首页 > 文献资料
-
微管蛋白酪氨酸连接酶样-1在小鼠脊髓中表达差异的研究
目的:探讨微管蛋白酪氨酸连接酶样-1(Ttll1)在脊髓发育中的作用.方法:选用孕18天胎鼠及出生后1天、5天、10天、20天、40天的A/J(A)和C57BL/6J(B6)小鼠,以实时荧光定量PCR方法测定各发育阶段Ttll1在脊髓中的表达.结果:2种品系小鼠不同发育阶段Ttll1的表达有明显差异,A/J小鼠在出生后1天表达强,C57BL/6J小鼠在胚胎18天表达强且峰值显著高于A/J的峰值.提示Ttll1的表达与脊髓的发育及与两种小鼠脊髓发育的差异有关.结论:Ttll1基因与脊髓发育相关,其机制可能是通过表达强度调节脊髓的发育.
关键词： 微管蛋白酪氨酸连接酶-1 脊髓 实时荧光定量聚合酶链反应 小鼠 -
实时荧光定量酶联免疫吸附试验检测HBV-DNA的临床意义
目的:探讨实时荧光定量PCR检测HBV-DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防等方面的临床应用价值.方法:运用实时荧光定量PCR和ELISA法同时检测了乙型肝炎180例和正常献血员56例血清中HBV-DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行对比分析.结果:乙肝大三阳95例HBV-DNA阳性达95例(100.00%),显著高于其它各组(P＜0.05),HBV-DNA含量为4.8×107copies·ml-1;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P＜0.05),但平均病毒含量与大三阳组差异无显著性(P>0.05),高达2.1×107copies·ml-1;单独HBsAg阳性和单独HBsAb阳性组HBV-DNA阳性率分别为53.85%、33.33%,平均病毒含量分别为5.6×105copies·ml-1、3.8×104copies·ml-1;献血员56例血清HBV-DNA阳性3例,其病毒含量低于其它组.结论:实时荧光定量PCR检测HBV-DNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大.
关键词： 乙型肝炎 乙肝病毒-DNA 实时荧光定量聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 -
miR-375在胃癌中的表达及其与临床病理特征的相关性
目的 探讨miR-375在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法 选取苏州大学附属第一医院2008年12月至2009年4月间经手术切除的原发性胃癌标本及癌旁组织标本各50例,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-375的表达,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系.结果 miR-375在胃癌组织中的表达相对于癌旁组织明显下调(P＜0.05),miR-375的表达与胃癌TNM分期、浸润深度和淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 miR-375在胃癌组织中的表达降低,在胃癌发生发展中可能起到一定的作用.
关键词： microRNAs 胃癌 实时荧光定量聚合酶链反应 -
miR-155在胃癌组织中的表达及临床意义
目的 分析胃癌组织和癌旁组织miR-155的表达差异及其临床意义.方法 收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织及癌旁组织标本miR-155的表达水平,并分析其表达水平与临床病理因素的关系.结果 miR-155在胃癌组织中的表达量显著高于其在配对癌旁组织中的表达量(P＜0.05)；淋巴结转移组的表达量高于淋巴结未转移组(P＜0.05).结论 miR-155可能在胃癌发生、发展和转移过程中起到重要作用.
