首页 > 文献资料
-
RP-HPLC同时测定葛根异黄酮提取部位中葛根素、大豆苷、染料木苷和大豆苷元的含量
目的:建立控制葛根异黄酮提取部位的定性和定量分析方法.方法:用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),KromasilKR100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-0.03 mol·L-1醋酸铵,梯度洗脱,流速0.7 mL·min-1,检测波长250 nm,柱温30℃,对葛根异黄酮部位中的主要成分葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元进行定量测定.结果:色谱峰分离情况良好,葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆苷元可达到定性、定量要求.葛根素在0.13～0.66μg、大豆苷在0.03～0.14μg、染料木苷在0.03～0.16μg、大豆苷元在0.02μ0.12μg范围内,线性良好(r>0.9995),平均回收率为98.1%～99.3%.结论:所建方法准确、简便,重复性好,可用于葛根异黄酮部位中主成分的定性、定量考察.
-
HPLC法同时测定血脂康胶囊中3种异黄酮和洛伐他汀的含量
目的:建立血脂康胶囊中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素和洛伐他汀的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,YMC-C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脱[0 min(25%A)→45 min(84%A)→55 min(25%A)],流速1.0 mL·min-1,进样量10 μL,256 nm检测.结果:大豆苷元、黄豆黄素、染料木素和洛伐他汀进样浓度分别在13.6×10-3～81.6×10-3 μg(r=1.0000),8.0×10-3～48.0×10-3 μg(r=1.0000),24.0×10-3～144.0×10-3 μg(r=1.0000),4.50～8.25 μg(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率分别为99.1%,98.5%,98.2%,99.6%,RSD分别为1.75%,1.37%,1.54%,1.49%(n=5).结论:方法操作简便,准确,重复性好,可用于同时测定血脂康胶囊中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素和洛伐他汀的含量.
-
葛根芩连汤及微丸中葛根素、大豆苷元的HPCE分析
目的:建立高效毛细管电泳法分离葛根异黄酮并测定葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元的方法.方法:以555.8μg·mL-1苄基三乙基氯化铵为内标,缓冲液由85%的硼砂(30 mmol·L-1,pH=9.2)与15%甲醇组成;未涂层融硅毛细管(52 cm×50μm,有效长度30 cm),分离电压18 kV,进样压力6.7kPa,进样1 s;检测波长254 nm,温度30℃.结果:上述条件下,葛根芩连汤及微丸中葛根素和大豆苷元在8 min内得到很好的分离,葛根素和大豆苷元的加样回收率分别为99.75%和98.59%;RSD分别为2.0%和1.6%.结论:该方法具有良好的精密度和回收率,可为葛根制剂中葛根素及大豆苷元的含量测定提供参考.
-
RP-HPLC法测定不同栽培品种粉葛中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量
目的:采用反相高效液相色谱方法测定栽培粉葛中葛根素、大豆苷和大豆苷元含量,为栽培粉葛质量控制提供方法学参考.方法:采用Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为A-B二元体系,A相为甲醇,B相为1%醋酸.梯度洗脱程序为:0～13 min,保持25%A;13～15 min,A线性增至40%;15～30 min,A线性增至60%;30～40 min,A线性降至25%,洗脱时间为40 min.流速为1 mL·min-1,进样量5 μL.柱温为室温,检测波长250 nm.结果:葛根素、大豆苷和大豆苷元分别在0.21～1.89,0.05～0.45,0.065～0.585 μg范围内呈良好线性关系;相关系数r分别为0.9997,0.9996,0.9996.其平均回收率在99.6%～100.9%范围内,RSD均小于2%.在测定的3个样品中,小叶粉葛中葛根素、大豆苷和大豆苷元含量均高.结论:建立的方法简便、准确,分离效果好,可以用于粉葛质量控制.
-
葛根芩连片多成分含量测定的研究
目的:建立葛根芩连片中14个特征性成分的HPLC含量测定方法,并测定11家生产企业的葛根芩连片含量.方法:采用Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm,5μn)反相高效液相色谱柱,以乙腈-0.02 mol· L-1醋酸铵+0.03％三乙胺溶液(用冰醋酸调pH4.3)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,葛根素、大豆苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、大豆苷元、甘草酸铵、黄芩素8个成分检测波长250 nm,汉黄芩素检测波长280 nm,表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱5个成分检测波长346 nm.结果:葛根素、大豆苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、大豆苷元、盐酸巴马汀、甘草酸铵、盐酸小檗碱、黄芩素、汉黄芩素进样量分别在146.26～5 850.24、24.13～965.04、18.45～738.00、79.18～3 167.32、9.57～382.80、4.76～190.40、2.57～102.80、13.41～536.40、10.60～424.00、11.33～453.22、12.08～483.20、46.73～1 869.25、20.28～811.20、12.11～484.50 ng范围内与峰面积呈良好线性关系(r＞0.999 0);平均加样回收率(n=6)分别为2.18％、1.79％、1.81％、1.68％、2.27％、2.13％、1.96％、1.07％、0.93％、0.61％、2.92％、0.77％、2.79％、0.62％;精密度、重复性、稳定性良好,RSD均小于3％.用该方法测定11家生产企业生产的16批葛根芩连片,除一批样品的汉黄芩苷未被检出外,其余企业14种成分均有检出,但含量存在差异.结论:该方法准确易行,可用于该品种的整体质量控制.
