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微型近红外光谱仪快速测定桔梗有效成分研究
目的:探索微型近红外光谱仪在中药材有效成分研究方面的可行性.方法:以JDSU公司生产的Micro NIR-1700微型近红外光谱仪为基础,以桔梗药材为例,采用多种光谱预处理方法,结合偏小二乘法,建立桔梗皂苷D的定量校正模型,并对验证样本进行含量预测.结果:根据交叉验证的标准误差(SECV)选择佳模型维数(LV)为8,校正模型的R2为0.9563.验证集外部验证的结果与真实值之间的相关系数R2为0.94.结论:该微型光谱仪在中药材主要成分研究方面具有应用的可行性,为该便携式微型近红外光谱仪的推广使用奠定了基础.
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HPLC 法对杏桔合剂中桔梗皂苷 D 的含量测定研究
目的：建立杏桔合剂中桔梗皂苷 D 的含量测定方法，为杏桔合剂的质量控制提供量化参考。方法：采用 HPLC 方法测定桔梗皂苷 D 的含量。结果：桔梗皂苷 D 在0．5～8μg 范围内线性关系良好，回归方程：y ＝238632x ＋10382，r ＝0．9997，加样回收率93．64％，RSD ＝1．54％。结论：应用 HPLC 测定杏桔合剂中桔梗皂苷 D 含量的方法可行，可以作为其质量控制的参考依据。
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HPLC测定除痰止嗽丸中的桔梗皂苷D、桔梗皂苷E、白花前胡甲素和白花前胡乙素
目的:采用高效液相色谱法测定除痰止嗽丸(CTZSW)中桔梗皂苷D、桔梗皂苷E、白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流速1.0 mL·min-1,流动相乙腈-水(35∶65)(桔梗皂苷D和桔梗皂苷E),ELSD漂移管温度105℃,载气(N2)流速2.6 SLPM· min-;流动相乙腈-甲醇-水(40∶ 30∶ 30)(白花前胡甲素和白花前胡乙素),检测波长321 nm.结果:桔梗皂苷D和桔梗皂苷E分别在0.041 3～0.826 0μg(r =0.999 7),0.079 7～1.5940μg(r =0.999 8)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.32％,98.94％,RSD(n =6)分别为0.80％,0.93％;白花前胡甲素和白花前胡乙素分别在0.154 9 ～3.098 0μg(r =0.999 4),0.051 7 ～1.034 0 μg(r =0.999 8)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.72％,99.15％,RSD(n =6)分别为0.86％,0.95％.结论:该方法测定结果准确、灵敏、重复性好;可用于除痰止嗽丸的质量评价.
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不同产地桔梗药材中总皂苷及桔梗皂苷D的含量比较
目的:比较不同产地桔梗中总皂苷及桔梗皂苷D的含量差异,为该药材的质量控制与生产提供参考.方法:采用2005年版《中国药典》方法测定桔梗总皂苷含量,2010年版《中国药典》方法测定桔梗皂苷D的含量,对36批桔梗药材总皂苷及桔梗皂苷D含量进行测定.结果:赤峰产区10批样品总皂苷质量分数在5.02％ ～ 9.20％,桔梗皂苷D质量分数在0.1％～0.175％,二者含量分布较窄.其他产区桔梗药材含量分布较宽,与内蒙古桔梗药材品质存在较大差异.结论:各产地桔梗的质量总体较好,但不同产地间及同产地各桔梗样品间的质量及其稳定性存在较大差异,浙江产桔梗的桔梗皂苷D和总皂苷含量均较高,而赤峰产桔梗品质稳定性较好;从整体质量评价角度看,桔梗质量标准中宜增加总皂苷含量的限量规定.
