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进口冷冻鸡翼尖中单增李斯特菌的分离与鉴定
目的 单增李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌,严重威胁着畜禽和人类健康.近年来,已在世界许多港口产品(尤其冷冻食品)中被检测到,各国政府对此菌检测均十分严格.本实验在对一批从某国进口的鸡翅尖检测时,通过增菌与培养、miniVIDAS仪器初步筛选、科玛嘉李斯特显色培养基分离、API Listeria试验结果等终鉴定为单增李斯特菌.
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食品中单增李斯特菌血清型及耐药性监测
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM,简称单增李斯特菌)是一种重要人畜共患病致病菌[1].为了解浙江省各类食品中单增李斯特菌的污染情况、分布特点、血清型及耐药性,预防和控制食源性疾病,本文对2006年生禽肉、散装熟肉制品、水产品、生食蔬菜等1 651份样品中分离的单增李斯特菌进行血清型、耐药性监测分析.现报道如下.
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单增李斯特菌食品分离株多重PCR鉴定与分型
单增李斯特菌(Lm)巳被国家列为食品卫生必检项目.为掌握湖北省武汉市食品中Lm的血清型,追溯Lm污染来源,武汉市疾病预防控制中心于2005～2007年,从生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜和蔬菜沙拉等6大类食品中检测分离出49株Lm疑似菌株,并采用双重PCR和四重PCR方法进行鉴定及血清分型.
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单增李斯特菌免疫胶体金试纸条快速检测
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,单增李斯特菌),是李斯特菌属(Listeria)中重要的人类食源性病原菌[1].目前单增李斯特菌的检测方法主要依靠传统的分离培养和生化鉴定,该方法费时费力[2,3].
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李斯特菌FTA卡-16S rRNA测序法鉴定
单增李斯特菌的传统鉴定方法主要是进行生化反应,辅以溶血实验和小鼠毒力试验.这些传统鉴定方法操作复杂、耗时长,鉴定结果易受各种因素影响.近年来各种分子生物学方法开始逐步应用于李斯特菌的检测和鉴定[1-7],其中适用于细菌鉴定的方法只有脉冲电场凝胶电泳(PFGE)法、随机扩增DNA多态性(RADP)法、测序法,但由于操作比较繁琐、操作技术和分析能力要求较高,在实际检测中应用并不多.
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食品中单增李斯特菌国标定量方法实验室验证结果与分析
目的 对食品中单增李斯特菌国标定量方法进行实验室验证.方法 将单增李斯特菌标准菌株活化,经一系列稀释后染菌样品.再用单增李斯特菌国标定量方法讨论稿中平板计数和MPN法检测样品中单增李斯特菌浓度.使用3种分离培养基鉴定,对比检测效果,确定检出限.结果 平板计数法的检出限为100 CFU/250 ml和10 CFU/250 ml.MPN计数法的检出限为10 CFU/250 ml和1CFU/250 ml.平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基检出限低于PALCAM分离培养基,而MPN计数法中,3种分离培养基鉴定结果一致.结论 平板计数法和MPN计数法均适合于食品中单增李斯特菌定量检测,MPN计数法灵敏度更高.平板计数法中科玛嘉单增李斯特菌显色培养基普遍优于PALCAM分离培养基,3种培养基都适合MPN计数法,鉴定符合率高.科玛嘉和ALOA上生长典型菌落较PALCAM容易判别.
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肉汤稀释法MIC药敏试剂盒对66株单增李斯特菌的检测结果分析
目的 对食源性致病菌分离株的耐药情况进行调查,掌握我国食源性致病菌的耐药趋势和耐药谱,为指导抗生素在人类临床和动物饲养中的合理应用,控制耐药菌株的传播提供重要的参考性数据.方法 根据CLSI推荐的微量肉汤稀释法进行药敏检验,定量测定致病菌的低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC).结果 66株单增李斯特菌对亚胺培南、红霉素、环丙沙星、青霉素、左氧氟沙星、四环素、氯霉素、利福平、庆大霉素、氨苄西林、强力霉素耐药;耐药率分别是:9.1％、6.1％、4.5％、4.5％、3.0％、3.0％、3.0％、3.0％、1.5％、1.5％、1.5％.MIC值4～ ＞128不等.对头孢噻吩、万古霉素、复方新诺明完全敏感.结论 吉林省市售食品中检出的单增李斯特存在多种抗生素耐药.有1株6重耐药;1株4重耐药;2株2重耐药.但66株中耐药谱没有一致的菌株.应高度重视和加强食源性单增李斯特菌的耐药性监测,以保证食品安全和人类健康.
