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藏药小檗皮对糖尿病大鼠视网膜PKC-β、VEGF、HIF-1α表达的影响
目的：探讨藏药小檗皮对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C（PKC-β）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）和低氧诱导因子（HIF-1α）的影响。方法：SD大鼠采用链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔内注射的方法造模，随机分为模型组、小檗皮低剂量、中剂量和高剂量组、二甲双胍组、羟苯磺酸钙组、小檗碱组和对照组。成模后开始灌胃给药，小檗皮低剂量组、中剂量组、高剂量组分别按成人剂量的5、10、20倍给药，二甲双胍组和小檗碱组按成人剂量的10倍给药，模型组和对照组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠于灌胃6周后处死。采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1α表达，采用免疫组织化学法检测视网膜HIF-1α蛋白表达。结果：与正常组比较，糖尿病大鼠视网膜中PKC-β、VEGF、HIF-1αmRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，小檗皮高、中剂量组视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1α mRNA表达显著降低（P<0.01），PKC-β、VEGF和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P<0.05），小檗皮低剂量组大鼠PKC、VEGF和HIF-1α表达明显降低（P<0.05）。结论：小檗皮对糖尿病大鼠视网膜具有保护作用，其作用机制可能与整体多点调控糖尿病大鼠视网膜的PKC-β、VEGF、HIF-1α表达有关。
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小檗皮水浸膏对db/db糖尿病小鼠视网膜病变的影响(Ⅱ)
目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜蛋白激酶C-B(PKC-β),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探索该药防治糖尿病视网膜病变的作用机制.方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照.采用随机方法将db/db小鼠分为db/db组,小檗皮高、中、低剂量组(1.50,0.75,0.38 g·kg-1),羟苯磺酸钙组(0.23 g·kg-1),盐酸小檗碱组(0.135 g·kg-1).相关药物连续ig2个月,并于ig2个月末处死小鼠.采用免疫组化方法观察3种因子在视网膜结构的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测视网膜内3种因子的基因与蛋白表达.结果:与db/m组比较,db/db组视网膜组织PKC-β,VEGF免疫组化反应呈阳性,表达显著增加(P ＜0.01);HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达量有升高趋势,但差异无统计学意义;db/db组三种因子的基因与蛋白表达显著增加(P＜0.01).与db/db组比较,羟苯磺酸钙组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P＜0.05),小檗皮高剂量组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(p＜0.01),其他各给药组较db/db组PKC-β表达有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组视网膜组织HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达有降低趋势,但差异无统计学意义;小檗碱组、小檗皮低剂量组视网膜组织VEGF免疫组化反应呈阳性,表达明显降低(P＜0.01),其他各给药组视网膜组织VEGF有降低趋势,但差异无统计学意义.与db/db组比较,羟苯磺酸钙组HIF-1α基因表达明显降低(P＜0.05),其他各给药组PKC-β,HIF-1α,VEGF基因表达有降低趋势,但差异无统计学意义.与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、低剂量组PKC-β蛋白表达显著降低(P＜0.01),小檗皮中剂量组PKC-β蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P＜0.01),小檗皮低剂量组HIF-1α蛋白表达量有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组VEGF蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:小檗皮浸膏防治db/db糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制可能与抑制PKC-B,HIF-1α,VEGF表达有关.
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晶珠糖尿康胶囊的质量标准研究
目的:为控制晶珠糖尿康胶囊质量,建立藏茜草、小檗皮、诃子的薄层色谱(TCL)鉴别及盐酸小檗碱的薄层扫描定量方法.方法:采用TCL进行定性鉴别,用薄层扫描法进行含量测定.结果:鉴别方法专属性强,定量方法简便、准确,平均回收率为98.5%,RSD为1.08%.结论:本质量标准可有效地控制晶珠糖尿康胶囊质量.
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高效液相色谱法测定九味獐牙菜胶囊中小檗碱的含量
九味獐牙菜胶囊是由獐牙菜、金腰草、榜嘎、木香、兔耳草、苦荬菜、小檗皮、波棱瓜子药物组成,具有清热、消炎、止痛功效.用于治疗胆囊炎、初期黄疸型肝炎等疾病.