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不同产地桔梗性状、浸出物、桔梗皂苷D含量及HPLC指纹图谱比较
目的:对国家资源普查收集的产自10个省市的58批桔梗样品进行性状鉴别,测定其浸出物、桔梗皂苷D的含量,建立HPLC指纹图谱并对其进行比较.方法:按照2015年版《中国药典》方法测定浸出物及桔梗皂苷D含量;采用高效液相-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),梯度洗脱,建立不同产地桔梗样品HPLC指纹图谱.结果:58批桔梗样品中有2批表面色泽,7批大小,11批断面特征不符合2015年版《中国药典》规定;浸出物、桔梗皂苷D的含量的总不合格率为36.20％;建立了58批桔梗样品的特征指纹图谱,共找到17个共有峰;四川省桔梗样品浸出物、桔梗皂苷D含量及HPLC指纹图谱相似度3个方面均较高,重庆市、湖南省桔梗样品3个方面均较低;对58批不同产地桔梗进行了聚类分析及性状、浸出物、桔梗皂苷D含量和HPLC指纹图谱的比较研究,浸出物、桔梗皂苷D含量及HPLC指纹图谱相似度不成正向相关,但样品中浸出物含量以及各成分含量的差异与样品性状特征(皮部)具相关性.结论:所鉴别的性状特征,测定的浸出物、桔梗皂苷D含量以及建立的HPLC指纹图谱可为优质桔梗的筛选,新版《中国药典》标准的修订以及桔梗质量评价,提供更全面、真实、具代表性的参考依据.
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不同密度下桔梗干物质积累和桔梗皂苷D含量的动态研究
目的:研究不同密度下桔梗干物质积累和桔梗皂苷D含量动态变化.方法:大田试验设5个密度处理:M1(4 cm×25 cm),M2(6 cm×25 cm),M3(8 cm×25 cm),M4(10 cm×25 cm),M5(12 cm×25 cm),分时期对桔梗个体和群体的生物量积累、干物质分配、根产量、桔梗皂苷D含量进行研究.结果:在一定密度范围内,桔梗个体生物量除M2>M3外,随着密度的增大而减少,群体生物量随密度增大而增加.桔梗器官干物质积累各处理间有显著差异,但趋势相近.各器官干物质分配在不同密度处理下差异显著,其中M2花果所占比例小,根部物质积累多;桔梗茎、花果干物质量随密度增加显著降低,而叶干物质量随密度增加显著增加.除M2高外,桔梗单株产量随密度增加而增加.桔梗群体根产量随密度增加而增加.桔梗皂苷D含量以M2处理为高.结论:适宜的密度对桔梗干物质积累与分配、桔梗根产量、桔梗皂苷D含量及群体产量极为重要.
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桔梗皂苷D诱导人肺癌细胞A549的凋亡及机制
目的:研究桔梗皂苷D(platycodin,PD)抑制人肺癌A549细胞株增殖和诱导凋亡的分子机制.方法:体外培养人肺癌细胞株A549,PD作用终浓度分别为5～ 20μmol·L-1.MTF法测定PD对细胞的增殖抑制作用,显微镜观察细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测PD对Caspase-3,Caspase-9,PARP的剪切片段和Bax,Bcl-2,Bak,Bcl-xl蛋白表达的影响.结果:PD抑制A549细胞的增殖,并随药物浓度的增加和作用时间的延长,作用更显著；与对照组相比,不同浓度的PD作用24 h后,细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低,且差异显著.蛋白电泳检测结果显示蛋白Caspase-3,Caspase-9均出现剪切片断,并随着时间的增加断裂更明显.PD处理A549细胞后,Bax和Bak蛋白表达升高,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达下降.结论:PD具有明显的细胞毒作用,能诱导A549细胞凋亡,通过对Bax,Bak和Bcl-2,Bcl-xl表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase终导致肺癌细胞死亡.
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桔梗皂苷D联合伊马替尼对白血病耐药细胞K562/R的抑制增殖和作用机制研究
桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对多种恶性肿瘤有显著抑制作用,对白血病细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡的作用,但其是否有效提高耐药细胞对伊马替尼的敏感性及其发挥功能的分子机制仍未阐明.为了研究PD与伊马替尼(imatinib,IM)联合用药对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/R的作用及机制.细胞增殖实验检测桔梗皂苷D对伊马替尼增殖抑制功能的影响,采用CCK8测定PD和IM单药及联合用药对K562/R增殖的抑制作用;流式细胞术检测Annexin V-FITC/PI双标记细胞凋亡率的变化,Western blot法检测cleaved caspase-3,cleaved caspase-9,PARP,cleaved PARP,Bcr/abl,p-AKT,p-mTOR蛋白表达.结果显示桔梗皂苷D联合伊马替尼对K562/R细胞的增殖抑制作用和细胞凋亡率比单独用药组效果明显.Westernblot法检测结果显示与单药组比较,联合用药组可以明显上调cleaved caspase-3,cleaved caspase-9,cleaved PARP蛋白表达,同时下调PARP,Bcr/abl,p-AKT,p-mTOR蛋白的表达.结果表明桔梗皂苷D可以提高耐药细胞对伊马替尼的敏感性,联合用药在抑制细胞增殖、诱导凋亡、抑制Bcr/abl蛋白和激活PI3 K/AKT/mTOR信号通路方面明显优于单独用药.