-
HPLC波长切换法同时测定舒糖络颗粒中4种成分的含量
目的:建立高效液相色谱波长切换法同时测定舒糖络颗粒中葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、大豆苷元4个活性成分的含量.方法:采用Therno C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱(0～10 min,20％ A→30％A;10～ 20 min,30％ A;20～ 25 min,30％ A→40％ A;25～ 30 min,40％ A→50％ A;30 ～ 35 min,50％A→20％A),流速1.0 mL·min-,柱温30℃,检测波长为250 nm(葛根素、大豆苷、大豆苷元)、330 nm(毛蕊花糖苷).结果:葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、大豆苷元的进样量分别在0.590 ～7.375 μg(r =0.999 9),0.110～1.375 μg(r=0.999 6),0.081 1～1.015 μg(r=0.999 9),0.033 8 ～0.422 5 μg(r=0.999 9)范围内与峰面积线性关系良好;检测限(信噪比为3:1)分别为0.048 5、0.012 6、0.016 2、0.005 6 mg·L-1,定量限(信噪比为10:1)分别为0.147 5、0.036 6、0.0406、0.0112mg·L-1;中间精密度的RSD分别为1.3％、0.80％、1.7％、2.6％;平均加样回收率(n=9)为96.11％、104.0％、99.29％、101.5％.3批样品中葛根素、大豆苷、毛蕊花糖苷、大豆苷元的含量分别为6.970～7.038、1.802～1.871、1.438 ～1.470、0.399～0.460 mg·g-1.结论:本法经方法学验证可用于舒糖络颗粒的多指标性成分的检测.
-
超高效液相色谱-串联质谱法测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯在大鼠肝微粒体中的含量
目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠肝微粒体中亚硫酸氢钠穿心莲内酯.方法:以肝微粒体孵育液为基质,通过添加标准溶液的方法配制含亚硫酸氢钠穿心莲内酯和内标物大豆苷元的样品,选用甲醇为沉淀剂,经离心除去肝微粒体孵育液中的蛋白质,上清液用于目标物的检测.采用Thermo Hypersil Gold C18分析柱(50mm×2.1 mm,1.9μm),预柱:Phenomenex Security Guard C18(4 mm ×3.0 mm),以甲醇-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速:0.2 mL·min-1,柱温:35℃,整个分析时间为6 min.采用电喷雾负离子(ESI-)模式电离,选择反应监测(SRM)模式检测,以大豆苷元作为内标物质进行定量.用于监测的离子分别为亚硫酸氢钠穿心莲内酯m/z 413.2→287.2/331.2和大豆苷元m/z 253.1→132.2,用基质匹配标准溶液法进行定量.结果:肝微粒体孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的质量浓度在0.05～50 μmol· L-1范围内线性良好(r=0.9977,权重系数W:1/x2)；孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检出限(信噪比为3)为0.02μmol· L-1;其平均回收率在85％～ 115％之间；日内及日间的相对标准偏差(RSD)均小于15％,满足生物样品检测的要求.结论:将该方法用于肝微粒体孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检测.该方法选择性强、灵敏度高、操作简便快速、重现性好,适用于亚硫酸氢钠穿心莲内酯体外代谢动力学等方面的研究.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱法 电喷雾离子化 亚硫酸氢钠穿心莲内酯 大豆苷元 肝微粒体 大鼠 代谢 -
UPLC-MS/MS法测定血浆中新型酪氨酸酶抑制剂UP302的含量
目的:建立超高效液相色谱-串联质谱测定血浆中新型酪氨酸酶抑制剂UP302的方法,并用于研究UP302在大鼠、狗、猴和人血浆中的稳定性.方法:血浆中加入内标大豆苷元经2倍体积甲醇沉淀后进行分析.采用Hypersil Gold C18(50mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,流动相为甲醇(A) -5 mmol·L-1甲酸铵水溶液(B),梯度洗脱,梯度流速恒定为0.2 mL·min-1,柱温为30℃,整个分析时间为6min.采用负离子电喷雾离子化电离源和选择反应监测模式进行检测.结果:在5～2000 ng·mL-的浓度范围内,标准曲线线性关系良好(r =0.9998)；血浆中UP302低定量下限为5ng·mL-1;本方法日内日间准确度在99.2％～107.3％,日内日间精密度均小于9.3％.结论:本方法灵敏度高,重现性好,操作简便,可用于血浆中UP302浓度的测定.
