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长沙市2010年-2011年食源性致病菌耐药性分析
目的 了解长沙地区食源性金黄色葡萄球菌、沙门菌和单增李斯特菌的耐药情况,指导抗生素的合理应用.方法 对2010年-2011年检出的57株金黄色葡萄球菌、沙门菌和单增李斯特菌使用微量肉汤稀释法分别进行药敏试验.结果 28株金黄色葡萄球菌对16种抗生素中的4种完全敏感(100％),对盘尼西林均耐药(100％),对苯唑西林的耐药率达57.14％.10株沙门菌对14种抗生素均产生不同程度的耐药,对四环素和阿莫西林-克拉维酸的耐药率高,达60.00％,且对6种以上抗生素的多重耐药率高达40％.19株单增李斯特菌对15种抗生素均敏感(100％),无耐药菌株的出现.结论 长沙地区食源性金黄色葡萄球菌和沙门菌耐药形势严峻,应加强抗生素的管理和耐药性监测.
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VIDAS和VITEK32在食品卫生检验中的应用
目的 探索快速检验方法在食品检验中的应用.方法 应用VIDAS和VITEK32仪器对食品中沙门氏菌和单增李斯特菌进行检测,并与国标法进行比较.结果 检测样品257份,VIDAS法检测沙门氏菌阳性样品11份,国标法检测沙门氏菌阳性样品8份.VIDAS法检测单增李斯特菌阳性样品17份,国标法检测单增李斯特菌阳性样品10份.VIDAS+VITEK32法检测沙门氏菌阳性样品9份,检测单增李斯特菌阳性样品12份.结论 VIDAS有很高的灵敏性,VITEK32有很高的准确性,VIDAS +VITEK32方法检出率高于国标法.
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2011-2015年渭南市市售食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况监测与分析
目的 了解渭南市市售食品中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的污染状况,确定可能受污染的食品种类,为消除单增李斯特菌引发的食品安全隐患,保证居民饮食安全,有效预防食源性疾病的暴发提供科学依据. 方法 2011-2015年采集渭南市餐饮服务和流通环节销售的10类共739份食品样品,依据GB 4789.30-2010《单核细胞增生李斯特氏菌检验》对单增李斯特菌进行分离和鉴定. 结果 739份样品中共检出单增李斯特菌22株,总检出率为2.98％;2015年单增李斯特菌的检出率高(7.05％),其次为2013年(3.41％)和2011年(1.96％);不同种类食品中生畜禽肉中单增李斯特菌的检出率高(17.31％),其次为冷冻挂浆鱼糜制品(5.00％)和熟肉制品(3.33％);不同采样场所中采自零售便利店的样品单增李斯特菌的检出率高(9.33％),其次为超市(3.57％)和大中小型餐馆(3.08％);不同年份及不同种类食品中单增李斯特菌的检出率差异均有统计学意义(P＜0.05);不同季度中第二季度食品单增李斯特菌检出率高(3.49％). 结论 2011-2015年渭南市多种食品及食品餐饮流通环节中单增李斯特菌的污染情况较为普遍,存在引发公共卫生问题的安全隐患,相关部门应加强对食品卫生的监督管理,预防食源性疾病的发生.
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湖州市食品中食源性致病菌污染状况调查分析
了解湖州市食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、O157:H7大肠杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌五种食源性致病菌污染情况,降低食源性疾病暴发,进一步开展食品安全性研究和预防控制食源性疾病发生提供科学依据,我们于2004年4～12月对湖州市农贸市场、食品超市、水产养殖场采集101份样品进行监测,现将结果报告如下.
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食源性单增李斯特菌血清分型及耐药性的研究
目的 掌握宝鸡市食品中单增李斯特菌的血清型和耐药水平.方法 薄片凝胶法检测O抗原,试管凝集法检测H抗原;用微量肉汤稀释法检测59株单增李斯特菌对15种抗生素的耐药性.结果 59株单增李斯特菌对氨苄西林、青霉素、亚胺培南、万古霉素、氨苄西林/青霉烷石砏全部敏感,对庆大霉素、四环素、强力霉素等5种抗生素的耐药率均＜5％,环丙沙星在三年耐药率检测中结果高,且2012年只有环丙沙星一种抗生素耐药,59株菌株中有2株出现了多重耐药.59株单增李斯特菌分属5个血清型,1/2a血清型占49.15％,1/2b血清型占42.37％,1/2c血清型占5.08％.结论 食品中单增李斯特菌的主要血清型为1/2a和1/2b;15种抗生素有9种产生了耐药性,并且出现了2株多重耐药菌株.今后应加强对单增李斯特菌耐药性的日常检测,为临床治疗提供科学依据.