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清喉利咽含片提取工艺的研究
目的:改变清喉利咽的剂型,明确提取工艺的加水量、提取次数.方法:通过以黄芩苷、桔梗皂苷D为考察指标,研究清喉利咽含片在提取过程中的加水量、提取次数.结果:提取工艺的确定:将黄芩等十味先温浸1h,煎煮2次,第1次加水10倍量,煎1h;第2次加水8倍量,煎40min,滤过,合并滤液.结论:加水量越大,药液中桔梗皂苷D、黄芩苷含量相应变高,但提高幅度不是很大,由于溶媒量过大在浓缩时会造成能源浪费,故通过综合评价将加水量定为第一次10倍量,第二次8倍量.
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桔梗皂苷D对HCCLM3细胞迁移侵袭影响机制探讨
目的 桔梗皂苷D(platycodin D,PD)是中药材桔梗的主要活性成分,对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性.有研究发现,它能够促进肝癌细胞的凋亡和抑制增殖,但对细胞侵袭性的影响在很大程度上是未知的.本实验研究PD对人肝癌HCCLM3细胞迁移侵袭作用的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 不同浓度的PD处理肝癌HCCLM3细胞24和48 h,MTT法检测对细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移侵袭实验检测对细胞迁移和侵袭的作用;荧光定量PCR和蛋白质印迹实验分别检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9基因在mR-NA和蛋白水平的表达情况.结果 MTT检测结果表明,PD降低肝癌HCCLM3细胞的存活率,抑制细胞的增殖,并呈剂量依赖性,P<0.01.划痕实验结果表明,10、20和40μmol/L的PD处理细胞48 h后,细胞的迁移率分别为(41.33±8.25)％、(31.87±9.83)％ 和(12.29±3.10)％,与对照组(86.53±6.04)％ 相比,差异有统计学意义,F=56.28,P<0.001.Transwell实验结果表明,10、20和40μmol/L的PD处理细胞48 h后,迁移的细胞个数分别为466.33±103.94、294.67±42.53和156.68±52.27,与对照组818.33±108.15相比,差异有统计学意义,F=36.47,P<0.001;侵袭的细胞个数分别为299.33±92.93、192.67±55.63和64.00±28.90,与对照组665.67±76.84相比,差异有统计学意义,F=43.48,P<0.001.荧光定量PCR和蛋白质印迹实验进一步研究表明,10、20和40μmol/L的PD处理细胞后,MMP-2和MMP-9在mRNA水平的表达降低,与对照组相比,差异有统计学意义,F值分别为16.86和27.32,P值分别为0.002和0.001;同时,MMP-2和MMP-9在蛋白水平的表达也降低,F值分别为8.85和15.01,P值分别为0.006和0.001.结论 PD能够抑制人肝癌HCCLM3细胞的迁移和侵袭能力,可能与降低MMP-2和MMP-9的表达有关.
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HPLC-MS/MS法测定桑菊感冒片中5种成分的含量
目的:建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定桑菊感冒片中芦丁、绿原酸、连翘苷、桔梗皂苷D和苦杏仁苷的含量.方法:采用Waters Atlantis C18色谱柱(2.1 mm×150mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％甲酸(B)为流动相,梯度洗脱(0 ～3 min,20％A;3～ 15 min,20％ A→60％A;15～23 min,60％A;23～24 min,60％ A→20％A;24～30 min,20％ A),流速0.2 mL·min-1,柱温35℃,采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测(MRM)方式进行正离子扫描.结果:芦丁、绿原酸、连翘苷和桔梗苷D分别在浓度0.01 ～2 μg·mL-1的线性范围内线性关系良好(r ＞0.999),苦杏仁苷在浓度0.25 ～ 50μg·mL-的线性范围内线性关系良好(r＞0.999),平均回收率(n=6)分别为98.89％、99.80％、100.61％、99.35％、99.51％,RSD％分别为0.84％、0.90％、1.19％、1.28％、0.86％.测定样品3批,5个成分的测定结果分别为:批号S154601:0.2605、0.2721、0.1848、0.1693、4.8203 mg·g-;批号S154602:0.2440、0.2573、0.1709、0.1712、4.7639 mg·g-1;批号S154603:0.2679、0.2788、0.1900、0.1778、4.8725 mg·g-1.结论:所建立的方法准确、可靠、重复性好,灵敏度高,为桑菊感冒片的全面质量控制提供科学依据.
