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茉莉酸甲酯影响阳春砂挥发性萜类代谢和基因转录
目的：研究茉莉酸甲酯对阳春砂挥发性萜类合成的影响，深入了解挥发性萜类生物合成的分子调控机制。方法：用不同浓度茉莉酸甲酯溶液喷施阳春砂的叶片和果实，用微波法提取果实中的挥发性萜类成分，应用气相色谱-质谱（GC-MS）联用技术检测挥发性萜类成分的变化，通过转录组测序构建cD-NA文库并进行生物信息学分析。结果：果皮和种子团中分别检测到20种和33种挥发性萜类成分，600μmol·L-1 MeJA喷果24 h后果皮和种子团中大部分挥发性萜类成分的积累量明显增加，如乙酸龙脑酯、樟脑和龙脑等；而200μmol·L-1 MeJA喷施叶片或果实对果皮及种子团中不同挥发性萜类含量的影响存在差异，且200μmol·L-1 MeJA喷施果实比喷施叶片更能提高种子团中挥发性萜类成分的积累量。此外，转录组测序共获得68168个Unigene，通过与公共数据库比对，共有48627个Unigene获得注释。对KEGG代谢通路的注释结果进行初步分析，发现挥发性萜类代谢密切相关的Unigene有208个，MYC2类转录因子（JA信号转导的重要调控因子）相关的Unigene有22个。结论：MeJA能有效调控阳春砂中挥发性萜类成分的代谢，转录组测序获得了多个与挥发性萜类合成相关的候选基因，为深入开展阳春砂挥发性萜类生物合成相关功能基因的发掘及调控研究提供了丰富的数据资源。
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微量元素肥料和茉莉酸甲酯处理对金银花有效成分含量的影响
目的:应用高效液相色谱法(HPLC),研究不同微量元素肥料(微肥)、不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)处理对金银花中7种有效成分含量的影响.方法:应用转换波长的高效液相色谱分析方法,色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为0.3％甲酸水溶液(A)和乙腈(B),进行梯度洗脱；流速1mL/min;采用VWD紫外检测器转换波长(330、350nm)检测；柱温为常温.结果:不同微肥、不同浓度MeJA处理能不同程度地影响金银花中各个成分或总成分含量.结论:不同微肥处理中,Fe处理可同时增加绿原酸、木犀草苷含量；不同浓度MeJA处理中,浓度为800、1600μmol/L的MeJA可增加绿原酸及总成分含量.
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非生物诱导子茉莉酸甲酯和水杨酸对半夏悬浮细胞中生物碱代谢的影响
目的：研究非生物诱导子茉莉酸甲酯（MeJA）和水杨酸（SA）对半夏悬浮细胞系生物碱含量及相关酶活性的影响。方法以叶柄来源的愈伤组织建立半夏悬浮细胞系，调查不同培养时间、MeJA和SA浓度对细胞中生物碱含量的影响，并分析生物碱合成相关酶（IMP脱氢酶、sAMP合成酶）的活性。结果悬浮培养21 d时，悬浮细胞干重（DW）为培养前9倍，且生物碱总量为培养前3倍。MeJA和SA处理均能显著促进生物碱在半夏悬浮细胞中累积。150μmol/L MeJA处理组生物碱含量为对照组3.6倍，达4.7 mg/g DW；50μmol/L SA处理使悬浮细胞生物碱含量达到对照组的2.5倍。100μmol/L MeJA和50μmol/L SA处理使IMP脱氢酶比活力分别为对照组3.0、3.7倍，150μmol/L MeJA和100μmol/L SA处理使sAMP合成酶比活力分别为对照组2.6、4.4倍。结论添加适量外源诱导子MeJA和SA能促进半夏悬浮细胞中生物碱的累积。
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茉莉酸甲酯对丹参毛状根中丹参酮类成分积累和释放的影响
目的:研究茉莉酸甲酯(methy jasmonat,MI)对丹参酮类成分的积累和向培养基中的释放的影响.方法:6-7 V悬浮振荡培养ATCC15834农杆菌诱导的丹参毛状根培养18 d后,液体培养基中加入化学诱导子--茉莉酸甲酯,采用HPLC的方法,测定MJ处理后不同时间段(2,6,9 d)丹参毛状根中隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量以及其在培养基中的含量.结果:毛状根经MJ处理后2,6,9 d隐丹参酮的含量分别达0.039,0.204,0.572 mg·g-1,分别是同时期未经MJ处理的2.2,8.5,23.8倍;丹参酮ⅡA的含量达0.251,0.601,1.563 mg·g-1,分别是同时间期未经MJ处理丹参毛状根的1.9,4.1,6.2倍.结论:MJ能显著促进丹参毛状根中丹参酮类成分的积累并向培养基中释放.