关键词： 胃癌 实时荧光定量聚合酶链反应 miR-155 -
结直肠癌患者血清游离DNA的表达及意义
目的：建立基于ALU序列的实时荧光定量PCR（ALU-qPCR）检测游离DNA浓度的方法，并探讨结直肠癌患者血清游离DNA定量检测的临床意义。方法：随机采集结直肠癌104例、结直肠息肉63例和正常人110例血清标本，采用ALU-qPCR方法定量检测血清ALU115表达水平；用化学发光方法检测肿瘤标志物CEA的水平。结果：（1）结直肠癌患者血清ALU115浓度中位数为1046.0 ng/mL，显著高于结直肠息肉组423.3 ng/mL和对照组385.4 ng/mL，差异有统计学意义（P均<0.001），结直肠息肉组和对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）结直肠癌血清ALU115和CEA联合检测灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别是82.69%、99.09%、91.12%、98.85%和85.82%，两者联合检测提高结直肠癌诊断率。结论：基于ALU序列的实时荧光定量PCR是一种快速简便、灵敏度高及特异性好的检测方法。血清cf-DNA浓度对结直肠癌辅助诊断有一定的价值。
关键词： 结直肠癌 游离DNA Alu序列 实时荧光定量聚合酶链反应 癌胚抗原 -
两种游离DNA检测方法的比较研究
目的：对比评价人血清游离DNA的分支DNA（bDNA）检测和实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测方法。方法：收集44例人血清标本，分别运用bDNA技术和荧光定量PCR检测其游离DNA浓度，对2种方法检测结果做分析比较。同时采用bDNA技术分别检测其中10例血清和血浆游离DNA含量。结果：bDNA技术的检测结果和荧光定量PCR具有较高的相关性（r=0.7077，P<0.0001）；血清较血浆具有较高的游离DNA的水平。结论：bDNA操作简便且结果可信，适用于人群大规模筛查游离DNA水平。
关键词： 游离DNA 分支DNA 实时荧光定量聚合酶链反应 化学发光免疫分析仪 -
MicroRNA let-7e与食管鳞癌临床分期研究
目的：检测食管鳞癌患者不同临床分期癌组织及癌旁组织中MicroRNA let-7e表达水平的差异。方法：应用实时荧光定量RT-PCR Taqman MGB探针法，检测60例食管癌癌组织及癌旁组织中MicroRNA let-7e表达水平。以U6 snRNA为内参，进行荧光定量PCR,统计分析表达水平的差异。结果：MicroRNA let-7e的表达水平在癌组织比癌旁组织高，病理分期I期与III期相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：MicroRNA let-7e在食管鳞癌中表达水平明显高于癌旁组织，可能用于食管鳞癌临床分期诊断的重要标记。
关键词： 食管鳞癌 微小RNA let-7e 实时荧光定量聚合酶链反应 -
高脂膳食对雄性肥胖大鼠肾周脂肪水通道蛋白7表达的影响
目的：观察高脂膳食诱导肥胖模型大鼠肾周脂肪水通道蛋白7mRNA的表达情况，探讨其在肥胖发生中的作用。方法：将48只雄性SD大鼠随机分为对照组和造模组，分别喂基础饲料和高脂饲料。8周末造模组按体重筛选出高脂膳食诱导肥胖模型大鼠（DIO组）继续高脂喂养至20周。于第8周和第20周分别处死一批大鼠，计算Lee’s指数、肝/体比和脂/体比，检测血脂水平，实时定量聚合酶链反应测定肾周脂肪水通道蛋白7 mRNA表达水平。结果：8周末，DIO组大鼠体重、Lee’s指数、肝/体比、脂/体比和血清TG含量明显高于对照组（P<0.01或P<0.05），喂养至20周，上述指标均进一步明显增高（P<0.01），血清TC和LDL-C水平也升高（P<0.01或P<0.05）。DIO组肾周脂肪组织水通道蛋白7 mRNA表达水平于8周明显上调（P<0.01），20周下调（P<0.05）。结论：肾周脂肪组织水通道蛋白7可能在不同程度肥胖中发挥不同作用。
关键词： 肥胖症 水通道蛋白7 脂肪 实时荧光定量聚合酶链反应 大鼠 -
荧光定量PCR法对糖尿病大鼠肾脏BAX基因表达的检测
目的:对单肾切除糖尿病大鼠肾脏中BAX基因mRNA的拷贝数进行精确定量,以探讨糖尿病肾病的发病机制.方法:以SYBR Green Ⅰ作为定量检测中荧光染料,采用实时荧光定量PCR法,对单肾切除糖尿病模型组和单肾切除对照组大鼠肾脏中BAX基因的转录水平进行检测.结果:糖尿病模型组中BAX转录拷贝数明显高于对照组.结论:糖尿病大鼠肾脏中存在BAX基因的转录异常,细胞凋亡亢进可能参与糖尿病肾病的发生发展.