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桔梗药材中桔梗皂苷D的定性定量方法研究
目的 进行桔梗药材的质量标准研究.方法 以桔梗皂苷D为对照品,采用TLC法进行定性鉴别,HPLC法进行含量测定,Zorbax C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸水溶液(3:25:72),检测波长为204 nm,柱温为40℃,流速为1.0 mL/min.结果 桔梗皂苷D在0.226～2.486 μg线性关系良好(r=1.000 0),平均回收率101.81%,RSD 1.70%.结论 通过10批次不同产地桔梗的鉴别和含量测定,证明本方法灵敏,准确可靠,重现性好,可用于桔梗药材的质量控制.
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桔梗皂苷D的HPLC法制备
目的 探讨桔梗皂苷D的HPLC法制备方法.方法 采用超声提取方法,通过大孔吸附树脂得到各水相、有机相,再根据不同分离原理,运用硅胶、ODS、HPLC等柱层析技术对桔梗总皂苷及其单体皂苷进行分离,制备桔梗皂苷D,优化其工艺.结果 超声提取方法可优化其工艺.结论 该制备方法先进、简便、省时、效率高.
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HPLC-ELSD法测定咳喘宁中桔梗皂苷D的含量
目的 建立高效液相色谱法测定咳喘宁中桔梗皂苷D的方法.方法 采用以蒸发光散射检测器的高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250.0 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(28∶72),流速为0.9 ml/min,ELSD漂移管温度为70℃,气体流速为3.0 SLPM/min.结果 桔梗皂苷D进样量在0.513～10.260 μg范围内呈良好线性关系(r=0.9996),平均回收率98.44％,RSD=0.88％ (n=6).结论 该方法准确,可靠,重复性好,灵敏度高,可用于咳喘宁的质量控制标准.
关键词： 咳喘宁 桔梗皂苷D 高效液相色谱法-蒸发光散射检测器 -
HPLC-ELSD法测定复方桔梗止咳片中桔梗皂苷D的含量
目的：建立一方法来测定复方桔梗止咳片中的桔梗皂苷D。方法采用HPLC-ELSD法，色谱柱为KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（28∶72），流速为0.9mL/min，ELSD漂移管温度为70℃，气体流速为3.0SLPM/min。结果在0.513～10.26μg线性范围内桔梗皂苷D进样量与峰面积呈良好的线性关系良好（r=0.9996），平均回收率99.44%，RSD=1.2%（n=6）。结论该方法准确，重复性好，可有效的控制复方桔梗止咳片的质量。
关键词： 复方桔梗止咳片 桔梗皂苷D 高效液相色谱法-蒸发光散射检测器 -
UPLC-MS/MS法同时测定玄麦甘桔颗粒中8种有效成分
目的 建立同时测定玄麦甘桔颗粒(玄参、麦冬、甘草、桔梗)中8种有效成分(哈巴苷、甘草苷、哈巴俄苷、桔梗皂苷D、甘草酸铵、麦冬皂苷D、麦冬黄烷酮A和麦冬黄烷酮B)的方法,并对市售不同厂家生产玄麦柑桔颗粒中上述8种有效成分进行定量分析.方法 采用超高效液色谱相串联质谱(UPLC-MS/MS)法,Phenomenex Kenetix C18柱(50 mm×2.1mm,5μm),流动相为乙腈和含0.1％甲酸的水溶液梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min;质谱采用正负离子同时监测,多反应监测模式扫描,进样量5μL.结果 玄麦柑桔颗粒中哈巴苷、甘草苷、哈巴俄苷、桔梗皂苷D、甘草酸铵、麦冬皂苷D、麦冬黄烷酮A和麦冬黄烷酮B分别在9～2 250、8～2 000、3.4～850、96～24 000、12.4～3 100、3.6～1 900、1.7～425、1.5～375 ng/mL内线性关系良好,加样回收率为97.2％～102.8％,RSD小于2.7％.8种成分在8批样品中的质量分数依次为哈巴苷32.8～107.6 μg/g,甘草苷54.8～178.0 μg/g,哈巴俄苷14.6～70.7 μg/g,桔梗皂苷D 31.2～280.0 μg/g,甘草酸铵106.4～287.9μg/g,麦冬皂苷D 0.1～0.6 μg/g,麦冬黄烷酮A 0.01～0.07 μg/g和麦冬黄烷酮B 0.03～0.17 μg/g.结论 建立的方法简单、高效、准确可靠,可用于同时测定玄麦甘桔颗粒中8种成分,为该制剂建立更全面的质量控制方法提供依据.