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茉莉酸甲酯对高山红景天愈伤组织中红景天苷和多糖积累的影响
目的:探明茉莉酸甲酯(MeJA)对高山红景天愈伤组织生物量及有效物质积累的影响,旨在为其产品生产提供一种新的材料来源.方法:在3L气球型气升式生物反应器内培养高山红景天愈伤组织20 d后添加MeJA,研究了MeJA处理时间及浓度对愈伤组织生物量、红景天苷和多糖积累及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性的影响.结果:用125 μmol·L-1的MeJA处理时发现0～6d愈伤组织生物量无明显变化,但超过6d后显著减少,MeJA处理4d时红景天苷和多糖的含量及生产量高,同时SOD和POD活性达大.MeJA浓度对愈伤组织生物量和活性物质积累影响很大,浓度超过125 μmol·L-时愈伤组织生物量明显减少;红景天苷和多糖的大积累量分别出现在225,275 μmol·L-1的MeJA浓度处理.对SOD和POD活性测定结果发现,在MeJA 225 μmol·L-1处理中出现峰值.对高山红景天愈伤组织中红景天苷及多糖含量与野生植株进行比较的结果,愈伤组织中红景天苷和多糖含量显著高于植株的根和茎叶,愈伤组织中红景天苷的含量分别是根、茎叶的1.1倍、2.4倍;多糖含量分别是根、茎叶的3.6,8.0倍.结论:高山红景天愈伤组织在气球型气升式生物反应内培养20 d后加入225 μmol·L-1的茉莉酸甲酯后继续培养4d有利于红景天苷及多糖的积累,且这两种活性物质的含量明显高于野生植株.因此,通过生物反应器培养愈伤组织是一种获得大量高山红景天活性物质的有效方法,可作为高山红景天产品生产的另一原材料来源.
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诱导子对丹参毛状根酚酸类和丹参酮类成分积累的影响
目的:考察生物诱导子真菌菌丝提取物和非生物诱导子茉莉酸甲酯及二者协同作用对丹参毛状根酚酸类和丹参酮类成分积累的综合性影响.方法:在继代培养21 d的丹参毛状根中添加不同的诱导子及诱导子组合,分别测定不同收获期毛状根的生长量和两大类成分的积累量.结果:3种处理均显著抑制了丹参毛状根的生长,促进了隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ的积累,但对酚酸类成分的积累却有不同的作用,茉莉酸甲酯可以促进酚酸类成分的积累,真菌诱导子在一定程度上抑制了酚酸类成分的积累.结论:真菌诱导子和茉莉酸甲酯以及二者协同作用对丹参毛状根不同成分的积累具有不同的影响,3种处理条件下水溶性成分的积累和脂溶性成分的积累基本不存在关联性.
