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焦磷酸测序法检测单增李斯特菌
目的:建立单增李斯特菌的焦磷酸测序检测方法.方法:通过焦磷酸测序法对hly基因的保守片段进行测序来检测单增李斯特菌,从基因序列上对单增李斯特菌进行鉴定.结果:焦磷酸测序法可准确鉴定94株单增李斯特菌.结论:本方法可用于单增李斯特菌的检测鉴定,具有准确、快速和实时等优点,可满足对单增李斯特菌快速、高通量检测的需求.
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单增李斯特菌ActA的表达与免疫原性研究
目的:研究单增李斯特菌ActA原核表达产物的免疫原性.方法:构建原核表达载体pGEX-3X/ActA,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE与Western blot分析,GST亲合层析纯化蛋白,免疫小鼠,检测小鼠体内特异性抗体水平,脾淋巴细胞增值活性及T淋巴细胞亚群,评价表达蛋白的免疫原性.结果:在大肠杆菌中表达了融合蛋白并获得了纯度较高的ActA;免疫小鼠在免疫后7周效价达到高峰,以后逐渐下降;免疫组的脾淋巴细胞增殖活性显著高于对照组(P<0.05);免疫组CD3+细胞、CD4细胞、CD4+/CD8+比对照组分别增加了17.14%、18.03%、32.67%,CD8+细胞降低了12.38%.结论:ActA诱导了特异性体液免疫和细胞免疫.
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Taq Man-MGB探针Real-timePCR快速检测单增李斯特菌的研究
目的:建立Taq Man-MGB探针Real-time荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术.方法:在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上,设计一对特异性Taq Man-MGB探针法引物及探针,通过Real-timePCR反应条件和反应体系的优化,实现对单增李斯特菌的快速检测;用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性.结果:方法的灵敏性高,其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系,低可检测57个拷贝数,经18 h增菌,可检测低至4.5 cfu/ml的细菌;特异性强,检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值(CT值)均小于25,而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值(CT值)大于35;快速,快1 h可出结果,实际样品20 h可出结果,而常规细菌培养法需要一周以上;对103份速冻米面食品进行检测,13份阳性,与常规方法无显著性差异(P＞0.05).结论:Taq Man-MGB探针的单增李斯特菌Real-time荧光PCR检测方法具有特异性强,敏感性高,易操作等优点,可推广应用.
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杭州市26株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型
目的:为了解杭州市各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性及流行病学的意义.方法:对所分离到的LM菌株进行传统生化检测和脉冲场凝胶电泳分型.结果:所分离到的26株LM菌株传统生化反应没有区别,PFGE分成14个图谱类型,各型之间不紧密相关.结论:杭州市食品中LM的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象.
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食品中单增李斯特菌血清型及耐药性研究
目的:掌握食品中单增李斯特菌血清型及耐药水平.方法:玻片凝集法检测O抗原,试管凝集法检测H抗原;用K-B法测定耐药性.结果:186株单增李斯特菌对甲氧苄胺嘧啶、丁胺卡那霉素、利福平等8种抗生素耐药性小于5%,对四环素、头孢噻肟和呋喃妥因的耐药性分别为8.97%、39.74%和49.36%,对胺苄青霉素、氯洁霉素、头孢西丁耐药性在50%以上.胺苄青霉素、头孢西丁、头孢噻肟耐药株逐年增加;152株单增李斯特菌分属7个血清型,1/2b血清型占50%,1/2a血清型占30.26%,1/2c血清型占13.16%.结论:食品中单增李斯特菌血清型主要为1/2b、1/2a和1/2c;甲氧苄胺嘧啶可替代胺苄青霉素作为单增李斯特菌病临床首选药物.