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食品中单增李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型
目的 分析吉林省食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别,探讨吉林省食品中单核细胞增生李斯特菌污染的同源性.方法 将市售熟制米面制品、熟肉制品、中式凉拌菜和即食非发酵豆制品中分离出的39株单核细胞增生李斯特菌进行PFGE分子分型,BioNumerics version软件分析比较同源性.结果 39株单核细胞增生李斯特菌的PFGE结果主要分为6大群,其中1群包括6株,相似度为86.0％以上；2群包括16株,分为2个亚群,2A亚群包括7株,相似度为94.1％以上,2B亚群9株,相似度为74.8％；3群包括3株,相似度为80.0％以上；4群包括14株,亦分为4个亚群；5群包括3株,相似度为85.7％以上；6群包括1株,相似度为63.3％以上.结论 吉林省食品中的LM来源于不同的克隆株,但部分LM有不同程度的相关性；PFGE是分析LM同源性的有效方法,对LM的流行趋势、分布特点和分子流行病学研究具有重要意义.
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单增李斯特菌作为疫苗载体的研究进展
单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytohenes)简称单增李斯特菌(LM),是一种革兰氏阳性兼性厌氧、胞内寄生菌,对环境耐受性强,可在较高的盐浓度(可高达40%NaCl)以及宽泛的pH(pH3～12)和温度范围(0～45℃)内生长,并可形成夹膜,因而LM广泛存在于自然界的不同环境中(土壤、水源、植物及动物体内等),易污染各种食品(肉、奶、海产品及蔬菜等),属条件致病性人畜共患病原菌[1].
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减毒单增李斯特菌疫苗递呈研究进展
单核细胞增生性李斯特菌（ Listeria monocytogenes，Lm)是一种革兰氏阳性兼性厌氧胞内寄生条件致病菌。该菌可穿越肠道屏障、血脑屏障和胎盘屏障，引起人和动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症[1]。且具有独有的胞内逃逸存活和胞间传送等特性，因此是研究胞内寄生的模式细菌。目前研究发现 Lm 的毒力主要由六个毒力因子编码基因（ prfA-plcA-hly-mpl-actA-plcB )组成。 plcA 和 plcB 分别编码磷脂酰肌醇特异性磷脂酶（ PI-PLC )和卵磷脂酶（ PC-PLC)，有助于Lm逃离吞噬小体；actA与基于Lm肌动蛋白的运动性有关；hly则与Lm的溶血素有关，参与单增李斯特菌一级和次级吞噬小体的逃离；prfA 主要调控 Lm 的侵袭相关毒力因子，如inlA和inlB 等；mpl是一个依赖锌的金属蛋白酶基因[2，3]。以“Listeria monocytogenes+vaccine”为关键词在Medline进行检索发现，截至（2015/05/06)为止，共有703篇关于Lm作为疫苗载体的研究，其中近五年相关研究为301篇。这些研究表明，Lm能够同时引起MHCⅠ和MHCⅡ类抗原递呈系统，具有显著激发强烈的CD8+和CD4+细胞免疫的能力。同时，减毒Lm作为口服疫苗载体可以调动机体的黏膜免疫效应[4]。近年来随着对单增李斯特菌毒力基因、跨膜转运机制研究的不断深入，以及平衡致死载体和细菌表面展示等技术的快速发展，进一步证明了减毒单增李斯特菌作为高效递呈抗原活载体的实用价值。迄今为止减毒Lm活载体疫苗已成功应用于人类免疫缺陷病毒（ Human immunodeficiency virus，HIV)、人类乳头瘤病毒（ Human papillomavirus ；HPV)和转移性胰腺癌等[5-7]人类复杂疾病的免疫治疗中。
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胶体金标记单克隆抗体测定单增李斯特菌试剂盒制备
目的 制备单增李斯特菌54001、54002型的单克隆抗体(McAb),制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测试剂板.方法 以纯化单增李斯特菌为抗原,免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析试剂板的检测方法. 结果 筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,免疫球蛋白亚类均为IgM.通过选用柠檬酸钠法制备胶体金,测定其适结合蛋白浓度为28 g/ml,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测板.结论 为产单核李斯特菌提供了一个方便、快捷、切实有效的检测技术.
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单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用
目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用.方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价.4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价.得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法.结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364 g·L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应；致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5％,低检出抗原含量为0.039 8 g· L-1.结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体；建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段.
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单增李斯特菌溶血素O的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化单增李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO).方法 PCR扩增LLO hly基因,并插入pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-hly,转化入大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,切胶纯化重组蛋白,并进行Western blot分析.结果 克隆的hly基因长1515 bp,与GenBank中登录的hly基因的核苷酸序列同源性为99％；重组表达质粒pET-hly经酶切鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为55000,表达量占细菌总蛋白的45.2％；纯化的重组蛋白可与单增李斯特菌阳性血清反应.结论 已成功原核表达并纯化了LLO,为下一步诊断试剂盒的研制奠定了基础.