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冷冻饮品加工过程中单核细胞增生李斯特菌污染状况分析
目的 了解湖南省冷冻饮品生产加工过程中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)污染状况,为食源性疾病预防和控制提供科学依据. 方法 采集湖南省2家冷冻饮品生产企业的生产加工各个环节的样品,包括食物样品75份(原料类、中间产品、终产品)和非食物样品279份(环境、仪器设备、人员、工具等),参照GB 4789.30-2010中方法进行单增李斯特菌检测,分离菌株采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型. 结果 两家企业共监测354份样品,检出28株单增李斯特菌,检出率为7.91％,均在非食品样品中检出(检出率10.04％),其中环境样品的检出率高(16.07％),人员、仪器设备、工具检出率分别为6.35％、6.58％、10.00％;与车间前处理区(0.96％)、整箱包装区相比(4.44％),灌装区检出率较高(12.20％);O企业非食品样品的检出率(13.94％)高于P企业(4.39％)(x2=6.815,P=0.009).PFGE结果显示,O企业分离的23株单增李斯特菌,分为4个型别,其中有82.6％的菌株为同一型别,P企业分离的5株单增李斯特菌,分为2个型别,其中有4株为同一型别. 结论 两家冷冻饮品企业在生产加工过程中均检出单增李斯特菌,主要存在于车间灌装区的地面与地面接触物中,两企业检出的单增李斯特菌均存在优势型别,提示应加强消毒与监督,预防单增李斯特菌对冷冻饮品污染的潜在风险.
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广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析
目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况.方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(Emc-PCR).结果 单增李斯特菌阳性率为15.89％ (58/365),其中生畜肉类检出率高,为25.38％ (33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80％)和1/2a(32.80％);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9～18条100～8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型.结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控.
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十堰市26株单增李斯特菌同源性与耐药特征分析
目的 研究十堰市单增李斯特菌分离株的同源性和耐药性,为追溯传染源和临床用药提供参考依据.方法 对单增李斯特菌分离株进行PFGE分型,然后用E-test法对氨苄西林等13种抗生素进行耐药性分析.结果 26株单增李斯特菌可分为13个PFGE亚型,相同PFGE型的菌株为同一来源.分别有45.15％和19.23％的菌株对磺胺嘧啶和环丙沙星耐药,对这2种抗生素均耐药的菌株有2株,为多重耐药菌株.结论 十堰市单增李斯特菌对一些抗生素存在较严重的耐药性,应加强对单增李斯特菌等食源性致病菌的监测,避免其污染水体而影响南水北调水源区水质.
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致病性李斯特菌毒力因子蛋白组学及基因组学研究进展
单增李斯特菌与绵羊李斯特菌是李斯特菌属中具有致病性的两个菌种,均能在胞内繁殖,可以作为疫苗载体构建疫苗.但它们在宿主范围和致病力等方面又存在较大差异,导致两者在疫苗学和免疫学领域的应用不尽相同.从分子层面上看,两种菌独特的病原学特点与各自的主要毒力因子蛋白及相关毒力基因的差异有关.分析比较两者的毒力因子蛋白及基因,对两菌进一步在疫苗学上的应用很有必要.本文特对单增李斯特菌与绵羊李斯特菌毒力因子蛋白组学和基因组学研究进展作一综述.
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2010-2013年达州市市售食品单增李斯特菌污染监测结果分析
目的 了解达州市市售食品单增李斯特菌污染状况,为科学监管提供参考.方法 依照食品国家安全标准“单核细胞增生李斯特氏菌检验”GB 4789.30-2010方法对达州市81类市售食品进行检测.结果 共检测达州市8类市售食品571件,检出单增李斯特菌20株,其中,水产品中单增李斯特菌检出率高,为20.0％;3类采样地点中,农贸市场销售的食品中单增李斯特菌检出率高,为5.1％;达州市周边县市单增李斯特菌检出率为8.3％,高于达州市主城区食品的检出率.结论 达州市市售食品存在单增李斯特菌污染,但污染严重程度低于我省部分市州,需要对高风险的食品类别和销售地点进行重点监管.