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茉莉酸甲酯对曼陀罗毛状根中主要莨菪烷类生物碱成分积累和释放的影响
目的:研究茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MJ)对曼陀罗毛状根中主要次生代谢产物东莨菪碱和莨菪碱成分的积累和向培养基中的释放的影响.方法:1/2 MS液体培养C58C1农杆菌诱导的曼陀罗毛状根培养18 d后,液体培养基中加入化学诱导子——茉莉酸甲酯,采用HPLC测定MJ处理后不同浓度梯度及不同时间段(0,3,6,9,12 d)曼陀罗毛状根中东莨菪碱和莨菪碱的含量以及其在培养基中的含量.结果:曼陀罗毛状根经MJ处理后3,6,9,12 d的东莨菪碱的质量分数分别达0.419,0.439,0.431,0.374 mg·g-1,分别是同时期未经MJ处理的1.36,1.42,1.17,1.12倍；莨菪碱的质量分数达1.493,0.817,0.723,0.698 mg·g-1,分别是同时期未经MJ处理曼陀罗毛状根的2.28,1.11,0.63,0.70倍.结论:MJ能显著促进曼陀罗毛状根中东莨菪碱成分的积累并向培养基中释放；MJ能显著促进处理3d和6d后曼陀罗毛状根中莨菪碱成分的积累并向培养基中释放.
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高良姜1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶cDNA克隆与表达调控
目的:克隆高良姜1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)的全长cDNA,分析其组织表达模式及茉莉酸甲酯( MeJA)的调控模式,为高良姜有效成分的基因调控及基因工程育种奠定基础.方法:应用简并引物RT-PCR和RACE技术从高良姜根茎中克隆DXR全长cDNA,运用生物信息学解析其编码的蛋白质结构,实时荧光定量PCR法分析其组织表达模式和MeJA的调控模式.结果:克隆了高良姜DXR全长cDNA序列(AoDXR),开放读码框长1419 bp,编码的蛋白质含472个氨基酸残基、相对分子质量约51.48 kDa.推导的AoDXR氨基酸序列与其他高等植物的DXR具有高度的序列一致性(73％～99％).AoDXR在高良姜叶片中表达量强,而在根茎中表达量较弱.外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理提高了根茎AoDXR的转录水平和1,8-桉油精含量.结论:AoDXR在高良姜根茎中的表达水平与1,8-桉油精的积累不一致,反应了AoDXR催化的终产物的多样性和表达调控的复杂性.外源MeJA可促进根茎AoDXR的表达和1,8-桉油精的积累,对提高药材品质有应用价值.
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茉莉酸通路参与Hpa1诱导的欧洲花楸细胞植保素生物合成
Hpa1是一种Harpin蛋白,可诱导植物的防御响应机制.以欧洲花楸悬浮细胞为材料,研究Hpa1粗提物(Hpa1 CE)对其次生代谢产物合成的影响以及茉莉酸(jasmonate,JA)信号通路是否参与相关信号的传导.结果显示,Hpa1 CE可诱导欧洲花楸细胞合成植保素,主要是异欧花楸素及其糖苷;Hpa1 CE处理使细胞内茉莉酸甲酯(MeJA)合成增加,同时细胞内异欧花楸素大量合成.向欧洲花楸细胞中同时添加Hpa1 CE和JA通路抑制剂salicylhydroxamic acid(SHAM),与Hpa1 CE组相比,细胞内合成的MeJA和异欧花楸素的量都大为降低.实时荧光定量PCR结果显示Hpa1 CE诱导后,JA通路中JAZ表达下调而myc2表达上调.因此Hpa1 CE处理导致欧洲花楸悬浮细胞建立了防御机制,茉莉酸通路参与了Hpa1 CE诱导的欧洲花楸细胞内植保素的生物合成.该研究首次从植物次生代谢的角度研究茉莉酸通路在植物防御机制中作用,为全面理解植物应激响应机制提供了线索.