-
葛属植物中3种异黄酮成分分析
目的:测定7种葛属植物根中异黄酮成分的含量.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长250 nm;葛根素、大豆苷、大豆苷元的加样回收率±RSD分别为(105.7±4.6)%,(105.4±6.9)%,(104.5±9.2)%.结果:葛属植物中3种异黄酮成分含量差异较大,野葛、粉葛和峨嵋葛中含有的葛根素和大豆苷比其它几种葛属植物高,野葛中葛根素的含量高;从液相色谱图中观察到不同产地野葛的图谱与其它种的葛属植物有明显区别.结论:异黄酮成分可作为评价葛属植物质量的参考依据.
-
HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量
目的:HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～5 min,93％B;5～ 20 min,93％ B→89％B;20 ～ 23 min,89％ B→85％B;23 ～ 30 min,85％ B→83％B;30 ～ 35 min,83％ B→77％B;35 ～ 50min,77％B→52％B;50 ～ 53 min,52％ B→15％ B;53 ～55 min,15％B),流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm(0 ～35 min,测定葛根素和大豆苷)、270 nm(35 ～48min,测定黄芩苷和大豆苷元)、290 nm(48 ～50.5 min,测定桂皮醛)、278 nm(50.5 ～ 55 min,测定黄芩素),柱温40℃.结果:葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素进样量分别在0.01240～2.480、0.004208 ～0.8416、0.005503 ～1.101,0.002132 ～0.4264、0.0007120 ～0.1424、0.0007980 ～0.1597μg范围内与峰面积均有较好的线性关系,平均加样回收率均在99.0％ ～101.2％范围内,RSD均小于1.3％.结论:经方法学验证,本法可用于小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量测定,为小儿柴桂退热颗粒全面的质量控制提供科学依据.
-
大豆苷元对去卵巢大鼠血脂及肝脏ERα和LDLR表达的影响
目的:探讨不同剂量大豆苷元对绝经后血脂的保护作用.方法:选用4月龄SD雌性大鼠66只,随机分为:假手术组(Sham)、去势组(OVX)、戊酸雌二醇组(E2)、大豆苷元高剂量(H-Dai,200 mg/kg)组、中剂量(M-Dai,50 mg/kg)组和低剂量(L-Dai,10 mg/kg)组,每组11只.于去势术后4周开始分别给予相应的药物灌胃,3个月后处死大鼠,取血和肝脏,检测血清甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c),以及肝脏Erα和LDLRmRNA的表达量.结果:与OVX组相比,大豆苷元可以降低血清LDL-c,且随着剂量的增加其作用更明显(P<0.01);大剂量可以降低血清TG(P<0.05).大豆苷元还增加肝脏Erα和LDLRmRNA的表达量,且也有剂量依赖效应,低、中剂量组与高剂量组差异显著(P<0.01).结论:大豆苷元对去势大鼠血脂有一定保护作用,其降低血清LDL-c的作用可能是通过Erα途径增加LDLR的表达而实现的.
-
大豆苷元对乳腺癌生长和血管生成的影响
目的：利用7，12-二甲基苯蒽(DMBA)诱导的大鼠乳腺癌模型，探讨大豆苷元对乳腺癌肿瘤血管生成的抑制作用及机制。方法：建立DMBA诱导的乳腺癌大鼠模型，随机分为对照组、10、25、50和75 mg/kg大豆苷元灌胃组，观察各组肿瘤生长情况，测定肿瘤微血管密度(MVD)，并计算各组肿瘤的增殖指数和凋亡指数；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测心脏离心血标本中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮抑素的水平。结果：与对照组比较，50和75 mg/kg大豆苷元组大鼠瘤体质量显著减轻(P<0.05)，75 mg/kg大豆苷元组的凋亡指数增加，其抑制肿瘤血管生成的效果显著(均<0.05)。与对照组比较，25、50和75 mg/kg大豆苷元组的VEGF水平降低，且呈剂量依赖性(P<0.05)，同时50和75 m g/kg大豆苷元组的内皮抑素水平增加，差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论：较高剂量(≥50 m g/kg)的大豆苷元能使大鼠乳腺肿瘤的微血管密度下降，可有效抑制乳腺肿瘤生长。