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单核细胞增多性李斯特菌作为疫苗活菌载体的研究进展
单核细胞增多性李斯特菌是一种兼性厌氧的胞内寄生菌,由于具有能在吞噬细胞的胞浆内生长和繁殖的特性,使插入其中的外源基因表达产物可以通过MHC Ⅰ、Ⅱ类途径在宿主细胞内加工和递呈,从而引起特异性CD4+和CD8+T细胞反应,被公认为是一种理想的疫苗载体.本文特对以单核细胞增多性李斯特菌为疫苗活菌载体的新研究进展作一综述.
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多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光检测食源性致病菌
[目的]建立单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.m)hly基因、金黄色葡萄球菌(Staphyl ococcus aureus,S.a)nuc基因、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,B.c)16S-23S ITS基因的多重PCR产物的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE).[方法]提取细菌DNA后,分别设计扩增单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)hly基因、金黄色葡萄球菌(Staphyl ococcus aureus,S.a)nuc基因、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)16S-23S ITS基因的引物,进行三重PCR扩增,采用无胶筛分毛细管电泳作为分离手段,以激光诱导荧光检测PCR扩增产物.[结果]对多重PCR扩增产物的条件进行了优化,20 min内即可完成3种致病菌的同时检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%～1.58%.[结论]所建立的方法可以同时快速检测3种食源性致病菌并应用食品样品的检测.与单-PCR扩增和传统的凝胶电泳相比,快速简便,灵敏可靠,为食源性致病菌检测提供可靠的快速检测方法,为应对突发性的公共卫生事件提供检测手段,对保障食品安全具有一定的实际意义.
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ILO与LLO协助李斯特菌黏附、侵袭细胞及胞内增殖的比较研究
目的 研究李斯特菌溶血素的主要功能,比较两种李斯特菌——绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii,LI)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的溶血素对细菌黏附细胞等作用的强弱.方法 构建含有LIi-hly基因上、下游同源序列和lacZ基因或hly基因的打靶质粒,利用基因重组技术构建LI溶血素(ILO)缺陷的LI重组菌株LI△i-hly∷lacZ和回补表达LM溶血素(LLO)的重组菌株LI△i-hly∷hly;比较2株重组菌与野生LI对人肝癌HepG2细胞的黏附、侵袭能力;比较3株菌在巨噬细胞RAW264.7内的增殖能力.结果 重组菌株LI△i-hly∷lacZ和LI△i-hly∷hly的基因序列与预期相符;LI△i-hly∷hly、LI和LI△i-hly∷lacZ对HepG2细胞的黏附率分别为(3.43±0.82)％、(3.43±1.59)％和(3.41±1.12)％,侵袭率分别为(1.74±0.46)％、(1.22±0.75)％和(1.39±0.46)％,差异均无统计学意义;胞内增殖实验结果表明,与野生株相比,ILO缺陷株LI△i-hly∷lacZ在巨噬细胞内的增殖量降低,LI△i-hly∷hly的增殖量升高.结论 LI在细胞内的增殖水平与ILO有关,ILO缺失抑制了LI在细胞内的增殖能力,LM溶血素LLO协助细菌逃离吞噬泡进入宿主细胞质的能力强于LI溶血素ILO.
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单增李斯特菌感染抑制HepG2细胞RhoA表达并促进其凋亡
目的 探讨单增李斯特菌(Lm)调控HepG2细胞的凋亡能力以及对Rho家族RhoA蛋白表达的影响.方法 常规方法培养HepG2细胞,分别以感染复数(MOI)=10和MOI=100接种Lm菌EGD株,共培养lh和20 h后收集培养物.异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,反转录PCR检测HepG2细胞RhoA和caspase 3编码基因表达,分光光度法检测HepG2细胞活化的caspase 3水平,Western blot法检测HepG2细胞RhoA蛋白表达.结果 Lm的侵袭可促进HepG2细胞凋亡,下调HepG2细胞RhoA编码基因和蛋白表达,并上调caspase 3编码基因表达.结论 Lm感染促进宿主细胞凋亡,抑制宿主细胞RhoA表达.
