western blot结果显示：单纯肝大切组GST－π及γ－GT只有汇管区有少量表达；模型组GST－π及γ－GT阳性表达灶明显增多；治疗组阳性表达灶数量较模型组明显减少。 Wstern blot结果显示治疗后Hedgehog信号通路中Gli2和Shh下降。结论：中药槲芪散及君药槲寄生提取物--总碱、多糖可能通过Hedgehog信号通路抑制大鼠肝癌前病变，目前正在研究中。
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经动脉化疗栓塞术联合槲芪散或槐耳颗粒治疗原发性肝癌的疗效对比分析
目的:对比分析经动脉化疗栓塞术联合槲芪散或槐耳颗粒治疗原发性肝癌的临床疗效.方法:选取2009年8月至2010年5月我科收治的原发性肝癌患者85例作为研究对象,我们将上述患者随机分成两组,观察组43例,在经动脉化疗栓塞术后再给予槲芪散治疗；对照组42例,在经动脉化疗栓塞术后再给予槐耳颗粒治疗.口服槲芪散或槐耳颗粒的时间为期24周.结果:(1)治疗前,两组患者生存质量评分差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后,观察组生存质量评分显著大于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(2)观察组的治疗有效率显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)观察组治疗后1年的生存率显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:经动脉化疗栓塞术后再联合使用槲芪散可以显著提高原发性肝癌患者的生存质量、治疗有效率、生存率等指标.
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骨髓间充质干细胞在肝癌前病变大鼠肝脏内的分化及槲芪散的影响
目的:探讨骨髓源性肝脏干细胞是否参与肝癌前病变的形成,评价槲芪散对肝癌前病变的干预作用.方法:取80g体重的雄性Wistar大鼠的股骨和胫骨,用PBS冲洗骨髓,按密度梯度离心法原代分离培养骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs),用绿色荧光蛋白(GFP)作为追踪标记物将MSCs进行标记.将大鼠分为6组:即常规饲养组、模型组、模型+MSCs移植组、肝大部切除+ MSCs移植组、槲芪散治疗组8g/kg、槲寄生总碱治疗组8g/kg.除正常对照组外,各组动物在行肝大部切除术后,选择剩余肝脏不同部位表面注射经GFP标记好的MSCs,用荧光显微镜观察GFP标记MSCs并计算标记率.用免疫荧光化学的方法检测肝脏内GFP标记的细胞.用组织化学染色的方法及Western Blot的方法分别检测大鼠肝脏～GT的表达及大鼠肝脏AFP的表达.结果:模型组及及模型+ MSCs移植组的肝脏中-GT灶的数量及面积显著增多,且AFP的表达明显升高,以模型+MSCs移植组的变化更为明显,与槲芪散及槲寄生碱组比较有显著性差异.结论:MSCs参与了肝癌前病变的发生发展过程,而槲芪散及槲寄生总碱能够改善肝脏内环境,影响归巢于肝脏的MSCs的分化方向,诱导MSCs分化为正常肝细胞.
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槲芪散对DEN诱导的肝癌前病变大鼠肝脏血流的影响
目的:研究槲芪散对肝癌前病变大鼠肝脏血流的影响,探讨槲芪散干预肝癌前病变的机制.方法:依据Solt-Farber 程序建立肝癌前病变动物模型,应用高分辨率超声影像系统检测大鼠肝脏门静脉、肝静脉内径及血流速度；利用酶组织化学染色的方法检测大鼠肝脏组织能量代谢相关酶G-6-Pase葡萄糖-6-磷酸酶、SDH琥珀酸脱氢酶、ATPase三磷酸腺苷酶的活性.结果:肝癌前病变大鼠的门静脉内径及门静脉血流速度增加、肝静脉内径及肝静脉血流速度减少.经槲芪散干预的肝癌前病变大鼠的门静脉内径及门静脉血流速度减少、肝静脉内径及肝静脉血流增加.肝癌前病变大鼠能量代谢相关酶G-6 -Pase葡萄糖-6-磷酸酶、SDH琥珀酸脱氢酶、ATPase三磷酸腺苷酶的活性发生变化,槲芪散对此变化有干预作用.结论:槲芪散可以减轻肝癌前病变大鼠肝脏的瘀血状态,促进肝脏糖异生及有氧氧化,改善肝脏能量代谢.
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槲芪散对肝癌前病变大鼠肝脏线粒体结构的影响
目的:探讨槲芪散对肝癌前病变大鼠肝脏线粒体结构的影响.方法: 用二乙基亚硝胺建立Solt-Earber二步肝癌前短期动物模型,以槲芪散对肝癌前病变大鼠进行治疗.通过电镜观察大鼠肝脏的线粒体结构变化.结果:二乙基亚硝胺所引起的肝癌前病变大鼠可出现肝细胞线粒体肿胀、空泡和嵴消失,槲芪散可减轻大鼠肝癌前病变模型肝细胞内线粒体肿胀.结论:槲芪散可减轻由二乙基亚硝胺所引起的肝癌前病变大鼠肝脏线粒体结构的损伤.
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槲芪散及其君药槲寄生提取物抑制人肝癌细胞生长的机制研究
目的:探讨槲芪散(HQS)及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用与细胞内游离钙离子浓度的影响.方法:采用MTT法测定对细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.结果:流式细胞仪检测发现,经药物作用48h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期和C2期比例降低,HQS组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,三者均使细胞凋亡增加.激光共聚焦显微镜检测发现,加入不同浓度的HQS、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本持续维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余两组未见明显下降趋势.结论:HQS、槲寄生多糖和总碱均能抑制肿瘤细胞增殖,促进凋亡,并且初步认为药物引起胞内钙超载可能是三者诱导SMMC-7721凋亡的机制之一.
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槲芪散及其君药槲寄生提取物对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响
目的:研究槲芪散及其君药槲寄生对人肝癌细胞生长和端粒酶活性的影响.方法: 用不同浓度的槲芪散及其君药槲寄生提取物作用于人肝癌细胞(SMMC-7721)后,用四甲基偶氮唑比色法(MTT)检测SMMC-7721细胞增殖.用实时荧光定量PCR法检测SMMC-7721的端粒酶活性.结果: (1)MTT结果显示槲芪散、槲寄生多糖和总碱能抑制SMMC-7721细胞,随药物作用时间的延长作用增强.(2)槲芪散、槲寄生多糖和槲寄生总碱能明显降低SMMC-7721端粒酶的活性.结论: 槲芪散及槲寄生多糖和总碱均能抑制SMMC-7721增殖,降低SMMC-7721端粒酶的活性.