关键词： 实时荧光定量聚合酶链反应 糖尿病肾病 bax基因 -
MiR-17-3P对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响
目的：探究miR-17-3P对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-17-3P在MM细胞系RPMI 8226、U266和KM3及正常人骨髓细胞中的表达情况。合成miR-17-3P模拟物和抑制物，分别转染U266细胞，采用MTT法测细胞活力，PI染色流式细胞仪测细胞周期，观察U266细胞增殖情况。结果：MM细胞株RPMI8226、U266、KM3中miR-17-3P相对表达量均明显高于正常人骨髓细胞；利用模拟物上调miR-17-3P后，U266的细胞活力较对照组明显提高，48h时作用效果为显著；相反，下调miR-17-3P后，U266的细胞活力降低；上调miR-17-3P后，G1期细胞比例较对照组有所减少，S期细胞比例明显增多；相反，下调miR-17-3P后，细胞多被阻滞在G1期。结论：MiR-17-3P可能促进多发性骨髓瘤细胞增殖。
-
肝素酶在胃癌组织中表达的临床意义探讨
目的:探讨肝素酶表达在胃癌发生、发展中的作用.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定42例胃癌和26例非癌组织中肝素酶的表达情况.采用χ2检验比较肝素酶的表达与胃癌临床病理特征之间的关系.结果:胃癌中肝素酶呈阳性表达26例(61.9%);非癌组织中呈弱阳性表达1例(3.8%).RT-PCR和FQ-PCR的检测结果均相同.胃癌TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期肝素酶mRNA表达阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05);肝素酶表达与浆膜浸润、淋巴结转移或远端转移呈相关性(P＜0.05).结论:肝素酶可能促进胃癌浸润和转移,在胃癌的转移途径中,参与淋巴道转移而非血道转移.肝素酶可作为预测胃癌复发、转移的分子标志物之一.
关键词： 胃癌 肝素酶 逆转录聚合酶链反应 实时荧光定量聚合酶链反应 -
两种方法检测肺炎支原体的对比研究
目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应与快速培养法检验肺炎支原体的临床效果.方法 选取我院收治的肺炎支原体肺炎患儿186例,以及同期非肺炎支原体肺炎患儿131例,同时行两法检测肺炎支原体,对比临床诊断.结果 实时荧光定量聚合酶链反应与快速培养法检测肺炎支原体相比,在灵敏度、阳性预测值、假阴性率以及诊断符合率方面略高(P＞0.05);但前者在特异度、假阳性率方面则明显优于后者(P＜0.05).两法联合应用,灵敏度、阴性预测值、诊断符合率高于单用(P＜0.05),但特异度低于前者(P＜0.05).两种检测方法检测结果也并不完全一致,一致率为72.56%.结论 两种检测方法对肺炎支原体检测各有优点,应考虑联合应用.
关键词： 实时荧光定量聚合酶链反应 快速培养 肺炎支原体 -
实时荧光定量聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中结核分枝杆菌-DNA对肺结核的诊断价值
目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测支气管肺泡灌洗液(SAIF)中结核分枝杆菌-DNA(TB-DNA)对肺结核的诊断价值.方法 肺结核52例(菌阳20例.菌阴32例),肺炎35例,采用FQ-PCR法检测其支气管肺泡灌洗液中TB-DNA水平.结果 52例肺结核组的阳性率为65.4%(菌阳19例,菌阴15例),35例非肺结核组的阳性率为5.7%,经统计学比较,FQ-PCR法检出结核杆菌阳性率著高于痰涂片抗酸染色和培养法(P均<0.05),FQ-PCR法特异性高.结论 FQ-PCR法检测BALF中TB-DNA为痰涂片阴性及无痰患者提供良好的诊断依据.