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进口水产品中单增李斯特菌毒力基因调查
目的 为了研究进口水产品中单增李斯特菌毒力基因的分布情况.方法 以来自宁波口岸进口水产品中的66株单增李斯特菌为研究对象,利用PCR技术对单增李斯特菌的9个毒力基因(prfA、iap、actA、plcB、plcA、mpl、inlB、Hly、inlA)进行检测.结果 66株单增李斯特菌中16株出现了基因缺失,其余50株具有全部毒力基因,其中prfA基因检出率84.8％ (56/66),iap基因检出率93.9％ (62/66),mpl基因检出率95.5％ (63/66),inlB基因检出率98.5％ (65/66),inlA基因检出率98.5％(65/66).结论 进口水产品中单增李斯特菌几乎都具有这9种毒力基因,对食品安全具有潜在的威胁,需要加强监测.
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食品中单核细胞增生李斯特菌污染及耐药状况调查
目的:了解吉林省市售八类食品中单增李斯特菌的污染状况和耐药现状.方法:采集市售八类食品样品,采用显色培养基,API及BAX分离鉴定,K-B法药敏实验.结果:1251份样品共检出单增李斯特菌74株,总检出率为5.9％.主要在熟肉制品(17.0％)和凉拌菜(9.1％).74株菌株对氨苄西林、青霉素、庆大霉素、卡那霉素全部敏感.头孢噻肟、新霉素耐药率达50％以上.其次为恩氟沙星(35.1％)、环丙沙星(33.8％)和诺氟沙星(25.6％).结论:吉林省市售八类食品中尤其是熟肉制品和凉拌菜中单增李斯特菌污染和耐药现象严重.应高度重视并加强污染状况及耐药性监测,保证食品安全和人类健康.
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2009年顺义区食品中单增李斯特菌污染及耐药状况调查
目的:了解北京市顺义区食品中单增李斯特菌的污染状况和耐药情况.方法:菌株分离鉴定应用国标法和VITEK细菌鉴定仪.药敏试验采用K-B法.结果:单核细胞增生性李斯特菌总检出率为4.88%,其中生禽畜肉类为18.75%.其次为熟肉制品,为10.00%,生食蔬菜、水产品和乳制品中均未检出该菌.8株菌株对氨苄西林、青霉素、万古霉素、阿莫西林、头孢噻吩、庆大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶和利福平全部敏感,仅有一株菌株对红霉素和四环素耐药.结论:顺义地区部分食品不同程度受到单增李斯特菌的污染,尤以生禽畜肉和熟肉制品污染严重.单增李斯特菌对多种抗生素敏感.
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甘肃省部分地区各类食品中单增李斯特菌污染情况调查分析
目的:了解甘肃省各类食品中单增李斯特菌的污染状况,初步确定主要污染的食品类别,为食源性疾病监测及预防提供基础依据.方法:两年采集八大类665份样品按<食源性疾病监测网工作手册>中单增李斯特菌监测方法进行分离鉴定.结果:665份样品中检出单增43株,总检出率为6.5%,生畜肉检出率高.结论:我省食品单增李斯特菌污染较为严重,主要污染的食品为生畜肉、生禽肉、鲜冻水产、速冻生制食品、熟肉制品、生食蔬菜、蔬菜沙拉、冰激淋.
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杭州市市售肉类食品中单增李斯特菌污染状况调查研究
目的:了解杭州市市场销售的肉类食品的卫生质量.方法:于2007年5月和11月采集杭州市2家超市及3家农贸市场肉类食品样品共计70件,其中生肉样品50件,熟肉样品20件,按GB/T4789.30-2003<食品卫生微生物学检验>进行单增李斯特菌检测.结果:70件检样共检出单增李斯特菌19株,阳性率为27.14%(19/70).结论:肉类食品中单增李斯特菌的污染率较高,尤其以超市出售的冷藏(冻)生肉类食品单增李斯特菌污染较为严重,熟食肉制品及非冷藏(冻)生肉类相对较为安全,应加强对冷藏(冻)生肉类食品的卫生管理.