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茉莉酸甲酯对颠茄托品烷类生物碱代谢及相关基因表达的影响
莨菪碱和东莨菪碱是颠茄中重要的托品烷类生物碱次生代谢产物,具有多方面药理价值.该研究采用土培法种植颠茄实生苗,设置不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)处理,分析不同浓度MeJA对颠茄莨菪碱和东莨菪碱的含量、生物碱合成的上游物质以及关键酶基因表达量的影响.结果表明,MeJA浓度为200 μmol·L-时更有利于颠茄生物碱的积累;对腐胺(Put)及其合成的关键酶活性的测定发现,Put的含量与其合成的关键酶活性的变化基本一致,都随MeJA浓度升高先增加后降低,Put含量在MeJA浓度为200 μmol·L-1时达到高;对PMT,TRⅠ,H6H表达量的检测发现,200 μmol· L-MeJA处理下叶片和根部TRⅠ,H6H基因均有较高的表达水平,PMT基因表达量无明显变化趋势.以上结果说明,MeJA对颠茄莨菪碱和东莨菪碱合成的调控主要依靠影响关键酶基因的表达量发挥效用,适宜浓度茉莉酸甲酯提高了颠茄叶片TR Ⅰ和根部TR Ⅰ与H6H表达量,从而促进莨菪碱的合成和莨菪碱向东莨菪碱的转化,提高颠茄体内莨菪碱和东莨菪碱的积累.
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茉莉酸甲酯对胃癌SGC7901细胞生长抑制机制探讨
目的:探讨茉莉酸甲酯(MJ)对胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用及其机制.方法:四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞生长活性；Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡细胞核的形态学变化；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡率；蛋白质印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达.结果:MTT法显示,MJ对胃癌SGC790I细胞生长有显著抑制作用,且呈剂量-时间依赖关系,0.5、1.0和2.0 mmol/L MJ作用6h后,抑制率分别为(7.10±0.84)％、(18.22±1.82)％和(26.89±1.56)％,溶剂对照组为(0.43±0.26)％,顺铂(DDP)组为(10.44±1.17)％,总体比较差异有统计学意义(F=232,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均＜0.01；采用MJ上述3种浓度作用12h后,抑制率分别为(12.44±1.20)％、(32.70±1.29)％和(52.94±2.29)％,溶剂对照组为(0.31±0.41)％,DDP组为(22.60±1.97)％,总体比较差异有统计学意义(F=1013,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均＜0.01;MJ三种浓度作用24h后,抑制率分别为(17.37±1.95)％、(41.79±4.40)％和(71.93±4.65)％,溶剂对照组为(0.34±0.21)％,DDP组为(27.72±2.45)％,总体比较差异有统计学意义(F=444,P=0.000),各组间比较差异均有统计学意义,P值均＜0.01;其中以浓度为2.0mmol/L MJ作用24h后,对SGC7901细胞的抑制率效果佳.荧光染色法观察MJ能够诱导人胃癌SGC7901细胞株的凋亡.流式细胞检测显示,MJ可促进胃癌SGC7901细胞的凋亡,凋亡率为(68.14±7.91)％；与溶剂对照组(6.98±1.45)％相比,差异有统计学意义,P=0.013.蛋白质印迹法检测显示,MJ可上调凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达；事先采用辣椒素受体拮抗荆(Cap)预处理,MJ的抗胃癌SGC7901细胞的效应可被消除,与MJ单独给药组相比,MJ对癌细胞的生长抑制率下降为(38.79±2.77)％,P=0.05;凋亡细胞明显减少；肿瘤细胞凋亡率降为(39.81±4.57)％,P=0.045;凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9表达也降低.结论:MJ有显著抑制胃癌SGC7901细胞增殖的作用；辣椒素受体(VRl)可能介导了MJ对SGC7901细胞增殖的抑制作用,使细胞内凋亡信号通路激活,促进了肿瘤细胞的凋亡.