关键词： 结核分枝杆菌 诊断 实时荧光定量聚合酶链反应 -
wt1定量联合FCM在急性髓细胞白血病MRD监测中的临床应用
目的 探讨在急性髓细胞白血病(AML)中Wilms瘤基因1(wt1) mRNA定量联合多参数流式细胞术(FCM)分析监测微小残留病灶的临床应用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测35例AML患者的wt1表达水平;将患者根据不同亚型分组检测;并且对9例缓解和4例复发患者进行随访,检测wt1表达水平.采用FCM分析AML中微小残留病灶(MRD)水平.结果 与对照组比较,AML病例组wt1表达水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).在初诊的各种AML亚型中,M2亚型wt1表达水平高,M6亚型wt1表达水平低.9 例随访患者提示在达到完全缓解时wt1表达水平下降,而4例随访复发患者在复发时再次升高.FCM检测MRD在不同阶段异常髓系细胞比例明显不同.联合qRT-PCR和FCM技术对MRD检测的敏感性和特异性大大提高,两者具有一致性;利用ROC曲线对复发病例进行分析得到的监测阈值为3.33%.结论 在急性髓细胞白血病中wt1 mRNA定量联合多参数流式细胞术分析可用于监测MRD、评估治疗效果、预后及预测疾病复发风险.
-
急性白血病患者骨髓细胞中WT1基因的表达
目的:探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞WT1基因的表达.方法:采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测100例AL患者骨髓细胞WT1基因及内参基因(ABL),以WT1基因拷贝数/内参基因拷贝数(NQ比值)计算基因表达水平.结果:初诊组和复发组AL患者WT1表达水平明显高于完全缓解组(P<0.01).初诊患者中,AL各亚型之间WT1表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),急性淋巴细胞白血病WT1表达水平低,急性早幼粒细胞白血病表达高.随访3例患者,达到完全缓解时WT1表达很低,复发时WT1表达均再次升高.结论:WT1基因在AL中的表达,可作为白血病疗效评价及监测微小残留病灶的指标.
关键词： 白血病 WT1基因 微小残留病 实时荧光定量聚合酶链反应 -
程序性死亡4基因在食管鳞状细胞癌中的表达及意义
目的：：通过测定食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)患者肿瘤组织中程序性死亡4基因( Pdcd4)的表达，探讨Pdcd4与食管鳞癌发生、发展的关系。方法：应用实时荧光定量聚合酶链反应检测60例食管鳞癌组织中Pdcd4 mRNA的表达情况，同时应用免疫组织化学法检测石蜡包埋的178例食管鳞癌组织中Pdcd4的表达水平，相应的癌旁正常组织作为对照。结果：Pdcd4 mRNA在食管鳞癌组织中的表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.01)。 Pdcd4在癌旁正常组织中的阳性表达率为100.0%，明显高于食管鳞癌组织中的47.2%(P <0.01)。 Pdcd4的表达与肿瘤的分化程度有关，在高分化食管鳞癌的阳性率为71.4%，中分化食管鳞癌的阳性率为43.4%，低分化食管鳞癌的阳性率为30.2%，高分化鳞癌中Pdcd4阳性率高于中分化及低分化癌(P<0.01)；中、低分化食管鳞癌中Pdcd4阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)；Pdcd4阳性率在患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期和N分期间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：Pdcd4异常表达与食管鳞癌的组织病理分级有关。
关键词： 食管肿瘤 程序性死亡4基因 免疫组织化学 实时荧光定量聚合酶链反应 -
野生型及c.454C＞T突变型人血管内皮生长因子A基因重组真核表达载体的体外表达
目的:探讨野生型和c.454C＞T突变型人血管内皮生长因子A(VEGFA)基因重组真核表达载体(pEGFP-VEGFA)体外表达有无差异.方法:用脂质体法将野生型和突变型pEGFP-VEGFA转染人胚胎肾细胞(HEK293T),采用荧光显微镜观察重组载体VEGFA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白的表达,以实时荧光定量PCR法检测VEGFA mRNA的表达.结果:在经转染的HEK293T细胞内观察到绿色荧光,转染后48 h突变型pEGFP-VEGFA转染组荧光强度低于野生型pEGFP-VEGFA转染组.突变型pEGFP-VEGFA转染组VEGFA mRNA表达明显低于野生型pEGFP-VEGFA转染组(P＜0.01).结论:在HEK293T细胞中,初步表明VEGFA突变体导致VEGFA mRNA和蛋白的表达水平均下调,为进一步研究VEGFA c.454C＞T突变体在先天性左心室流出道病变发生中的作用奠定了基础.