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食品中单增李斯特菌快速、敏感、特异PCR检测方法的建立
[目的]建立食品中单增李斯特菌的PCR检测方法.[方法]根据单增李斯特菌的hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因各设计了一对引物,两对引物组合建立PCR方法,用人工污染食品对该方法进行验证,于37℃经24h预增菌和24h增菌后直接进行PCR分析.[结果]在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中单增李斯特菌的检出限为1cfu/25g(mL),在原奶和生肉中的检出限分别为1～10 cfu/25mL和25 cfu/25g.[结论]该方法快速、敏感、特异,适合不同类型食品的常规检测分析,可用于食品工业中单增李斯特菌的检测.
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利用IMS/PCR方法快速检测食品中单增李斯特菌
研究用免疫磁珠(1mmunomagnetic separation,IMS)和复合PCR(multiplex-PCR)联用方法,从样品中直接浓缩获取单增李斯特菌(Listeria monocytogenes).针对L.monocytogenes的Listeriolysin O基因和李斯特菌属的23S rRNA设计两对特异性引物,作为Polymerase Chain Reaction(PCR)的靶基因,经PCR反应分别得到700bp和240bp.用IMS/PCR方法和SN方法同时检测了样品162份,结果通过API方法确证,符合率达到100%.结果表明,本文建立的IMS/PCR方法较常规方法简便、快速、灵敏度高,灵敏度可达1.5CFU/mL,在24h可快速检出L.monocytogenes,有很好的应用前景和研究价值.
关键词： IMS multiplex-PCR 单增李斯特菌 -
单增李斯特菌及其表面蛋白的研究进展
单增李斯特菌是条件致病菌,由其引起的疾病称为李斯特菌病.单增李斯特菌的致病性由几个毒力因子所决定,这些毒力因子包括李斯特细胞溶菌酶O、蛋白ActA、磷酸脂酶C、内化素(InlA和InlB)、蛋白CwhA和金属蛋白酶.该菌能够侵染多种真核细胞并在其中复制、增殖,也能够穿越宿主的三个主要屏障--肠屏障、血脑屏障和胎盘屏障.与其他G+菌不同,单增李斯特菌的大量蛋白是共价结合到其胞壁质上的.实际上,由于单增李斯特菌存在大量表面蛋白,所以它能够在许多环境下复制增殖,并且能够侵染多种真核细胞.
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3种方法检测食品中单增李斯特菌能力验证结果分析
为了确保检测结果准确,提高实验室检测能力,采用GB 4789.30-2016、miniVIDAS、实时荧光PCR 3种方法同时检测能力验证样品中的单增李斯特菌,并对测试结果进行比对分析.结果显示,所采用的3种方法均能准确鉴定出目标菌,取得满意结果.3种方法各有优劣,同时使用,综合判断,能确保试验结果准确.
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4种含七叶苷培养基对单增李斯特菌检测效果的比较研究
为了比较研究4种含七叶苷的单增李斯特菌选择性分离培养基(PALCAM、OXA、OXA和LPM)对单增李斯特菌的检测效果,参考国标GB4789.28-2013的方法对4种选择性分离培养基上目标菌的生长率和非目标菌的抑制性进行比较;通过人工污染样品试验比较4种分离培养基对单增李斯特菌的检测效果.结果显示目标菌在LMP上的生长率低,其余3种分离培养基的生长率差异不大;综合比较对非目标菌的抑制性,PALCAM佳;样品中添加阳性菌株实验表明LMP的灵敏度低;检测杂菌较少的样品时,PALCAM、OXA和MOX的选择性灵敏度差异不大,而检测杂菌较多的样品时,PALCAM的选择性灵敏度高.
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单增李斯特菌选择性增菌培养和分离方法的比较研究
首先对改良的FDA法、NGFIS法、SN法和国标法4种李斯特菌选择性增菌和分离方法进行比较,结果表明:对于人工污染的样品(生猪肉、虾、牛奶),各种增菌方法的检测灵敏度都较高,均能检出样品中<10CFU/g的单增李斯特菌;但对于不同自然样品(生猪肉、调理食品、虾和牛奶)的李斯特菌检出,则以改良的FDA法佳.本项目设计了英诺克李斯特菌和单增李斯特菌的竞争性试验,明确当样品中含有英诺克李斯特菌时,增菌时间应缩短.