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茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制
探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响.1～2 mmol*L-1茉莉酸甲酯处理BE(2)-C细胞6～24 h后, MTT法检测瘤细胞生长活性, 克隆形成实验检测细胞增殖能力, PI单染流式细胞术检测细胞周期, AO/EB荧光染色法、 Hoechst 33258荧光染色法、 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡, 半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测细胞周期素D1(cyclin D1)、 X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)及survivin表达.结果表明, 各浓度茉莉酸甲酯作用后, BE(2)-C细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制, 1, 1.5和2 mmol*L-1茉莉酸甲酯作用24 h后, 细胞生长抑制率为20.6%～85.5%(P<0.01), IC50为1.35 mmol*L-1;S期细胞比率增高, 部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变, 早期凋亡细胞(FITC+ PI-)分别占13.51%、 17.32%和24.59%(均P<0.01),细胞死亡率分别为29.36%、 54.73%和75.52%(均P<0.01);XIAP和survivin表达分别下调18.5%～68.9%和22.4%～48.7%(均P<0.05), 而cyclin D1表达无显著变化(P>0.05).可见, 茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长活性, 下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一.
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丹参毛状根中多种丹酚酸类化合物的鉴定与生物合成
应用发根农杆菌9402侵染丹参叶片获得了一株可以稳定产生多种丹酚酸类化合物的丹参毛状根.除迷迭香酸和丹酚酸B外还含有丹酚酸K、丹酚酸L、乙基丹酚酸B、甲基丹酚酸B以及一个分子量为538的未知化合物(化合物538).LC-MS对这些化合物进行了鉴定.对茉莉酸甲酯(MeJA)和酵母诱导子对几种主要化合物积累的影响进行了分析:MeJA促进丹酚酸B、迷迭香酸、丹酚酸K和化合物538的积累,分别从干重4.21％、2.48％、0.29％和0.01％提高到7.11％、3.38％、0.68％和0.04％；酵母诱导子提高迷迭香酸含量,从干重2.83％上升到5.71％,抑制了丹酚酸B、丹酚酸K和化合物538的生物合成.实验结果表明所获得的丹参毛状根可以作为生产丹酚酸B、迷迭香和丹酚酸K以及化合物538的替代资源.对这些酚酸类化合物对诱导子的生物累积效应变化趋势进行分析推测:丹参毛状根中丹酚酸K和化合物538可能是从迷迭香酸合成丹酚酸B的中间产物.
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CtCHS4响应茉莉酸甲酯诱导促进了红花醌式查尔酮类化合物的积累
黄酮类化合物特别是查尔酮类如羟基红花黄色素A、红花红色素等是红花的主要药效成分,研究红花黄酮类的生物合成途径,对于定向调控红花的品质具有重要意义.作为调控黄酮类成分合成的入口酶,查尔酮合酶(CHS)在黄酮类化合物的合成过程中起着重要作用.但到目前为止,CHS在红花黄酮类化合物生物合成过程中的作用尚不十分清楚.茉莉酸甲酯JA/MeJA作为植物信号调节物质可以激活植物体内CHS基因表达.本研究在前期阐明红花的1个CHS基因CtCHS1功能的基础上,作为延续性工作,继续对红花中的其他CHS基因CtCHS2和CtCHS4进行研究.应用MeJA刺激花冠,分别于刺激后0、3、6、12h不同时间点采用qRT-PCR法分析CtCHS2和CtCHS4的相对表达量,采用UHPLC/Q-TOF-MS技术分析红花中次生代谢产物的变化.结果表明,CtCHS4的表达量响应MeJA的诱导在3、6h均明显升高,而CtCHS2的表达量则在诱导后表现出降低的趋势;同时,MeJA诱导后,芦丁、羟基红花黄色素A、D-苯丙氨酸、山柰酚-3-O-β-芸香糖苷、红花红色素的积累量明显提高,特别是羟基红花黄色素A的积累量在诱导后3、6、12h均显著性的提高(P≤0.05或0.01),而对山柰酚、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、槲皮素-3-β-D-葡糖苷的积累量的影响则不明显.Pearson相关分析结果表明,羟基红花黄色素A、红花红色素的积累量与CtCHS4的表达量均呈显著性正相关(r≥0.8).提示CtCHS4可能是形成羟基红花黄色素A和红花红色素的关键基因,在红花查尔酮类成分的积累中起着重要作用.CtCHS4-pMAL-C5X重组质粒在BL21 (DE3) PlyS原核表达宿主菌中成功表达出CtCHS4活性蛋白,在体外催化底物香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A生成了产物柚皮素.本研究结果进一步完善了红花中CHS基因的功能,为终阐明红花查尔酮类化合物生物合成途径的关键基因积累了资料.