关键词： 血管内皮生长因子A 突变 遗传载体 实时荧光定量聚合酶链反应 左心室流出道梗阻 -
实时定量PCR检测自然流产患者HLA-G mRNA的表达
目的:检测HLA-G mRNA在自然流产患者绒毛组织中的表达,探讨HLA-G与自然流产的关系.方法:取8例正常妊娠早孕人工流产(对照组)与6例自然流产绒毛组织(实验组),采用实时荧光定量聚合酶链反应( real-time PCR)检测对照组和实验组绒毛组织HLA-G mRNA表达水平.结果:自然流产组HLA-G mRNA的相对表达量(0.026±0.012)明显低于正常妊娠早孕人工流产组的HLA-G mRNA 的相对表达量(1.883±1.774),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HLA-G mRNA在绒毛组织的表达异常可能与自然流产的发病有关.
关键词： 人类白细胞抗原-G 自然流产 实时荧光定量聚合酶链反应 -
IL-23R基因在强直性脊柱炎患者外周血中的表达研究
目的 研究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)中IL-23R的表达和调节作用.方法 分别抽取强直性脊柱炎患者(n=61)和正常对照者(n=40)外周静脉血1 ml,以Trizol(invitrogen)法抽提总RNA,并逆转录为cDNA,通过实时荧光定量聚合酶链反应法分析其IL-23R的表达水平,实验数据以内参基因标化.以Bath强直性脊柱炎活动性指标(BASDAI)作为病情评估标准,;≤4分为病情稳定,≥5分为病情活动,将AS患者分为两组.分别比较患者组与正常对照绀,以及病情活动组与稳定组的IL-23R mRNA表达水平.结果 AS组的IL-23R mRNA表达水平(0.98±0.87)明显高于正常对照组(0.46±0.40),差异有统计学意义(P=0.0004);活动组表达水平(0.97±1.02)与稳定组(0.99±0.76)之间差异无统计学意义(P=0.2224).结论 IL-23R基因在强直性脊柱炎患者外周血高表达,可能是AS新的发病机制之一,进一步研究有可能会发现AS新的监测和治疗靶点.
关键词： 强直性脊柱炎 IL-23R 实时荧光定量聚合酶链反应 -
系统性红斑狼疮IRF-5和TLR-9mRNA的表达
目的 分析山东地区汉族人群IRF-5基因及TLR-9基因在系统性红斑狼疮患者体内的表达情况,以探讨其与系统系红斑狼疮的关系.方法 以实时荧光定量聚合酶链反应方法检测92例系统性红斑狼疮患者和88例健康对照者IRF5及TLR-9基因表达水平(以2-⊿⊿Ct表示).结果 系统性红斑狼疮患者体内IRF5及TLR-9 mRNA明显高于健康对照者,且具有统计学意义(p<0.05).结论 IRF-5、TLR-9基因可能在SLE发病中起一定作用.
关键词： 系统性红斑狼疮 IRF-5 TLR-9 实时荧光定量聚合酶链反应