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2004年～2006年北京市西城区食品中主要致病菌株检测结果及分析
目的:为了发现北京地区食品污染的特点,从而有针对性的制定食品卫生地方标准和控制食品污染的措施,防止病从口入,故进行了食品污染物监测网的监测工作.方法:西城区CDC作为监测点之一也在2004年～2006年的3年时间里采集了生肉类、生食蔬菜、熟肉类、水产品、冰淇淋等食品样品,进行了沙门菌、空肠弯曲菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、O157:H7、副溶血弧菌的检验.结果:3年中共完成了430件样品的测定,共检出127株致病菌.其中检出率高为单增李斯特菌,其次为沙门菌,其余几种致病菌检出率较低.结论:本市8种食品中都存在不同程度的污染,这也需要有关部门加强食品卫生管理,减少食源性疾病的发生.
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湖州市食品中单增李斯特菌的污染状况调查
目的:了解湖州市食品中单增李斯特菌的污染状况.方法:按国标方法,采用进口显色培养基,对食品进行单增李斯特菌的分离、生化鉴定.结果:281份样品中共检出22株,污染率为7.83%.其中冷冻/藏鸡肉中污染率高,为25.00%.结论:湖州市食品中单增李斯特菌的污染比较严重,应加强对生肉制品等的监督管理,以防食源性疾病的发生.
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从袋装生鲜食品中检出单增李斯特菌
2008年3～4月,我们对商检和其他部门送检的32份生鲜类袋装食品进行李斯特菌和大肠杆菌O157:H7检测,检出2株单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌,LM),现将检验过程和分析报告如下:
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近3年来吉林省食品中沙门菌和单增李斯特菌主动监测及结果分析
目的:了解吉林省高危食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌的污染状况,为国家食品安全监测网提供数据.方法:增菌后,用科玛嘉显色培养基分离,AIP生化板和泰国产血清鉴定.结果:检测生畜肉、生禽肉、非定型包装熟肉制品、生牛奶、淡水鱼、蔬菜共1 021件,检出沙门菌102株,检出率10.0%;检测单核细胞增生李斯特菌样品共1 181件,检出单核细胞增生李斯特菌169株,检出率14.3%.结论:3年来沙门菌监测结果05年高,阳性率每年有连续增长趋势.阳性率以生猪肉高,生鸡肉次之.3年中李斯特菌连续监测阳性率变化,以05年高,03年次之.生鸡肉阳性率高,生猪肉次之,生蔬菜少见.
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2例单增李斯特菌病人的病原学分析
目的 了解2例感染的单增李斯特菌与本区食品中污染物的单增李斯特菌的生物学特性及分子流行病学相关性.方法 对2株从病人血液中分离和本地区近5年(2007年-2011年)从食品中分离的57株单增李斯特菌,进行毒力基因检测、血清分型和PFGE分型.结果 病人分离株和所有食源性分离株针对与单增李斯特菌致病相关的6对毒力因子(prfA、actA、iap、hly、plcB、inlA)PCR扩增结果全部为阳性;2株来自病人的菌株为1/2b血清型;2株来自病人菌株的PFGE图谱完全一致,且与1株从本区某超市采集的生牛肉中检出的菌株PFGE型别也完全一致,均为GX6A16.CN0012.结论 母子感染的单增李斯特菌PFGE型别完全一致,提示为垂直传播;病人分离菌株和本地区食品中检出的李斯特菌均具有致病性.在本区食品中检出过与病人感染菌株PFGE型别完全一致的菌株.
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PCR与mini-VIDAS相结合快速检测食品中单增李斯特菌
目的:建立一种快速检测食品中单增李斯特菌的方法,提高检测的准确率,为有效地预防和控制李斯特菌病提供依据.方法:从超市和集贸市场上随机采集生畜肉、生禽肉、熟卤制品、生食蔬菜、水产品和乳制品共125份,先进行增菌培养,然后对样品的二次增菌液进行PCR扩增.扩增阳性的样品再进行mini-VIDAS LMO分析,后通过ISO 11290-1的标准方法来进行验证.结果:125份样品中有2份鉴定为Lm阳性,排除1个PCR扩增假阳性和2个mini-VIDAS LMO分析假阳性结果.结论:PCR与mini-VIDAS相结合检测食品中Lm准确率高,可在48h内完成,是快速检测李斯特菌的有效方法.