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丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶的cDNA全长克隆及其诱导表达分析
本文首次从丹参毛状根中克隆得到了丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(简称为SmCMK)的编码基因的全长cDNA序列,GenBank注册号:EF534309.KEGG软件分析表明:SmCMK位于二萜类化合物生物合成的上游途径--非甲羟戊酸途径(DXP),是DXP途径上唯一的激酶.所克隆的SmCMK基因序列全长1 493 bp,包括完整的开放阅读框(open readingframe,ORF),推测编码396个氨基酸的多肽,分子质量为43.302 kDa,等电点(pI)值为6.78;含有71 bp的5′非转译区(5′ UTR)和232 bp的3′非转译区(3′ UTR).末尾具有完整的AATAA加尾信号和PolyA结构,说明所克隆基因的序列较为完整.经序列比对分析表明,SmCMK与其他植物CMK激酶家族具有较高的同源性.实时荧光定量PCR结果显示该基因受茉莉酸甲酯(MJ)诱导后表达水平显著升高,与丹参酮类成分含量受MJ诱导后的增加趋势一致,初步证明了SmCMK基因表达量与丹参酮类成分的积累之间的关系,为进一步研究丹参酮类成分的次生代谢调控机制奠定了基础.
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诱导子对百里香中次生代谢产物的影响差异
目的 研究不同浓度诱导子对不同增殖阶段百里香中次生代谢产物积累的影响.方法 以1/2 MS为基本培养基,培养百里香至20、30和40 d后,分别用外源诱导子茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)和壳聚糖(Chs)对百里香进行诱导；采用萃取法对有效成分进行提取,用气相色谱-质谱联用仪检测不同增殖阶段诱导子对次生代谢产物积累的影响.结果 在提取液中检测到46种化合物,其中对比分析了含量大于1％的12种化合物,发现3种诱导子对以百里香酚为代表的芳香族化合物作用效果较为明显,对1-甲基-3-(1-甲基乙基)苯和1-甲基-4-4(1-甲基乙基)-1,4-环己烯为代表的氧化萜类化合物和萜烯类化合物效果十分明显.结论 不同的诱导子对百里香中次生代谢产物含量有显著差异.
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茉莉酸甲酯对贯叶连翘中芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素含量的影响
目的 刺激贯叶连翘次生代谢产物的迅速积累,提高有效成分含量.方法 采用高效液相色谱法以Phenomenex硅胶基质C18色谱柱(5 μm×4.6 mm×250 mm)为色谱柱,甲醇和0.2%乙酸水溶液为流动相,检测波长为270 nm,进样量为20 μL来测定茉莉酸甲酯(5 mmol/L)处理后的贯叶连翘次生代谢产物的含量.结果在短时间的茉莉酸甲酯的处理下,芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的含量在整体上有一定的提高.结论 若加长茉莉酸甲酯的处理时间,这些次生代谢产物的含量变化将更加显著.