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藏药小檗皮的质量标准研究
为建立藏药小檗皮的质量标准,提高其质量控制水平,该研究参照《中国药典》 2010年版附录相关方法,测定小檗皮药材的水分、灰分和浸出物的含量;以主要有效成分木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱为指标,分别采用薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)进行定性鉴别和含量测定研究.结果该药材的TLC鉴别斑点清晰、分离度较好;18批药材的测定结果表明水分为8.39％～ 12.23％,总灰分为4.50％～9.96％,酸不溶性灰分为0.10％～0.69％,浸出物为20.62％～37.13％,药材中木兰花碱、药根碱、巴马汀、小檗碱的平均质量分数分别为5.98％,0.63％,0.30％,2.50％.该研究所建立的方法准确可靠,可用于小檗皮药材的质量控制和质量评价.
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《中国药典》2000年版中药成方制剂显微特征摘录
(上接第2期28页)皮类韧皮纤维淡黄色,成束,偶见散生,呈长梭形,平直,长50～90μm,直径14～20μm,木化.……………………………………小檗皮
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HPLC法测定藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量
目的:建立藏药小檗皮中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀的含量测定方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Agilent XDB-C18(4.6mm × 50mm,5μm),流动相为水-乙腈-乙酸-三乙胺(70∶30∶0.5∶0.745),体积流量1.0mL/min,检测波长345nm.结果:盐酸小檗碱在0.400 ～2.000μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9999),盐酸巴马汀在0.016～0.800μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9999);平均回收率分别为98.5％和97.5％.结论:所建立的HPLC法简便快捷、准确,可用于藏药小檗皮的质量控制.
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藏药小檗皮中小檗碱的含量测定
用高效液相色谱法建立了藏药小檗皮中小檗碱的含量测定方法.该方法简便、准确,色谱条件为:shimpack CLC-ODS柱;乙腈:0.1mol/L;乙酸铵:磷酸(35:65:0.5)为流动相;紫外检测波长346nm.
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藏药小檗皮对糖尿病模型小鼠血糖水平影响的初步研究
目的:观察藏药小檗皮对糖尿病小鼠模型及正常小鼠血糖的影响,并以血糖为指标确定其治疗糖尿病及其并发症的有效剂量范围.方法:以6.72 9·kg-1、3.36 9·kg-1、1.68 g·kg-1、0.84 9·kg-1、0.42 g.· kg-1剂量的小檗皮浸膏灌胃四氧嘧啶糖尿病小鼠10d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,以确定小檗皮的有效降糖剂量范围；6.72 g·kg-1、1.68 g·kg-1、0.84 g·kg-1剂量的小檗皮浸膏灌胃正常小鼠7d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,观察小檗皮对正常小鼠血糖的影响.结果:与模型对照组相比,盐酸二甲双胍、盐酸小檗碱、生物碱复配及6.72 g·kg-1、1.68 9·k-1、0.84 9·kg-1、3.36 g·kg-1、0.42 g·kg-1的小檗皮浸膏均有较好的降糖作用,5个剂量的小檗皮浸膏降糖作用依次为:6.72 9·kg-1＞ 1.689·kg-1＞ 0.849·kg-1＞3.36 g·kg-1＞0.429·kg-1；盐酸二甲双胍、羟苯磺酸钙、盐酸小檗碱、复配生物碱及6.72 9·kg-1、1.68 g·kg-1、0.849·kg-1剂量的小檗皮浸膏对正常小鼠血糖无明显作用.结论:藏药小檗皮对四氧嘧啶所致糖尿病模型小鼠血糖有明显降糖作用,对正常小鼠血糖无明显作用.
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十八味诃子利尿丸质量标准研究
目的 建立十八味诃子利尿丸的质量控制方法 .方法 采用TLC法对本品中的小檗皮、姜黄进行薄层鉴别;采用HPLC法对本品中盐酸小檗碱进行含量测定.结果 在TLC色谱图中可检出小檗皮、姜黄;盐酸小檗碱在14.88～74.40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为98.64%,RSD=1.48%.结论 所用方法 简便、准确,可以用于十八味诃子利尿丸的质量控制.
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均匀设计法优化藏药小檗皮的煎煮法提取工艺
目的 优化藏药小檗皮的煎煮法提取工艺.方法 采用综合评分法和均匀设计法,以浸膏量、总生物碱含量为指标,对藏药小檗皮的煎煮法提取工艺参数进行优化.结果 藏药小檗皮的煎煮法提取工艺优化条件为:取小檗皮饮片,加水6倍量,煎煮4次,每次1h,其中第一次加水后浸泡4h.结论 建立的藏药小檗皮的提取工艺稳定、可行,可用于藏医临床制备小檗皮膏.