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奇特的单增李斯特菌
单增李斯特菌(L.monocytogenes LM)是一种人畜共患的食源性致病菌.本文通过认识单增李斯特菌流行现状、生物学特性、致病性和机体对其抗感染免疫的特殊性,来增强人们对单增李斯特菌的防控意识,制定有效预防措施,以减少单增李斯特菌对人类健康的危害.
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用于食品中单增李斯特菌检测的金纳米修饰玻碳电极DNA传感器研制
目的 制备一种新型、可快速检测食品中单核细胞增生性李斯特菌的电化学DNA传感器.方法 在玻碳电极表面修饰金纳米颗粒,利用金-硫键固定巯基修饰的ssDNA探针,制备了一种电化学DNA生物传感器.利用制成的电化学DNA生物传感器,以亚甲基蓝为杂交指示剂,利用差分脉冲伏安法,对单增李斯特菌基因进行检测.结果 在优条件下,该传感器对单增李斯特菌靶基因检测的线性范围为1.0 ×10-11mol/L ～ 1.0×10-8 mol/L,相关系数r=0.9989;检出限为1.0×10-12 mol/L.结论 利用该方法制备的电化学DNA生物感器灵敏度高、线性范围宽、选择性良好,可以用于食品中单核细胞增生性李斯特菌的快速检测.
关键词： 电化学DNA生物传感器 单增李斯特菌 食品检测 -
应用不同培养基检测单增李斯特菌结果比较
据中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所的报告显示,单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,单增李斯特菌)已经成为21世纪可能对中国人卫生健康有重大影响的病原微生物之一.该菌广泛分布于环境中,由该菌引起的污染是一个典型的环境卫生问题.
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上海市嘉定区生禽畜肉及相关食品中致病菌污染状况分析
为了解上海市嘉定区生禽畜肉及相关食品中致病菌污染状况，2012—2013年我们每月对6家监测点的生禽肉、生畜肉、中式凉拌菜和西式凉拌菜等4类食品进行了单核细胞增生李斯特菌（单增李斯特菌）、沙门菌、金黄色葡萄球菌（金葡菌）监测，为建立本区食源性疾病监测预警提供依据，以有效地预防和控制食源性疾病的爆发，提高对食源性疾病的预警和控制能力。
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Veriflow DNA签名捕获技术在检测食品中单增李斯特菌的应用
[目的]建立快速检测食品中单增李斯特菌的实验方法.[方法]与国家标准方法对比研究Veriflow方法检测单增李斯特菌的效能,对3种食品样品和4种环境表面样品进行单增李斯特菌的定性检测,以建立和验证快速检测食品中单增李斯特菌的实验方法.[结果]Veriflow方法的检测结果与国标方法的结果差异无统计学意义(P＞0.05).Veriflow方法的特异性验证结果显示该法对单增李斯特菌检测的包容性和特异性均为100％.Veriflow方法的检测时间只需26 h,短于国家标准的检测时间(6 d),检测效率明显提高.[结论]Veriflow是一种准确、特异性强并且操作简单的单增李斯特菌快速检测方法,具有良好的推广前景.
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空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究
目的 建立同时检测空肠弯曲菌、单核细胞增生性李斯特菌(简称单增李斯特菌)和大肠杆菌O157的多重聚合酶链反应(PCR)检测技术.方法 根椐空肠弯曲菌mapA基因序列、单增李斯特菌的编码溶血素(hly)基因序列和大肠杆菌的O157抗原(rfbE)基因序列,分别设计了3对特异引物,PCR扩增的目的基因片段为589 bp、360 bp和194bp;并对反应条件进行了优化.结果 对3种致病菌检测,多重PCR检测DNA的敏感度分别为空肠弯曲菌2.264 ng、单增李斯特菌37.92 ng、大肠杆菌2.100 ng,样品检测时间6～8 h.结论 该方法操作简便,检测周期短,特异性和敏感度高,为同时检测污染样品中空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157奠定了基础.
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1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点及分子特征
目的 了解1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点和分子特征.方法 对该菌株进行血清型、毒力基因、耐药性、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)等分析.结果 该菌株属于1/2b血清型、ST87型,携带12种毒力基因(actA,hlyA,prfA,flaA,plcA,plcB,Inl 1A,Inl 1B,Inl 1C,Inl J,iap,Mpl).该菌株与LM263(江苏)、LM417(上海)的PFGE带型一致,与2株北京分离株(LM188、LM403)的PFGE带型相差一条带,相似性为95%.该菌株对青霉素G、苯唑西林、氨苄西林、头孢克洛、头孢噻肟、克拉霉素等6种抗生素耐药,对其他18种抗生素敏感或中介.结论 该菌株属于引起李斯特菌病的常见血清型(1/2b)和ST型(ST87),具有强致病性,其PFGE型别已在中国其他地区出现.该菌对青霉素类抗生素耐药,应选用其他药物进行治疗.