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快速筛检食源性致病菌方法的比较分析
目的:对目前采用的快速筛检食源性致病菌的检测试剂盒进行比较.从中优选出较好的试剂盒,为2010年世博会现场快速检测提供依据.方法:对食源性致病细菌(单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希氏菌O157:H7、志贺菌)快速检测试剂盒进行灵敏度和特异性比较.结果:通过比较试验,单核细胞增生李斯特菌快速检测北京宝特斯生物科技有限公司的产品较好;大肠埃希氏菌O157:H7快速检测上海博赛生物公司的产品较好;志贺菌的快速检测广州华峰科技有限公司的产品较好.结论:通过此项试验,可以建立现场快速检测筛查侦检程序,有效应对2010年世博会及口岸突发公共卫生事件的发生.
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单增李斯特菌LAMP方法的建立
目的:探索建立一种能应用于单增李斯特菌检测与鉴定的LAMP方法,以适合在基层实验室开展应用.方法:针对单增李斯特菌invA基因靶序列,设计5条特异性LAMP引物,建立LAMP反应条件与体系.结果:整个检测过程仅需1.5 h,可通过肉眼目测或电泳检测判断结果,对5株单增李斯特菌和英诺克李斯特菌等共23株其它实验株的invA基因进行检测,结果显示该方法有良好的特异性;检测限试验显示敏感性稍差但不影响对单增李斯特菌分离疑似菌株鉴定及疑似食品污染物的批量检测.结论:本研究建立的LAMP方法能够快速、特异地检测单增李斯特菌;简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断;适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值.
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单增李斯特菌选择性增菌培养分离的初步探讨
目的:寻找一种良好的增菌培养分离法,提高食品中单增李斯特菌(Lm)的检出率.方法:对Fraser肉汤增菌法进行改良,在自行配制的第一液Haft-Fraser肉汤中添加氯霉素,观察其对Lm及蜡样芽孢杆菌(B.cereus)的影响,确定加入氯霉素的佳适宜量.160份样品同时采用改良Fraser肉汤法、FDA法、国标法增菌培养后,用传统生化鉴定Lm,比较检出率.结果:在.Half-Fraser肉汤中添加3.0 μg/ml氯霉素不会对样品中的Lm肌产生明显的影响,但可有效抑制B.cereus的生长.3种增菌培养法以Fraser肉汤增菌法总检出率高,尤其对速冻食品的检出率达100%,FDA法对灭菌食品的检出率达100%.结论:Half-Fraser肉汤氯霉素的佳添加量为3.Oμg/ml.不同样品类型要用不同的增菌法,必要时用2种以上方法相结合,提高食品中Lm的检出率.
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改良李斯特菌增菌液的研究
目的:研制改良李斯特菌增菌液.方法:用不同浓度的吖啶黄、萘啶酮酸、亚碲酸钾、氯霉素对单增李斯特菌、大肠杆菌及蜡样芽胞杆菌进行抑制效果试验.结果:浓度在15～10 mg/L时,吖啶黄对蜡样芽胞杆菌有较强的抑制性,对单增李斯特菌、大肠杆菌几乎不起作用;20～10 mg/L浓度的萘啶酮酸、25～15 mg/L浓度的亚碲酸钾对大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌均有较强的抑制性,但对单增李斯特菌无抑制性;15～3 mg/L 4种浓度的氯霉素对3种菌均有较强的抑制性;用吖啶黄15 mg/L、萘啶酮酸20 mg/L、亚碲酸钾15 mg/L的李斯特菌改良增菌液增菌,单增李斯特菌检出率明显高于国标法(P＜0.05).212件样品的单增李斯特菌检出率由0.94%提高到7.08%.结论:该增菌液选择性强,检出率高,值得推广和应用.