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大孔吸附树脂纯化桔梗皂苷的研究
目的:研究大孔吸附树脂富集、分离纯化桔梗皂苷工艺条件及参数.方法:以HPLC法测定桔梗皂苷D和去芹糖桔梗皂苷D的总量为考察指标,考察5种大孔吸附树脂分离纯化桔梗皂苷的吸附性能,重点筛选并优化D-101大孔吸附树脂富集桔梗皂苷的各种工艺参数.结果:D-101大孔吸附树脂在4h后达到大吸附量15.4mg/g,40%乙醇溶液可以使桔梗皂苷类成分大部分(解吸率≥90%)从树脂床上解吸附.结论:D-101大孔吸附树脂对桔梗皂苷吸附性能好,完全适合用于工业化富集分离纯化桔梗皂苷类成分.
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HPLC-ELSD法同时测定益肺清化颗粒中的黄芪甲苷、桔梗皂苷D和麦冬皂苷D的含量
目的:建立益肺清化颗粒中黄芪甲苷、桔梗皂苷D、麦冬皂苷D的定量测定方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法,色谱柱为SB-C 18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(20:80);体积流量1.0 ml/min;柱温30℃;ELSD漂移管温度95℃,气体流量2.5 L/min.结果:黄芪甲苷、桔梗皂苷D、麦冬皂苷D的线性范围分别为1.5～30μg/ml(r=0.9992)、1.0～20μg/ml(r=0.9993)和0.5～10μg/ml(r=0.9992),回收率分别为99.59％(RSD为1.39％,n=9)、99.88％(RSD为0.68％,n=9)和100.16％(RSD为2.39％,n=9).结论:该方法测定简便、快速、重复性好,可作为益肺清化颗粒的质量控制方法.
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桔梗皂苷D人工抗原的合成及鉴定
目的:合成桔梗皂苷D(PlatycodinD,PD)的人工完全抗原,为制备桔梗皂苷D的单克隆抗体及建立相应的免疫学分析方法奠定基础.方法:采用高碘酸钠(NaIO4)氧化法分别合成桔梗皂苷D免疫抗原(PD-BSA)和包被抗原(PD-OVA).用薄层色谱法鉴定人工抗原是否偶联成功;用动物免疫法测定其抗原性;并融合后筛选阳性孔.结果:薄层色谱法显示PD与BSA/OVA偶联成功;用合成的PD-BSA免疫小鼠后可使小鼠体内产生抗PD抗体,效价在1∶8000以上;融合可得出阳性孔.结论:成功合成了PD人工免疫原和包被原,可用于下一步PD单克隆抗体的制备及建立相应免疫学分析方法.
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瓜桔止嗽丸薄层鉴别及桔梗皂苷D的含量测定
目的:建立瓜桔止嗽丸中主要药味的薄层鉴别及含量测定方法,以控制制剂质量.方法:采用TLC法对制剂中桔梗、陈皮、甘草、百部进行了定性鉴别研究；采用HPLC-ELSD法测定制剂中桔梗皂苷D的含量,选用Dikma ODS C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(25∶75)为流动相,流速1.0 mL·min-1,ELSD参数:漂移管温度105℃,载气流速3.0L·min-1.结果:TLC法可鉴别出桔梗、陈皮、甘草、百部的特征斑点,且专属性强,分离度好；桔梗皂苷D浓度在0.06928～0.3464 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率为99.31％,RSD=1.01％.结论:该方法简便可行,可用于瓜桔止嗽丸的质量控制.