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藏医药对糖尿病视网膜病变的认识与新药发现策略
糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR),是糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)常见的并发症之一,已经成为DM患者致盲的主要原因之一,患病率随着DM病程的增加而增加,早期防治尤为关键.DM(“京尼萨库病”)作为藏医药临床治疗的特色优势病种之一,藏医药对DM及DR有着独特的医学认识和丰富的临床实践,从饮食起居到药物治疗提出了较为完善的预防手段和治疗措施.文章论述了藏医药对DM及DR的认识和防治,挖掘藏医古籍文献及临床中治疗糖尿病视网膜病变的常用藏药,特别是综述了现代医学对其中重要的DR治疗药物(小檗皮)研究进展,以期为下一步的DR治疗新药发现提供思路.
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藏药小檗皮的醇提工艺优化研究
目的:优化小檗皮的醇提工艺.方法:以小檗皮中木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量和浸膏量为评价指标,采用均匀设计-综合评分法考察乙醇用量、乙醇体积分数、提取时间对提取工艺的影响;采用3次均匀设计试验分别对第1次、第2次、第3次的提取工艺进行考察,分别确定3次提取试验各自的优化工艺并进行验证试验,计算转移率.结果:优工艺为取小檗皮粗粉加入15倍量75%乙醇,回流提取2次,每次提取120 min.验证试验中,小檗皮按优化工艺提取2次后木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量分别为58.96、4.82、3.07、23.29 mg/g,转移率分别为93.85%、95.02%、96.28%、94.88%(RSD分别为3.87%、2.64%、4.00%、3.91%,n=3).结论:优化的小檗皮乙醇回流提取工艺合理、可行,稳定性好.
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HPLC法测定不同产地藏药小檗皮中盐酸小檗碱含量比较
目的:探讨青海不同产地小檗皮药材中盐酸小檗碱的含量.方法:采用HPLC法,对小檗皮的有效成分盐酸小檗碱进行含量测定,并进行了方法学研究.结果:盐酸小檗碱在0.0138 ～0.1615 mg·ml“范围内呈良好线性关系,r=0.9995,盐酸小檗碱在供试品的平均回收率为97.67%,重复性RSD为1.48%(n=6).结论:青海化隆高海拔地区的小檗皮中盐酸小檗碱含量略高于青海其他地区,青海不同产地小檗皮中盐酸小檗碱含量无明显差异.
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紫外分光光度法测定藏药小檗皮中总生物碱的含量
目的:建立藏药小檗皮中总生物碱的含量测定方法,为其质量控制提供科学依据.方法:以盐酸小檗碱为对照品,采用紫外分光光度法测定不同来源小檗皮药材中总生物碱的含量.结果:小檗皮总生物碱在2.376 ～8.712 μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率为96.89％,RSD为1.08％.不同来源小檗皮药材的总生物碱含量在38.46 ～86.33 mg/g之间,平均含量为58.58 mg/g.结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于小檗皮药材的质量控制和评价.
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双波长薄层扫描法测定小檗皮中盐酸小檗硷的含量
小檗皮为小檗科植物甘肃小檗(Berberis Kansuensis Schneid)的干燥皮,在<晶珠本草>中有记载,现收载于<青海省藏药标准>1992年版,具有清热解毒、利目、敛黄水等作用,为藏医常用药物;盐酸小檗硷为小檗皮的主要活性成份,也是小檗皮质量控制的主要指标,本文采用双波长薄层扫描法对其进行了含量测定,结果茎皮含约1%以上的盐酸小檗硷.
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双波长薄层扫描法测定藏药小檗皮及晶珠糖尿肾康胶囊中盐酸小檗碱的含量
目的:建立藏药小檗皮及晶珠糖尿肾康胶囊的含量测定方法.方法:采用双波长薄层扫描法λs=425nm,λR=550nm,以正丁醇-冰醋酸-水(712)为展开剂.结果:盐酸小檗碱在(0.848～4.24)μg范围内呈良好的线性关系,胶囊的平均回收率为98.83%,RSD=1.04%.结论:方法可靠,重现性好,能有效控制该制剂的质量.