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海巴戟天悬浮细胞合成蒽醌类物质的研究
目的 研究外源激素、水杨酸、茉莉酸甲酯对海巴戟天悬浮细胞生长及蒽醌类化合物合成的影响.方法 建立海巴戟天细胞悬浮培养体系,并向海巴戟天细胞悬浮培养物中添加外源激素、水杨酸和茉莉酸甲酯,测定细胞比生长速率和蒽醌产量.结果 外源激素萘乙酸(NAA)、激动素(KT)对海巴戟天悬浮细胞的生长和蒽醌类化合物的合成有显著影响,采用B5培养基时,较佳激素组合为NAA2 mg/L+ KT 0.1 mg/L.在对数生长初期(培养9d)时,添加200 μmol/L水杨酸和50 μmol/L茉莉酸甲酯,蒽醌质量浓度分别为588.34 mg/L和595.49 mg/L,比对照分别提高了17.05％和18.47％.结论 适宜激素配比结合一定质量浓度的水杨酸和茉莉酸甲酯外源诱导对蒽醌类化合物的合成有促进作用.
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白木香AsNINJA1基因全长cDNA克隆及其在愈伤组织中的茉莉酸甲酯诱导表达
目的 克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis互作蛋白(jasmonate Zim-domain,JAZ)基因(NINJA),为深入研究其在沉香倍半萜合成途径中的功能奠定基础.方法 以白木香总RNA为模板,采用RACE法和RT-PCR方法,克隆白木香NINJA基因cDNA全长,并进行生物信息学的分析;采用实时荧光定量(qRT-PCR)方法分析经茉莉酸甲酯(MeJA)处理的白木香愈伤组织中AsNINJAJ基因的表达模式.结果 获得白木香NINJA基因全长cDNA,命名为As NINJA1.序列分析表明,该基因的序列全长为1 982 bp,包含一个l 221 bp的开放阅读框,编码406个氨基酸,蛋白质相对分子质量为43 697,等电点为6.02.qRT-PCR结果显示,经MeJA处理4h后AsNINJA1基因相对表达量高,是对照(未经MeJA处理的白木香愈伤组织)的近100倍,随后显著下降.结论 获得AsNINJA1基因全长cDNA序列,该基因对MeJA诱导极为敏感,且能在伤害早期响应.
关键词： 白木香 As NINJA1基因 cDNA快速末端扩增 序列分析 表达分析 茉莉酸甲酯 -
茉莉酸甲酯对艾纳香活性成分、抗氧化酶活力以及内源激素含量的影响
目的 研究艾纳香植株不同叶位叶片中4种内源激素含量和3种抗氧化酶活性以及L-龙脑的含量与诱导剂的浓度、采样时间之间的规律.方法 以0.01、0.10、1.00、10.00 mmol/L的茉莉酸甲酯(MeJA)作为外源诱导剂,艾纳香不同叶位的叶片(嫩叶、成熟叶、老叶)为实验对象,以生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素(GA3)、玉米素(ZT)4种内源激素含量和过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)3种抗氧化酶的活力以及活性成分L-龙脑的含量作为检测指标.结果 1.00 mmol/L的MeJA对L-龙脑的积累效果较好;不同浓度的MeJA诱导下,抗氧化酶的变化比较复杂.对于POD来说,除了10.00 mmol/L MeJA浓度处理下的艾纳香3个叶位的叶片中其含量低于对照外,其他浓度处理下,POD在72 h均显著高于对照(P＜0.05).对于CAT来说,10.00 mmol/L MeJA诱导下,艾纳香3个叶位叶片其含量在24 h时达到高,之后随着时间的推移,CAT活力极速下降.在其他浓度处理下,嫩叶和老叶中的CAT酶活力在72 h,显著低于对照,而在成熟叶中除了0.10 mmol/L MeJA处理,均在72 h时高于对照.对于SOD来说,除了1.00 mmol/L MeJA处理的3个叶位的叶片在48 h之后,SOD含量均高于对照,且与对照组有显著差异(P＜0.05)外,其余浓度处理下的SOD均低于对照.低浓度的MeJA(≤0.10 mmol/L)可以促进艾纳香叶片中的IAA、GA3和ZT的积累,而高浓度的MeJA(≥10.00 mmol/L)促进ABA的积累.结论 艾纳香植株在外源MeJA(1.00 mmol/L)诱导下可以促进活性成分积累,为其栽培生产提供理论依据.
